抗CD52单克隆抗体ADCC转基因测活方法的建立 被引量：1

1

作者 刘春雨 于传飞 +3 位作者 崔永霏 肖启东 黄璟 王兰 《微生物学免疫学进展》 2019年第5期27-33,共7页

目的 建立转基因细胞法测定抗CD52单克隆抗体(单抗)的抗体依赖细胞介导的细胞毒性作用(antibody-dependentcell-mediatedcytotoxicity,ADCC)生物学活性检测方法。方法 ①以Ramos细胞系作为靶细胞,以Jurkat-hFcγRⅢa/FcεRIγ-NFAT转基... 目的 建立转基因细胞法测定抗CD52单克隆抗体(单抗)的抗体依赖细胞介导的细胞毒性作用(antibody-dependentcell-mediatedcytotoxicity,ADCC)生物学活性检测方法。方法 ①以Ramos细胞系作为靶细胞,以Jurkat-hFcγRⅢa/FcεRIγ-NFAT转基因细胞系作为效应细胞,通过荧光素酶检测系统(Bright-GloTM luciferase Assay System)建立抗CD52单抗的ADCC生物学活性检测方法;②对靶细胞、量效范围、效靶比及诱导时间进行优化并进行方法学验证;③研究建立的方法应用于对不同抗CD52单抗的ADCC生物学活性检测。结果 建立抗CD52单抗的ADCC生物学活性检测方法,抗CD52单抗在该方法中存在量效关系,符合四参数方程:y=(A-D)/[1+(x/C)B]+D;经优化后确定抗体量效范围为起始质量浓度360μg/mL,4倍系列稀释9个稀释度;效靶比为3∶1,诱导时间为6.0h;该方法具有良好的专属性;4个不同稀释组回收率样品经3次测定,相对效价分别为(45.58±4.67)%、(71.61±9.45)%、(122.92±7.92)%和(149.94±14.58)%;对应的回收率分别为(91.16±9.34)%、(95.49±12.60)%、(98.34±6.34)%和(99.96±9.72)%,上述结果的变异系数(coefficientofvariation,CV)均小于15%;且该方法也适用于不同抗CD52单抗的ADCC效应评价。结论 利用转基因细胞法成功建立了抗CD52单抗ADCC生物学活性检测方法,该方法专属性强、准确性高、重复性好,可用于评价抗CD52单抗的ADCC生物学活性。 展开更多

关键词 抗cd52单克隆抗体 单克隆抗体 抗体依赖细胞介导的细胞毒性作用 生物学活性 报告基因

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重组抗CD52单克隆抗体的食蟹猴单次静脉注射毒性研究

2

作者 王欣 张琳 +5 位作者 杨莹 齐卫红 姜华 林志 王海彬 耿兴超 《中国药事》 CAS 2022年第10期1147-1165,共19页

目的:开展食蟹猴静脉注射重组抗CD52人源化单克隆抗体注射液单次给药毒性研究,考察动物体内耐受性、给药后出现的毒性反应及严重程度和药物毒性作用靶器官,评价其安全性。方法:首先应用流式细胞术检测方法,筛选出8只红细胞表面CD52抗原... 目的:开展食蟹猴静脉注射重组抗CD52人源化单克隆抗体注射液单次给药毒性研究,考察动物体内耐受性、给药后出现的毒性反应及严重程度和药物毒性作用靶器官,评价其安全性。方法:首先应用流式细胞术检测方法,筛选出8只红细胞表面CD52抗原阴性食蟹猴,用于单次给药毒性研究。将动物随机分成4组,包括溶媒对照组和3、10、30 mg·kg^(-1)剂量组,每组2只,雌雄各半。采用静脉推注给药,给药1次。试验期间,每天观察动物的临床症状和摄食量,每周称量1次体质量。分别在给药第2、8、15 d采集动物外周血液进行临床病理检查,包括血液学(含凝血)、血清生化(含电解质)。分别在给药第2、6、8、15、21 d采集动物外周血液进行T淋巴细胞及亚群和B淋巴细胞的分类计数。于给药第22 d解剖动物并进行大体病理学检查。结果:动物给药后,在10 mg·kg^(-1)和30 mg·kg^(-1)剂量下,会引起白细胞总数、淋巴细胞、单核细胞数量和比例、T淋巴细胞数量及其亚群细胞数量下降,这些变化与药物的免疫抑制作用相关。受试物还会引起血红蛋白浓度下降,网织红细胞数量和比例和总胆红素升高。结论:给予食蟹猴单次静脉注射3、10、30 mg·kg^(-1)重组抗CD52人源化单克隆抗体注射液后,动物耐受良好,最大耐受量是30 mg·kg^(-1)。本研究的给药剂量以及与药物相关的毒性发现,为后续开展长期毒性研究提供了参考。 展开更多

