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Cathepsin-L在缺血心肌中的表达 被引量:2
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作者 梁正 刘瑞清 +3 位作者 路一凡 唐田丰 张更谦 王英元 《中国法医学杂志》 CSCD 2012年第5期364-367,I0002,共5页
目的检测cathepsin-L(CTSL)在大鼠早期缺血心肌中的表达变化,并探讨其法医学意义。方法建立大鼠早期心肌缺血模型,设置早期缺血组(early ischemic myocardium,EIM)、非缺血组(non-ischemic myocardium,NIM)、假手术组以及空白对照组,采... 目的检测cathepsin-L(CTSL)在大鼠早期缺血心肌中的表达变化,并探讨其法医学意义。方法建立大鼠早期心肌缺血模型,设置早期缺血组(early ischemic myocardium,EIM)、非缺血组(non-ischemic myocardium,NIM)、假手术组以及空白对照组,采用real-time PCR方法检测大鼠缺血后15min,30min,1h和2h CTSL mRNA的表达量,并进行组内和组间比较。收集心源性猝死者缺血心肌和机械性损伤致死者正常心肌样本,采用免疫组化染色方法观察心肌组织中CTSL蛋白表达。结果 EIM组CTSL mRNA表达量与NIM组、假手术组及空白组相比,在15min时无统计学意义(P>0.05),在30min、1h和2h时分别升高1.4、3.1和4.5倍(P<0.05);其余3组间差异无统计学意义(P>0.05)。观察10例冠脉狭窄程度Ⅲ~Ⅳ级的心源性猝死(SCD)者缺血心肌,CTSL表达增强。结论大鼠心肌缺血后早期即可检测到CTSL mRNA的升高,并在SCD冠脉狭窄死者缺血心肌中高表达,提示CTSL可作为心肌缺血与SCD的参考指标。 展开更多
关键词 法医病理学 Cathepsin—L real—time PCR 免疫组化 早期心肌缺血
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组织蛋白酶L在卵母细胞和早期胚胎发育中的作用
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作者 朱青 宋佳 唐淮云(审校) 《国际生殖健康/计划生育杂志》 2026年第1期49-53,共5页
组织蛋白酶L(cathepsin L,CTSL)是溶酶体半胱氨酸蛋白酶家族的核心成员,通过降解细胞外基质调控原始卵泡激活与排卵过程。其N-糖基化修饰的CTSL变体通过破坏线粒体功能、加剧氧化应激和干扰纺锤体组装,成为驱动卵母细胞质量下降的关键... 组织蛋白酶L(cathepsin L,CTSL)是溶酶体半胱氨酸蛋白酶家族的核心成员,通过降解细胞外基质调控原始卵泡激活与排卵过程。其N-糖基化修饰的CTSL变体通过破坏线粒体功能、加剧氧化应激和干扰纺锤体组装,成为驱动卵母细胞质量下降的关键介质。CTSL异常表达还与生殖衰老密切相关。在胚胎发育层面,CTSL参与母源-合子转变、自噬调控和表观遗传重编程等关键事件,其活性动态精确地指导着早期胚胎发育进程。深入解析CTSL在雌性生殖调控网络中的作用,可增进对生殖细胞发育机制的理解,并有望应用于改善辅助生殖结局。 展开更多
关键词 组织蛋白酶L 卵母细胞 胚胎发育 排卵 后成说 遗传
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慢性心功能不全急性加重患者血清组织蛋白酶与血脂代谢及病情程度的关系
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作者 许静 牛林 +2 位作者 王卫国 储红颍 王伟 《中华老年心脑血管病杂志》 北大核心 2025年第7期858-862,共5页
目的探讨血清组织蛋白酶L(cathepsin-L,CTSL)在慢性心力衰竭(chronicheartfailure,CHF)急性加重患者中的变化,及其与血脂代谢指标和病情程度的关系。方法前瞻性选取2021年2月至2024年10月阜阳市人民医院心血管内科收治的老年CHF急性加... 目的探讨血清组织蛋白酶L(cathepsin-L,CTSL)在慢性心力衰竭(chronicheartfailure,CHF)急性加重患者中的变化,及其与血脂代谢指标和病情程度的关系。方法前瞻性选取2021年2月至2024年10月阜阳市人民医院心血管内科收治的老年CHF急性加重患者186例,测定患者血清CTSL和血脂代谢指标,根据CTSL四分位数分为A组(CTSL≤3.31μg/L)47例、B组(3.31μg/L<CTSL≤3.70μg/L)46例、C组(3.70μg/L<CTSL<4.41μg/L)47例和D组46例(CTSL≥4.41μg/L)。比较4组患者一般临床资料、血脂代谢和病情程度。采用Pearson相关性分析CTSL与血脂代谢指标,用有序回归模型、限制性立方样条图分析血清CTSL与CHF急性加重患者病情程度的关系。