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基于镍基合金材料低频振动辅助BTA深孔钻削性能实验研究
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作者 师毓华 郑建明 +4 位作者 刘驰 蒋大勇 冯佩 马莉丽 商鹏 《工具技术》 北大核心 2025年第10期82-87,共6页
镍基合金深孔加工时切削温度高、排屑困难、刀具磨损快是目前制孔工艺中的一项技术难题。基于BTA深孔钻削机理,建立镍基合金普通和低频振动辅助BTA深孔钻削力及钻削温度测量系统,对两种钻削条件下钻削温度、钻削力以及钻头外齿的前刀面... 镍基合金深孔加工时切削温度高、排屑困难、刀具磨损快是目前制孔工艺中的一项技术难题。基于BTA深孔钻削机理,建立镍基合金普通和低频振动辅助BTA深孔钻削力及钻削温度测量系统,对两种钻削条件下钻削温度、钻削力以及钻头外齿的前刀面、后刀面及定径刃的磨损情况进行对比分析。结果表明:相较于普通钻削,振动钻削时工件孔壁处温度下降5.9%,说明振动钻削方式能够改善BTA深孔钻削换热环境,并且通过适当调整切削用量,可以有效降低钻削温度;振动钻削相较普通钻削能够降低钻削力,其中轴向力平均值降低16.61%,扭矩平均值降低7.53%;此外,Inconel 718镍基合金的切削加工性能差,刀具磨损快,振动钻削时外刀齿后刀面的磨损量VB较普通钻削时低,初始磨损期持续时长为普通钻削的3倍,外齿前刀面和定径刃的磨损程度均较普通钻削改善明显。振动钻削能够有效延缓刀齿磨损,提高刀具的使用寿命。 展开更多
关键词 镍基合金 bta深孔钻削 低频振动 钻削温度 钻削力 刀具磨损
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bta-miR-330对牛前体脂肪细胞增殖和分化的影响
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作者 杨志梅 高妮 +1 位作者 马鑫浩 昝林森 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第4期1-11,22,共12页
【目的】研究bta-miR-330对牛前体脂肪细胞增殖和分化的影响。【方法】利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测bta-miR-330在牛前体脂肪细胞分化进程中的表达量。根据bta-miR-330的成熟序列设计bta-miR-330的模拟物、抑制剂及其对照序列,通过... 【目的】研究bta-miR-330对牛前体脂肪细胞增殖和分化的影响。【方法】利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测bta-miR-330在牛前体脂肪细胞分化进程中的表达量。根据bta-miR-330的成熟序列设计bta-miR-330的模拟物、抑制剂及其对照序列,通过lip3000转染至牛前体脂肪细胞,利用EdU染色、RT-qPCR和Western blot方法检测bta-miR-330过表达和抑制表达对牛前体脂肪细胞增殖阳性细胞数量、增殖相关基因P21、P27、CDK1、CCND1、CCNE1、MCM3和PCNA及增殖相关蛋白PCNA和CDK1表达量的影响。利用油红O染色、RT-qPCR和Western blot方法检测bta-miR-330过表达和抑制表达对牛前体脂肪细胞脂滴累积、细胞分化相关基因PPARγ、CEBPα、SREBP1和FABP4及分化相关蛋白PPARγ、CEBPα和FABP4表达量的影响。利用生物信息学方法预测bta-miR-330的靶基因,采用RT-qPCR及双萤光素报告酶方法检测bta-miR-330与靶基因的靶向关系。【结果】bta-miR-330在牛前体脂肪细胞分化过程中表达量存在显著差异。过表达bta-miR-330可降低牛前体脂肪细胞增殖阳性细胞数量,显著抑制细胞增殖相关基因MCM3、CCNE1和CCND1及相关蛋白PCNA和CDK1的表达。过表达bta-miR-330可促进牛前体脂肪细胞脂滴累积,显著促进细胞分化相关基因CEBPα和FABP4及相关蛋白PPARγ和FABP4的表达。抑制bta-miR-330的表达会在一定程度上出现与过表达相反的作用。在线软件预测长链酯酰辅酶A合成酶6(ACSL6)基因为bta-miR-330的靶基因,RT-qPCR和双萤光素报告酶载体试验结果表明,bta-miR-330和ACSL6存在靶向关系。【结论】bta-miR-330对牛前体脂肪细胞增殖和分化具有调控作用。 展开更多
