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Catquest-9SF的研究进展及临床应用
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作者 海玥(综述) 廖萱(审校) 《山东大学耳鼻喉眼学报》 CAS 2021年第6期142-146,共5页
随着手术技术和材料设备的发展,白内障手术已成为屈光性手术,其治疗目标从早期的单纯复明发展到追求功能性视力和精准化医疗。值得注意的是,部分白内障患者尽管术后主观视力和客观视觉质量恢复良好,却仍不满意术后效果。由于视功能相关... 随着手术技术和材料设备的发展,白内障手术已成为屈光性手术,其治疗目标从早期的单纯复明发展到追求功能性视力和精准化医疗。值得注意的是,部分白内障患者尽管术后主观视力和客观视觉质量恢复良好,却仍不满意术后效果。由于视功能相关生存质量研究作为评价白内障手术干预效果的工具,能够提供前述指标以外的重要的信息,在临床上越来越受到重视。Catquest-9SF是一种评价白内障视功能相关生存质量量表,经翻译、回译及跨文化调试后目前已经在国际被广泛应用。本文将对其演变进程以及近年来临床和科研中的应用情况进行综述。 展开更多
关键词 白内障 视功能 catquest-9sf 量表 临床应用
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基于Sf9细胞培养表达鸭短喙侏儒综合征病毒VP2蛋白的工艺优化
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作者 甘辉群 王永娟 +3 位作者 吴双 傅宏庆 谭菊 刘明生 《畜牧与兽医》 北大核心 2025年第9期87-92,共6页
旨在获得高表达的鸭短喙侏儒综合征病毒VP2抗原蛋白。本试验通过对接毒与表达工艺中pH值、Sf9细胞密度、接毒量、收获时间、搅拌转速和溶氧值等参数进行优化,考察VP2重组杆状病毒的增殖情况,收获病毒液,测定病毒含量变化;同时,对培养物... 旨在获得高表达的鸭短喙侏儒综合征病毒VP2抗原蛋白。本试验通过对接毒与表达工艺中pH值、Sf9细胞密度、接毒量、收获时间、搅拌转速和溶氧值等参数进行优化,考察VP2重组杆状病毒的增殖情况,收获病毒液,测定病毒含量变化;同时,对培养物进行VP2蛋白SDS-PAGE和Western blot分析,并采用SDS-PAGE灰度扫描测定蛋白含量。结果:在pH值维持6.8~7.2,接毒密度为1.0×10^(6)~2.0×10^(6)个/mL,感染复数(MOI)值为0.01~0.1,收获时间为接种后5~7 d,转速100~140 r/min,溶氧度控制在40%~80%时,重组杆状病毒生长较好,含量较高,达10^(7.7)~10^(8.5) TCID_(50)/mL;均出现约65 kDa目的条带,蛋白表达量基本一致,达57μg/mL以上。根据优化的工艺参数在5 L反应器进行5批抗原生产验证,VP2蛋白表达量达58~63μg/mL,蛋白生产稳定,表达量高。 展开更多
关键词 鸭短喙侏儒综合征 重组杆状病毒 sf9细胞 接毒工艺 表达生产工艺
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The Italian Catquest-9SF cataract questionnaire: translation, validation and application 被引量:1
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作者 Eirini Skiadaresi Giuseppe Ravalico +3 位作者 Silvio Polizzi Mats Lundstrom Miguel Gonzalez-Andrades Colm McAlinden 《Eye and Vision》 SCIE 2016年第1期89-96,共8页
Background:To validate the Catquest-9SF questionnaire in Italian,assess the change in visual disability with cataract surgery and determine the correlation between pre-operative Catquest-9SF scores and Lens Opacities ... Background:To validate the Catquest-9SF questionnaire in Italian,assess the change in visual disability with cataract surgery and determine the correlation between pre-operative Catquest-9SF scores and Lens Opacities Classification System(LOCS)III cataract grading.Methods:Prospective,questionnaire validation study.The Catquest-9SF questionnaire was forward and back translated and completed by 209 Italian patients before and three months following cataract surgery.Rasch analysis was used to assess its psychometric properties.Results:The Italian Catquest-9SF demonstrated ordered response categories,unidimensionality(item fit statistics range:0.73–1.34),adequate person separation(2.04),and no differential item functioning.Mistargeting was evident