关键词 cd52抗原 单克隆抗体 食蟹猴 单次给药毒性 安全性评价

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CD52在肿瘤研究中的相关进展

3

作者 卢必敏 卢冠铭 《右江医学》 2022年第11期801-806,共6页

CD52分子是由12个氨基酸组成的小分子糖基磷脂酰肌醇(glycosylphosphatidylinositol,GPI)锚定糖蛋白,在N末端第3位天冬酰胺处高度糖基化,与细胞膜上的GPI在C末端处相连接。CD52分子主要在淋巴细胞、单核细胞等血细胞及恶性淋巴瘤细胞广... CD52分子是由12个氨基酸组成的小分子糖基磷脂酰肌醇(glycosylphosphatidylinositol,GPI)锚定糖蛋白,在N末端第3位天冬酰胺处高度糖基化,与细胞膜上的GPI在C末端处相连接。CD52分子主要在淋巴细胞、单核细胞等血细胞及恶性淋巴瘤细胞广泛表达,在雄性生殖系统的某些细胞表面也可表达,在B细胞与T细胞中高度表达。早期关于癌症界CD52的研究重点集中在B淋巴细胞肿瘤,近年来越来越多的研究表明CD52与实体性肿瘤及一些疾病也有着重要关系。该文就CD52分子结构、基因结构及其细胞组织分布情况,与其在一些疾病和几种常见肿瘤的研究进展等方面做一综述。 展开更多

关键词 cd52 抗cd52单克隆抗体 肿瘤

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3种不同Protein A亲和层析填料纯化抗CD52单克隆抗体的比较 被引量：3

4

作者 南建军 秦海艳 +4 位作者 宋宪铭 安晨 宋兰兰 赵晓瑞 陈继军 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期78-83,共6页

目的比较3种Protein A亲和层析填料MabSelect SuRe、Protein A Diamond及UniMab 50纯化抗CD52单克隆抗体的载量及纯化效果。方法将浓度为1.24 mg/mL的抗CD52单克隆抗体分别流经3种Protein A亲和层析填料,确保保留时间一致,检测流穿液的... 目的比较3种Protein A亲和层析填料MabSelect SuRe、Protein A Diamond及UniMab 50纯化抗CD52单克隆抗体的载量及纯化效果。方法将浓度为1.24 mg/mL的抗CD52单克隆抗体分别流经3种Protein A亲和层析填料,确保保留时间一致,检测流穿液的抗体浓度,以流穿液中抗体浓度达10%上样浓度时的上样量确定填料的最大动态载量。3种填料均按80%最大载量上样,纯化3批抗CD52单克隆抗体培养上清样品,比较洗脱体积、抗体回收率及洗脱收集液中抗体浓度、抗体纯度、电荷异质性、宿主蛋白残余量、宿主DNA残余量、填料配基Protein A脱落量。结果填料MabSelect SuRe与Protein A Diamond在载量、宿主蛋白残余量、填料配基Protein A脱落量方面接近;在抗体纯度、电荷异质性、宿主DNA残余量方面,3种填料表现相当;在抗体回收率、洗脱体积及抗体浓度方面,UniMab 50表现最佳。结论 3种填料亲和纯化抗CD52单克隆抗体的效果各有优劣,但均可满足该纯化步骤的要求,可根据实际工艺状况及质控要求进行选择。 展开更多

关键词 亲和层析填料 载量 抗cd52单克隆抗体 纯化效果

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人源化CD52单克隆抗体诱导食蟹猴动物模型的建立 被引量：2

