Chemo-Enzymic Synthesis of a Four-Chiral-Center Portion of A-23187(Calcimycin)

1

作者 Jian Wen Fang Zu Yi LI(Shanghai Institute of Organic Chemistry.Academic Sinica354 Fenglin Lu. Shanghai 200032) 《Chinese Chemical Letters》 SCIE CAS CSCD 1997年第2期111-113,共3页

A four-chiral-center portion of A-23187 was synthesized from a chiral synthon which was obtained from lipase-catalyzed resolution.

关键词 HRMS CM FOUR calcimycin Chemo-Enzymic Synthesis of a Four-Chiral-Center Portion of A-23187

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商陆皂甙甲抑制大鼠腹腔巨噬细胞释放血小板活化因子 被引量：14

2

作者 方军 郑钦岳 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 1991年第10期721-724,共4页

卡西霉素(A_(23187))刺激大鼠腹腔巨噬细胞释放血小板活化因子(PAF),用洗涤血小板聚集的方法测定,证明商陆皂甙甲在0.1～100μmol/L浓度范围内及所试的时间范围内,呈剂量及时间依赖性抑制大鼠腹腔巨噬细胞释放PAF:商陆皂甙甲可能就是通... 卡西霉素(A_(23187))刺激大鼠腹腔巨噬细胞释放血小板活化因子(PAF),用洗涤血小板聚集的方法测定,证明商陆皂甙甲在0.1～100μmol/L浓度范围内及所试的时间范围内,呈剂量及时间依赖性抑制大鼠腹腔巨噬细胞释放PAF:商陆皂甙甲可能就是通过抑制体内PAF生成而起抗炎作用的。 展开更多

关键词 商陆皂甙甲 血小板 卡西霉素

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两种哒嗪酮衍生物对小鼠腹腔巨噬细胞体外释放肿瘤坏死因子的影响 被引量：1

3

作者 嵇扬 曾国钱 芮耀诚 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期95-97,共3页

目的　研究两种哒嗪酮衍生物即 :6 (α,α 二苯基乙酰哌嗪基苯基 ) 4,5 二氢 5 甲基 3 (2H) 哒嗪酮 (简称DMDP)和 6 (α 苯基乙酰哌嗪基苯基 ) 4,5 二氢 5 甲基 3 (2H) 哒嗪酮 (简称PMDP)及对照药物维拉帕米 (verapamil,Ver... 目的　研究两种哒嗪酮衍生物即 :6 (α,α 二苯基乙酰哌嗪基苯基 ) 4,5 二氢 5 甲基 3 (2H) 哒嗪酮 (简称DMDP)和 6 (α 苯基乙酰哌嗪基苯基 ) 4,5 二氢 5 甲基 3 (2H) 哒嗪酮 (简称PMDP)及对照药物维拉帕米 (verapamil,Ver)对小鼠腹腔巨噬细胞体外释放肿瘤坏死因子 (tumornecrosisfactor ,TNF)的影响。方法　体外诱生TNF ,以L92 9细胞为靶细胞的细胞毒结晶紫染色法进行TNF的生物定量测定。结果　在 10 -6～ 10 -4 mol·L-1浓度范围内 ,DMDP的抑制作用呈剂量依赖性 ;浓度达 10 -4 mol·L-1时 ,可完全抑制TNF的释放。IC50 <10 -6mol·L-1。PMDP的抑制作用更强 :10 -8～ 10 -6mol·L-1时 ,该抑制作用呈剂量依赖性 ;10 -6mol·L-1时 ,即可完全抑制TNF的释放。IC50 <10 -8mol·L-1。结论　DMDP ,PMDP及Ver对小鼠腹腔巨噬细胞体外释放TNF具有显著的抑制作用。 展开更多

关键词 肿瘤坏死因子 巨噬细胞 哒嗪酮衍生物 卡西霉素 脂多糖 小鼠

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粉防己碱，钩藤碱和维拉帕米对兔主动脉平滑肌细胞内外钙转运的作用 被引量：2