with a mean difference in item difficulty and person ability of 2.04 logits but improved with inclusion of pre-operative data only.There was a statistically significant(Friedman tests,p<0.001)median improvement in visual disability of 1.92,3.57,1.44 and 2.94 logits in patients undergoing first eye surgery with and without ocular comorbidity,and second eye surgery with and without ocular comorbidity respectively.There was no statistically significant difference in the improvements among the four groups(Kruskal-Wallis H test,X^(2)(3)=5.445,p=0.142).There was no correlation between Catquest-9SF scores and nuclear opalescence(r_(s)=0.049,p=0.478),nuclear colour(r_(s)=0.008,p=0.909),cortical(r_(s)=0.066,p=0.341),and posterior subcapsular components(r_(s)=0.048,p=0.494).Conclusions:The Italian Catquest-9SF demonstrated good psychometric properties and is suitable for use in Italian speaking patients.There were similar improvements in visual disability in patients undergoing first or second eye surgery,with or without ocular comorbidity.There was no correlation between pre-operative Catquest-9SF scores and LOCS III cataract grading. 展开更多
关键词 catquest-9sf Questionnaires Patient-reported outcomes CATARACT Cataract surgery Rasch analysis
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TM9SF2缺失促进Ⅰ型干扰素信号通路抑制水疱性口炎病毒复制的初步研究
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作者 李康 王新宇 +5 位作者 叶然 郭凌云 王林旭 许诺 张彤 段小涛 《细胞与分子免疫学杂志》 北大核心 2025年第6期481-487,共7页
目的探究9次跨膜超家族蛋白2(TM9SF2)缺失对水疱性口炎病毒(VSV)复制的影响,并探究其参与抗病毒先天免疫的作用机制。方法采用转染小干扰RNA(siRNA)方法敲低人非小细胞肺癌细胞(A549)中TM9SF2基因;采用CCK-8法检测细胞增殖活性;建立VSV... 目的探究9次跨膜超家族蛋白2(TM9SF2)缺失对水疱性口炎病毒(VSV)复制的影响,并探究其参与抗病毒先天免疫的作用机制。方法采用转染小干扰RNA(siRNA)方法敲低人非小细胞肺癌细胞(A549)中TM9SF2基因;采用CCK-8法检测细胞增殖活性;建立VSV-绿色荧光蛋白(VSV-GFP)感染细胞模型;空斑实验检测病毒上清滴度;采用实时定量PCR和Western blot法检测VSV病毒感染A549细胞后病毒基因组复制的mRNA水平和蛋白水平表达情况,以及检测用双链RNA类似物聚胞苷酸〔poly(I∶C)〕刺激细胞后Ⅰ型干扰素信号通路中β干扰素(IFN-β)mRNA水平和干扰素调节因子3(IRF3)蛋白磷酸化水平。结果与阴性对照组相比,TM9SF2敲低效果显著;敲低TM9SF2后不影响A549细胞增殖;成功建立VSV-GFP感染A549细胞模型;在病毒刺激下,敲低TM9SF2后细胞荧光强度减弱,显著下调VSV的mRNA水平和蛋白水平,VSV的病毒滴度降低;在poly(I∶C)刺激下,敲低TM9SF2显著上调IFN-β的mRNA水平和IRF3蛋白磷酸化水平。结论TM9SF2缺失抑制VSV的复制,正向调控Ⅰ型干扰素信号通路,增强宿主抗病毒先天免疫反应。 展开更多
关键词 9次跨膜超家族蛋白2(TM9sf2) 水疱性口炎病毒(VSV) 病毒复制 抗病毒先天免疫
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家蝇乙酰胆碱酯酶在杆状病毒介导的Sf9细胞中表达
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作者 伍全根 张秀娟 孙英健 《中国农学通报》 2025年第32期109-115,共7页