5

作者 单廷 张景斌 +3 位作者 曲林林 李秋荣 李宁 黎介寿 《肠外与肠内营养》 CAS 北大核心 2011年第2期102-105,共4页

目的:建立人源化CD52单克隆抗体诱导食蟹猴的动物模型。方法:使用流式细胞仪筛选出红细胞表面不表达CD52抗原的食蟹猴,并观察给药后不同时间血中淋巴细胞数量变化情况。结果:食蟹猴血中淋巴细胞呈现出快速被清除及恢复的过程。CD20+B淋... 目的:建立人源化CD52单克隆抗体诱导食蟹猴的动物模型。方法:使用流式细胞仪筛选出红细胞表面不表达CD52抗原的食蟹猴,并观察给药后不同时间血中淋巴细胞数量变化情况。结果:食蟹猴血中淋巴细胞呈现出快速被清除及恢复的过程。CD20+B淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞、CD4+T淋巴细胞分别在给药后213、5和56 d恢复至给药前水平。结论:食蟹猴外周血中淋巴细胞清除效果略低于临床病人,恢复速度较快。本实验模型可用于临床人源化CD52单克隆抗体器官移植前的实验研究。 展开更多

关键词 人源化cd52单克隆抗体 食蟹猴 淋巴细胞

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人CD52基因的克隆及稳定转染细胞系的建立

6

作者 刘友 屈浩 +4 位作者 石琳 刘红芹 黄丽华 张宇光 朱卫彬 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2010年第5期471-474,共4页

目的克隆人CD52基因,构建真核表达载体,并在CHO细胞中稳定表达。方法提取人Hut-78细胞总RNA,采用RT-PCR法扩增CD52基因,定向克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+),构建重组表达质粒pcDNA3.1(+)/CD52,通过脂质体法转染CHO细胞,建立稳定转染的... 目的克隆人CD52基因,构建真核表达载体,并在CHO细胞中稳定表达。方法提取人Hut-78细胞总RNA,采用RT-PCR法扩增CD52基因,定向克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+),构建重组表达质粒pcDNA3.1(+)/CD52,通过脂质体法转染CHO细胞,建立稳定转染的细胞系CHO-CD52。采用RT-PCR、免疫荧光组化技术及流式细胞术检测目的基因和蛋白的表达。结果 RT-PCR扩增得到186bp的DNA片段。重组表达质粒pcDNA3.1(+)/CD52经PCR、双酶切及测序证明构建正确。CHO-CD52细胞经RT-PCR分析,可见186bp的目的基因条带;经免疫荧光检测,可见绿色荧光分布;经流式细胞术分析,阳性细胞百分率及荧光平均值分别为98.18和193.56。结论已成功克隆了人CD52基因,并建立了稳定转染的CHO细胞系,为CD52单克隆抗体的制备及抗体药物的开发奠定了基础。 展开更多

关键词 cd52基因 真核表达 转染 CHO细胞

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应用CE-SDS测定抗CD52人源化单克隆抗体参比品单体纯度及非糖化重链比例 被引量：6

7

作者 王建锋 乔玉玲 +3 位作者 秦海燕 崔保峰 南建军 毛晓燕 《现代生物医学进展》 CAS 2018年第15期2836-2840,2828,共6页

目的:测定抗CD52人源单克隆抗体参比品单体纯度及非糖基化重链比例。方法:采用PA800 plus毛细管电泳系统,非还原十二烷基苯硫酸钠-毛细管电泳(CE-SDS)测定抗CD52人源单克隆抗体单体纯度,以及用还原CE-SDS电泳测定非糖化重链比例。结果:... 目的:测定抗CD52人源单克隆抗体参比品单体纯度及非糖基化重链比例。方法:采用PA800 plus毛细管电泳系统,非还原十二烷基苯硫酸钠-毛细管电泳(CE-SDS)测定抗CD52人源单克隆抗体单体纯度,以及用还原CE-SDS电泳测定非糖化重链比例。结果:非还原CE-SDS三次测定单体纯度平均值为93.57%,主峰的迁移时间及修正峰面积百分比RSD分别为0.16%和0.19%;还原CE-SDS电泳重链修正峰面积百分比平均值为66.89%,修正峰面积百分比及迁移时间RSD分别为0.09%和0%;轻链修正峰面积百分比平均值为32.30%;轻链修正峰面积及迁移时间RSD分别为0%和0%;非糖基化重链修正峰面积百分比平均值为0.87%,修正峰面积百分比及迁移时间RSD分别为6.66%和0.27%。结论:CE-SDS测定抗CD52人源单抗单体纯度及非糖化重链比例实验结果偏差较小,表明结果准确可靠。 展开更多

关键词 十二烷基苯硫酸钠-毛细管电泳 抗cd52人源单抗 单体纯度 非糖化重链比例

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重组抗CD52单克隆抗体亲和层析纯化工艺的优化 被引量：5

8

作者 陈继军 南建军 +6 位作者 乔玉玲 张超 宋兰兰 熊颖 安晨 房世娣 毛晓燕 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2019年第4期439-444,共6页