4

作者 开丽 薛春生 周歧新 《中国药理学与毒理学杂志》 CSCD 北大核心 1995年第3期180-183,共4页

粉防己碱和钩藤碱对由高钾和去甲肾上腺素引起的兔主动脉条收缩的抑制作用没有维拉帕米强。粉防己碱，钩藤碱和维拉帕米在由去甲肾上腺素和５－羟色胺引起的两相收缩中，抑制Ⅰ相收缩的ＩＣ５０小于抑制Ⅱ相收缩的ＩＣ５０．粉防己碱，... 粉防己碱和钩藤碱对由高钾和去甲肾上腺素引起的兔主动脉条收缩的抑制作用没有维拉帕米强。粉防己碱，钩藤碱和维拉帕米在由去甲肾上腺素和５－羟色胺引起的两相收缩中，抑制Ⅰ相收缩的ＩＣ５０小于抑制Ⅱ相收缩的ＩＣ５０．粉防己碱，钩藤碱抑制由去甲肾上腺素引起的Ⅰ相收缩的ＩＣ５０分别是抑制高钾所致收缩的１／１２．８和１／６．但维拉帕米没有表现此种关系，三种药物均不能对抗卡西霉素引起的收缩。粉防己碱和钩藤碱能增强咖啡因所致收缩，但维拉帕米抑制之，这些结果表明粉防己碱和钧藤碱为细胞内钙动员抑制剂，而且它们的作用点不同于维拉帕米。 展开更多

关键词 主动脉 平滑肌细胞 钙转运 粉防己碱 钩藤碱

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花椒油素对A23187和钙调节血小板及细胞内游离钙作用的研究 被引量：2

5

作者 金云海 蒋毅萍 林继红 《第一军医大学学报》 CSCD 2000年第6期513-514,共2页

目的 研究花椒油素对CaCl2和钙离子载体A23187调节血小板及其中Ca2+浓度的作用。方法 比浊法测定血小板聚集，用Fura-2/AM荧光法测定细胞内游离钙的水平。结果 花椒油素显著地抑制CaCl2和A23187诱导的血小板聚集，前者的抑制率为9.0%(67... 目的 研究花椒油素对CaCl2和钙离子载体A23187调节血小板及其中Ca2+浓度的作用。方法 比浊法测定血小板聚集，用Fura-2/AM荧光法测定细胞内游离钙的水平。结果 花椒油素显著地抑制CaCl2和A23187诱导的血小板聚集，前者的抑制率为9.0%(67.1%，后者的抑制率为18.1%(72.5%。明显降低A23187诱导的血小板胞质游离Ca2+浓度，降低率为12.8%(63.4%。结论 花椒油素抑制聚集作用与降低细胞内游离Ca2+水平之间呈线性正相关（P<0.01）。 展开更多

关键词 花椒油素 钙离子 钙离子载体 血小板聚集

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卡西霉素对血小板在脑微血管内皮细胞粘附的影响及药物的阻断作用

6

作者 胡晋红 孙笃新 +2 位作者 曾国钱 林爱友 芮耀诚 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 1994年第5期335-339,共5页

体外实验表明ｃａｌｃｉｍｙｃｉｎ０．０１μｍｏｌ·Ｌ－１刺激牛脑微血管内皮细胞２５ｍｉｎ，使兔血小板与脑微血管内皮细胞的粘附率增高１７．１％。ＰＡＦ受体拮抗剂ＷＥＢ２０８６０．１，１．０和１０．０μｕｍｏｌ·... 体外实验表明ｃａｌｃｉｍｙｃｉｎ０．０１μｍｏｌ·Ｌ－１刺激牛脑微血管内皮细胞２５ｍｉｎ，使兔血小板与脑微血管内皮细胞的粘附率增高１７．１％。ＰＡＦ受体拮抗剂ＷＥＢ２０８６０．１，１．０和１０．０μｕｍｏｌ·Ｌ－对血小板在脑微血管内皮细胞上粘附的抑制率分别为９．０，２２．９和２３．１％。ＤＭＰＰ０．１，１．０，１０．０μｍｏｌ·Ｌ－１及Ｔｅｔ０．１，１．０，１０。Ｏμｍｏｌ·Ｌ－１的抑制率分别为９．７，１５．６，２２．１％和７．８，１５．６及２４．６％，提示ＤＭＰＰ和Ｔｅｔ对脑血管有保护作用。 展开更多

关键词 血小板 血管内皮细胞 卡西霉素

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神经肌肉接头前阻断剂川楝素抑制大鼠大脑皮层突触体谷氨酸释放(英文) 被引量：4

7

作者 许彤辉 施玉樑 +1 位作者 任小梅 周建营 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期321-326,共6页