关键词 bta-miR-330 前体脂肪细胞 ACSL6基因
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基于阻尼器对BTA刀具振动的主动控制与试验研究
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作者 周瑜哲 张耿 《机械设计与制造工程》 2025年第4期43-48,共6页
主要研究阻尼器对BTA刀具振动的主动控制,首先依据深孔钻削系统,建立BTA钻削刀具轴向振动动力学模型。为了验证普通钻削和振动钻削模型的有效性,对各刀齿的轴向力、径向力以及主切削力的波形图进行了比较。然后搭建含有阻尼器的BTA深孔... 主要研究阻尼器对BTA刀具振动的主动控制,首先依据深孔钻削系统,建立BTA钻削刀具轴向振动动力学模型。为了验证普通钻削和振动钻削模型的有效性,对各刀齿的轴向力、径向力以及主切削力的波形图进行了比较。然后搭建含有阻尼器的BTA深孔钻削试验平台,在进给量f _(r)为0.05 mm/r的前提下,检测不同转速的普通钻削和振动钻削在15~55 mm深度下的圆度误差,结果表明含有阻尼器的BTA刀具,振动钻削方式获得了较好的表面质量,为后续的BTA刀具振动控制的相关研究提供了试验支撑。 展开更多
关键词 阻尼器 bta刀具 主动控制 振动钻削
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bta-miR-34a的生物信息学分析及其在牛脂肪组织中的表达模式研究
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作者 马海楠 宋雅萍 +7 位作者 焦若普 马欣雨 姜超 宋小雨 杨东梅 龚红芳 马艺伦 魏大为 《中国畜禽种业》 2025年第9期10-21,共12页
肌内脂肪与牛肉嫩度、风味密切相关。bta-miR-34a是调控肌内脂肪生成的重要因子,该研究旨在探究其在牛脂肪沉积中的潜在功能。该文应用生物信息学分析了bta-miR-34a在不同物种中保守性及调控的靶基因,并对靶基因进行功能富集;使用RT-qPC... 肌内脂肪与牛肉嫩度、风味密切相关。bta-miR-34a是调控肌内脂肪生成的重要因子,该研究旨在探究其在牛脂肪沉积中的潜在功能。该文应用生物信息学分析了bta-miR-34a在不同物种中保守性及调控的靶基因,并对靶基因进行功能富集;使用RT-qPCR技术探究了bta-miR-34a在牛皮下脂肪和背最长肌组织以及肌内脂肪细胞分化不同阶段中的表达模式。结果表明,miR-34a在不同物种中具有高度保守性。通过miRWalk和TargetScan数据库联合筛选,共同鉴定出520个bta-miR-34a的候选靶基因,这些靶基因显著富集在细胞群体增殖、跨膜运输、间充质发育等生物过程及cAMP、TGF-β、Wnt等信号通路。RT-qPCR结果显示,bta-miR-34a在安格斯牛和西门塔尔牛皮下脂肪的相对表达量极显著高于背最长肌的相对表达量(P<0.01),在西门塔尔牛皮下脂肪中的相对表达量显著高于安格斯牛(P<0.05);bta-miR-34a在安格斯成年牛背最长肌的相对表达量极显著高于犊牛(P<0.01),bta-miR-34a在牛肌内脂肪细胞分化过程中的表达量呈现先上升后下降的变化情况。基于此,该研究发现bta-miR-34a的潜在靶基因在脂肪沉积中发挥着重要的作用,且其在西门塔尔牛和安格斯牛品种间的背最长肌和皮下脂肪的表达量存在显著的差异。 展开更多
关键词 bta-miR-34a 靶基因 脂肪沉积 表达模式
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Bta-miR-134靶基因预测及生物信息学分析
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作者 许浩天 赵雅菲 +2 位作者 于月通 李静 齐萌 《塔里木大学学报》 2025年第1期29-37,共9页