目的优化重组抗CD52单克隆抗体亲和层析纯化工艺。方法采用试验设计(Design of Experiment,DOE)方法优化重组抗CD52单克隆抗体亲和层析纯化工艺,试验因子为中间清洗液Na Cl浓度(130~870 mmol/L)和洗脱液p H(3.50~4.20),试验响应变量为... 目的优化重组抗CD52单克隆抗体亲和层析纯化工艺。方法采用试验设计(Design of Experiment,DOE)方法优化重组抗CD52单克隆抗体亲和层析纯化工艺,试验因子为中间清洗液Na Cl浓度(130~870 mmol/L)和洗脱液p H(3.50~4.20),试验响应变量为纯化后样品收率、纯度、残余宿主蛋白含量、外源DNA含量及蛋白A含量,通过DOE构建模型,预测中间清洗液Na Cl浓度和洗脱液p H范围。同时采用DOE方法验证预测工艺参数的稳定性。结果确定中间清洗液Na Cl浓度为400~700 mmol/L,洗脱液p H为3.55~3.75。试验因子在该参数范围内变动时,样品收率均大于80%,纯度均大于97%,外源DNA浓度均低于260 pg/mg,宿主蛋白含量均低于2 300 ng/mg,蛋白A含量均低于6.5 ng/mg。结论成功优化了重组抗CD52单克隆抗体的亲和纯化工艺,且具有较好的稳定性。 展开更多

关键词 重组抗cd52单克隆抗体 亲和层析 试验设计

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小鼠抗人CD52功能性抗体的制备与鉴定

9

作者 刘友 屈浩 +3 位作者 石琳 黄丽华 张宇光 朱卫彬 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期56-59,64,共5页

目的鼠抗人CD52抗血清的制备与功能鉴定。方法由人Hut-78细胞提取细胞总RNA,运用RT-PCR方法扩增CD52基因,定向克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+),用脂质体转染法转染CHO细胞,建立稳定转染的CHO细胞系,用RT-PCR、FACS、免疫组织化学技术检... 目的鼠抗人CD52抗血清的制备与功能鉴定。方法由人Hut-78细胞提取细胞总RNA,运用RT-PCR方法扩增CD52基因,定向克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+),用脂质体转染法转染CHO细胞,建立稳定转染的CHO细胞系,用RT-PCR、FACS、免疫组织化学技术检测目的蛋白的表达。用CD52合成肽免疫小鼠,通过间接ELISA和流式细胞术分析抗血清,用MTS实验鉴定抗体对白血病LCL细胞系的增殖抑制作用。结果建立了稳定转染的CHO细胞系。鉴定出有高效价抗体存在。MTS实验检测免疫血清有抑制LCL细胞生长作用。结论功能性抗体制备成功并建立了稳定转染CD52的CHO细胞系。 展开更多

关键词 cd52抗体 真核表达载体 稳定转染细胞 抗体制备

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CD52抗原的研究进展及其抗体在临床中的应用 被引量：3

10

作者 屈浩 廖晓龙 《国外医学（免疫学分册）》 2005年第6期369-373,共5页

人类CD52属于一个未命名的短链GPI锚定糖蛋白家族,其基因定位于人类1号染色体(1p36.1),分子量为25～29KD.广泛分布于淋巴细胞、单核细胞等造血细胞上和雄性生殖系统中的某些细胞表面,在造血干/祖细胞表面没有表达.由于①其具有在淋巴细... 人类CD52属于一个未命名的短链GPI锚定糖蛋白家族,其基因定位于人类1号染色体(1p36.1),分子量为25～29KD.广泛分布于淋巴细胞、单核细胞等造血细胞上和雄性生殖系统中的某些细胞表面,在造血干/祖细胞表面没有表达.由于①其具有在淋巴细胞和很多造血系统恶性肿瘤细胞上的高密度分布;②其分子交联化可引起一系列信号传导,从而导致细胞因子分泌,细胞增殖、生长抑制及凋亡;③其分子在细胞表面排列整齐、密度大,与抗体结合后结合补体的能力受抗体亚类影响较小等特点,抗CD52单克隆抗体(CAMPATH-1系列)已经被广泛地用于临床治疗.CD52分子自身直接的生物学功能目前还知之甚少,被人们利用的大部分都与其GPI锚定蛋白的特性相关.除CAMPATH-1系列抗CD52单抗以外,HI186因识别表位不同,其在生物学功能和临床应用上的差别值得关注. 展开更多