结果各组CHF急性加重患者总胆固醇(totalcholesterol,TC)、三酰甘油(triacylglycerol,TG)、高密度脂蛋白胆固醇(high-densitylipoproteincholesterol,HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(low-densitylipoprotein cholesterol,LDL-C)比较有统计学差异(P<0.05,P<0.01)。Pearson相关性分析显示,血清CTSL与CHF急性加重患者TC、TG、LDL-C呈正相关(r=0.203,P=0.005;r=0.178,P=0.015;r=0.184,P=0.012),与HDL-C呈负相关(r=-0.344,P=0.000)。有序回归分析显示,血清CTSL水平是影响CHF急性加重患者病情程度独立危险因素(P<0.05)。限制性立方样条图分析显示,血清CTSL水平与老年CHF急性加重患者病情程度呈线性关系(χ^(2)=3.140,P=0.371),血清CTSL>3.73μg/L时,老年CHF急性加重患者病情程度显著增加。结论血清CTSL水平与老年CHF急性加重患者血脂代谢水平密切相关,且是影响患者病情程度的独立危险因素。 展开更多
关键词 脂类 代谢 组织蛋白酶L 心力衰竭 病情程度
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Ctsl缺失诱导小鼠巨噬细胞M2极化和白色脂肪组织棕色化
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作者 张仁霞 刘健 林燕 《中国生物工程杂志》 北大核心 2025年第7期11-21,共11页
目的:脂肪组织巨噬细胞M2极化可诱导解耦联蛋白1(uncoupling protein 1,UCP1)依赖的脂肪细胞棕色化和产热,进而促进机体能量消耗;研究溶酶体组织蛋白酶L(cathepsin L,CTSL)在小鼠脂肪组织棕色化和能量代谢过程中的调控作用,尤其是在CTS... 目的:脂肪组织巨噬细胞M2极化可诱导解耦联蛋白1(uncoupling protein 1,UCP1)依赖的脂肪细胞棕色化和产热,进而促进机体能量消耗;研究溶酶体组织蛋白酶L(cathepsin L,CTSL)在小鼠脂肪组织棕色化和能量代谢过程中的调控作用,尤其是在CTSL缺失条件下对脂肪组织巨噬细胞炎症表型的影响。方法:利用全身性Ctsl缺失(Ctsl^(-/-))小鼠和相关细胞模型,采用实时荧光定量PCR与蛋白质免疫印迹实验对小鼠白色脂肪组织棕色化程度进行分析,利用流式细胞术监测Ctsl^(-/-)对小鼠骨髓衍生巨噬细胞(bone marrow-derived macrophages,BMDMs)M2极化的作用。结果:Ctsl缺失不影响小鼠体质量,可显著提升小鼠体温和能量消耗,小鼠白色脂肪组织(white adipose tissues,WAT)UCP1蛋白水平升高,Ucp1、Prdm16、Pgc1α、Cieda、Elovl3和Ndufv2等多种棕色化标识基因mRNA表达增加;小鼠Ctsl缺失(Ctsl^(-/-))促进WAT中脂肪细胞棕色化,进而增加机体能量消耗;进一步研究显示,Ctsl^(-/-)可以促进小鼠骨髓衍生巨噬细胞M2极化,上调其Il-4、Il-10、Il-13、Mrc1和Mrc2等抗炎性细胞因子的mRNA表达。结论:Ctsl^(-/-)通过影响脂肪组织巨噬细胞M2极化,从而增加WAT棕色化和机体能量消耗,为肥胖及相关代谢疾病的防治提供了新的靶点。 展开更多
关键词 组织蛋白酶L 巨噬细胞M2极化 脂肪组织棕色化 解耦联蛋白
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鲢鱼Cystatin C延缓4℃冷藏乌鱼片品质劣变及机制分析
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作者 李龙飞 李树红 +6 位作者 谭小千 王菲 李冉 蒋宇维 仝浩楠 黎成林 周子函 《四川农业大学学报》 北大核心 2025年第1期71-79,共9页
【目的】鲢鱼Cystatin(HmCystatin C)是兼具半胱氨酸蛋白酶抑制活性及抑菌活性的天然小分子蛋白,在水产加工废弃组织中广泛存在,具有作为水产品天然生物保鲜剂的良好开发前景,研究旨在探索其延缓冷藏鱼肉片品质劣变的潜在机制。【方法... 【目的】鲢鱼Cystatin(HmCystatin C)是兼具半胱氨酸蛋白酶抑制活性及抑菌活性的天然小分子蛋白,在水产加工废弃组织中广泛存在,具有作为水产品天然生物保鲜剂的良好开发前景,研究旨在探索其延缓冷藏鱼肉片品质劣变的潜在机制。【方法】将重组HmCystatin C注射并涂抹于乌鱼肉片后监测4℃冷藏5 d期间的品质变化,分别从HmCystatin C细胞内渗透性、对组织蛋白酶B/L及优势腐败菌的抑制3个角度分析其可能的作用机制。【结果】HmCystatin C处理组(Cys组)冷藏期间各品质指标(感官评分、剪切力、TPA质构、肌纤维断裂指数MFI、结构蛋白完整性、挥发性盐基氮TVB-N、菌落总数)均优于对照组(Con组),保鲜期延长。同时免疫组化检测发现HmCystatin C可以渗透到鱼肉细胞内部,且在整个冷藏期内明显抑制了组织蛋白酶B/L活性;此外,HmCystatin C对从冷藏乌鱼肉片中分离的优势腐败菌,即中间气单胞菌(Aeromonas media)和腐生葡萄球菌(Staphylococcus saprophyticus)表现出明显的抑制活性。【结论】HmCystatin C可渗透至鱼肉细胞内部,显著抑制内源性组织蛋白酶B/L活性与腐败微生物的生长,延缓乌鱼肉片4℃冷藏期间的品质劣化。 展开更多