本研究旨在利用基因重组技术与杆状病毒介导的Sf9昆虫细胞表达系统,实现家蝇乙酰胆碱酯酶(AChE)的活性表达,为将其开发为杀虫剂残留检测试剂及昆虫抗药性分析提供基础。以含家蝇AChE基因(Md-ache)的pcDNA3.1-Md-ache质粒为模板,通过PCR... 本研究旨在利用基因重组技术与杆状病毒介导的Sf9昆虫细胞表达系统,实现家蝇乙酰胆碱酯酶(AChE)的活性表达,为将其开发为杀虫剂残留检测试剂及昆虫抗药性分析提供基础。以含家蝇AChE基因(Md-ache)的pcDNA3.1-Md-ache质粒为模板,通过PCR扩增引入EcoRⅠ和XhoⅠ酶切位点,构建重组质粒Peasy-T1-Md-ache,进一步与pFastBac1载体连接获得重组质粒pFastBac1-Md-ache,转染DH10Bac感受态细胞后筛选得到重组bacmid质粒,再转染Sf9细胞进行蛋白表达与鉴定。结果表明:(1)重组bacmid质粒在Sf9细胞中成功包装,转染后细胞出现体积增大、增殖抑制等典型病变;(2)重组家蝇AChE具有催化活性,细胞裂解液中酶活性达44.7±2.3 nmol/(min·mg protein),培养液中检测到10.1±2.1 nmol/(min·mL)的酶活性,提示存在分泌性表达;(3)经Lineweaver-Burk双倒数作图法测定,重组AChE的Km值为15.69±1.75µmol/L,对底物亲和力较高;(4)有机磷杀虫剂毒死蜱可体外抑制该重组AChE活性,经改良寇氏法计算半数抑制浓度(IC_(50))为11.18±0.68µmol/L。本研究证实,杆状病毒介导的Sf9细胞表达系统可高效表达具有催化活性与杀虫剂敏感性的家蝇AChE,其表达产物为杀虫剂残留检测试剂开发及昆虫抗药性机理分析提供了关键材料。 展开更多
关键词 家蝇 乙酰胆碱酯酶 ache基因 基因重组 杆状病毒表达系统 sf9细胞 有机磷杀虫剂 氨基甲酸酯杀虫剂
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Validity of the French version of Catquest-9SF and use of an electronic notepad for entering patient-reported outcome measures
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作者 Gregory Katz Alexandra Rouquette +3 位作者 François Lignereux Thierry Mourgues Michel Weber Mats Lundström 《Eye and Vision》 SCIE CSCD 2021年第1期92-100,共9页
Background:The Catquest-9SF questionnaire is a patient reported outcome measure that quantifies the visual benefits from cataract surgery.The purpose of this study was to translate and adapt the Catquest-9SF questionn... Background:The Catquest-9SF questionnaire is a patient reported outcome measure that quantifies the visual benefits from cataract surgery.The purpose of this study was to translate and adapt the Catquest-9SF questionnaire for France,to assess its psychometric properties via Rasch analysis,and to assess its validity when completed using an electronic notepad.Methods:The Catquest-9SF questionnaire was translated following the guidelines of the International Society for Pharmacoeconomics and Outcomes Research.Catquest-9SF and clinical data were collected from patients before and after routine cataract surgery.All questionnaire data were collected via an electronic notepad.Rasch analysis was performed to assess psychometric properties,and sensitivity to change was analysed for patients with complete paired pre-and post-operative questionnaires.Results:A complete filled-in preoperative questionnaire was obtained for 848 patients.Rasch analysis showed good precision(person separation:2.32,person reliability:0.84),ordered category probability curves,no item misfit,and unidimensionality.The respondents were slightly more able than the level of item difficulty(targeting:−1.12 logits).Sensitivity was analysed on 211 paired questionnaires,and the postoperative questionnaires showed a clear ceiling effect.The effect size was 2.6.The use of an electronic notepad for completing the questionnaire worked out very well after some adjustments.Conclusions:The French version of Catquest-9SF has good psychometric properties and is suitable for use in French-speaking patients.The use of the Catquest-9SF questionnaire in an electronic format showed good validity. 展开更多