本研究对LPS与钙离子共处理的奶牛乳腺上皮细胞RNA样本以及LPS处理的奶牛乳腺上皮细胞RNA样本进行miRNA测序,发现16个差异表达miRNA,其中表达水平上调miRNA 1个,表达水平下调miRNA 15个。上调miRNA为bta-miR-134,其可能在钙离子抑制奶... 本研究对LPS与钙离子共处理的奶牛乳腺上皮细胞RNA样本以及LPS处理的奶牛乳腺上皮细胞RNA样本进行miRNA测序,发现16个差异表达miRNA,其中表达水平上调miRNA 1个,表达水平下调miRNA 15个。上调miRNA为bta-miR-134,其可能在钙离子抑制奶牛乳腺上皮细胞炎症反应进程中发挥关键作用。因此,对奶牛乳腺上皮细胞来源bta-miR-134的靶基因进行预测并开展生物信息学分析,为bta-miR-134的功能验证奠定研究基础。使用miRBase数据库分析bta-miR-134的成熟序列保守性;使用Targetscan数据库预测bta-miR-134的靶基因;使用R语言中clusterProfiler包对bta-miR-134靶基因进行GO和KEGG富集分析;使用STRING数据库分析bta-miR-134靶基因的蛋白互作关系。Bta-miR-134的成熟序列在不同物种间高度保守;预测到bta-miR-134的靶基因共计171个;GO功能富集结果显示,靶基因主要富集蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶活性、蛋白激酶活性、蛋白丝氨酸激酶活性等分子功能;KEGG通路富集结果显示,靶基因主要参与Ras信号通路、神经营养因子信号通路、人类免疫缺陷病毒1型感染和恰加斯病等相关信号通路;蛋白互作分析表明KRAS、PIK3CA、CASP8这3个基因与其他基因的连通度最高。Bta-miR-134可能靶向KRAS、PIK3CA、CASP8等关键基因,由Ras信号通路、MAPK信号通路和Toll样受体信号通路进一步介导,从而调控奶牛乳腺上皮细胞炎症反应。本研究为进一步揭示奶牛乳腺上皮细胞中钙离子、miRNA与炎症信号通路之间的调控机制提供重要数据。 展开更多
关键词 bta-miR-134 靶基因 生物信息学分析
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基于BTA钻断屑机理对钻削性能影响的仿真研究
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作者 张小石 张强 +3 位作者 姜黎明 王宪升 黄勇 侯冬冬 《青岛理工大学学报》 2025年第4期150-156,共7页
针对BTA钻加工难断屑的问题,通过ABAQUS软件对BTA钻加工钛合金建立的有限元模型进行仿真分析,研究BTA错齿型刀具结构对钻削加工内孔分屑效果的判别依据。研究钻削速度、进给速度、钻削深度钻削三要素在钻削加工内孔时应力、温度的分布... 针对BTA钻加工难断屑的问题,通过ABAQUS软件对BTA钻加工钛合金建立的有限元模型进行仿真分析,研究BTA错齿型刀具结构对钻削加工内孔分屑效果的判别依据。研究钻削速度、进给速度、钻削深度钻削三要素在钻削加工内孔时应力、温度的分布规律。得出结论:钻削加工内孔的性能排序为BTA错齿V型、BTA错齿VI型、BTA型。在主轴转速2000 r/min、钻削深度1.5 mm,进给速度由30 mm/min降到10 mm/min时,平均应力由1.4×10^(3) MPa降到1.2×10^(3) MPa,降低了14.29%,温度平稳在110℃。 展开更多
关键词 bta 断屑机理 钻削性能
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GH4169镍基高温合金深盲孔BTA钻削参数优化
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作者 刘小帆 王娟 +1 位作者 赵彦民 李继斌 《金属加工(冷加工)》 2025年第6期54-58,共5页
针对典型难加工材料GH4169在深孔加工过程中存在切削温度高、切削力大、加工硬化倾向大、刀具磨损快、切削变形大、排屑难和不易观察等问题,制定了GH4169三台阶深盲孔的加工工艺,针对工艺过程中的难点——?25mm深底孔的钻削展开研究,采... 针对典型难加工材料GH4169在深孔加工过程中存在切削温度高、切削力大、加工硬化倾向大、刀具磨损快、切削变形大、排屑难和不易观察等问题,制定了GH4169三台阶深盲孔的加工工艺,针对工艺过程中的难点——?25mm深底孔的钻削展开研究,采用正交试验法选择BTA内排屑深孔钻配合CW6163D机床完成钻削试验。得出结论,当转速n=600r/min、进给量f=0.052mm/r、切削液流量Q=70L/min时为最优钻削参数组合。 展开更多
关键词 GH4169 bta深孔钻 切削参数 切屑形态
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BTA深孔加工镗杆的横向随机振动 被引量:1