关键词 HmCystatin C 冷藏乌鱼肉片品质 细胞内渗透性 酶活抑制 抑菌
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利用cpl-1(qx304);MAH215转基因线虫研究CPL-1在自噬中的作用
6
作者 周颖 刘健 林燕 《合肥工业大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第12期1652-1656,1677,共6页
秀丽隐杆线虫是一种被广泛使用的衰老模型,其溶酶体介导的自噬水平随衰老进程逐渐下降;溶酶体组织蛋白酶L样蛋白(cathepsin L-like protease,CPL-1)作为溶酶体中的一种关键组织蛋白酶,其在衰老调控中的作用尚不明确。为了研究CPL-1在衰... 秀丽隐杆线虫是一种被广泛使用的衰老模型,其溶酶体介导的自噬水平随衰老进程逐渐下降;溶酶体组织蛋白酶L样蛋白(cathepsin L-like protease,CPL-1)作为溶酶体中的一种关键组织蛋白酶,其在衰老调控中的作用尚不明确。为了研究CPL-1在衰老过程中的作用,文章利用cpl-1缺失线虫cpl-1(qx304)与自噬底物LGG-1双荧光(绿色和红色)标记的转基因线虫MAH215(sqⅠsⅡ[lgg-1p::mCherry::gfp::lgg-1+rol-6])进行杂交,通过荧光监测线虫表型,再对其进行DNA测序分析,筛选出成功表达mCherry::GFP::LGG-1的cpl-1缺失线虫cpl-1(qx304);MAH215。通过荧光表达监测,发现随着衰老的进程,野生型MAH215线虫中LGG-1的黄色荧光(红色和绿色荧光共定位)表达显著增加,而cpl-1缺失进一步增加LGG-1的黄色荧光水平。研究结果表明:在衰老过程中,自噬水平降低,自噬底物LGG-1逐步聚集;而cpl-1缺失则进一步增加LGG-1的聚集,加速了衰老的进程。因此,通过构建的cpl-1(qx304);MAH215转基因线虫确定了CPL-1在衰老相关自噬调控中的重要作用。 展开更多
关键词 秀丽隐杆线虫 自噬 衰老 组织蛋白酶L样蛋白(CPL-1) 杂交
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喉癌患者外周血Cathepsin B、L及Stefin A水平检测的意义 被引量:2
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作者 陈立伟 刘明波 +2 位作者 王嘉陵 赵建东 田军 《军医进修学院学报》 CAS 2011年第6期620-621,628,共3页
目的探讨喉癌患者外周血组织蛋白酶B(Cathepsin B)、组织蛋白酶L(Cathepsin L)及内源性抑制剂(Stefin A)表达水平的变化与临床诊断和预后的关系。方法收集我院确诊的喉癌患者及正常对照者血清,酶联免疫吸附测定法(Elisa)检测60例喉癌患... 目的探讨喉癌患者外周血组织蛋白酶B(Cathepsin B)、组织蛋白酶L(Cathepsin L)及内源性抑制剂(Stefin A)表达水平的变化与临床诊断和预后的关系。方法收集我院确诊的喉癌患者及正常对照者血清,酶联免疫吸附测定法(Elisa)检测60例喉癌患者及30位正常对照者血清中Cathepsin B、L及Stefin A水平。结果喉癌患者血清中CathepsinB、L水平显著高于正常对照者(P<0.01),二者表达水平呈显著正相关(r=0.434 1,P<0.05);Stefin A水平显著低于正常对照者(P<0.01),但与Cathepsin B、L无显著相关性。结论喉癌患者血清中存在高水平的Cathepsin B、L及低水平的Stefin A,提示检测血清中Cathepsin B、L及Stefin A含量可协助诊断及判断预后。 展开更多
关键词 CATHEPSIN-B cathepsin-l Stefin-A 喉癌
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牦牛肉宰后成熟机理与肉用品质研究 被引量:45
8
作者 田甲春 韩玲 +3 位作者 刘昕 师希雄 王文婷 郭兆斌 《农业机械学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2012年第12期146-150,共5页
以10头青海牦牛为研究对象,对其在宰后8 d成熟期间的机理指标:pH值、糖原含量、肌原纤维小片化指数(MFI)、钙激活酶活性、组织蛋白酶L活性以及肉用品质:加压损失、蒸煮损失、剪切力、色度L*、a*、b*进行了测定分析,并对剪切力、MFI、钙... 以10头青海牦牛为研究对象,对其在宰后8 d成熟期间的机理指标:pH值、糖原含量、肌原纤维小片化指数(MFI)、钙激活酶活性、组织蛋白酶L活性以及肉用品质:加压损失、蒸煮损失、剪切力、色度L*、a*、b*进行了测定分析,并对剪切力、MFI、钙激活酶活性、组织蛋白酶L活性进行相关性分析。结果表明:成熟过程中上述指标均发生变化,最直接的效应是改善了牦牛肉的嫩度。MFI和钙激活酶活性相关性极显著(P<0.01)与组织蛋白酶L活性相关性显著(P<0.05),钙激活酶活性与组织蛋白酶L活性呈显著负相关(P<0.05)。 展开更多