关键词 CATARACTS Patient-related outcome measures Quality of life QUESTIONNAIRE Value-based health care catquest-9sf
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草地贪夜蛾Sf9细胞外泌体microRNA调控AcMNPV增殖的研究
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作者 田伟彬 张以农 +2 位作者 任菲菲 严寄铭 孙京臣 《华南农业大学学报》 北大核心 2025年第2期133-140,共8页
【目的】探究草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda Sf9细胞外泌体microRNA(miRNA)对苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus,AcMNPV)增殖的影响。【方法】通过不连续蔗糖质量分数梯度超速离心纯... 【目的】探究草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda Sf9细胞外泌体microRNA(miRNA)对苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus,AcMNPV)增殖的影响。【方法】通过不连续蔗糖质量分数梯度超速离心纯化外泌体,随后利用透射电镜观察和纳米颗粒跟踪分析技术对纯化产物进行颗粒直径分析。运用sRNA高通量测序技术筛选AcMNPV感染Sf9细胞后外泌体差异表达的miRNA并预测其潜在靶基因对应的生物学通路。通过转染模拟物(mimic)和病毒感染等细胞试验以及qPCR验证外泌体miRNA的差异表达,并检测差异表达miRNA——sfr-miR-1a-3p对AcMNPV增殖的影响。【结果】成功纯化Sf9细胞外泌体,且AcMNPV感染有效刺激Sf9细胞外泌体的分泌量增加。AcMNPV感染Sf9细胞72 h后,经与Rfam数据库比对,筛选出11个差异表达的外泌体miRNAs,其中,8个miRNAs的转录水平与测序结果趋势一致。通过预测miRNAs靶基因和KEGG富集分析,发现潜在的靶基因主要富集在cAMP信号通路、PI3K-Akt信号通路、癌症通路、人乳头瘤病毒信号通路等,这表明差异表达外泌体miRNA可能参与昆虫天然免疫反应。过表达sfrmiR-1a-3p能显著提高AcMNPV病毒vp39基因的表达。【结论】本研究通过sRNA测序筛选了AcMNPV感染后Sf9细胞外泌体的差异表达miRNA,证明了AcMNPV通过促进外泌体分泌,协助被感染细胞传递miRNA−sfr-miR-1a-3p来影响周围未感染细胞,以促进自身增殖。以上结果为昆虫外泌体传递miRNA以调控病毒增殖的机制研究提供了重要的理论依据。 展开更多
关键词 草地贪夜蛾 sf9细胞 苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒 外泌体 microRNA sfr-miR-1a-3p
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miR-185-5p靶向负调控TM9SF1对肺腺癌细胞增殖、迁移和自噬能力的影响
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作者 王晓娜 龚秀莹 +5 位作者 赵苗苗 刘清华 李勇 王坤 尹崇高 李洪利 《解放军医学杂志》 北大核心 2025年第5期566-574,共9页
目的 探讨miR-185-5p靶向负调控跨膜9超家族蛋白1(TM9SF1)对肺腺癌细胞增殖、迁移和自噬能力的影响。方法 在基因表达综合数据库(GEO)中下载数据集GSE51853,分析miR-185-5p在肺腺癌组织中的表达情况。采用在线数据库miRTargetLink、miRT... 目的 探讨miR-185-5p靶向负调控跨膜9超家族蛋白1(TM9SF1)对肺腺癌细胞增殖、迁移和自噬能力的影响。方法 在基因表达综合数据库(GEO)中下载数据集GSE51853,分析miR-185-5p在肺腺癌组织中的表达情况。采用在线数据库miRTargetLink、miRTarbase和DIANA-microT-CD预测miR-185-5p靶向结合的蛋白,使用HADb网站下载自噬相关蛋白,将4个数据库所得结果取交集,通过StarBase数据库分析交集结果VEGFA和TM9SF1的生存曲线。分别将TM9SF13'UTR(WT)或TM9SF1 3'UTR(MUT)报告质粒与miR-185-5p对照质粒(CON)或miR-185-5p过表达质粒(over-miR-185-5p)共转染HEK-293T细胞,采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-185-5p与TM9SF1的结合位点及荧光素酶活性。采用Western blotting检测转染miR-185-5p过表达质粒后A549细胞中TM9SF1蛋白的表达情况。将A549细胞分为3组:(1)CON+NC组,转染miR-185-5p对照质粒和TM9SF1对照质粒;(2)over-miR-185-5p+NC组,转染miR-185-5p过表达质粒和TM9SF1对照质粒;(3)over-miR-185-5p+over-TM9SF1组,转染miR-185-5p过表达质粒和TM9SF1过表达质粒。采用EdU细胞增殖实验、划痕实验和Transwell迁移实验验证miR-185-5p靶向结合TM9SF1对肺腺癌细胞增殖和迁移能力的影响。分别采用stubRFPsensGFP-LC3自噬流检测慢病毒和JC-1实验检测肺腺癌细胞自噬流和线粒体膜电位(MMP)的改变。结果 GSE51853数据集中,miR-185-5p在肺腺癌组织中的表达水平明显低于正常肺组织(P<0.01);qRT-PCR检测结果显示,miR-185-5p在肺腺癌细胞NCI-H1299、A549中的表达水平低于正常肺上皮细胞BEAS-2B(P<0.01)。