目的采用BALB/c小鼠免疫结合ELISA法,建立新型冠状病毒灭活疫苗(Vero细胞)体内效力检验方法,探讨其影响因素后,进行方法验证。方法新型冠状病毒灭活疫苗(Vero细胞)免疫小鼠14 d后,摘眼球采血并分离血清及灭活,采用ELISA法检测小鼠血清...目的采用BALB/c小鼠免疫结合ELISA法,建立新型冠状病毒灭活疫苗(Vero细胞)体内效力检验方法,探讨其影响因素后,进行方法验证。方法新型冠状病毒灭活疫苗(Vero细胞)免疫小鼠14 d后,摘眼球采血并分离血清及灭活,采用ELISA法检测小鼠血清中特异性新型冠状病毒抗体效价。对小鼠2种动物来源和3种周龄以及检测试剂盒内关键试剂(包被板、酶稀释液、酶标抗体)各3批进行结果比对分析,并按照《中国药典》四部(2020版)9401生物制品生物活性/效价测定方法验证指导原则,对建立的方法进行精密度、专属性、相对准确度验证;采用建立的方法对10批新型冠状病毒灭活疫苗(Vero细胞)半成品的体内效力进行检测。结果3批样品免疫不同来源小鼠检测结果的几何变异系数(geometric coefficient of variation,GCV)为17.1%~30.3%,2种来源小鼠检测结果在95%置信区间内差异无统计学意义(t=0.25,P>0.05);同一批样品免疫不同周龄小鼠检测结果GCV为10.9%。同一批试剂盒、同一批抗体及不同批酶稀释液检测的A_(450-630)值GCV为4.8%,同一批试剂盒、同一批酶稀释液及不同批抗体检测的A_(450-630)值GCV为9.9%,同一批抗体、同一批酶稀释液及不同批酶标板检测的A_(450-630)值GCV为6.3%;同一实验人员对同一批半成品重复检测6次,GCV为9.1%~23.8%,不同实验人员在不同时间、不同地点检测的GCV为24.9%;氢氧化铝佐剂和阴性对照组抗体效价几何平均滴度(geometric mean titer,GMT)的GCV为8.4%;同一样品在4个不同稀释度的相对偏倚(relative bias,RB)为-25.0%~21.7%。10批疫苗参考品效价为1131~2263,GCV为13.0%。结论建立的小鼠免疫结合ELISA法具有较高的准确度、精密度,较好的专属性,可用于新型冠状病毒灭活疫苗(Vero细胞)体内效力检测,可作为产品有效性评价指标。展开更多
文摘目的采用BALB/c小鼠免疫结合ELISA法,建立新型冠状病毒灭活疫苗(Vero细胞)体内效力检验方法,探讨其影响因素后,进行方法验证。方法新型冠状病毒灭活疫苗(Vero细胞)免疫小鼠14 d后,摘眼球采血并分离血清及灭活,采用ELISA法检测小鼠血清中特异性新型冠状病毒抗体效价。对小鼠2种动物来源和3种周龄以及检测试剂盒内关键试剂(包被板、酶稀释液、酶标抗体)各3批进行结果比对分析,并按照《中国药典》四部(2020版)9401生物制品生物活性/效价测定方法验证指导原则,对建立的方法进行精密度、专属性、相对准确度验证;采用建立的方法对10批新型冠状病毒灭活疫苗(Vero细胞)半成品的体内效力进行检测。结果3批样品免疫不同来源小鼠检测结果的几何变异系数(geometric coefficient of variation,GCV)为17.1%~30.3%,2种来源小鼠检测结果在95%置信区间内差异无统计学意义(t=0.25,P>0.05);同一批样品免疫不同周龄小鼠检测结果GCV为10.9%。同一批试剂盒、同一批抗体及不同批酶稀释液检测的A_(450-630)值GCV为4.8%,同一批试剂盒、同一批酶稀释液及不同批抗体检测的A_(450-630)值GCV为9.9%,同一批抗体、同一批酶稀释液及不同批酶标板检测的A_(450-630)值GCV为6.3%;同一实验人员对同一批半成品重复检测6次,GCV为9.1%~23.8%,不同实验人员在不同时间、不同地点检测的GCV为24.9%;氢氧化铝佐剂和阴性对照组抗体效价几何平均滴度(geometric mean titer,GMT)的GCV为8.4%;同一样品在4个不同稀释度的相对偏倚(relative bias,RB)为-25.0%~21.7%。10批疫苗参考品效价为1131~2263,GCV为13.0%。结论建立的小鼠免疫结合ELISA法具有较高的准确度、精密度,较好的专属性,可用于新型冠状病毒灭活疫苗(Vero细胞)体内效力检测,可作为产品有效性评价指标。
