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蛋白激酶CK2催化亚基的特性
1
作者 熊卿圆 刘新光 周中军 《中山大学研究生学刊（自然科学与医学版）》 2009年第2期1-6,共6页
蛋白激酶CK2是一种真核细胞中普遍存在和高度保守的信使非依赖性丝/苏氨酸蛋白激酶,由两种有调节作用的CK2β亚基和两种催化亚基CK2α与CK2α组成。而两个催化亚基CK2α和CK2α的氨基酸顺序90%是相同的,所以它们的性质很相似,但却又有... 蛋白激酶CK2是一种真核细胞中普遍存在和高度保守的信使非依赖性丝/苏氨酸蛋白激酶,由两种有调节作用的CK2β亚基和两种催化亚基CK2α与CK2α组成。而两个催化亚基CK2α和CK2α的氨基酸顺序90%是相同的,所以它们的性质很相似,但却又有各自不同的独特作用和性质。如CK2α对于胚胎发育乃至成活形成起着必要的作用,而CK2α的作用主要体现在大脑及雄性的生殖细胞发育方面。本文将对这两种催化亚基的独特性质进行综述。 展开更多
关键词 蛋白激酶CK2 催化亚基 ck2a ck2a'
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重组人蛋白激酶CK2β亚基cDNA的克隆与测序 被引量：33
2
作者 刘新光 梁念慈 +1 位作者 马涧泉 刘文 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1999年第2期228-231,共4页
蛋白激酶ＣＫ２是一种存在的信使非依赖性丝／苏氨酸蛋白激酶．它是由两个催化亚基（α或α′）和两个调节亚基（β）组成的不均一四聚体．用反转录ＰＣＲ从ＨＬ－６０细胞中获得了人蛋白激酶ＣＫ２β亚基编码区ｃＤＮＡ，将ＮｄｅⅠ／... 蛋白激酶ＣＫ２是一种存在的信使非依赖性丝／苏氨酸蛋白激酶．它是由两个催化亚基（α或α′）和两个调节亚基（β）组成的不均一四聚体．用反转录ＰＣＲ从ＨＬ－６０细胞中获得了人蛋白激酶ＣＫ２β亚基编码区ｃＤＮＡ，将ＮｄｅⅠ／ＨｉｎｄⅢ双酶切ＰＣＲ产物连接到表达载体ｐＴ７－７的ＮｄｅⅠ／ＨｉｎｄⅢ双酶切位点中．转化感受态细菌ＤＨ５α获得转化子，阳性筛选率为７２％．限制性酶切分析结果表明，插入片段和重组质粒的大小与理论推测值相符．随机挑选４个阳性质粒测定其插入片段ＤＮＡ序列，结果显示有２个含有正确插入的人蛋白激酶ＣＫ２βｃＤＮＡ，命名为ｐＴＣＫＢ．其余２个克隆分别存在１个和２个点突变，即在其编码区ｃｏｎｄｏｎ１４８的ＴＣＡ→ＴＴＡ，结果Ｓｅｒ→Ｌｅｕ；另一个则在Ｃｏｎｄｏｎ１４３ＧＴＧ→ＡＴＧ，Ｖａｌ→Ｍｅｔ；Ｃｏｎｄｏｎ１７０ＧＴＧ→ＧＣＧ，Ｖａｌ→Ａｌａ．重组质粒（ｐＴＣＫＢ）克隆的成功，将为在原核细胞中表达蛋白激酶ＣＫ２β亚基以及利用ＣＫ２βｃＤＮＡ作为探针进行深入研究打下基础． 展开更多
关键词 人蛋白激酶CK2 Β亚基 DNA测序 重组 CDNA
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人蛋白激酶CK2α′亚基在大肠杆菌中的克隆、表达及其重组蛋白的纯化与性质鉴定 被引量：24
3
作者 陈小文 刘新光 +1 位作者 梁景耀 梁念慈 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期176-182,共7页
通过RT PCR从HL 6 0细胞获得人蛋白激酶CK2α′亚基编码区cDNA ,将NdeⅠ HindⅢ双酶切的PCR产物和pT7 7表达载体进行定向克隆、细菌转化、电泳初筛和限制性酶切分析鉴定 .随机挑选阳性克隆进行DNA测序确证 ,筛选含与已知序列完全相符... 通过RT PCR从HL 6 0细胞获得人蛋白激酶CK2α′亚基编码区cDNA ,将NdeⅠ HindⅢ双酶切的PCR产物和pT7 7表达载体进行定向克隆、细菌转化、电泳初筛和限制性酶切分析鉴定 .随机挑选阳性克隆进行DNA测序确证 ,筛选含与已知序列完全相符的重组质粒 (命名为pTCKA′) .将其转化BL2 1(DE3)菌 ,IPTG诱导后未见高效特异表达 .然后将人CK2α′cDNA亚克隆至GST融合蛋白表达载体 ,经同样转化和诱导步骤后可见一蛋白特异高效表达 .Western印迹结果证明 :该蛋白能与兔抗人CK2α′3 3 3 3 50 肽段抗血清发生特异性免疫反应 .采用GSH Sepharose 4B柱纯化 ,凝血酶酶切 ,最后从 4g细菌获 4 4mg纯化重组蛋白 .通过性质鉴定和酶动力学分析证明 :克隆、表达和纯化的重组蛋白是有生物学活性的人CK2α′亚基 . 展开更多
关键词 人蛋白激酶CK2α'亚基 大肠杆菌 克隆 表达 纯化 重组蛋白 鉴定