在线数据库miRTargetLink、miRTarbase、DIANA-microT-CD和HADb预测结果显示,miR-185-5p可靶向调控自噬相关蛋白TM9SF1。双荧光素酶报告基因实验和Western blotting检测结果分别显示,miR-185-5p可直接与TM9SF1 mRNA的3'UTR区结合,过表达miR-185-5p后靶蛋白TM9SF1的表达水平降低(P<0.05)。EdU细胞增殖实验、划痕实验和Transwell迁移实验结果显示,过表达miR-185-5p可抑制肺腺癌细胞的增殖和迁移能力,过表达TM9SF1能够削弱miR-185-5p对肺腺癌细胞增殖、迁移能力的抑制作用(P<0.05)。stub RFP-sens GFP-LC3自噬流检测慢病毒结果显示,过表达mi R-185-5p后A549细胞中自噬流加快,而同时过表达mi R-185-5p和TM9SF1后A549细胞中自噬流减慢;JC-1实验结果显示,过表达miR-185-5p后A549细胞中MMP水平降低,同时过表达miR-185-5p和TM9SF1后A549细胞中MMP水平升高。结论 miR-185-5p可能通过靶向负调控TM9SF1的表达影响肺腺癌细胞的增殖、迁移和自噬能力。 展开更多
关键词 肺腺癌 miR-185-5p TM9sf1 增殖 迁移 自噬
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人胰岛素基因杆状病毒表达载体的构建及其在Sf_9细胞中的表达 被引量:5
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作者 李华 刘维全 +5 位作者 王吉贵 江禹 王本旭 王萍 齐顺章 殷震 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期258-262,共5页
对人胰岛素基因组基因真核表达载体 ( p CMA/m INS)进行 Xho 酶切 ,回收的含人胰岛素基因组基因的 1 60 8bp片段与线性化的杆状病毒载体 p Fast Bac 进行连接 ,获得重组载体 p Fast/m INS。将该重组载体转化 DH1 0 Bac感受态细菌 ,在体... 对人胰岛素基因组基因真核表达载体 ( p CMA/m INS)进行 Xho 酶切 ,回收的含人胰岛素基因组基因的 1 60 8bp片段与线性化的杆状病毒载体 p Fast Bac 进行连接 ,获得重组载体 p Fast/m INS。将该重组载体转化 DH1 0 Bac感受态细菌 ,在体内进行重组 ,并经 2次抗性与蓝白斑筛选 ,得到杆状病毒重组载体 Bacmid/m INS。将该载体转染 Sf9细胞 ,获得了重组杆状病毒 ,经 Tricine-SDS-PAGE和 Western-blotting检测 ,重组杆状病毒在 Sf9细胞中的表达产物是胰岛素原 。 展开更多
关键词 人胰岛素基因 杆状病毒表达系统 表达载体 sf9细胞 基因表达
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杆状病毒AcMNPV介导BmK IT的表达促进草地夜蛾卵巢Sf9细胞凋亡及病毒在细胞内的复制(英文) 被引量:4
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作者 付月君 赵洁 +1 位作者 梁爱华 胡风云 《生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期305-311,共7页
昆虫杆状病毒是一类寄生于节肢动物的囊膜包裹的双链环状DNA,杆状病毒作为新型生物杀虫剂逐渐应用于害虫防治。BmK IT是一种从东亚钳蝎分离出来的昆虫毒素,可以与昆虫细胞膜的钠离子通道相互作用,引起钠离子通道动作电位重复发放,并增... 昆虫杆状病毒是一类寄生于节肢动物的囊膜包裹的双链环状DNA,杆状病毒作为新型生物杀虫剂逐渐应用于害虫防治。BmK IT是一种从东亚钳蝎分离出来的昆虫毒素,可以与昆虫细胞膜的钠离子通道相互作用,引起钠离子通道动作电位重复发放,并增强钠电流峰值,延缓钠传导关闭,使昆虫产生兴奋性麻痹。为了提高杆状病毒苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(Autographa californica multicapsid nucleopolyhedrovirus,AcMNPV)杀虫活性,本研究将BmK IT基因插入到AcMNPV基因组中,形成重组杆状病毒AcMNPV-BmK IT。采用MTT法、TUNEL试剂、Western blot、real-time PCR及病毒滴度测定来检测AcMNPVBmK IT对草地夜蛾卵巢细胞Sf9发生凋亡及病毒在Sf9细胞内的复制情况。结果显示AcMNPV介导BmK IT的表达促进了Sf9细胞凋亡及病毒复制。此结果为揭示重组病毒AcMNPV-BmK IT的抗虫机制提供了实验依据。 展开更多
关键词 ACMNPV BMK IT sf9细胞 凋亡 复制
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喜树碱诱导的草地贪夜蛾Sf9细胞凋亡 被引量:7
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作者 王文祥 钟国华 +2 位作者 胡美英 黄劲飞 葛萃萃 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期894-901,共8页