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作者 赵武 张全斌 +1 位作者 李亚敏 荆双喜 《振动与冲击》 EI CSCD 北大核心 2024年第3期46-57,共12页
采用随机方法分析了蕴含轴向流动流体的BTA(boring and trepanning association)深孔镗杆在随机力下的横向随机动力行为。建模时考察了流固耦合镗杆承受的弯曲、拉伸和扭转变形;经Galerkin Method离散化处理,分析了BTA镗杆在有、无随机... 采用随机方法分析了蕴含轴向流动流体的BTA(boring and trepanning association)深孔镗杆在随机力下的横向随机动力行为。建模时考察了流固耦合镗杆承受的弯曲、拉伸和扭转变形;经Galerkin Method离散化处理,分析了BTA镗杆在有、无随机激励两种情况的特征值和特征频率对振动特性的影响;利用响应方差最大值和谱密度解析了BTA镗杆横向振动的临界转速与临界失稳频率;明确了镗杆随转速、刚度、初始轴向总力和剪切模量等参数变化对系统振动特性的影响机制:镗杆转速变化对系统稳定性不再具有单调性,随BTA镗杆转速持续增加,系统可历经两次转速的临界失稳,相继出现二次失稳和二次稳定;增加系统等效刚度和等效剪切模量会促进工作过程的稳定,改变轴向力对工作过程稳定的影响不明显;并以随机振动物理试验信号的功率谱分析,验证了理论仿真结果与试验结果的一致性。该研究在一定程度上揭示了BTA深孔工艺系统运动状态的复杂性,这种研究模式为进一步分析在复杂状态下的运动演化提供了更多的可能。研究结论为更好地理解BTA深孔镗杆工作时的随机动力行为提供了依据,也为BTA深孔工艺过程的振动控制和参数优化奠定了理论基础。 展开更多
关键词 bta深孔镗杆 横向振动 随机振动特性 特征值 响应方差 谱密度
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BTA深孔连接器设计及油膜压力研究 被引量:1
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作者 陈振亚 马卓强 +3 位作者 李翔 苗鸿宾 杨尚进 李建 《机床与液压》 北大核心 2024年第19期59-64,共6页
针对BTA加工过程中刀具系统刚性不足和径向受力不平衡的问题,基于流体动压润滑原理设计一种BTA深孔连接器。连接器包括双桥应变片和可倾瓦块,利用油膜支撑刚度增大刀具系统的刚性,并通过实时调整油膜压力抵消同步检测的不平衡径向力。... 针对BTA加工过程中刀具系统刚性不足和径向受力不平衡的问题,基于流体动压润滑原理设计一种BTA深孔连接器。连接器包括双桥应变片和可倾瓦块,利用油膜支撑刚度增大刀具系统的刚性,并通过实时调整油膜压力抵消同步检测的不平衡径向力。建立可倾瓦块的数学模型,推导出油膜厚度公式,进一步得出油膜压力的计算公式。基于Fluent软件对连接器进行流体仿真,采用单因素实验法,分析不同条件下可倾瓦块受到的油膜压力的变化规律。结果表明:BTA加工过程中,通过调节工件转速、切削液黏度、瓦块倾角和瓦块包角等参数调整油膜压力,进而实现增大刀具系统刚性和抵消不平衡径向力的目的。 展开更多
关键词 bta深孔连接器 油膜压力 系统刚性 径向力 流体仿真
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LPS对乳腺上皮细胞来源外泌体中bta-miR-224和bta-miR-146a表达的影响
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作者 徐欣然 姚鑫鑫 +7 位作者 房子豪 郭凯军 肖龙菲 常迪 盛熙晖 齐晓龙 刘冰颖 王相国 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2024年第S1期305-311,共7页