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CK2β、VEGF和p53蛋白表达对宫颈癌患者预后的预测价值研究 被引量：35
4
作者 陈晓露 张波 吴蓉宜 《重庆医学》 CAS 北大核心 2016年第8期1083-1086,共4页
目的探讨蛋白激酶CK2β、血管内皮生长因子(VEGF)和p53蛋白表达对宫颈癌患者预后的预测价值。方法选取成都市第六人民医院妇科宫颈癌手术患者123例作为研究组,同期选取慢性宫颈炎手术患者119例作为对照组,采用免疫组化法检测CK2β、VEGF... 目的探讨蛋白激酶CK2β、血管内皮生长因子(VEGF)和p53蛋白表达对宫颈癌患者预后的预测价值。方法选取成都市第六人民医院妇科宫颈癌手术患者123例作为研究组,同期选取慢性宫颈炎手术患者119例作为对照组,采用免疫组化法检测CK2β、VEGF和p53蛋白表达水平,比较两组阳性表达差异和分析3者对预后的预测价值。结果研究组CK2β、VEGF和p53蛋白阳性表达率明显高于对照组,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05),CK2β、VEGF和p53蛋白表达与临床分期、病理分级、淋巴结转移具有明显的相关性,其中临床分期和病理分级越高,合并淋巴结转移者CK2β、VEGF和p53蛋白阳性表达率越高,差异具有统计学意义(P<0.05),宫颈癌患者5年生存率为47.97%(59/123),其中预后状况与临床分期、病理分级、淋巴结转移、CK2β、VEGF及p53表达显著相关,临床分期和病理分级越高,合并淋巴结转移及CK2β、VEGF与p53阳性表达者5年生存率更低,差异具有统计学意义(P<0.05),其中Cox多因素分析显示,CK2β、VEGF与p53表达是预后状况的独立影响因素。结论宫颈癌组织CK2β、VEGF和p53阳性表达显著上调,其中三者阳性表达预示疾病预后欠佳,对疾病的预后状况具有重要的预测价值。 展开更多
关键词 宫颈肿瘤 CK2β 血管内皮生长因子 预后
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山奈酚抑制蛋白激酶CK2活性 被引量：15
5
作者 林小聪 刘新光 +1 位作者 陈小文 梁念慈 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第11期894-901,共8页
研究体外以及HL-60细胞内山奈酚对蛋白激酶CK2的抑制作用及机制.通过测定药物作用后转移到CK2底物上的[γ-32P]ATP的32P的放射性活度,探讨山奈酚对重组人CK2全酶以及细胞内CK2活性的影响;采用多重RT-PCR检测CK2α、α′和β亚基的mRNA... 研究体外以及HL-60细胞内山奈酚对蛋白激酶CK2的抑制作用及机制.通过测定药物作用后转移到CK2底物上的[γ-32P]ATP的32P的放射性活度,探讨山奈酚对重组人CK2全酶以及细胞内CK2活性的影响;采用多重RT-PCR检测CK2α、α′和β亚基的mRNA表达水平;通过Lineweaver-Burk作图法,分析CK2的酶动力学机制.山奈酚能显著抑制重组人CK2活性(IC50=1.88μmol/L)和HL-60细胞内的CK2活性,对细胞内CK2的作用效果强于阳性对照四溴-2-氮杂苯并咪唑(TBB).山奈酚作用2h,对CK2各亚基的mRNA表达水平均没有影响.山奈酚对重组人CK2的酶动力学分析表明,山奈酚与ATP(Ki=1.14μmol/L)及酪蛋白(Ki=1.03μmol/L)均呈非竞争性抑制作用.结果提示,山奈酚是一种有效的蛋白激酶CK2的抑制剂,其作用机制可能与其阻碍CK2与ATP以及底物的结合有关. 展开更多
关键词 蛋白激酶CK2 山奈酚 酶动力学
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槲皮素及其水溶性衍生物对HL-60细胞生长影响的比较 被引量：13
6
作者 翁云 佘戟 +1 位作者 蔡康荣 梁念慈 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期154-157,共4页