传统植物源杀虫剂喜树碱具有优异的抑制昆虫生长发育活性,其诱导昆虫细胞凋亡的作用方式和机制尚不明确,极大地限制了喜树碱在植物保护领域的应用开发。本研究以1μmol/L喜树碱诱导草地贪夜蛾Spodopterafrugiperda Sf9细胞呈现细胞皱缩... 传统植物源杀虫剂喜树碱具有优异的抑制昆虫生长发育活性,其诱导昆虫细胞凋亡的作用方式和机制尚不明确,极大地限制了喜树碱在植物保护领域的应用开发。本研究以1μmol/L喜树碱诱导草地贪夜蛾Spodopterafrugiperda Sf9细胞呈现细胞皱缩、微绒毛消失和染色质边集等典型细胞凋亡早期超微结构形态特征,中期凋亡小体逐渐出现并急剧增多,DNA电泳分析可见清晰DNA片段化凋亡特征。流式细胞术分析表明1μmol/L喜树碱诱导Sf9细胞12h凋亡率达到最大值39.67%,是对照的13.13倍,随后减小。喜树碱诱导Sf9细胞凋亡在12h和24h时Sf caspase-1分别出现两个活性高峰,表明其作为效应因子在细胞凋亡级联反应过程中具有影响作用。喜树碱显著抑制Sf9细胞拓扑异构酶Ⅰ活性,阻断解旋负超螺旋pBR322DNA,导致DNA损伤进而启动细胞凋亡级联反应使Sfcaspase-1活性增加,提示其信号转导过程是细胞凋亡诱导机制之一。本研究通过分析喜树碱的诱导昆虫Sf9细胞凋亡,对揭示喜树碱诱导昆虫细胞凋亡的作用机制具有重要启示和帮助。 展开更多
关键词 草地贪夜蛾 喜树碱 sf9细胞 细胞凋亡 级联反应 流式细胞术
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抗黄曲霉毒素B1单链抗体在Sf9昆虫细胞中的表达与性质分析 被引量:3
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作者 刘爱平 李诚 +2 位作者 刘书亮 王小红 陈福生 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期40-45,共6页
目的:在原核表达抗黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)单链抗体(single chain Fv fragment,sc Fv)研究的基础上,为进一步了解和提高抗AFB1 sc Fv的活性,利用Sf9昆虫细胞表达抗AFB1sc Fv,并对其活性进行探索研究。方法:构建p Fast Bac 1-sc... 目的:在原核表达抗黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)单链抗体(single chain Fv fragment,sc Fv)研究的基础上,为进一步了解和提高抗AFB1 sc Fv的活性,利用Sf9昆虫细胞表达抗AFB1sc Fv,并对其活性进行探索研究。方法:构建p Fast Bac 1-sc Fv2E6VHVL重组质粒,将重组质粒转化Escherichia coli(E.coli)DH10Bac细胞,进行蓝白斑筛选,挑取阳性克隆。提取相应的重组杆状病毒穿梭载体Bacmid侵染Sf9昆虫细胞,表达sc Fv,利用镍亲和层析法纯化sc Fv,并以ELISA检测sc Fv活性。结果:蓝白斑筛选后,经菌落PCR和测序验证挑取的白斑阳性单克隆含有正确的单链抗体基因。提取相应的重组杆状病毒穿梭载体Bacmid侵染Sf9昆虫细胞,通过Western blot检测得知抗AFB1 sc Fv在Sf9昆虫细胞中成功表达。AFB1对sc Fv的抑制中浓度(IC50)为30μg/ml。结论:与E.coli BL21(DE3)表达系统相比,sc Fv灵敏度转好,但仍有较大提升空间。 展开更多
关键词 AFB1 ELISA sf9细胞 SCFV
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氟对人成骨细胞TM9SF1和Ras mRNA表达的影响 被引量:5
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作者 李良忠 张宏印 +3 位作者 钟近洁 周婷婷 刘岳强 刘开泰 《中国地方病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期386-389,共4页
目的探讨氟对体外培养人成骨细胞中TM9SF1、RasmRNA表达的影响。方法采用原代细胞培养的方法培养人成骨细胞。取早期引产胎儿的骨组织,胶原酶消化、分离成骨细胞,加入DMEM培养液进行传代培养。将传代后的人成骨细胞按染氟剂量不同分为... 目的探讨氟对体外培养人成骨细胞中TM9SF1、RasmRNA表达的影响。方法采用原代细胞培养的方法培养人成骨细胞。取早期引产胎儿的骨组织,胶原酶消化、分离成骨细胞,加入DMEM培养液进行传代培养。将传代后的人成骨细胞按染氟剂量不同分为0(对照)、2.5、5.0、10.0、20.0mg/L组。染氟培养10d后,光镜下观察氟对人成骨细胞形态的影响;实时定量(RT)PCR法检测不同染氟剂量对体外培养人成骨细胞TM9SFI、Ras mRNA的表达影响。结果光镜下对照组和2.5mg/L组人成骨细胞呈长梭形、三角形或不规则多边形,有突起伸出,胞质透亮、饱满,相邻细胞彼此贴靠;20.0mg/L组人成骨细胞呈长梭形或不规则多边形,细胞数目明显减少、体积变大,一些细胞胞质出现了多个小空泡及颗粒样物质。不同染氟剂量对人成骨细胞TM9SF1 mRNA表达的影响,组间比较差异有统计学意义(F=322.82,P〈0.01);其中2.5mg/L组(9326.0+115.97)表达最高,随着染氟剂量增加,TM9SFImRNA表达降低,5.0、10.0、20.0mg/L组(6495.0±323.9、4387.5+545.2、5962.5+536.7)与对照组(9221.0+107.5)比较,差异有统计学意义(P均〈0.01)。不同染氟剂量对人成骨细胞RasmRNA表达的影响,组间比较差异有统计学意义(F=703.28,P〈0.01);其中对照组表达最高,随着染毒剂量的增加,RasmRNA表达减少,2.5、5.0、10.0、20.0mg/L组(6144.5±270.82、5603.5+88.39、3181.0±159.81、4067.5±37.4)与对照组(6571.0±196.58)比较,差异有统计学意义(P均〈0.01)。结论氟影响人成骨细胞TM9SF1、RasmRNA的表达,表达量的高低与染氟剂量有关。 展开更多
关键词 氟化钠 成骨细胞 TM9sf1 MRNA RAS MRNA
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不同杀虫成分对Sf9细胞凋亡的影响 被引量:6