通过对外泌体及其miRNA和乳腺相关泌乳因子的研究及乳汁中外泌体miRNA(bta-miR-146a、bta-miR-224)的差异表达,探索牛乳腺上皮细胞来源外泌体miRNA在亚临床型乳房炎早期诊断中的可行性,寻找亚临床型乳房炎早期诊断和治疗的新靶标,为奶... 通过对外泌体及其miRNA和乳腺相关泌乳因子的研究及乳汁中外泌体miRNA(bta-miR-146a、bta-miR-224)的差异表达,探索牛乳腺上皮细胞来源外泌体miRNA在亚临床型乳房炎早期诊断中的可行性,寻找亚临床型乳房炎早期诊断和治疗的新靶标,为奶牛乳房炎的早期防治提供理论依据和实践指导。运用20μg/mL LPS刺激奶牛乳腺上皮细胞,体外构建亚临床型奶牛乳房炎细胞模型,检测体外模型中乳腺上皮细胞来源外泌体bta-miR-146a和bta-miR-224及泌乳基因的差异表达,进一步采集健康和患病奶牛乳汁并其检测外泌体中bta-miR-146a和bta-miR-224的差异表达。结果显示,20μg/mL的LPS作用24 h即可成功建立亚临床型奶牛乳房炎细胞模型。在该模型中,产奶量和乳汁质量下降的重要标志因子ACSL1的表达量极显著下降。从乳腺上皮细胞培养液和乳汁中成功提取并鉴定了外泌体,运用透射电子显微镜也可以清晰地观察到外泌体的脂质双层膜结构,囊泡大小为30~150 nm。20μg/mL LPS刺激乳腺上皮细胞和乳汁来源外泌体中bta-miR-146a和bta-miR-224的表达均显著降低。总之,牛奶来源外泌体bta-miR-146a和bta-miR-224可以作为奶牛乳房炎早期诊断的候选因子。 展开更多
关键词 奶牛 乳房炎 外泌体 bta-miR-146a bta-miR-224
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bta-miR-27a-5p的生物信息学分析及其对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响
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作者 李鑫 乔俊杰 +6 位作者 吴金瑞 侯中一 孟聖博 杜志龙 许会芬 李明 蔡含芳 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2024年第13期1-9,111,共10页
为了探究bta-miR-27a-5p的生物学特性及其对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响,试验利用miRBase数据库对不同物种间miR-27a-5p的保守性进行分析,并构建了miR-27a-5p的系统进化树;利用TargetScan和miRWalk在线网站预测bta-miR-27a-5p的靶基因,... 为了探究bta-miR-27a-5p的生物学特性及其对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响,试验利用miRBase数据库对不同物种间miR-27a-5p的保守性进行分析,并构建了miR-27a-5p的系统进化树;利用TargetScan和miRWalk在线网站预测bta-miR-27a-5p的靶基因,并对靶基因进行GO功能注释和KEGG信号通路分析;利用实时荧光定量PCR方法检测在不同月龄夏南牛不同器官中bta-miR-27a-5p基因的相对表达量;最后通过实时荧光定量PCR方法、Western-blot检测、三酰甘油浓度测定和油红O染色探究过表达bta-miR-27a-5p后对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响。结果表明:不同物种miR-27a-5p的成熟序列保守性较高;牛miR-27a-5p基因与山羊的亲缘关系最近,与非洲爪蟾的亲缘关系最远;bta-miR-27a-5p靶基因主要在细胞过程、生物过程、细胞、细胞部分、结合等GO条目上富集,并富集在胰岛素抵抗、细胞衰老、脂肪细胞因子等信号通路中;bta-miR-27a-5p基因可在夏南牛的多个器官中表达,且12月龄夏南牛脂肪组织中的相对表达量均显著低于0月龄和24月龄(P<0.05);过表达bta-miR-27a-5p基因可显著或极显著抑制C/EBPα、PPARγ和FABP4基因和蛋白质表达(P<0.05或P<0.01),并显著或极显著降低3T3-L1前脂肪细胞内脂滴和三酰甘油浓度(P<0.05或P<0.01)。说明bta-miR-27a-5p在不同物种间高度保守,在不同月龄夏南牛脂肪组织中显著差异表达,并且能抑制3T3-L1前脂肪细胞分化,bta-miR-27a-5p基因可能是调控牛脂肪生成的候选miRNA。 展开更多
关键词 bta-miR-27a-5p 靶基因 生物信息学分析 夏南牛 表达分析 3T3-L1前脂肪细胞
原文传递
牛泡沫病毒BBet抑制BTas反式激活功能负调控病毒复制
