【目的】猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS),俗称"蓝耳病",是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的一种高致死性传染病,对世...【目的】猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS),俗称"蓝耳病",是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的一种高致死性传染病,对世界养猪业造成了巨大的经济损失。由于PRRSV遗传变异性较大,因此国内外并未有理想疫苗能够对此病进行有效防制。Cluster of differentiation 163(CD163)是PRRSV感染猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophage,PAM)的受体之一,研究旨在利用CRISPR/Cas9技术结合体细胞核移植技术制备CD163基因编辑的大白猪。【方法】针对猪CD163基因的第7外显子设计构建CRISPR/Cas9基因编辑载体;转染大白猪胎儿成纤维细胞,获得基因编辑阳性细胞克隆;以基因编辑细胞为核供体、体外成熟的猪卵母细胞为核受体构建克隆胚胎;胚胎移植到受体母猪生产CD163基因编辑猪,并进行后续的扩繁试验。【结果】设计的g RNA能够高效的识别靶位点。对获得的127个细胞单克隆进行PCR和测序显示,共有21个克隆发生突变,其中14个克隆为单等位基因突变或双等位基因杂合突变,7个克隆为双等位基因纯合突变。通过体细胞核移植技术,成功获得了CD163双等位基因编辑的纯合大白猪;并获得首批F1代CD163基因编辑仔猪,目前健康状态良好。随后将有更多的F1代CD163基因编辑猪陆续出生。【结论】制备的无抗性筛选标记的CD163双等位基因编辑猪,能够安全并快速地为培育抗PRRSV新品种猪提供育种材料。展开更多
文摘目的:探讨CD163^(+)M2型巨噬细胞在食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)放疗疗效中的浸润水平及其与放疗疗效的关系。方法:本研究利用生物信息学方法分析M2型巨噬细胞在ESCC中的浸润情况。分析2014年1月至2024年12月新疆医科大学第一附属医院56例ESCC患者的临床资料和病理组织,基于疗效将患者分为放疗敏感组和抵抗组。通过免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)法检测CD163^(+)M2巨噬细胞的浸润水平,采用单因素Logistic回归、χ^(2)检验等统计方法分析放疗疗效与M2型巨噬细胞浸润的关系,同时绘制受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线评估其作为敏感性预测指标的价值。结果:生物信息学分析显示,M2型巨噬细胞在ESCC中高度浸润。IHC结果显示,放疗抵抗的组织中CD163^(+)M2型巨噬细胞水平显著升高。单因素Logistic回归分析发现,远处转移和巨噬细胞浸润均为影响近期放疗疗效的危险因素(P<0.05)。χ^(2)检验显示,M2型巨噬细胞浸润程度与放疗敏感性、远处转移及临床分期呈显著相关性(P<0.05),ROC曲线中受试者工作特征(area under the ROC,AUC)曲线下面积为0.705,提示其具有一定的预测价值。结论:ESCC患者中CD163^(+)M2型巨噬细胞高浸润,提示其与癌症发展密切相关,并在近期疗效评估中具有重要的临床应用价值。