关键词 cd52 CAMPATH-1 GPI 锚定蛋白 药用抗体

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重组人源化抗CD52单克隆抗体相对抗原结合活性检测方法的建立及验证 被引量：3

11

作者 秦海艳 熊颖 +5 位作者 黄峥 乔玉玲 陈继军 安晨 庄超 毛晓燕 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2018年第1期67-72,76,共7页

目的建立重组人源化抗CD52单克隆抗体相对抗原结合活性的检测方法,并进行验证。方法测定3种人淋巴瘤细胞(MC/CAR、HUT78、RAMOS)CD52抗原的表达率,选择CD52表达率最高的作为靶细胞。以系列稀释的重组人源化抗CD52单克隆抗体的参比品和... 目的建立重组人源化抗CD52单克隆抗体相对抗原结合活性的检测方法,并进行验证。方法测定3种人淋巴瘤细胞(MC/CAR、HUT78、RAMOS)CD52抗原的表达率,选择CD52表达率最高的作为靶细胞。以系列稀释的重组人源化抗CD52单克隆抗体的参比品和供试品作用表达CD52抗原的人淋巴瘤细胞,FITC标记的兔抗人Ig G结合人淋巴瘤细胞上的重组人源化抗CD52单克隆抗体,流式细胞分析仪测定几何荧光均数。通过四参数方程拟合,计算参比品和供试品的半数有效浓度(EC50)及相对结合活性。并对该方法的专属性、准确性、精密性、线性范围和耐用性进行验证。结果淋巴瘤MC/CAR细胞CD52抗原表达率最高,确定该细胞为靶细胞。CD52抗原与无关抗体不存在特异性结合;重复3次测定不同理论相对结合活性人源化抗CD52单克隆抗体参比品的回收率在97.4%~111.9%之间,相对结合活性及回收率的RSD值均在10%以内;同一实验人员于同一天6次重复检测重组人源化抗CD52单克隆抗体相对结合活性在86.93%~114.42%之间,RSD值在10%以内,3 d内不同实验员分别检测5个效价样品的相对结合活性的RSD在20%以内;在重组人源化抗CD52单克隆抗体理论效价50%~150%范围内,与相对结合活性呈良好的线性,线性回归方程为y=1.045 2 x-1.082,R2为0.992 1;MC/CAR细胞在第28代时仍适用于抗CD52抗体相对结合活性的测定。结论该方法具有良好的特异性、准确性、精密性、线性和耐用性,且操作简便,可用于重组抗CD52抗体抗原结合活性的常规检测。 展开更多

关键词 重组人源化抗cd52单克隆抗体 抗原结合活性 间接免疫荧光法 淋巴瘤细胞

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抗CD52单克隆抗体外源DNA残留量检测方法的建立及验证 被引量：3

12

作者 赵祖波 陈继军 +5 位作者 赵晓瑞 乔玉玲 秦海艳 南建军 熊颖 毛晓燕 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2017年第12期1305-1310,共6页

目的建立检测抗CD52单克隆抗体原液中残余DNA的方法,并对该方法进行验证。方法利用CHO Host Cell DNA Extraction&Amplification Kit,采用qPCR法检测抗CD52单克隆抗体中宿主细胞残留DNA含量,并进行方法的专属性、线性、准确度、精... 目的建立检测抗CD52单克隆抗体原液中残余DNA的方法,并对该方法进行验证。方法利用CHO Host Cell DNA Extraction&Amplification Kit,采用qPCR法检测抗CD52单克隆抗体中宿主细胞残留DNA含量,并进行方法的专属性、线性、准确度、精密度和耐用性验证。结果该方法可以准确定量检测CHO细胞残留DNA含量。专属性验证试验中对照制剂无特异扩增曲线,而CHO细胞上清有明显的扩增曲线;5次试验中标准曲线相关系数R^2均≥0.98,表明该方法线性良好;准确度验证试验中所有试验的加标回收率均在70%~130%范围内;精密度验证试验中所有试验检测结果的相对标准偏差(RSD)均不大于30%;耐用性验证试验中,Proteinase K不同消化温度下检测结果的CV为0.85%,不同稀释倍数的供试品加标回收率在70%~130%范围内,不同稀释倍数外源DNA检测结果CV为4.71%。结论该方法专属性、准确度、精密度、线性和耐用性均符合要求,可采用该试剂盒qPCR法检测外源DNA残留量。 展开更多