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作者 崔金刚 拜晓勃 +3 位作者 张其程 邵鹏 谈娟 乔文涛 《南开大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期45-49,共5页
泡沫病毒(foamy virus,FV)属于反转录病毒科中的泡沫病毒亚科、泡沫病毒属.其基因组除编码结构蛋白Gag、Pol及Env外,同时还编码2个非结构蛋白Tas和Bet.Tas是泡沫病毒的正调控蛋白,通过结合在病毒启动子上游的DNA调控元件上正调控病毒基... 泡沫病毒(foamy virus,FV)属于反转录病毒科中的泡沫病毒亚科、泡沫病毒属.其基因组除编码结构蛋白Gag、Pol及Env外,同时还编码2个非结构蛋白Tas和Bet.Tas是泡沫病毒的正调控蛋白,通过结合在病毒启动子上游的DNA调控元件上正调控病毒基因表达.Bet对病毒复制具有一定的负调控作用,但作用机制尚无报道.利用实验室筛选得到的牛泡沫病毒(bovine fomay virus,BFV)3026可释放株(BFV-Z1),采用不同感染复数(0.01及0.1)感染BFV Bet(BBet)稳定表达细胞系及对照细胞系,分析传代后病毒滴度,确证BBet抑制BFV复制;分析BBet对病毒启动子活性的影响,发现Bet对BFV的2个启动子LTR和IP本底活性影响较小,但BBet可抑制BFV Tas(BTas)对BFV的LTR和IP启动子的反式激活.进一步机制分析发现BBet未显著影响BTas的细胞定位,也不能直接结合启动子上游BTas相关应答序列,推测BBet可能通过抑制BTas结合启动子应答元件之后的分子事件,如募集转录复合物等过程负调控病毒复制. 展开更多
关键词 牛泡沫病毒 BBet btas
原文传递
基于深度学习的TC32钛合金BTA深孔钻削容屑系数和切屑形态研究 被引量:6
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作者 冯亚洲 陶觅辰 +1 位作者 刘战锋 孔浩 《制造技术与机床》 北大核心 2024年第4期57-62,共6页
在钛合金深孔钻削过程中,由于其难加工性经常会存在刀具磨损严重、排屑困难和内孔表面质量差等问题。为了获得具有良好内孔表面质量和切屑形态的钛合金深孔类零件,以新型钛合金TC32为研究对象,在不同工艺参数下基于深度学习和BP神经网... 在钛合金深孔钻削过程中,由于其难加工性经常会存在刀具磨损严重、排屑困难和内孔表面质量差等问题。为了获得具有良好内孔表面质量和切屑形态的钛合金深孔类零件,以新型钛合金TC32为研究对象,在不同工艺参数下基于深度学习和BP神经网络进行了TC32钛合金的容屑系数预测和加工试验验证。研究结果表明:预测模型的决定系数R 2为0.921,拟合程度和精度较高,预测性能良好;当进给量为0.08 mm/r、主轴转速为435 r/min时容屑系数为5.6,切屑形态以C形屑和短带状屑为主,排屑顺畅且加工过程稳定。 展开更多
关键词 深度学习 BP神经网络 bta深孔钻削 TC32钛合金 容屑系数
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牦牛“海绵吸附”bta-miR-125b的lncRNA筛选验证及慢病毒载体构建
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作者 贺鸿世 姚一龙 +5 位作者 索朗斯珠 孟朝轶 孔庆辉 席广银 郭敏 徐业芬 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2024年第9期1-8,共8页
旨在筛选在牦牛卵泡发育过程中可能吸附bta-miR-125b的长链非编码RNA(lncRNA),并构建双荧光素酶载体与慢病毒过表达载体,为研究调控牦牛生殖相关lncRNA的功能及机制提供基础。利用miRanda与RNAhybrid数据库预测可能靶向牦牛bta-miR-125b... 旨在筛选在牦牛卵泡发育过程中可能吸附bta-miR-125b的长链非编码RNA(lncRNA),并构建双荧光素酶载体与慢病毒过表达载体,为研究调控牦牛生殖相关lncRNA的功能及机制提供基础。