目的　阐释川楝素的作用机制 ,为了解递质解释的基本过程提供线索。方法　以大鼠大脑皮层匀浆经密度梯度离心分离获得的突触体作为研究标本 ,分别施加 5 0mmol·L- 1KCl,1.5 μmol·L- 1卡西霉素或 7.5mmol·L- 14 氨基吡... 目的　阐释川楝素的作用机制 ,为了解递质解释的基本过程提供线索。方法　以大鼠大脑皮层匀浆经密度梯度离心分离获得的突触体作为研究标本 ,分别施加 5 0mmol·L- 1KCl,1.5 μmol·L- 1卡西霉素或 7.5mmol·L- 14 氨基吡啶触发谷氨酸 (Glu)释放。通过检测由Glu氧化脱氢反应与NAD+ 生成的NADH荧光变化测定Glu释放量。结果　川楝素浓度、时间依赖地显著抑制由KCl诱发的Glu释放 ,并主要抑制钙依赖性释放 ;由卡西霉素直接提升胞内钙离子浓度而诱发的Glu释放也被川楝素明显抑制。结论川楝素抑制中枢突触Glu释放 ,该效应与其导致的递质释放机制中钙离子敏感性降低有关。 展开更多

关键词 川楝素 大脑皮质 突触体 氨基酸神经递质 谷氨酸 神经递质调节剂 卡西霉素 4-氨基吡啶

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教酒链霉菌NRRL 3882中钙霉素生物合成后修饰基因calD的功能分析 被引量：2

8

作者 李园莉 苟丽霞 +3 位作者 吴秋林 梁晶丹 邓子新 汪志军 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期148-156,共9页

【目的】钙霉素是二价阳离子载体,是一类含有吡咯环的聚醚类抗生素,广泛用于细胞二价阳离子的生物学功能研究。本文以钙霉素生物合成基因簇中cal D基因为研究对象,通过蛋白质同源序列比对、基因敲除、回补验证及HPLC/MS分析,对cal D基... 【目的】钙霉素是二价阳离子载体,是一类含有吡咯环的聚醚类抗生素,广泛用于细胞二价阳离子的生物学功能研究。本文以钙霉素生物合成基因簇中cal D基因为研究对象,通过蛋白质同源序列比对、基因敲除、回补验证及HPLC/MS分析,对cal D基因的功能进行表征。【方法】对cal D基因功能进行生物信息学预测。选用钙霉素产生菌Streptomyces chartreusis NRRL 3882,通过PCR-targeting的方法对cal D基因进行敲除获得突变株,再将cal D基因克隆到链霉菌整合质粒上,通过接合转移技术将cal D回补到缺失株中。使用HPLC/MS技术对菌株发酵产物进行分析。【结果】生物信息学预测Cal D蛋白酶属于氧化还原酶。获得cal D基因敲除突变株Δcal D及基因回补菌株Δcal D:cal D。HPLC/MS检测到cal D基因的缺失菌株大幅降低钙霉素产生能力,与野生型菌株相比,突变株中积累更多的3-Hydroxylcezomycin和更少的氮-去甲基钙霉素。【结论】cal D参与钙霉素的生物合成。cal D的缺失导致3-Hydroxylcezomycin的积累,推测cal D负责钙霉素生物合成途径中苯并噁唑环3位上羟基转化成酮基的氧化反应。初步阐明了cal D基因在钙霉素生物合成途径中的功能机制。 展开更多

关键词 教酒链霉菌NRRL 3882 钙霉素 calD基因 3-Hydroxylcezomycin

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卡西霉素生物合成调控基因calR2的功能 被引量：3

9

作者 盖婧璇 韩铁生 +3 位作者 刘文秀 武策 汪志军 苟丽霞 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期1518-1526,共9页