目的　研究并比较槲皮素及其硫酸酯钠盐衍生物 (槲皮素单硫酸酯钠、槲皮素二硫酸酯钠 )对HL 6 0细胞生长的影响。方法　细胞存活力以台盼兰染色法测定 ;蛋白激酶CK 2活性以连接到CK 2底物上的 [γ 3 2 P]GTP的3 2 P放射活度来检测 ;细... 目的　研究并比较槲皮素及其硫酸酯钠盐衍生物 (槲皮素单硫酸酯钠、槲皮素二硫酸酯钠 )对HL 6 0细胞生长的影响。方法　细胞存活力以台盼兰染色法测定 ;蛋白激酶CK 2活性以连接到CK 2底物上的 [γ 3 2 P]GTP的3 2 P放射活度来检测 ;细胞周期变化以流式细胞仪检测。结果　槲皮素、槲皮素单硫酸酯钠和槲皮素二硫酸酯钠均可抑制HL 6 0细胞的生长 ,槲皮素和槲皮素单硫酸酯钠对HL 6 0细胞生长的抑制作用差异无显著性 (P >0 0 5 ) ,槲皮素二硫酸酯钠的作用则比槲皮素弱得多 (P <0 0 1) ;槲皮素可抑制HL 6 0细胞中蛋白激酶CK 2的活性 ,而槲皮素单硫酸酯钠和槲皮1999 0 5 14收稿 ,1993 0 7 15修回 广东省自然科学基金资助课题 (No 940 5 86)和广东省高教厅重点学科资助课题 (No 93 0 4)作者简介 :翁　云 ,女 ,2 7岁 ,硕士 ;梁念慈 ,男 ,5 8岁 ,教授 ,博士生导师 ,广东医学院院长。研究方向 :生化药理学素二硫酸酯钠对HL 6 0细胞内CK 2活性无明显影响 ;槲皮素阻断HL 6 0细胞于G2 /M期 ,而槲皮素单硫酸酯钠和槲皮素二硫酸酯钠均阻断细胞于G0 /G1期。结论　槲皮素、槲皮素单硫酸酯钠和槲皮素二硫酸酯钠均为潜在的肿瘤细胞生长抑制剂 ,但它们的抑制机制却不相同 ,槲皮素 7 OH对维持槲皮素的功能有重要作用。 展开更多
关键词 槲皮素 单硫酸酯钠 HL-60细胞周期 蛋白激酶CK2
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9种蒽醌类衍生物对重组人蛋白激酶CK2活性的影响及构效浅析 被引量：7
7
作者 林小聪 李春梅 +2 位作者 刘新光 陈小文 梁念慈 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期733-737,共5页
目的观察9种蒽醌类衍生物对重组人蛋白激酶CK2全酶活性的影响,并进行构效分析。方法将利用基因工程技术获得的重组人CK2α′及β亚基在体外等摩尔混合构成CK2全酶。通过测定药物作用后转移到CK2底物上的[γ-32P]ATP的32P的放射性活度,... 目的观察9种蒽醌类衍生物对重组人蛋白激酶CK2全酶活性的影响,并进行构效分析。方法将利用基因工程技术获得的重组人CK2α′及β亚基在体外等摩尔混合构成CK2全酶。通过测定药物作用后转移到CK2底物上的[γ-32P]ATP的32P的放射性活度,探讨蒽醌类衍生物对重组人CK2全酶活性的抑制作用,并采用半数效量概率单位法计算其IC50值。结果米托蒽醌、2-羧基蒽醌、1,2-二氨蒽醌、1,8-二羟蒽醌和醌茜能明显抑制重组人CK2全酶活性,其IC50值分别是0.66、0.81、8.81、28.76和61.26μmol·L-1;其中米托蒽醌、2-羧基蒽醌和1,2-二氨蒽醌的作用效果均强于目前已知的CK2抑制剂DRB和A3。1-氨基蒽醌和1-氯蒽醌对CK2的作用效果较弱,其IC50值分别为143.38和221.18μmol·L-1;而蒽醌和2-乙基蒽醌对CK2的活性则没有明显的影响。构效分析表明:C2上的-COOH、C8位上的-OH以及C2上的-NH2可能分别是2-羧基蒽醌、1,8-二羟蒽醌和1,2-二氨基蒽醌的药效基团;而C2上的-CH2CH3和C1上的-Cl可能分别是2-乙基蒽醌和1-氯蒽醌的非必需基团。结论米托蒽醌、2-羧基蒽醌和1,2-二氨蒽醌是3种较强的重组人蛋白激酶CK2的抑制剂。 展开更多
关键词 蛋白激酶CK2 蒽醌类衍生物 IC50 构效分析
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蛋白激酶CK2抑制剂TBB对甲状腺鳞癌细胞株SW579 CK2β和Akt表达的影响 被引量：5
8
作者 刘超 刘洋 +2 位作者 赵颂 王翠瑶 肖建英 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期276-280,共5页
目的:观察四溴苯三唑(TBB)对甲状腺鳞癌SW579细胞株CK2β和Akt表达的影响,探讨TBB抗甲状腺癌的作用机制。方法:体外培养SW579细胞,实验分为对照组(未加任何处理组和DMSO组)、TBB组(终浓度为25μmol·L-1)和Wortmannin组(终浓度为100... 目的:观察四溴苯三唑(TBB)对甲状腺鳞癌SW579细胞株CK2β和Akt表达的影响,探讨TBB抗甲状腺癌的作用机制。方法:体外培养SW579细胞,实验分为对照组(未加任何处理组和DMSO组)、TBB组(终浓度为25μmol·L-1)和Wortmannin组(终浓度为100 nmol·L-1)。MTT比色法测定细胞生长抑制率,同时测定蛋白激酶CK2的活性。