利用miRanda与RNAhybrid数据库预测可能靶向牦牛bta-miR-125b的lncRNAs,筛选出bta-miR-125b具有“海绵吸附”作用的lncRNAs,由RNAhybrid进行结合位点预测,筛选出最优的lncRNA;采集牦牛卵巢分离卵泡并提取总RNA构建cDNA池,以RT-PCR技术扩增筛选所得lncRNA;在此基础上利用pmir-GLO载体构建技术构建该lncRNA野生型及突变型双荧光素酶报告载体,并将其与bta-miR-125b mimics共转染至293T细胞,检测双荧光素酶活性;最后利用慢病毒载体构建技术将测序正确的lncRNA与pHBLV-CMV-MCS-EF1-ZsGreen-T2A-puro载体同源区的片段同源重组,通过慢病毒包装系统(psPAX2:pMD2G)包装后感染293T细胞,计算感染效率及滴度。结果:两个数据库中的lncRNA-ARS-UCD1.2与bta-miR-125b存在紧密结合位点,扩增出lncRNA-ARS-UCD1.2的序列全长为1552 bp;双荧光素酶活性检测表明牦牛lncRNA-ARS-UCD1.2与bta-miR-125b mimic具有靶向关系(P<0.01);同源重组后经酶切鉴定及测序验证表明成功构建了重组质粒,感染效率达(61.520±0.875)%,感染滴度为4×10^(8)TU/mL,表明lncRNA-ARS-UCD1.2过表达慢病毒载体成功构建。综上,本试验筛选出牦牛“海绵吸附”bta-miR-125b的lncRNA,并验证了两者的靶向结合关系,同时成功构建了该lncRNA的过表达慢病毒载体,为下一步深入研究lncRNA在细胞中的功能机制奠定了基础。 展开更多
关键词 牦牛 长链非编码RNA bta-miR-125b 海绵吸附 慢病毒载体
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lncRNA-MSTRG.7889.1竞争性结合bta-miR-146a靶向Smad4调控牦牛颗粒细胞的凋亡 被引量:1
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作者 孟朝轶 王运路 +5 位作者 姚一龙 席广银 牛家强 索朗斯珠 郭敏 徐业芬 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期797-809,共13页
【背景】卵泡颗粒细胞(Granulosa cells,GCs)凋亡是导致卵泡闭锁的重要原因,竞争性内源RNA(competing endogenous RNAs,ce RNA)机制已被证明参与调控GCs的凋亡过程。前期牦牛卵巢转录组测序发现lnc RNA-MSTRG.7889.1与bta-mi R-146a具... 【背景】卵泡颗粒细胞(Granulosa cells,GCs)凋亡是导致卵泡闭锁的重要原因,竞争性内源RNA(competing endogenous RNAs,ce RNA)机制已被证明参与调控GCs的凋亡过程。前期牦牛卵巢转录组测序发现lnc RNA-MSTRG.7889.1与bta-mi R-146a具有结合位点,而bta-mi R-146a和Smad4存在靶向关系。【目的】通过探究影响牦牛卵泡GCs凋亡的ce RNA分子调控机制,为揭示牦牛生殖调控的奥秘奠定基础。【方法】采集和分离成年母牦牛的健康和闭锁卵泡,利用RT-q PCR法检测lnc RNA-MSTRG.7889.1、bta-mi R-146a和Smad4在卵泡中的表达。制作牦牛健康和闭锁卵泡组织切片,TUNEL检测健康卵泡和闭锁卵泡中GCs的凋亡情况;荧光原位杂交分析lnc RNA-MSTRG.7889.1、bta-mi R-146a和Smad4在卵泡中的定位。体外分离和培养牦牛GCs,分别转染Smad4过表达载体和bta-mi R-146a mimics,流式细胞术检测GCs细胞凋亡率,Western blot检测促凋亡蛋白CASPASE3和BAX,抑凋亡蛋白BCL-2的表达;GCs共转染Smad4过表达载体和bta-mi R-146a mimics后,探究bta-mi R-146a是否靶向Smad4影响牦牛GCs的凋亡。将lnc RNA-MSTRG.7889.1过表达慢病毒载体感染GCs,流式细胞术和Western blot检测lnc RNA-MSTRG.7889.1对GCs凋亡的影响;lnc RNA-MSTRG.7889.1载体和bta-mi R-146a mimics共转染GCs,进一步分析lnc RNA-MSTRG.7889.1是否竞争性结合bta-mi R-146a靶向Smad4影响牦牛GCs的凋亡。【结果】lnc RNA-MSTRG.7889.1和Smad4 m RNA在牦牛健康卵泡中的表达极显著高于闭锁卵泡(P<0.01),而bta-mi R-146a的表达则相反(P<0.01)。TUNEL检测结果显示,在闭锁卵泡中GCs的荧光强度极显著高于健康卵泡(P<0.01),说明闭锁卵泡中GCs凋亡显著高于健康卵泡。