【背景】卡西霉素(Calcimycin)是由教酒链霉菌NRRL3882产生的吡咯聚醚类抗生素,结构独特且具有广泛的生物活性,但其生物合成调控机制尚不清楚。【目的】研究卡西霉素生物合成基因簇上编码LuxR家族同源蛋白的潜在调控基因calR2的功能。... 【背景】卡西霉素(Calcimycin)是由教酒链霉菌NRRL3882产生的吡咯聚醚类抗生素,结构独特且具有广泛的生物活性,但其生物合成调控机制尚不清楚。【目的】研究卡西霉素生物合成基因簇上编码LuxR家族同源蛋白的潜在调控基因calR2的功能。【方法】通过PCR-targeting的方法对卡西霉素基因簇上的calR2基因进行中断,HPLC对突变株及回补菌株的代谢产物进行分析。利用荧光定量RT-PCR分析ΔcalR2突变菌株和野生菌株的基因转录水平差异。【结果】calR2基因中断的突变株不能产生卡西霉素,回补菌株则恢复产生卡西霉素的能力。RT-PCR结果表明卡西霉素生物合成的一些重要骨架基因在ΔcalR2突变株中的转录水平明显降低。【结论】LuxR家族转录调控基因calR2在卡西霉素生物合成过程中起正调控作用。 展开更多

关键词 卡西霉素 LuxR家族 调控基因 生物合成

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聚酮合酶大蛋白的表达和纯化方法的建立

10

作者 王川 吴昊 +5 位作者 张灿 汪小杰 刘建军 梁晶丹 李利明 汪志军 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期4581-4589,共9页

CalA3是钙霉素生物合成途径中的大型聚酮合酶,生物信息学分析表明CalA3隶属I型聚酮合酶(PKS-I)。本研究通过构建、体外表达,建立了CalA3的纯化流程,获得了高纯度、稳定的巨大蛋白。通过无缝克隆方法,从柯斯质粒p16F9上扩增calA3基因片... CalA3是钙霉素生物合成途径中的大型聚酮合酶,生物信息学分析表明CalA3隶属I型聚酮合酶(PKS-I)。本研究通过构建、体外表达,建立了CalA3的纯化流程,获得了高纯度、稳定的巨大蛋白。通过无缝克隆方法,从柯斯质粒p16F9上扩增calA3基因片段,C端引入6His Tag,成功构建到表达质粒pET-28a(+)上,得到结果质粒pET-CalA3cH;通过探索不同的表达宿主、共表达分子伴侣和培养基的优化,获得最佳表达条件:在大肠杆菌BL21-Gold(DE3)中通过LBBS培养基与pGro7共表达,获得了该蛋白的最优可溶性高表达;通过Ni2+亲和层析、Heparin、离子交换和凝胶过滤层析多步纯化手段,对CalA3进行了有效分离纯化,获得了高纯度和稳定的蛋白;通过非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和凝胶过滤层析法测定了CalA3的表观分子量,并推测该蛋白为二聚体;凝胶迁移实验证明CalA3具有DNA结合能力。本研究探索了体外表达和纯化大型聚酮合酶CalA3蛋白的方法,成功获得了大蛋白在大肠杆菌中的异源表达和纯化,表征了CalA3的二聚体分子量为360 kD,并初步确定了CalA3具有体外结合DNA的能力,暗示其在钙霉素生物合成中具有转录调控功能。本研究为进一步研究CalA3的功能提供了理论依据。 展开更多

关键词 钙霉素 Ⅰ型聚酮合酶 CalA3 DNA 结合蛋白

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卡西霉素生物合成途径中抗性基因calT的功能

11

作者 苟丽霞 解子晗 +3 位作者 张文丽 宋子涵 汪志军 韩铁生 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期643-648,共6页

目的研究卡西霉素产生菌教酒链霉菌NRRL 3882中编码MmpL家族同源蛋白的抗性基因calT的功能。方法利用λ-RED同源重组方法构建calT基因敲除质粒,通过接合转移和同源重组的方法得到双交换的calT基因敲除的突变株。通过HPLC分析突变株的代... 目的研究卡西霉素产生菌教酒链霉菌NRRL 3882中编码MmpL家族同源蛋白的抗性基因calT的功能。方法利用λ-RED同源重组方法构建calT基因敲除质粒,通过接合转移和同源重组的方法得到双交换的calT基因敲除的突变株。通过HPLC分析突变株的代谢产物,并对突变株及野生菌株的细胞内及细胞外卡西霉素的分布进行分析。结果突变株GLX30(ΔcalT)中卡西霉素的产量与野生菌株相比显著降低,且胞内卡西霉素的占比与野生菌株相比增加约3倍,说明calT与卡西霉素的转运功能相关。结论CalT为转运蛋白,负责将卡西霉素转运至胞外以实现教酒链霉菌对卡西霉素的抗性。 展开更多