关键词 cd52 单克隆抗体 CHO细胞 残余DNA 实时定量PCR 方法验证

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重组抗CD52人源化单克隆抗体ELISA检测方法的建立

13

作者 李金龙 胡百卉 +4 位作者 许先兴 张代超 刘运龙 陈知航 程远国 《生物技术通讯》 CAS 2015年第5期667-671,共5页

目的：建立一种灵敏、特异、快速的ELISA方法,用于检测食蟹猴血清中重组抗CD52单克隆抗体的含量。方法：采用双抗夹心ELISA法对重组抗CD52单克隆抗体进行定量。以猴血清吸附的羊抗人Ig G作为包被抗体,稀释的猴血清吸附的羊抗人Ig G-HRP... 目的：建立一种灵敏、特异、快速的ELISA方法,用于检测食蟹猴血清中重组抗CD52单克隆抗体的含量。方法：采用双抗夹心ELISA法对重组抗CD52单克隆抗体进行定量。以猴血清吸附的羊抗人Ig G作为包被抗体,稀释的猴血清吸附的羊抗人Ig G-HRP（二抗）作为检测抗体,加入底物显色剂后在酶标仪上读取D450nm值。结果：建立并确证了检测重组抗CD52单克隆抗体的ELISA方法,方法的线性范围为7.81~500 ng/m L,定量下限为7.81 ng/m L,板内及板间精密度和准确度均在±15%以内,室温、冻融、稀释效应稳定性良好。结论：方法学验证表明ELISA法测定食蟹猴血清中重组抗CD52单克隆抗体浓度的特异性、精密度和准确度均满足新生物制药临床前药代动力学研究指导原则要求,可用于重组抗CD52单克隆抗体的检测。 展开更多

关键词 重组抗cd52单克隆抗体 酶联免疫吸附法 药代动力学

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阳离子交换高效液相色谱检测重组人源化抗CD52单克隆抗体的电荷异质性 被引量：6

14

作者 秦海艳 安晨 +6 位作者 宋兰兰 陈继军 黄峥 乔玉玲 南建军 庄超 毛晓燕 《微生物学免疫学进展》 2018年第4期19-25,共7页

目的建立阳离子交换高效液相色谱检测重组人源化抗CD52单克隆抗体(monoclonal antibody,m Ab)电荷异质性的方法,并对其进行验证。方法基于m Ab等电点呈弱碱性,且因为抗体所带电荷的不同导致其与色谱柱结合力的不同,采用"PropacTMWC... 目的建立阳离子交换高效液相色谱检测重组人源化抗CD52单克隆抗体(monoclonal antibody,m Ab)电荷异质性的方法,并对其进行验证。方法基于m Ab等电点呈弱碱性,且因为抗体所带电荷的不同导致其与色谱柱结合力的不同,采用"PropacTMWCX-10"弱阳离子交换柱,利用盐梯度洗脱的方法依次洗脱出m Ab的酸性电荷变异体、中性电荷变异体及碱性电荷变异体;对方法的专属性、线性、准确性、精密度和耐用性进行验证。结果阳离子交换高效液相色谱分析重组人源化抗CD52 m Ab各电荷变异体的保留时间在14~21 min之间,其中酸性电荷变异体的保留时间在14~17 min,中性电荷变异体的保留时间在17~18 min,碱性电荷变异体的保留时间在18~21 min之间。专属性验证显示空白辅料对照色谱图在样品出峰位置无干扰。线性验证显示酸性电荷变异体、中性电荷变异体和碱性电荷变异体相关系数R2均>0.99。准确性验证显示酸性电荷变异体、中性电荷变异体和碱性电荷变异体回收率分别为99.3%~99.9%、99.8%~100.4%和99.3%~99.7%。仪器重复性、样品重复性和中间精密度验证中,各电荷变异体的RSD均<5%。耐用性验证中,流动相p H在8.0±0.1、流动相中盐浓度为100 mmol/L±5 mmol/L、柱温在(30±2)℃变化时各电荷变异体的RSD均<5%。结论阳离子交换高效液相色谱可以有效分离重组人源化抗CD52 m Ab的酸性电荷变异体、中性电荷变异体和碱性电荷变异体,且该方法具有良好的专属性、线性、准确性、精密度和耐用性。 展开更多

关键词 阳离子交换高效液相色谱 cd52 单克隆抗体 电荷异质性

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CD52单抗通过清除活化T细胞对IL-10基因敲除小鼠结肠炎的干预作用 被引量：1