采用RT-PCR方法检测SW579细胞CK2β及Akt的mRNA表达,分析各处理组CK2β及Akt基因表达变化。采用Western blotting方法检测SW579细胞CK2β及Akt的蛋白表达,分析各处理组CK2β及Akt的蛋白表达变化。结果:与对照组比较,TBB组SW579细胞生长抑制率明显增加(P<0.01),细胞内CK2的活性明显降低(P<0.01)。RT-PCR结果表明,与对照组比较,TBB组CK2β的mRNA表达水平显著降低(P<0.01),Akt的mRNA表达水平无明显变化(P>0.05)。Western blotting结果表明,与未处理组比较,Wortmannin组内源性CK2的活性无明显变化(P>0.05),TBB组CK2β的表达明显降低(P<0.01),同时Akt Thr308和Ser473磷酸化状态受到抑制(P<0.01),总Akt水平无明显变化。结论:TBB可降低SW579细胞蛋白激酶CK2β的表达,进而再下调Akt的活性。 展开更多
关键词 四溴苯三唑 甲状腺鳞癌 CK2β AKT/PKB SW579
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重组人蛋白激酶CK 2α亚基的原核表达、纯化与鉴定 被引量：17
9
作者 刘新光 梁念慈 马涧泉 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 2000年第1期17-22,共6页
将构建成功的人蛋白激酶 CK2 α亚基 c DNA的重组质粒 ,转化大肠杆菌 BL2 1 ( DE3) ,IPTG诱导后获特异高效表达 ,表达蛋白占菌体总蛋白的 30 % ,但大多数重组蛋白以不溶形式存在 .表达产物依次进行 DE- 5 2、P1 1磷酸纤维素和肝素 - Sep... 将构建成功的人蛋白激酶 CK2 α亚基 c DNA的重组质粒 ,转化大肠杆菌 BL2 1 ( DE3) ,IPTG诱导后获特异高效表达 ,表达蛋白占菌体总蛋白的 30 % ,但大多数重组蛋白以不溶形式存在 .表达产物依次进行 DE- 5 2、P1 1磷酸纤维素和肝素 - Sepharose柱层析分离 ,最后从 30 9mg可溶性蛋白质中得到 6.1 mg纯化蛋白 . SDS- PAGE显示纯化的蛋白质为一分子量 4 2 k D的单一蛋白带 .Western- blot的结果证明 :纯化的表达产物与抗人 CK2α抗体可发生特异性免疫反应 . CK2α和β亚基等摩尔分子混合可组成有完全活性的全酶 .重组的 CK2全酶的性质和功能与该酶的已知特性一致 .这些结果证明重组蛋白是人蛋白激酶 CK2 展开更多
关键词 人蛋白激酶CK2α亚基 原核表达 纯化 鉴定
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CIP2A和CK2β蛋白在食管鳞状细胞癌中的表达及其与预后的关系 被引量：5
10
作者 李红伟 李多杰 +3 位作者 柴大敏 江浩 汪朝歌 马莉 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期200-205,共6页
目的探讨CIP2A和CK2β蛋白在食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中的表达意义及对患者预后的影响。方法采用免疫组织化学法检测155例ESCC组织(实验组)、50例癌旁正常黏膜组织(对照组)中CIP2A和CK2β蛋白的表达,分析CIP2A和CK2β蛋白表达水平及与... 目的探讨CIP2A和CK2β蛋白在食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中的表达意义及对患者预后的影响。方法采用免疫组织化学法检测155例ESCC组织(实验组)、50例癌旁正常黏膜组织(对照组)中CIP2A和CK2β蛋白的表达,分析CIP2A和CK2β蛋白表达水平及与临床病理参数之间的关系,应用Kaplan-Meier生存分析和Cox多因素分析对ESCC患者的生存情况进行分析。结果 CIP2A和CK2β蛋白在ESCC组织中的表达阳性率分别为76.67%和66.45%,均明显高于正常对照组的16.00%和12.00%,差异有统计学意义(均P=0.000)。CIP2A蛋白与ESCC的淋巴结转移及临床分期有关(P=0.005,P=0.000),而与患者的年龄、性别、组织学分级和浸润深度等无相关性。CK2β蛋白的表达与ESCC的组织学分级、淋巴结转移和临床分期有关(P=0.000,P=0.004,P=0.000),而与患者的年龄、性别和浸润深度无相关性。CIP2A与CK2β蛋白表达呈正相关(r=0.611,P=0.000)。