关键词 卡西霉素 calT MmpL家族 生物合成

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教酒链霉菌中卡西霉素生物合成基因簇的calU3基因功能分析

12

作者 苟丽霞 杨清浅 +2 位作者 刘孟欣 汪志军 韩铁生 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期418-426,共9页

卡西霉素(calcimycin)是重要的离子载体抗生素,具有广泛的生物活性,其生物合成基因簇已从教酒链霉菌(Streptomyces chartreusis)NRRL3882的基因组DNA中成功克隆,但其生物合成途径尚未阐明。本研究拟分析卡西霉素生物合成途径中calU3基... 卡西霉素(calcimycin)是重要的离子载体抗生素,具有广泛的生物活性,其生物合成基因簇已从教酒链霉菌(Streptomyces chartreusis)NRRL3882的基因组DNA中成功克隆,但其生物合成途径尚未阐明。本研究拟分析卡西霉素生物合成途径中calU3基因的功能。采用PCR-targeting方法构建calU3基因中断质粒,通过接合转移和同源重组的方法构建得到教酒链霉菌NRRL3882的ΔcalU3突变株,并对突变株进行calU3基因的互补分析,通过高效液相色谱(HPLC)及液相色谱-质谱(LC-MS)分析突变株及互补菌株的代谢产物。构建calU3的表达载体,纯化得到重组CalU3蛋白,对其进行紫外/可见光的吸光谱分析。结果显示calU3基因中断的突变株丧失产生卡西霉素及N-脱甲基卡西霉素的能力,但有色唑霉素(cezomycin)的积累,互补菌株恢复野生菌株产卡西霉素的能力。CalU3蛋白具有明显的黄色,在377 nm和455 nm有特征性的吸收峰。以上结果表明calU3和卡西霉素苯并噁唑环3位取代基团的形成相关。CalU3具有FAD-NAD(P)的结合位点,可能是一个FAD-NAD(P)依赖的氧化还原酶,负责催化活化的色唑霉素中苯并噁唑环的3位羟化反应,生成3-羟基色唑霉素。本研究初步阐明了calU3基因对卡西霉素的苯并噁唑环3位的修饰功能,为全面解析卡西霉素的生物合成途径打下了坚实基础。 展开更多

关键词 卡西霉素 生物合成 氧化还原酶 FAD依赖 calU3

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卡西霉素生物合成基因簇中调控基因calR1的功能

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作者 苟丽霞 蔡楠 +2 位作者 刘孟欣 汪志军 韩铁生 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期1195-1204,共10页

【背景】卡西霉素(calcimycin)是重要的离子载体抗生素,其生物合成基因簇已从教酒链霉菌NRRL3882的基因组DNA中成功克隆,但基因簇内的部分生物合成基因及调控基因的功能有待研究。【目的】研究卡西霉素产生菌教酒链霉菌NRRL3882中编码T... 【背景】卡西霉素(calcimycin)是重要的离子载体抗生素,其生物合成基因簇已从教酒链霉菌NRRL3882的基因组DNA中成功克隆,但基因簇内的部分生物合成基因及调控基因的功能有待研究。【目的】研究卡西霉素产生菌教酒链霉菌NRRL3882中编码TylR家族同源转录调控蛋白的calR1基因的功能。【方法】通过PCR-targeting的方法,构建calR1基因敲除突变株及回补菌株,对突变菌株及回补菌株进行发酵,通过HPLC分析其代谢产物。利用荧光定量PCR检测ΔcalR1突变菌株和野生菌株的生物合成基因转录水平。【结果】calR1基因敲除突变株丧失产生卡西霉素的能力,但仍有中间产物噻唑霉素的积累,回补菌株中卡西霉素的产量有一定程度的恢复。RT-qPCR结果表明,卡西霉素合成相关的一些重要基因calC、calG、calU3等基因的表达量明显改变。【结论】TylR家族转录调控基因calR1是卡西霉素生物合成的调控基因。 展开更多

关键词 卡西霉素 TylR家族 调控基因 生物合成

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钙离子载体A23187联合嘌呤霉素激活行卵母细胞质内单精子注射后未受精卵母细胞的研究 被引量：3

14

作者 鹿群 陈子江 +4 位作者 高选 马水英 李梅 胡京美 李媛 《中华妇产科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期182-185,共4页