关键词 牦牛肉 肉用品质 成熟机理 嫩度 钙激活酶 组织蛋白酶
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脊尾白虾组织蛋白酶L基因的克隆及其表达分析 被引量:16
9
作者 段亚飞 刘萍 +3 位作者 李吉涛 李健 高保全 陈萍 《Zoological Research》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期39-46,共8页
根据本实验室构建的脊尾白虾(Exopalaemon carinicauda)血细胞全长cDNA文库获得的EST序列,利用RACE技术克隆获得脊尾白虾组织蛋白酶L基因的cDNA全长,命名为EcCatL基因。该序列全长1136bp,包括5'非编码区24bp,开放阅读框960bp和3'... 根据本实验室构建的脊尾白虾(Exopalaemon carinicauda)血细胞全长cDNA文库获得的EST序列,利用RACE技术克隆获得脊尾白虾组织蛋白酶L基因的cDNA全长,命名为EcCatL基因。该序列全长1136bp,包括5'非编码区24bp,开放阅读框960bp和3'非编码区152bp,开放阅读框共编码319个氨基酸,预测相对分子量为35.30×103,理论等电点为5.27。同源性分析表明,脊尾白虾组织蛋白酶LEcCatL氨基酸序列与其它甲壳动物高度保守,与变色小长臂虾(Palaemonetes varians)及北极甜虾(Pandalus borealis)CatL的同源性分别为92%和76%。系统进化分析表明,EcCatL基因氨基酸序列与变色小长臂虾的CatL聚为一支。荧光定量PCR分析结果表明,EcCatL基因在血细胞、鳃、肝胰腺、肌肉、卵巢、肠、胃及眼柄中均有表达,其中肝胰腺中的相对表达量最高。感染鳗弧菌及WSSV后6h和12h,脊尾白虾血细胞和肝胰腺中EcCatL的表达量较对照组均极显著增加(P<0.01),且具有明显的时间差异性,表明EcCatL基因在脊尾白虾免疫反应中具有重要作用。 展开更多
关键词 脊尾白虾 组织蛋白酶L 基因克隆 基因表达
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合浦珠母贝组织蛋白酶L2基因的特征与组织表达分析 被引量:13
10
作者 麻建军 张殿昌 +3 位作者 崔淑歌 姜晶晶 蒲含林 江世贵 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期701-712,共12页
为了研究合浦珠母贝(Pincatada fucata)的先天免疫调控机制,利用cDNA文库筛选和重测序技术克隆了1个合浦珠母贝组织蛋白酶L的全长cDNA序列(命名为poCL2)。poCL2cDNA全长1094bp,5′-非编码区(Untranslated region,UTR)长21bp,3′-UTR长80... 为了研究合浦珠母贝(Pincatada fucata)的先天免疫调控机制,利用cDNA文库筛选和重测序技术克隆了1个合浦珠母贝组织蛋白酶L的全长cDNA序列(命名为poCL2)。poCL2cDNA全长1094bp,5′-非编码区(Untranslated region,UTR)长21bp,3′-UTR长80bp,开放阅读框(Open reading frame,ORF)为993bp,编码330个氨基酸组成的多肽链,分子量为37.1kD,理论等电点为6.9。poCL2蛋白由信号肽(Met1-Ala16)、前体域(Arg17-Asp113)和成熟域(Leu114-Val330)三部分组成,存在一个潜在的糖基化位点(Asn97),6个底物结合位点(Leu182,Met183,Ala249,Leu275,Gly278和Ser324),1个由半胱氨酸(Cys138)、组氨酸(His277)和天冬酰胺(Asn297)残基构成的催化位点和2个组织蛋白酶L签名序列(E42X3RX3WX2NX3IX3N61和G74X1NX1YX1D80)。同源性分析表明,poCL2氨基酸序列与其他物种高度保守,相似性在61.5%~73.9%之间,同源性在44.4%~59.8%之间。进化分析显示,poCL2与其他无脊椎动物的组织蛋白酶L聚为一支,和淡水螺(Radix peregra)亲缘关系最近。组织表达分析表明poCL2mRNA在消化腺、外套膜、性腺、闭壳肌、肠、血淋巴和鳃组织中均表达,外套膜表达量最高。应激实验表明,经溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)或脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激后,poCL2mRNA在消化腺中的表达量显著上调,说明poCL2参与了合浦珠母贝的先天免疫应答反应,暗示其在合浦珠母贝先天免疫调控中发挥重要作用。 展开更多
关键词 合浦珠母贝 组织蛋白酶L 先天免疫
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黄芪甲甙对病毒性心肌炎小鼠心肌组织蛋白酶L表达的作用 被引量:9