15

作者 刘建辉 朱维铭 《肠外与肠内营养》 北大核心 2018年第4期243-247,共5页

目的:观察CD52单抗对IL-10基因敲除小鼠结肠炎的干预作用并探究其干预作用的可能机制。方法:给予CD52单抗治疗后,计算疾病活动度指数,检测结肠病理学评分,外周血、脾脏及结肠固有层单个核细胞中T淋巴细胞的清除情况,结肠组织炎性因子水... 目的:观察CD52单抗对IL-10基因敲除小鼠结肠炎的干预作用并探究其干预作用的可能机制。方法:给予CD52单抗治疗后,计算疾病活动度指数,检测结肠病理学评分,外周血、脾脏及结肠固有层单个核细胞中T淋巴细胞的清除情况,结肠组织炎性因子水平及相关细胞因子的m RNA转录水平的变化。结果:CD52单抗能有效降低疾病活动度评分、结肠病理学评分,能显著地清除模型小鼠外周血、脾脏及结肠固有层单个核细胞中CD3+T细胞,明显降低结肠组织中IFN-γ、IL-17的表达水平,同时增加了IL-5和IL-13的表达,并相应下调TNF-α、IFN-γ、IL-17和IL-6及炎症调控因子IL-12和IL-23的m RNA表达水平。结论:抗CD52单抗能有效地治疗IL-10基因敲除小鼠的结肠炎,其干预效果与活化T细胞的直接清除相关,此外,其对IL-12/23通路的下调及Th2反应的诱导作用亦可能与干预作用相关。 展开更多

关键词 抗cd52单克隆抗体 IL-10基因敲除小鼠 T细胞清除 T细胞相关炎症

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抗CD52单克隆抗体中残留蛋白AELISA定量检测方法的验证 被引量：2

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作者 乔玉玲 黄峥 +6 位作者 秦海艳 陈继军 曾晨 安晨 赵祖波 庄超 毛晓燕 《微生物学免疫学进展》 2018年第1期25-29,共5页

目的验证抗CD52单克隆抗体(单抗)中残留蛋白A(Protein A,Pro A)ELISA定量检测方法。方法使用Cygnus公司的Mix-N-Go Protein A检测试剂盒,对抗CD52单抗中的Pro A残留量进行检测,并验证该方法的专属性、准确度、精密度、线性及定量限。结... 目的验证抗CD52单克隆抗体(单抗)中残留蛋白A(Protein A,Pro A)ELISA定量检测方法。方法使用Cygnus公司的Mix-N-Go Protein A检测试剂盒,对抗CD52单抗中的Pro A残留量进行检测,并验证该方法的专属性、准确度、精密度、线性及定量限。结果亲和填料(Mab Select SuRe)稀释1 000倍后仍检测到含有Pro A 1.9 ng/m L;制剂及抗CD52单抗细胞发酵液中未检出Pro A;3种不同Pro A加标质量浓度6次试验的加标回收率均在80%~120%之间;3种不同Pro A加标质量浓度重复性检测结果及中间精密度检测结果 RSD均<20%;分别对3次Pro A残余检测结果绘制的四参数标准曲线,R2均>0.990;定量限为0.16 ng/m L。结论经验证,抗CD52单抗中Pro A残留量的ELISA定量检测方法专属性好,准确度、精密度高且线性良好。 展开更多

关键词 抗cd52单克隆抗体 蛋白A 检测 残留物 酶联免疫吸附测定

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生物标志物CD52对胰腺癌诊断及预后判断的作用:基于TCGA的数据分析

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作者 赵力波 张蓉 《国际检验医学杂志》 CAS 2018年第A02期64-67,共4页

目的分析生物标志物CD52在胰腺癌组织中的表达差异及其对临床早期诊断,预后评估的作用,并结合基因富集分析探讨其潜在的作用机制,为后续研究提供线索。方法下载TCGA数据库中mRNA表达数据及胰腺癌患者相关临床病理参数,基于R语言进行数... 目的分析生物标志物CD52在胰腺癌组织中的表达差异及其对临床早期诊断,预后评估的作用,并结合基因富集分析探讨其潜在的作用机制,为后续研究提供线索。方法下载TCGA数据库中mRNA表达数据及胰腺癌患者相关临床病理参数,基于R语言进行数据的整理、合并及标准化;基于CD52基于表达差异对肿瘤样本分组,T检验统计CD52基因表达量在组间差异(P<0.05),随后Kaplan-Meier进行生存分析,最后结合GSEA分析调控CD52表达的潜在信号通路。结论肿瘤组织高表达CD52与患者TNM分期(Ⅱ期与Ⅲ期)及预后显著相关,原发性免疫缺陷反应、T细胞受体信号通路、NK细胞介导的细胞毒反应及Toll样受体等多个信号转导通路参与了CD52的表达调控。CD52或可成为判断胰腺癌预后,早期诊断及治疗恶性肿瘤的新靶点。 展开更多