目的观察钙离子载体A23187联合嘌呤霉素对卵母细胞质内单精子注射（ICSI）后未受精卵母细胞的激活作用。方法将体外成熟（IVM）-ICSI和常规ICSI后未受精卵母细胞，按行ICSI后体外培养的时间，分为IVM-ICSI 22h组（33个）、IVM—ICSI 44... 目的观察钙离子载体A23187联合嘌呤霉素对卵母细胞质内单精子注射（ICSI）后未受精卵母细胞的激活作用。方法将体外成熟（IVM）-ICSI和常规ICSI后未受精卵母细胞，按行ICSI后体外培养的时间，分为IVM-ICSI 22h组（33个）、IVM—ICSI 44h组（18个）、ICSI44h组（37个）、ICSI68h组（25个），分别采用钙离子载体A23187联合嘌呤霉素进行激活处理。应用荧光原位杂交（FISH）技术，对来源于双原核合并第二极体合子的激活胚胎进行性染色体分析。结果钙离子载体A23187联合嘌呤霉素能激活行ICSI后22—68h未受精的卵母细胞。其中IVM-ICSI22h组卵母细胞激活率为88％（29／33）、总卵裂率为62％（18／29）、4细胞阶段胚胎发育率为28％（5／18），1个胚胎发育到桑椹胚阶段；而IVM-ICSI44h组、ICSI44h组、ICSI68h组的未受精卵母细胞激活率分别为56％（10／18）、65％（24／37）、52％（13／25）；总卵裂率分别为20％（2／10）、42％（10／24）、46％（6／13），仅ICSI44h组有1个胚胎发育到4细胞阶段。FISH对激活胚胎的分析显示，4个胚胎为XX，9个胚胎为XY。结论钙离子裁体A23187联合嘌呤霉素能有效激活行ICSI失败的卵母细胞；行ICSI后22h内，是对未受精卵母细胞进行辅助激活较为理想的时机。激活的双原核合并第二极体胚胎中有雄原核的存在。 展开更多

关键词 卵母细胞 卡西霉素 嘌呤霉索 精子注射 细胞质内 原位杂交 荧光

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粉防己碱对兔血小板聚集和血小板活化因子生成的影响(英文) 被引量：6

15

作者 张敏 张乐之 吕金胜 《中国药理学报》 CSCD 1995年第3期209-212,共4页

目的:探讨粉防己碱(Tet)对兔血小板聚集和PAF生成的影响.方法:卡西霉素(Cal)和PAF诱导血小板聚集的聚集率和Tet对血小板聚集的抑制率被测定;给予或未给予Tet处理之血小板用Cal刺激释放PAF的量也被测定.结果:在4—64 μmol·L^(-1)... 目的:探讨粉防己碱(Tet)对兔血小板聚集和PAF生成的影响.方法:卡西霉素(Cal)和PAF诱导血小板聚集的聚集率和Tet对血小板聚集的抑制率被测定;给予或未给予Tet处理之血小板用Cal刺激释放PAF的量也被测定.结果:在4—64 μmol·L^(-1)浓度范围,Tet明显抑制Cal和PAF诱导的血小板聚集.IC_(50)值分别为8.6μmol·L^(-1)和14.0μmol·L^(-1).Tet也浓度依赖性的抑制Cal诱导血小板释放PAF,IC_(50)值为21.0μmol·L^(-1).结论:Tet抑制血小板聚集作用与抑制内源性PAF生成有关. 展开更多

关键词 粉防己碱 血小板聚集 血小板活化因子 卡西霉素

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小檗胺对培养的HeLa细胞内游离钙浓度的作用(英文) 被引量：2