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作者 于小华 李双杰 +2 位作者 王时俊 陈瑞珍 杨英珍 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期57-59,共3页
目的探讨黄芪活性成分黄芪甲甙对病毒性心肌炎(VMC)小鼠心肌中组织蛋白酶L(cathepsinL,CL)表达的作用。方法BALB/C小鼠100只,随机分成6组。非感染小鼠腹腔无菌注射病毒培养液,分为正常对照组(A组10只,以羧甲基纤维素钠0.1ml灌胃7d)、9%... 目的探讨黄芪活性成分黄芪甲甙对病毒性心肌炎(VMC)小鼠心肌中组织蛋白酶L(cathepsinL,CL)表达的作用。方法BALB/C小鼠100只,随机分成6组。非感染小鼠腹腔无菌注射病毒培养液,分为正常对照组(A组10只,以羧甲基纤维素钠0.1ml灌胃7d)、9%黄芪甲甙对照组(B组10只,9%黄芪甲甙0.1ml灌胃7d);余80只小鼠以柯萨奇病毒(CVB3)腹腔无菌注射制作VMC模型,VMC小鼠随机分为心肌炎对照组和1%、3%、9%黄芪甲甙干预心肌炎组,分别以羧甲基纤维素钠及1%、3%、9%黄芪甲甙0.1ml灌胃7d(分别为C、D、E、F组,每组20只)。14d后处死全部小鼠并取其心脏。采用RT_PCR和免疫组化半定量检测心肌CLmRNA及蛋白表达水平。结果F组小鼠较C组死亡率明显降低[10%(2/20例)vs45%(9/20例),χ2=6.14,P<0.05],B组无小鼠死亡;与C组相比,CLmRNA、蛋白表达水平以及心肌病变积分在F组均显著下降,而1%、3%黄芪甲甙对心肌炎小鼠CLmRNA、蛋白表达及心肌病变积分无明显影响。结论黄芪甲甙可能通过抑制cathepsinL表达,对BALB/C小鼠CVB3心肌炎具有良好的治疗作用。 展开更多
关键词 心肌炎 病毒 组织蛋白酶L 黄芪甲甙
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池蝶蚌组织蛋白酶L基因的组织表达及免疫应激分析 被引量:7
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作者 彭扣 王军花 +5 位作者 刘彤彤 盛军庆 史建伍 邵攀 何书豪 洪一江 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期1128-1134,共7页
应用cDNA文库筛查及同源片段克隆拼接技术,克隆了池蝶蚌组织蛋白酶L(Hs-CtsL)cDNA基因全长序列(GenBank注册号为JN604558)。其cDNA全长1152 bp,5′-非翻译区(Untranslated Region,UTR)长1 bp,3′-UTR长149 bp包括1个多聚腺苷信号AATAAA... 应用cDNA文库筛查及同源片段克隆拼接技术,克隆了池蝶蚌组织蛋白酶L(Hs-CtsL)cDNA基因全长序列(GenBank注册号为JN604558)。其cDNA全长1152 bp,5′-非翻译区(Untranslated Region,UTR)长1 bp,3′-UTR长149 bp包括1个多聚腺苷信号AATAAA和Poly(A)尾巴,开放阅读框(Open reading frame ORF)为1002 bp,编码333个氨基酸组成的多肽链。其分子量约37.7 kD,理论等电点为7.16,包含信号肽、前体域和成熟域。系统进化分析显示,Hs-CtsL同无脊椎动物组织蛋白酶L聚为一支,且同三角帆蚌亲缘关系最近,其次为褶纹冠蚌。组织表达分析结果显示,池蝶蚌组织蛋白酶L在肠、鳃、性腺、外套膜、斧足、闭壳肌、血细胞、肝胰腺、肾和心脏均有表达,其中血细胞中表达量最高。应激实验表明,经嗜水气单胞菌刺激后,Hs-CtsL在血细胞、鳃、肝胰腺和外套膜中的表达量显著上调。其中在肝胰腺中刺激后6h表达量到达峰值,在血细胞、鳃和外套膜中的表达模式近似,表现为一个波动变化,在4h、12h和48h被上调。结果暗示着Hs-CtsL除参与了池蝶蚌血细胞的先天性免疫防御以外,还参与了其消化腺免疫器官的免疫应答反应。 展开更多
关键词 池蝶蚌 CATHEPSIN L 组织表达 免疫应激
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中国明对虾组织蛋白酶L的原核重组表达及其组织分布 被引量:7
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作者 卜兴江 仉晓文 +2 位作者 孙允东 赵小凡 王金星 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期910-916,共7页