ESCC患者总体5年生存率为23.33%。CIP2A蛋白表达阳性患者的5年生存率为8.11%(9/111),阴性者为66.67%(26/39),差异具有统计学意义(P=0.000)。CK2β蛋白表达阳性患者的5年生存率为6.06%(6/99),阴性者为56.86%(29/51),差异具有统计学意义(P=0.000)。Cox多因素预后分析显示,TNM临床分期和CIP2A及CK2β蛋白表达水平是影响ESCC患者预后的独立因素(P=0.008,P=0.013,P=0.000)。结论 CIP2A和CK2β的表达与ESCC发生及发展密切相关,其可能参与了ESCC的浸润及转移,阳性表达者预后较差。联合检测2种蛋白的表达对判断ESCC的预后具有重要意义。 展开更多
关键词 食管鳞状细胞癌 CIP2A CK2β 预后
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大黄素对顺铂耐药卵巢癌细胞的逆转作用及其相关基因表达研究 被引量：7
11
作者 秦春明 侯华新 +4 位作者 程道海 李力 黎丹戎 刘瑛 宋慧 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 2011年第4期638-642,共5页
为了研究大黄素对人卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP细胞耐药逆转作用及其机制,本研究以卵巢癌SK-OV3和多药耐药细胞株SKOV3/DDP为研究对象,通过噻唑蓝(MTT)法测定SKOV3/DDP细胞的耐药指数和大黄素在无细胞毒浓度下对卵巢癌细胞耐受顺铂(DDP... 为了研究大黄素对人卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP细胞耐药逆转作用及其机制,本研究以卵巢癌SK-OV3和多药耐药细胞株SKOV3/DDP为研究对象,通过噻唑蓝(MTT)法测定SKOV3/DDP细胞的耐药指数和大黄素在无细胞毒浓度下对卵巢癌细胞耐受顺铂(DDP)的逆转作用;采用Real-time PCR技术检测耐药相关基因HIF-1α、STAT1、CK2α、GSTP1 mRNA表达情况。结果发现无细胞毒作用浓度的7.8 mg/L和3.9 mg/L大黄素能逆转SKOV3/DDP细胞对DDP的耐药性,对DDP的逆转倍数分别为1.91倍和1.30倍,与SKOV3比较,SKOV3/DDP细胞的HIF-1α、STAT1、CK2α、GSTP1 mRNA表达明显升高(P<0.01)。3.9 mg/L和7.8 mg/L大黄素作用均可下调HIF-1α、CK2α、STAT1 mRNA表达,存在剂量-效应依赖关系。7.8 mg/L大黄素作用可下调GSTP1 mR-NA表达,但3.9 mg/L大黄素作用不明显。7.8 mg/L和3.9 mg/L大黄素联合IC50浓度的DDP时,四个耐药相关基因的表达与单独化疗药组作用相比明显下调(P<0.01)。提示无细胞毒浓度的大黄素对卵巢癌细胞耐药逆转的作用可能是通过下调HIF-1α、STAT1、GSTP1、CK2α的表达起作用。 展开更多
关键词 大黄素 卵巢癌耐顺铂细胞 耐药逆转 HIF-1α STAT1 GSTP1 CK2α
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黄芩甙对重组人蛋白激酶CK2全酶的抑制作用及其动力学分析 被引量：4
12
作者 林小聪 刘新光 +2 位作者 陈小文 陈伟珠 梁念慈 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第8期874-878,共5页
背景与目的蛋白激酶CK2是一种在真核细胞中普遍存在的多功能的丝/苏氨酸蛋白激酶。在许多实体瘤、白血病细胞中CK2的活性均增高。其α及α'基因是原癌基因。CK2作为一种具有潜在抗肿瘤作用的分子靶点正日益受到重视。为了寻找肿瘤... 背景与目的蛋白激酶CK2是一种在真核细胞中普遍存在的多功能的丝/苏氨酸蛋白激酶。在许多实体瘤、白血病细胞中CK2的活性均增高。其α及α'基因是原癌基因。CK2作为一种具有潜在抗肿瘤作用的分子靶点正日益受到重视。为了寻找肿瘤细胞内CK2的特异性抑制剂,本研究观察黄芩甙体外对重组人蛋白激酶CK2的抑制效果,并进行酶动力学分析以确定其抑制作用类型。方法利用基因工程技术进行克隆、表达和纯化,获得重组人CK2的α'及β亚基并在体外等摩尔混合构成CK2全酶,测定不同条件下CK2的活性。CK2活性通过测定转移到CK2底物上的[γ-32P]ATP的32P的放射性活度来检测。结果黄芩甙能显著抑制重组人蛋白激酶CK2的活性(IC50=2.54μmol/L)。酶动力学分析表明,黄芩甙与ATP呈非竞争性抑制CK2的活性(Ki=7.73μmol/L),与酪蛋白则呈混合性抑制CK2的活性(Ki=3.07μmol/L)。结论黄芩甙是一种较强的体外蛋白激酶CK2的抑制剂。 展开更多