16

作者 李柏岩 付兵 +1 位作者 赵艳玲 李文汉 《中国药理学报》 CSCD 1999年第11期1011-1014,共4页

目的:研究Ca^(2+)信号传导是否参与Hela细胞的信号传导过程以及小檗胺(Ber)对HeLa细胞内钙浓度([Ca^(2+)]_i)变化的影响。方法:Fluo 3-AM负载HeLa细胞,共聚焦法测定[Ca^(2+)]_i,结果以荧光强度(FI)表示。结果:(1)有外钙时,HeLa细胞静息F... 目的:研究Ca^(2+)信号传导是否参与Hela细胞的信号传导过程以及小檗胺(Ber)对HeLa细胞内钙浓度([Ca^(2+)]_i)变化的影响。方法:Fluo 3-AM负载HeLa细胞,共聚焦法测定[Ca^(2+)]_i,结果以荧光强度(FI)表示。结果:(1)有外钙时,HeLa细胞静息FI为186±44,KCl、NE、Cal,及咖啡因均升高HeLa细胞的[Ca^(2+)]_i。(2)Ber处理后,静息FI无影响,但抑制KCl、NE和Cal引起的[Ca^(2+)]_i升高(P<0.01),FI变化的速率减慢,达峰值的时间延长。(3)无外钙时,咖啡因诱导的[Ca^(2+)]_i升高不被Ber抑制。(4)Ber的上述作用与Ver的作用相似。结论:HeLa细胞属于非兴奋性细胞,但部分生物学特征与兴奋性细胞相似,Ca^(2+)同样在其信息转导中发挥重要作用。 展开更多

关键词 小檗胺 钙 钾 去甲肾上腺素 HELA细胞 荧光染料

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依他酸和卡西霉素对人胚肺成纤维细胞脱氧核糖核酸和胶原合成的影响(英文)

17

作者 刘海林 陆汉明 +2 位作者 李定国 齐凤 蒋祖明 《中国药理学报》 CSCD 1996年第1期63-65,共3页

目的:研究依他酸(EA)和卡西霉素(Cal)对人胚肺成纤维细胞脱氧核糖核酸和胶原合成的影响。方法:采用[~3H]TdR与[~3H]脯氨酸掺入分别测定脱氧核糖核酸和胶原合成。结果:给药24h后,EA0.05—4mmol·L^(-1)和Cal0.25—20μmol·L^(-1... 目的:研究依他酸(EA)和卡西霉素(Cal)对人胚肺成纤维细胞脱氧核糖核酸和胶原合成的影响。方法:采用[~3H]TdR与[~3H]脯氨酸掺入分别测定脱氧核糖核酸和胶原合成。结果:给药24h后,EA0.05—4mmol·L^(-1)和Cal0.25—20μmol·L^(-1)组胶原合成均显著增加,脱氧核糖核酸合成无明显改变。给药36和48h,EA 1—4mmol·L^(-1)组胶原与脱氧核糖核酸合成降低:Cal0.25—20μmol·L^(-1)组脱氧核糖核酸合成亦下降,胶原合成仅10和20μmol·L^(-1)组降低。结论:细胞外液Ca^(2+)内流促进胶原合成,细胞内Ca^(2+)浓度过高或过低均抑制脱氧核糖核酸合成。 展开更多

关键词 肺 钙 依他酸 卡西霉素 胶原 成纤维细胞 DNA

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链佐星所致糖尿病大鼠主动脉内皮依赖舒张反应损伤的特征(英文)

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作者 沈建中 郑秀凤 《中国药理学报》 CSCD 1999年第9期844-850,共7页

目的:研究早期糖尿病大鼠内皮依赖舒张反应(EDR)损伤的机制。方法:离体主动脉环张力实验。结果:乙酰胆碱(ACh),组胺(His),缓激肽,环匹阿尼酸(CPA)在糖尿病组EDR均比对照组明显减弱。而卡西霉素诱导的EDR未见损伤。L-NAME(0.3mmol·L... 目的:研究早期糖尿病大鼠内皮依赖舒张反应(EDR)损伤的机制。方法:离体主动脉环张力实验。结果:乙酰胆碱(ACh),组胺(His),缓激肽,环匹阿尼酸(CPA)在糖尿病组EDR均比对照组明显减弱。而卡西霉素诱导的EDR未见损伤。L-NAME(0.3mmol·L^(-1))预处理取消所有EDR,并使两组间效应均一化。ACh或CPA诱导最大EDR时,卡西霉素(1μmol·L^(-1))进一步扩张糖尿病而非正常组血管环。硝普钠扩血管及CPA或His缩血管效应均无组间差异。结论:在4周链佐星糖尿病大鼠主动脉,受体而不是非受体介导的EDR普遍损伤,其机制与内皮细胞电容性钙内流信号通路受损从而使NO合成减少有关。 展开更多

关键词 血管内皮 链佐星 糖尿病 缓激肽

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环孢菌素抑制钙离子介导的HL-60细胞凋亡(英文) 被引量：3