组织蛋白酶L属于半胱氨酸蛋白酶中的木瓜蛋白酶超家族,在哺乳动物中它与抗原提呈、肿瘤入侵和转移、骨质吸收、细胞凋亡等许多生命活动有关。但对其在无脊椎动物中的功能了解的不多。从中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)中克隆得到... 组织蛋白酶L属于半胱氨酸蛋白酶中的木瓜蛋白酶超家族,在哺乳动物中它与抗原提呈、肿瘤入侵和转移、骨质吸收、细胞凋亡等许多生命活动有关。但对其在无脊椎动物中的功能了解的不多。从中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)中克隆得到了组织蛋白酶L基因,为了进一步研究组织蛋白酶L的组织分布及其功能,对该基因进行了重组表达。将中国明对虾组织蛋白酶L基因的酶原片段亚克隆进原核表达载体pET30a中,转化大肠杆菌BL21(DE3),再进行诱导表达,表达产物经SDS-PAGE电泳检测,其分子量在40kD左右,与期望的中国明对虾组织蛋白酶L的分子量一致。表达产物形成包涵体,经过对包涵体变性和复性,并进行His-tag柱亲和纯化,得到了纯化的蛋白。利用重组蛋白制备了的兔抗血清。Western实验表明,组织蛋白酶L在中国明对虾的肝、胃、肠中有表达,而在卵巢中没有表达。 展开更多
关键词 中国明对虾 组织蛋白酶L 原核重组表达 组织分布
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组织蛋白酶L的结构与功能 被引量:12
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作者 杨东辉 刘宇 +1 位作者 肖蓉 李庆伟 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1093-1099,共7页
组织蛋白酶L(cathepsin L,CTSL)是溶酶体半胱氨酸蛋白酶家族的主要成员,具有非常独特的合成和转运方式.CTSL前体酶原的前体肽含有ERF/WNIN模体和GNFD模体.CTSL的空间结构主要由α螺旋构成的L结构域以及由β折叠构成的R结构域组成.大量... 组织蛋白酶L(cathepsin L,CTSL)是溶酶体半胱氨酸蛋白酶家族的主要成员,具有非常独特的合成和转运方式.CTSL前体酶原的前体肽含有ERF/WNIN模体和GNFD模体.CTSL的空间结构主要由α螺旋构成的L结构域以及由β折叠构成的R结构域组成.大量研究工作表明,CTSL在体内生理和病理过程中,以及在寄生动物中都发挥着极其重要的功能.其生理作用广泛涉及到蛋白质水解、抗原提呈、T细胞分选、细胞凋亡以及胚胎发育等方面.CTSL还与多种类型的肿瘤发生、心血管疾病以及肾病等密切相关.另外,CTSL在寄生动物中也发挥着独特的作用.本文针对CTST的最新研究进展做了简要总结及分析,并指出了相关研究的发展趋势. 展开更多
关键词 组织蛋白酶L 前体酶原 生理作用 病理活动 寄生动物
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组织蛋白酶L与冠心病及其危险因素的相关性 被引量:8
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作者 王峻 刘颖娴 +5 位作者 李向平 彭道泉 谭峥 刘鸿敏 秦英楠 薛彦琼 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期130-134,共5页
目的:探讨组织蛋白酶L(CatL)与冠心病发病、冠脉狭窄程度以及冠心病危险因素之间的关系。方法:采用酶联免疫吸附剂实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定137例冠心病患者和48名对照者的血清CatL水平。同时测定空腹血糖(FBS... 目的:探讨组织蛋白酶L(CatL)与冠心病发病、冠脉狭窄程度以及冠心病危险因素之间的关系。方法:采用酶联免疫吸附剂实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定137例冠心病患者和48名对照者的血清CatL水平。同时测定空腹血糖(FBS)、血脂及高敏C反应蛋白(hs-CRP)水平。所有受试者均行冠脉造影,以Gensini积分评估冠脉狭窄程度。结果:冠心病组血清CatL水平(5.63±0.12μg/L)与对照组(3.93±0.22μg/L)比较显著升高(P<0.01)。Logistic回归分析显示CatL血清浓度与冠心病发病独立相关,相对危险度为2.341(P<0.01,95%CI为1.567~3.496)。冠心病患者的血清CatL水平与冠脉狭窄的Gensini积分呈显著正相关(r=0.228,P<0.01),且CatL是Gensini积分的独立相关因子(P<0.05)。血清CatL水平与高密度脂蛋白胆固醇(r=-0.228,P<0.01)、载脂蛋白A1(r=-0.187,P<0.05)呈显著负相关,与FBS呈显著正相关(r=0.161,P<0.05)。结论:CatL可能与冠心病的发病独立相关,其血清水平可反映冠心病患者冠状动脉狭窄病变程度,CatL可能对糖代谢及脂代谢有一定影响。 展开更多
关键词 组织蛋白酶L 冠心病 冠状动脉狭窄 危险因素
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补肾调经方、逍遥丸对促性腺激素预处理小鼠组织蛋白酶-L mRNA的影响 被引量:11
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作者 段彦苍 杜惠兰 +1 位作者 贺明 宋翠淼 《中国中西医结合杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期80-84,共5页