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作者 贾建文 黄劲飞 +2 位作者 王文祥 胡美英 钟国华 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期29-35,共7页
通过倒置显微形态观察凋亡小体、DNA琼脂糖凝胶电泳确证的模型,研究了8种代表性杀虫成分对草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda离体培养细胞系Sf9的凋亡诱导效果,以探讨不同杀虫成分对昆虫细胞凋亡的影响.结果表明,印楝素0.15-1.50μg/mL... 通过倒置显微形态观察凋亡小体、DNA琼脂糖凝胶电泳确证的模型,研究了8种代表性杀虫成分对草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda离体培养细胞系Sf9的凋亡诱导效果,以探讨不同杀虫成分对昆虫细胞凋亡的影响.结果表明,印楝素0.15-1.50μg/mL处理后72 h内、喜树碱0.35-3.50μg/mL处理后36 h,Sf9细胞产生大量典型凋亡小体,处理时间延长或剂量加大则以造成细胞坏死为主;DNA电泳产生典型的DNA Ladder,表明印楝素和喜树碱对Sf9具有明显的细胞凋亡诱导作用.印楝素1.5μg/mL诱导处理Sf9细胞凋亡高峰期为处理后24-48 h,喜树碱0.35-3.50μg/mL诱导处理Sf9细胞凋亡高峰期为处理后12 h.苦参碱、氟铃脲、毒死蜱、灭多威、氯氰菊酯以0.1-10.0μg/mL及昆虫蜕皮激素20-羟基蜕皮酮(20-hydroxyecdysone)以0.048-4.800μg/mL处理后72 h内对Sf9均无明显的细胞凋亡诱导作用.杀虫剂对昆虫细胞凋亡诱导效应随供试化合物、细胞种类、处理剂量、处理时间而异. 展开更多
关键词 细胞凋亡 草地贪夜蛾细胞系sf9 印楝素 喜树碱
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Sf9昆虫细胞宿主蛋白含量双抗体夹心ELISA检测方法的建立 被引量:6
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作者 王宁 佟雪莲 +4 位作者 边雅静 周思杭 李静 王奔 唐玉龙 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2014年第5期716-719,共4页
目的建立Sf9昆虫细胞宿主蛋白(host cell protein,HCP)含量双抗体夹心ELISA检测方法。方法从Sf9昆虫细胞中提取总蛋白,免疫家兔,制备兔抗Sf9细胞总蛋白多克隆抗体,经辛酸-硫酸铵沉淀和CL-4B层析柱纯化后,采用SDS-PAGE分析抗体纯度,间... 目的建立Sf9昆虫细胞宿主蛋白(host cell protein,HCP)含量双抗体夹心ELISA检测方法。方法从Sf9昆虫细胞中提取总蛋白,免疫家兔,制备兔抗Sf9细胞总蛋白多克隆抗体,经辛酸-硫酸铵沉淀和CL-4B层析柱纯化后,采用SDS-PAGE分析抗体纯度,间接ELISA法检测抗体效价,Western blot法检测抗体特异性;用纯化的多克隆抗体作为包被抗体,采用改良过碘酸钠法将HRP酶标记至纯化的抗体上作为酶标抗体,采用方阵滴定法确定双抗体夹心ELISA方法的最适工作条件。确定该方法的最佳线性范围及最低检测限,验证该方法的准确度及精密度。将表达戊型肝炎ORF2基因的重组杆状病毒感染Sf9细胞,收获病毒培养上清,制备3批纯化的重组蛋白,用建立的方法检测纯化过程中HCP含量的变化,验证其在纯化工艺中的适用性。与商品化试剂盒进行比较,检测两种方法的灵敏度及在制品中的适用性。结果纯化后的兔抗Sf9细胞总蛋白多克隆抗体纯度达90%以上,抗体效价为1∶10 000,可与Sf9细胞蛋白特异性结合。建立的双抗体夹心法ELSA方法最佳抗体包被浓度为20μg/ml,37℃孵育1 h;酶标抗体的工作浓度为1∶200,37℃孵育1 h;TMB室温显色30 min;测定各孔A450值。该方法的最佳线性范围为50~1 600 ng/ml,最低检测为50 ng/ml;不同浓度的Sf9细胞蛋白抗原回收率在87.8%~117%之间,变异系数均小于10%;制备的3批重组蛋白经超滤及层析纯化后,HCP含量均逐渐降低至小于50 ng/ml,纯化工艺可有效去除HCP;与商品化试剂盒比较,该方法更适用于检测戊肝类病毒颗粒样品。结论已成功建立Sf9昆虫细胞残余蛋白含量检测的双抗体夹心法ELSA方法,可用于检测Sf9昆虫细胞/杆状病毒表达系统纯化的重组蛋白中HCP含量。 展开更多
关键词 sf9昆虫细胞 宿主蛋白 双抗体夹心酶联免疫吸附测定
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印楝素A诱导Sf9细胞凋亡的显微和超微形态变化 被引量:4
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作者 程杏安 黄劲飞 +2 位作者 胡美英 胡黎明 张颜博 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期52-58,共7页
利用倒置显微镜和透射电子显微镜技术观察印楝素A诱导草地贪夜蛾Spodoptera frugperda蛹卵巢Sf9细胞凋亡的显微和超微形态变化.结果表明:1.5μg.mL-1印楝素A对Sf9细胞具有显著的凋亡诱导作用,从凋亡小体和贴壁细胞数量变化判断,印楝素... 利用倒置显微镜和透射电子显微镜技术观察印楝素A诱导草地贪夜蛾Spodoptera frugperda蛹卵巢Sf9细胞凋亡的显微和超微形态变化.结果表明:1.5μg.mL-1印楝素A对Sf9细胞具有显著的凋亡诱导作用,从凋亡小体和贴壁细胞数量变化判断,印楝素A处理12 h,细胞开始出现少量凋亡小体,12~24 h凋亡小体逐渐增多,但贴壁细胞未见明显减少,因此24 h之前(0~24 h)属于凋亡早期阶段;24~36 h凋亡小体大量出现,贴壁细胞逐渐减少,属于凋亡中期;处理36 h以上,凋亡小体和贴壁细胞急剧减少,细胞凋亡进入晚期.观察诱导24 h的细胞超微结构发现,胞内的主要细胞器在数量或形态上发生了显著变化,包括溶酶体数量显著增加,线粒体内部嵴变模糊,内质网从囊泡状变成线管状,细胞核出现分页、皱缩以及区域性膨大等. 展开更多