关键词 蛋白激酶CK2 重组蛋白 全酶 黄芩甙 酶动力学
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蛋白激酶CK2在细胞周期调控中的作用 被引量：12
13
作者 刘振杰 刘新光 梁念慈 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第11期1281-1285,共5页
细胞周期的研究是生物生长、发育、遗传及医学等相关领域中重大问题研究的基础,其运转的分子基础是以Cyc lin-CDK-CK I为中心的细胞周期网络调控系统。蛋白激酶CK2在进化过程中是最保守的蛋白激酶之一,大量的研究表明,其在细胞周期的调... 细胞周期的研究是生物生长、发育、遗传及医学等相关领域中重大问题研究的基础,其运转的分子基础是以Cyc lin-CDK-CK I为中心的细胞周期网络调控系统。蛋白激酶CK2在进化过程中是最保守的蛋白激酶之一,大量的研究表明,其在细胞周期的调控中发挥着举足轻重的作用。 展开更多
关键词 蛋白激酶CK2 细胞周期 调控
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重组人CK2β亚基的原核表达、纯化与鉴定 被引量：29
14
作者 刘新光 梁念慈 马涧泉 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2000年第2期201-205,共5页
将构建成功的人蛋白激酶CK2 β亚基cDNA的重组质粒 ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,在IPTG诱导下表达 .表达蛋白大多数以不溶形式存在 .6L (约 10 2g)表达菌抽提得到约 2 0mg的可溶性表达产物 ,通过P11磷酸纤维素一步层析分离 ,得到 6 8mg... 将构建成功的人蛋白激酶CK2 β亚基cDNA的重组质粒 ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,在IPTG诱导下表达 .表达蛋白大多数以不溶形式存在 .6L (约 10 2g)表达菌抽提得到约 2 0mg的可溶性表达产物 ,通过P11磷酸纤维素一步层析分离 ,得到 6 8mg纯化蛋白 .SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示纯化的蛋白为一分子质量2 6ku的单一蛋白带 .蛋白质印迹结果证明 :纯化的表达产物与抗人CK2 β抗体可发生特异性免疫反应 .CK2 β亚基对CK2α有激活作用 ,纯化的CK2α和β亚基在等摩尔混合时即可组成有最大生物活性的全酶 .实验结果有力地证明了克隆表达与纯化的重组蛋白是人蛋白激酶CK2 β亚基 . 展开更多
关键词 人蛋白激酶 CK2β亚基 蛋白质纯化 基因表达
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用酵母双杂交系统筛选泛素/核糖体蛋白S27a 被引量：4
15
作者 黄功华 梁景耀 +2 位作者 陈碧 刘新光 梁念慈 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第1期40-46,共7页
背景与目的:蛋白激酶CK2是一种真核细胞中普遍存在的信使非依赖性丝/苏氨酸蛋白激酶,在细胞增殖和分化、信号的传导和加工等方面起重要作用。CK2在多种白血病细胞中的活性比相应的正常组织高2～8倍,且CK2的变化与肿瘤的生长情况相关。... 背景与目的:蛋白激酶CK2是一种真核细胞中普遍存在的信使非依赖性丝/苏氨酸蛋白激酶,在细胞增殖和分化、信号的传导和加工等方面起重要作用。CK2在多种白血病细胞中的活性比相应的正常组织高2～8倍,且CK2的变化与肿瘤的生长情况相关。为研究其在白血病细胞中的作用机制,本研究拟利用酵母双杂交系统从自行构建的HL鄄60细胞cDNA文库中筛选出与蛋白激酶CK2α'亚基相互作用的蛋白。方法:通过PCR扩增已构建成功的重组质粒pTHCK2A',获得人CK2α'亚基编码区cDNA;将PstⅠ/NdeⅠ双酶切的PCR产物连接到同样酶切的“诱饵”载体pGBKT7,构建酵母双杂交穿梭表达质粒(BD质粒),经DNA测序确证及转染感受态酵母菌AH109以排除自主激活。从体外培养的HL鄄60细胞中提取总RNA,以酵母穿梭表达质粒pGADT7鄄Rec为载体,采用CLONTECHSMART(switchingmechanismat5'endofRNAtranscript)技术,在酵母细胞中构建HL鄄60细胞的酵母双杂交cDNA文库,文库质粒为AD质粒。将上述构建成功的BD质粒、AD质粒共转染感受态酵母菌AH109,进行酵母双杂交实验。以筛选真阳性克隆(即与人蛋白激酶CK2α'相互作用的蛋白)。结果:经过酵母双杂交实验,筛选出6种与蛋白激酶CK2α'相互作用蛋白,核酸序列分析及同源性检索表明,其中1个与泛素/核糖体蛋白S27a有高度? 展开更多