目的探讨补肾调经方、逍遥丸对小鼠组织蛋白酶-L(cathepsin-L,Cat L)mRNA的影响。方法选择未成年小鼠随机分为正常组、对照组、逍遥丸组和补肾调经方组,每组12只,采用反转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reac... 目的探讨补肾调经方、逍遥丸对小鼠组织蛋白酶-L(cathepsin-L,Cat L)mRNA的影响。方法选择未成年小鼠随机分为正常组、对照组、逍遥丸组和补肾调经方组,每组12只,采用反转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)方法检测给予5IU人绒毛促性腺激素(humanchorionic gonadotropin,HCG)0、4、8、12h后Cat L mRNA在各组小鼠卵巢的表达强度。结果注射HCG0、4、8、12h后,Cat L mRNA在促性腺激素预处理小鼠对照组卵巢的表达逐渐升高,Cat L mRNA的相对表达含量分别为:0.066±0.005、0.383±0.045、0.737±0.024、1.036±0.073,各时间点比较差异有统计学意义(P<0.01)。注射HCG后4h与对照组比较,Cat L mRNA逍遥丸组、补肾调经方组小鼠卵巢表达均升高,差异有统计学意义(P<0.01);注射HCG8h与对照组比较,逍遥丸组Cat LmRNA表达升高,差异有统计学意义(P<0.01),补肾调经方组差异无统计学意义(P>0.05);注射HCG12h后与对照组比较,补肾调经方组Cat LmRNA表达升高,差异有统计学意义(P<0.01),逍遥丸组差异无统计学意义(P>0.05)。结论补肾调经方通过使Cat L mRNA表达增强而达到促排卵的作用,消遥丸通过使Cat L mRNA表达高峰提前达到促排卵的目的。 展开更多
关键词 补肾调经方 逍遥丸 排卵 组织蛋白酶-L 反转录聚合酶链式反应
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组织蛋白酶L在动脉粥样硬化病变中的表达以及对巨噬细胞脂质蓄积的影响 被引量:7
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作者 危当恒 夏敏 +2 位作者 贾小英 刘艳辉 田国平 《中国动脉硬化杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期963-968,共6页
目的观察组织蛋白酶L在动脉粥样硬化病变中的表达以及对巨噬细胞脂质蓄积的影响。方法颈总动脉套环并饲以高脂饮食建立兔颈总动脉粥样硬化模型,免疫组织化学方法检测斑块内组织蛋白酶L的表达。氧化型低密度脂蛋白孵育RAW264.7巨噬细胞24... 目的观察组织蛋白酶L在动脉粥样硬化病变中的表达以及对巨噬细胞脂质蓄积的影响。方法颈总动脉套环并饲以高脂饮食建立兔颈总动脉粥样硬化模型,免疫组织化学方法检测斑块内组织蛋白酶L的表达。氧化型低密度脂蛋白孵育RAW264.7巨噬细胞24 h,逆转录聚合酶链反应、Western blot以及荧光分光光度法检测组织蛋白酶L表达和活性。组织蛋白酶L抑制剂预处理巨噬细胞,油红O染色以及高效液相色谱法观察细胞内脂质蓄积。结果正常血管中不表达组织蛋白酶L,斑块内组织蛋白酶L高表达。巨噬细胞经不同浓度氧化型低密度脂蛋白孵育24 h后,组织蛋白酶L mRNA的表达量在各组间无明显差异(P>0.05),但蛋白表达量以及活性明显增加(P<0.05)。组织蛋白酶L抑制剂剂量依赖性地抑制巨噬细胞内脂质积蓄。结论组织蛋白酶L在动脉粥样硬化斑块中高表达并参与巨噬细胞脂质代谢。 展开更多
关键词 组织蛋白酶L 氧化型低密度脂蛋白 动脉粥样硬化 巨噬细胞
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马铃薯腐烂茎线虫L型半胱氨酸蛋白酶新基因(Dd-cpl-1)的克隆与序列分析 被引量:6
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作者 王高峰 彭德良 +3 位作者 孙建华 黄文坤 彭焕 龙海波 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期60-68,共9页
L型半胱氨酸蛋白酶基因(Cathepsin L-like cysteine proteinase gene)为与植物寄生线虫寄生能力相关的多功能基因。运用RT-PCR和RACE的方法从马铃薯腐烂茎线虫Ditylenchus destructor中克隆出1个L型半胱氨酸蛋白酶新基因Dd-cpl-1(GenBan... L型半胱氨酸蛋白酶基因(Cathepsin L-like cysteine proteinase gene)为与植物寄生线虫寄生能力相关的多功能基因。运用RT-PCR和RACE的方法从马铃薯腐烂茎线虫Ditylenchus destructor中克隆出1个L型半胱氨酸蛋白酶新基因Dd-cpl-1(GenBank登录号为GQ180107)。该基因Dd-cpl-1 cDNA全长序列含有1个1 131 bp的开放性阅读框(ORF),编码376个氨基酸残基,其5′末端及3′末端分别含有29 bp和159 bp的非编码区(UTR)。Dd-cpl-1内含子外显子结构分析结果表明,其基因组序列包含7个内含子,且各内含子两端剪接位点序列遵守GT/AG规则。Dd-cpl-1基因推定的蛋白Dd-CPL-1与松材线虫L型半胱氨酸蛋白酶高度同源,一致性达到77%。以不同物种中L型半胱氨酸蛋白酶氨基酸序列进行比对分析,推测推定的蛋白Dd-CPL-1含有L型半胱氨酸蛋白酶基因家族高度保守的催化三联体(Cys183,His322和Asn343)以及ERFNIN基系和GNFD基系。半胱氨酸蛋白酶系统发育分析表明,Dd-cpl-1属于由L型半胱氨酸蛋白酶组成的进化分支。Dd-cpl-1的这些序列特征进一步表明其为L型半胱氨酸蛋白酶基因。这是首次在马铃薯腐烂茎线虫中克隆到的L型半胱氨酸蛋白酶,为今后在蛋白水平对其进行进一步的功能分析提供基础。 展开更多