关键词 胰腺癌 cd52 TCGA数据库

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mrt-CD52在男性生殖中的作用

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作者 肖淼淼 肖辉雪 《医学分子生物学杂志》 CAS 2013年第4期244-248,共5页

男性生殖道CD52 （male reproductive tract CD52, mrt-CD52）也被称为Campath-1和HE-5．是一种精子成熟抗原，存存于成熟精子膜和精浆中。近年来的研究发现mrt-CD52阻碍了男性生殖系统中补体经典途径的激活，它是一种在男性生殖系统中... 男性生殖道CD52 （male reproductive tract CD52, mrt-CD52）也被称为Campath-1和HE-5．是一种精子成熟抗原，存存于成熟精子膜和精浆中。近年来的研究发现mrt-CD52阻碍了男性生殖系统中补体经典途径的激活，它是一种在男性生殖系统中调节补体免疫的重要调节因子。此外，目前认为mrt-CD52存附睾内糖酰化获得的蛋向质侧链寡糖可能用作避孕疫苗靶抗原的精子蛋白。mrt-CD52的研究不仅能促进男性不育治疗的发展． 展开更多

关键词 mrt-cd52 男性生殖 补体调节因子 免疫避孕疫苗

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CD52单克隆抗体通过抑制Th1/17介导的炎症及诱导调节性T细胞反应对克罗恩病模型小鼠结肠炎的治疗作用 被引量：7

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作者 刘建辉 李毅 朱维铭 《中华内科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期926-928,共3页

拟观察CD52单克隆抗体对IL-10基因敲除克罗恩病模型小鼠结肠炎的治疗作用并揭示其可能的机制。结果显示,CD52单克隆抗体能有效治疗模型小鼠结肠炎症,降低Th1/17相关炎性因子的表达,同时能增加结肠固有层调节性T细胞的比例及功能。提示... 拟观察CD52单克隆抗体对IL-10基因敲除克罗恩病模型小鼠结肠炎的治疗作用并揭示其可能的机制。结果显示,CD52单克隆抗体能有效治疗模型小鼠结肠炎症,降低Th1/17相关炎性因子的表达,同时能增加结肠固有层调节性T细胞的比例及功能。提示其治疗作用的机制可能与抑制Th1/17介导的炎症及诱导调节性T细胞反应相关。 展开更多

关键词 结肠炎 cd52单克隆抗体 IL-10基因敲除小鼠 调节性T细胞

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TCL1和CD52双阴性T细胞幼淋巴细胞白血病1例并文献复习

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作者 刘金立 徐腾飞 +2 位作者 孙伟 高胜海 王毅力 《白血病．淋巴瘤》 CAS 2022年第7期437-440,共4页

目的提高对T细胞幼淋巴细胞白血病(T-PLL)诊疗的认识。方法回顾性分析2020年12月威海市立医院收治的1例T-PLL患者的临床症状、实验室检查及影像学检查结果,并复习相关文献。结果患者,男性,43岁,发病时骨髓流式细胞术检测免疫表型TCL1、C... 目的提高对T细胞幼淋巴细胞白血病(T-PLL)诊疗的认识。方法回顾性分析2020年12月威海市立医院收治的1例T-PLL患者的临床症状、实验室检查及影像学检查结果,并复习相关文献。结果患者,男性,43岁,发病时骨髓流式细胞术检测免疫表型TCL1、CD52均为阴性,结合临床特征及多项实验室检查结果,诊断为T-PLL。予西达本胺联合苯达莫司汀、依托泊苷方案治疗,迅速获得缓解。累及皮肤和睾丸后,化疗方案未改变,加用头孢哌酮钠舒巴坦钠抗感染治疗后获得缓解。结论TCL1和CD52双阴性T-PLL较少见,诊断需要进行综合分析;造血干细胞移植可能对少数患者有效。 展开更多

关键词 白血病 幼淋巴细胞 T细胞 TCL1 cd52 双阴性 诊断 治疗

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