关键词 泛素 核糖体蛋白S27a α'催化亚基 蛋白激酶 CK2 人类 酵母双杂交系统 相互作用蛋白
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蛋白激酶CK2抑制剂-醌茜素在非小细胞肺癌中的抗肿瘤作用 被引量：5
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作者 李珂 周瑜 +5 位作者 张盛 李倩文 李振宇 周方正 伍钢 孟睿 《中国医院药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第17期1460-1465,共6页
目的:研究蛋白激酶CK2抑制剂-醌茜素在非小细胞肺癌中的抗肿瘤作用,探讨蛋白激酶CK2成为非小细胞肺癌治疗新靶点的可能。方法:使用MTT法检测细胞增殖,研究醌茜素对非小细胞肺癌细胞A549、H460细胞增殖的影响,探究醌茜素作用于A549、H46... 目的:研究蛋白激酶CK2抑制剂-醌茜素在非小细胞肺癌中的抗肿瘤作用,探讨蛋白激酶CK2成为非小细胞肺癌治疗新靶点的可能。方法:使用MTT法检测细胞增殖,研究醌茜素对非小细胞肺癌细胞A549、H460细胞增殖的影响,探究醌茜素作用于A549、H460增殖的可能途径。使用流式细胞术检测醌茜素作用于A549、H460后,细胞的凋亡以及周期的变化。使用Trans-well迁移实验检测细胞迁移能力,探究醌茜素对A549、H460迁移的影响。结果:醌茜素能够抑制A549、H460细胞的增殖,并且该抑制作用具有时间依赖性及浓度依赖性(P<0.01,P<0.01)。在25μmol·L-1及50μmol·L-1浓度下,醌茜素能够促进细胞A549、H460凋亡(P<0.01,P<0.01;P<0.01,P<0.01)。在实验条件下,醌茜素对A549的周期影响差异没有统计学意义,但醌茜素在50μmol·L-1浓度下对H460具有周期阻滞作用,G2/M期的比例明显增加(P<0.01)。醌茜素能够显著抑制A549、H460细胞的迁移活动。结论:蛋白激酶CK2抑制剂-醌茜素能够抑制非小细胞肺癌细胞系A549、H460增殖、迁移,促进其凋亡,发挥抗肿瘤作用,有可能成为一种具有潜力的非小细胞肺癌分子靶向治疗的新型药物。 展开更多
关键词 蛋白激酶CK2 非小细胞肺癌 醌茜素 肿瘤治疗靶点
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蛋白激酶CK2α在食管癌中的表达及意义 被引量：4
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作者 曹传辉 陈勃 +3 位作者 梁基韵 董忠谊 黄志勇 吴德华 《广东医学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期1680-1683,共4页
目的研究蛋白激酶CK2α与食管癌发生发展及临床病理因素的相关性。方法采用免疫组织化学方法检测组织芯片中56对食管癌及其癌旁正常黏膜中CK2α蛋白的表达。分别提取9对手术切除的食管癌及其癌旁组织标本的RNA与蛋白,通过qRT-PCR和Weste... 目的研究蛋白激酶CK2α与食管癌发生发展及临床病理因素的相关性。方法采用免疫组织化学方法检测组织芯片中56对食管癌及其癌旁正常黏膜中CK2α蛋白的表达。分别提取9对手术切除的食管癌及其癌旁组织标本的RNA与蛋白,通过qRT-PCR和Western blot的方法分别在基因与蛋白水平检测CK2α的表达水平。结果在56对食管癌及癌旁组织中,CK2α在癌组织中的表达明显强于癌旁正常黏膜组织,在食管癌组织中弱阳性表达率为8.9%,中阳性表达率为35.7%,强阳性表达率为55.4%,而癌旁正常黏膜组织分别为96.4%、3.6%和0.0%,两者差异有统计学意义(P<0.001)。CK2α蛋白在食管癌中的表达水平与其TNM分期有关(P<0.001)。qRT-PCR及Western blot证实无论是在基因水平还是蛋白水平,蛋白激酶CK2α在食管癌组织中均呈高表达。结论蛋白激酶CK2α可以作为食管癌发生发展及判断其进展程度的分子靶标。 展开更多