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作者 黄其擎 方敏 +1 位作者 张鸿卿 薛绍白 《中国药理学报》 CSCD 1997年第3期262-265,共4页

目的:研究环孢菌素(Cyc)在HL-60细胞凋亡中的作用.方法:通过DNA凝胶电泳、细胞形态观察及流式细胞术等方法确定药物三尖杉酯碱(Har), 喜树碱(Cam)或卡西霉素(Cal),thapsigargin(Tha)诱导的细胞凋亡.流式细胞术测定细胞凋亡中胞内相对自... 目的:研究环孢菌素(Cyc)在HL-60细胞凋亡中的作用.方法:通过DNA凝胶电泳、细胞形态观察及流式细胞术等方法确定药物三尖杉酯碱(Har), 喜树碱(Cam)或卡西霉素(Cal),thapsigargin(Tha)诱导的细胞凋亡.流式细胞术测定细胞凋亡中胞内相对自由钙浓度的变化.结果:Cal或Tha均能诱导HL-60细胞凋亡,其效应可被Cyc抑制;但Cyc不抑制Hat或Cam诱导的HL-60细胞凋亡.Cal或Tha均能诱导细胞内Ca^(2+)浓度升高,而Hat或Cam并不诱导胞内Ca^(2+)浓度升高.结论:Cyc只抑制由Ca^(2+)升高介导的细胞凋亡.Cal或Tha诱导的细胞凋亡机制不同于由Hat或Cam所诱导的细胞凋亡机制. 展开更多

关键词 环孢菌素 钙 细胞凋亡 HL-60细胞

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钙霉素聚酮链释放亚基蛋白性质优化及底物选择性 被引量：1

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作者 李希希 王嘉良 +4 位作者 曹卫 李丹丹 邓子新 汪志军 梁晶丹 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期194-205,共12页

【目的】钙霉素合成酶亚基CalA3释放钙霉素合成过程中的聚酮链。获得生物化学性质稳定、蛋白结构性质均一的CalA3蛋白,可用于冷冻电镜(cryo-electron microscopy)结构解析,以帮助理解装配线型聚酮合酶亚基释放聚酮链的生物化学机理。探... 【目的】钙霉素合成酶亚基CalA3释放钙霉素合成过程中的聚酮链。获得生物化学性质稳定、蛋白结构性质均一的CalA3蛋白,可用于冷冻电镜(cryo-electron microscopy)结构解析,以帮助理解装配线型聚酮合酶亚基释放聚酮链的生物化学机理。探究CalA3对不同关键结构特征的聚酮链底物的选择性,可为制备CalA3与小分子化合物的复合物提供生化材料,同时也为进一步挖掘CalA3的成酰胺键的应用潜能提供借鉴。【方法】优化CalA3蛋白异源表达菌株的培养条件、CalA3蛋白纯化的生化条件,利用负染电镜观察蛋白形态,计算并分析蛋白质结构的性质;测定CalA3对不同结构的直链聚酮类似物的体外催化活性,利用色谱和质谱分析鉴定CalA3催化N-乙酰半胱氨酸-吡咯-2-丙酸(SNAC-C3)、N-乙酰半胱氨酸-戊酸(SNAC-C5)和月桂酰辅酶A等多种不同结构的直链聚酮底物类似物与3-羟基邻氨基苯甲酸(3-hydroxy anthranilic acid,3HA)反应的产物。【结果】利用优化后的培养基PGTY,不仅实现了高纯度巨型聚酮合酶CalA3超量异源表达,同时,负染电镜观察、计算分析表明蛋白颗粒的结构性质优异。使用该条件纯化获得的CalA3蛋白,可以用于制备冷冻电镜样品,进行结构解析。CalA3催化SNAC-C3、SNAC-C5与3HA发生氨解反应,未检测到CalA3对月桂酰辅酶A底物的催化活性。【结论】蛋白纯化和负染电镜结果显示,本研究成功建立了CalA3异源表达的大肠杆菌培养条件、蛋白纯化生化条件。体外催化实验结果表明CalA3对聚酮链底物的结构选择具有宽泛性。这些发现为进一步探究聚酮合酶的结构、功能及应用提供了一定的借鉴。 展开更多

关键词 聚酮合酶 培养基 钙霉素合成酶CalA3 冷冻电镜 底物特异性 体外催化 聚酮类似物 结构鉴定

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