关键词 马铃薯腐烂茎线虫 L型半胱氨酸蛋白酶 Dd-cpl-1
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日本血吸虫组织蛋白酶L1基因的编码区全序列分析及克隆 被引量:4
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作者 雷智刚 孟锦绣 +3 位作者 何蔼 李卓雅 易冰 詹希美 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期325-327,共3页
目的 分析日本血吸虫组织蛋白酶L1(SjCL1)基因编码区的完整序列,并定向克隆到真核表达质粒pcD-NA3中。 方法 从日本血吸虫成虫提取总RNA,进行反向巢式RT-PCR,T载体克隆后测序。PCR扩增SjCL1基因的编码区序列,并将扩增产物克隆到pcDNA3... 目的 分析日本血吸虫组织蛋白酶L1(SjCL1)基因编码区的完整序列,并定向克隆到真核表达质粒pcD-NA3中。 方法 从日本血吸虫成虫提取总RNA,进行反向巢式RT-PCR,T载体克隆后测序。PCR扩增SjCL1基因的编码区序列,并将扩增产物克隆到pcDNA3质粒的BamHI和Xhol位点上。结果 通过反向巢式RT-PCR扩增出332 bp SjCL1基因5’端序列,测序后与报道的SiCL1基因部分序列拼接,可得到一个编码317个氨基酸的完整编码区序列。PCR特异性扩增出SjCL1编码区基因序列,其大小约为1 kb。经酶切、PCR鉴定和测序表明所构建的质粒pcDNA-SjCL1中含有所扩增的基因序列。 结论 构建了含SjCL1基因的编码区序列的真核表达质粒pcDNA-SjCL1。 展开更多
关键词 日本血吸虫 组织蛋白酶 Ll基因编码区 全序列分析 基因克隆
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温阳活血利水方含药血清对嘌呤霉素损伤小鼠永生系足细胞组织蛋白酶L表达的影响 被引量:10
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作者 邱雯雯 袁军 杨柳 《中国中西医结合杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期602-607,共6页
目的观察温阳活血利水方含药血清对嘌呤霉素损伤的小鼠永生系足细胞组织蛋白酶L(Cathepsin L,CatL)表达的影响。方法体外培养小鼠永生系足细胞,将其分为正常对照组、模型组、地塞米松组、10%温阳活血利水方血清组(简称10%中药血清组)、... 目的观察温阳活血利水方含药血清对嘌呤霉素损伤的小鼠永生系足细胞组织蛋白酶L(Cathepsin L,CatL)表达的影响。方法体外培养小鼠永生系足细胞,将其分为正常对照组、模型组、地塞米松组、10%温阳活血利水方血清组(简称10%中药血清组)、20%中药血清组及中药血清空白对照组。正常对照组以培养液孵育足细胞24 h,模型组应用嘌呤霉素45 mg/L作用于足细胞24 h;在模型组干预基础上,地塞米松组加用地塞米松1μmol/L共孵育24 h;10%及20%中药血清组分别加用10%及20%的中药血清共孵育24h,并设中药血清空白对照组(单用中药血清孵育24 h)。采用细胞免疫荧光染色观察各组足细胞CatL及其底物Synaptopodin荧光表达改变;异硫氰酸荧光素(FITC)-鬼笔毒环肽(phalloidin)染色标记足细胞纤维肌动蛋白(F-actin),并采用F-actin外周环评分(cortical F-actin score,CFS)半定量分析足细胞F-actin分布。结果与正常对照组比较,模型组足细胞Synaptopodin表达水平明显降低,CatL表达水平升高,F-actin排列紊乱,逐渐向细胞外周分布形成F-actin环,CFS评分明显升高(P<0.01)。与模型组比较,地塞米松组、10%、20%中药血清组足细胞Synaptopodin蛋白表达升高,CatL表达水平降低,CFS评分亦降低(P<0.05,P<0.01)。与地塞米松组比较,10%中药血清组Synaptopodin表达降低(P<0.05),20%中药血清组CFS评分明显降低(P<0.05)。结论温阳活血利水方能上调嘌呤霉素损伤的足细胞Synaptopodin表达,下调CatL表达水平,减少骨架蛋白F-actin的重构,有助于稳定足细胞actin骨架,改善足细胞融合。 展开更多
关键词 温阳活血利水方 嘌呤霉素 足细胞 组织蛋白酶L
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