关键词 细胞凋亡 凋亡小体 印楝素A 超微结构 sf9细胞系
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昆虫细胞Sf9在四种生物反应器中的培养 被引量:5
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作者 谢秋玲 郑云程 廖美德 《暨南大学学报(自然科学与医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期96-100,共5页
昆虫细胞表达系统已广泛的应用于表达各种重组蛋白,研究昆虫细胞Sf9分别在4种生物反应器:转瓶、摇瓶、Bellocell反应器、发酵罐中进行悬浮培养.转瓶、摇瓶、Bellocell和发酵罐的细胞接种密度都是5×105/mL.对细胞数量、葡萄糖浓度... 昆虫细胞表达系统已广泛的应用于表达各种重组蛋白,研究昆虫细胞Sf9分别在4种生物反应器:转瓶、摇瓶、Bellocell反应器、发酵罐中进行悬浮培养.转瓶、摇瓶、Bellocell和发酵罐的细胞接种密度都是5×105/mL.对细胞数量、葡萄糖浓度以及主要代谢产物乳酸、氨的浓度进行检测.昆虫细胞经转瓶和摇瓶培养,细胞密度达到最高分别为:5.5×106、7.3×106/mL,是起始密度的11倍和14.6倍.昆虫细胞经Bellocell和发酵罐培养,细胞密度达到最高分别为:8.01×106、1.52×107/mL,是起始密度的16.02倍和30.4倍.昆虫细胞经四种生物反应器中的悬浮培养之后,都达到了很高的密度,尤其是经发酵罐培养达到如此高密度,为高效大规模表达药物蛋白,奠定重要的基础. 展开更多
关键词 昆虫细胞sf9 转瓶 摇瓶 Bellocell反应器 发酵罐
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30种吗啉化合物对昆虫细胞Spodoptera frugiperda(Sf9)的毒力筛选 被引量:3
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作者 张新刚 史冠莹 +2 位作者 何利钦 陶科 侯太平 《农药》 CAS 北大核心 2012年第4期301-303,共3页
[目的]利用Spodoptera frugiperda(Sf9)细胞,测定30种吗啉化合物的毒力,研究化合物对细胞周期的影响。[方法]毒力测定采用MTT法,用流式细胞仪进行细胞周期测定。[结果]30种化合物中有27种化合物对Sf9细胞有抑制效果,其中吗啉丙烯酮类化... [目的]利用Spodoptera frugiperda(Sf9)细胞,测定30种吗啉化合物的毒力,研究化合物对细胞周期的影响。[方法]毒力测定采用MTT法,用流式细胞仪进行细胞周期测定。[结果]30种化合物中有27种化合物对Sf9细胞有抑制效果,其中吗啉丙烯酮类化合物A3、A4、A6的抑制率超过50%,分别为(69.5±1.54)%、(67.9±1.87)%与(53.6±0.98)%。用50μmol/L的化合物A3处理Sf9细胞后,有凋亡小体出现。同时,化合物A3能干扰细胞正常的增殖周期,使部分细胞被阻滞在DNA合成期(S期)。[结论]化合物A3、A4、A6对Sf9细胞有较强的抑制作用,化合物A3可以干扰正常的细胞周期,并引发细胞凋亡。 展开更多
关键词 sf9 毒力 MTT法 细胞周期
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利用杆状病毒Bac-to-Bac系统在Sf9细胞中表达真菌细胞色素P450nor(英文) 被引量:3
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作者 周建刚 江月 +2 位作者 段媛媛 彭建新 刘德立 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期177-181,共5页
利用Bac to Bac杆状病毒载体表达系统将真菌细胞色素P4 5 0nor基因克隆至转移载体pFastBac1中 ,得到重组质粒pFastBac P4 5 0nor,再将其转化进入含穿梭载体Bacmid的受体菌DH10Bac中发生转座作用 ,得到含P4 5 0nor基因的重组穿梭载体rBac... 利用Bac to Bac杆状病毒载体表达系统将真菌细胞色素P4 5 0nor基因克隆至转移载体pFastBac1中 ,得到重组质粒pFastBac P4 5 0nor,再将其转化进入含穿梭载体Bacmid的受体菌DH10Bac中发生转座作用 ,得到含P4 5 0nor基因的重组穿梭载体rBacmidpAc P4 5 0nor。分离提取重组BacmidDNA ,并转染培养的昆虫细胞Sf9,得到重组病毒rAc p4 5 0nor。经酶切和PCR鉴定 ,细胞色素P4 5 0nor基因正确地插入到病毒基因组的多角体蛋白基因启动子下 ,SDS PAGE分析证明 :表达蛋白的分子量为 4 3kD左右。Westernblotting分析结果表明 :有一条特定的杂交带存在 ,且分子量相同 (约 4 3kD)。进一步证明了含有真菌细胞色素P4 5 0nor基因的重组表达载体和重组病毒构建成功 ,并在昆虫细胞Sf9中实现了高效表达 ,经MTT法测定表达的细胞色素P4 5 0nor具有还原NO的生物学活性。 展开更多
关键词 杆状病毒 BAC-TO-BAC系统 sf9细胞 表达 真菌 细胞色素P450nor 基因 生物学活性
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血清AFP、CA19-9、SF检测在原发性肝癌诊断中的应用 被引量:6
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作者 洪锡田 张瑞丽 王丹 《临床肝胆病杂志》 CAS 2007年第1期57-57,共1页
关键词 原发性肝癌患者 肝癌诊断 检测结果 CA19-9 血清AFP 肿瘤标志物 sf 血清甲胎蛋白
暂未订购
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