关键词 CK2α 食管癌 进展程度 分子靶标
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蛋白激酶CK2β SiRNA对肺腺癌细胞A549增殖的抑制作用 被引量：3
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作者 阮杰 王菲菲 +3 位作者 刘新光 骆艳婷 刘振杰 梁念慈 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期701-706,共6页
目的:探讨蛋白激酶CK2B特异性小干扰RNA对肺腺癌细胞系A549生长增殖的影响。方法:构建CK2βsiRNA表达质粒稳定转染A549细胞,RT-PCR、免疫印迹、免疫细胞化学技术检测转染前后CK2β的mRNA和蛋白表达水平,同位素掺入法测定细胞内CK2活性,... 目的:探讨蛋白激酶CK2B特异性小干扰RNA对肺腺癌细胞系A549生长增殖的影响。方法:构建CK2βsiRNA表达质粒稳定转染A549细胞,RT-PCR、免疫印迹、免疫细胞化学技术检测转染前后CK2β的mRNA和蛋白表达水平,同位素掺入法测定细胞内CK2活性,细胞计数法绘制细胞生长曲线,计算细胞倍增时间,流式细胞术分析细胞周期。结果:与空白组和阴性对照组相比,稳定转染pGPU6-CSNK2B质粒后,A549细胞中CK2β的mRNA水平、胞浆蛋白表达水平以及CK2活性均明显下降(P<0.05),但各组间细胞核中CK2β的蛋白表达水平无明显差异(P>0.05);A549细胞生长明显受到抑制,倍增时间增加;A549细胞阻滞于G0/G1期。结论:CK2β siRNA可以下调A549细胞中CK2β的表达及其激酶活性,并抑制细胞增殖;本研究为CK2特异性siRNA作为抗肿瘤药物的开发和CK2药靶的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 肺肿瘤 癌 蛋白激酶CK2 CK2β SIRNA
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蛋白激酶CK2的研究进展 被引量：16
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作者 黄功华 刘新光 梁念慈 《生命的化学》 CAS CSCD 2003年第3期169-171,共3页
蛋白激酶CK2是一种真核细胞中普遍存在的信使非依赖性丝 /苏氨酸蛋白激酶。近年来 ,对蛋白激酶CK2的研究也取得了一些重要进展 ,尤其是蛋白激酶CK2的结构及其作用底物 ,蛋白激酶CK2与肿瘤及细胞凋亡的关系 。
关键词 蛋白激酶CK2 底物 肿瘤细胞凋亡 研究进展
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白杨素抑制H1299细胞系肺癌干细胞样细胞肿瘤球形成 被引量：4
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作者 冷超 韦兵 +4 位作者 莫靓 龙超众 冯耀光 贺大璞 王元星 《中国现代医学杂志》 CAS 北大核心 2015年第25期30-33,共4页
目的观察白杨素是否抑制人肺癌H1299细胞系干细胞样细胞肿瘤球形成能力,并探讨其作用机制是否涉及CK2α表达和Notch1信号。方法干细胞条件培养基悬浮培养与扩增H1299细胞系球形成细胞作为肺癌干细胞样细胞。不同浓度白杨素处理,肿瘤球... 目的观察白杨素是否抑制人肺癌H1299细胞系干细胞样细胞肿瘤球形成能力,并探讨其作用机制是否涉及CK2α表达和Notch1信号。方法干细胞条件培养基悬浮培养与扩增H1299细胞系球形成细胞作为肺癌干细胞样细胞。不同浓度白杨素处理,肿瘤球形成法检测H1299球形成细胞的肿瘤球形成率;Western blot分析CK2α、Notch1和CD44蛋白表达。CK2αsi RNA转染探讨白杨素作用机制。结果白杨素(5、10和20μM)处理H1299球形成细胞72 h,肿瘤球形成率以浓度依赖方式降低;CK2α、Notch1和CD44蛋白表达下调。CK2αsi RNA转染H1299球形成细胞导致Notch1信号抑制,并协同白杨素抑制肿瘤球形成。结论白杨素具有抑制肺癌干细胞样细胞肿瘤球形成作用,其作用机制涉及下调CK2α表达抑制Notch1信号传导。 展开更多
关键词 肺癌 肺癌干细胞 白杨素 CK2α NOTCH1
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