荧光原位杂交结果显示Smad4、bta-mi R-146a和lnc RNA-MSTRG.7889.1在牦牛卵泡中共表达,其在健康和闭锁卵泡中的表达与RT-q PCR结果基本一致,提示可能存在ce RNA机制参与牦牛健康卵泡发育和卵泡闭锁过程。在牦牛GCs过表达Smad4使细胞凋亡率显著降低(P<0.01),CASPASE3和BAX蛋白的表达显著降低(P<0.01),BCL-2蛋白的表达显著升高(P<0.01);过表达bta-mi R-146a使GCs凋亡率显著升高(P<0.01),CASPASE3和BAX蛋白的表达显著升高(P<0.01),BCL-2蛋白的表达显著降低(P<0.01);bta-mi R-146a靶向抑制Smad4的表达(P<0.01);Smad4和bta-mi R-146a共转染GCs,结果显示bta-mi R-146a靶向抑制Smad4降低前者对GCs凋亡的促进作用(P<0.01)。过表达lnc RNA-MSTRG.7889.1使牦牛GCs凋亡率显著降低(P<0.01),CASPASE3和BAX蛋白的表达显著降低(P<0.01),BCL-2蛋白的表达显著升高(P<0.01);lnc RNA-MSTRG.7889.1显著抑制bta-mi R-146a的表达(P<0.01)。将lnc RNA-MSTRG.7889.1和bta-mi R-146a共转染GCs,结果表明lnc RNA-MSTRG.7889.1靶向bta-mi R-146a降低后者对GCs凋亡的促进作用(P<0.01);而且RT-q PCR法和Western blot检测结果表明lnc RNA-MSTRG7889.1竞争性结合bta-mi R-146a促进Smad4 m RNA和蛋白水平的表达(P<0.01)。【结论】lnc RNA-MSTRG.7889.1竞争性结合bta-mi R-146a促进Smad4的表达抑制牦牛GCs的凋亡。 展开更多
关键词 lncRNA bta-miR-146a 凋亡 颗粒细胞 牦牛
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牛Bta-miR-494序列特征及其组织表达分析
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作者 徐俊杰 丁燕玲 +5 位作者 李承隆 周小南 苏总华 曲畅 史远刚 康晓龙 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2024年第3期215-223,共9页
为探究牛Bta-miR-494的序列特征及其组织表达情况,运用生物信息学方法分析其上游序列的CpG岛、启动子及转录因子特征及其在不同物种间的保守性;之后对牛Bta-miR-494的靶基因进行预测及功能富集分析;最后通过qRT-PCR方法检测其在牛不同... 为探究牛Bta-miR-494的序列特征及其组织表达情况,运用生物信息学方法分析其上游序列的CpG岛、启动子及转录因子特征及其在不同物种间的保守性;之后对牛Bta-miR-494的靶基因进行预测及功能富集分析;最后通过qRT-PCR方法检测其在牛不同组织及不同时期同一组织间的时空表达特征。结果表明,Bta-miR-494在不同物种间高度保守且与山羊亲缘关系最近,其上游不含CpG岛、存在2个转录起始位点;预测靶基因富集分析表明,Bta-miR-494的靶基因显著富集在PI3K-Akt、p53及MAPK等与肌肉生长发育及代谢相关的信号通路;qRT-PCR结果显示,Bta-miR-494在成年牛肝脏中的表达量最高,睾丸中表达量最低;且Bta-miR-494在成年牛股二头肌中的表达量显著高于初生犊牛,而心肌和背最长肌中的表达量显著低于初生犊牛。这种组织间差异性表达提示,Bta-miR-494可能在牛不同生长阶段的肌肉组织发育过程中主导不同的生肌表达模式。 展开更多
关键词 bta-miR-494 功能富集 组织表达 骨骼肌
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牦牛bta-miR-146a对卵巢卵泡颗粒细胞自噬的影响研究 被引量:1
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作者 徐业芬 王运路 +2 位作者 孟朝轶 刘博华 昝瑞隆 《高原农业》 2024年第4期367-375,共9页
自噬是细胞广泛存在的程序性死亡机制,通过对细胞内衰老细胞器、长寿命蛋白以及外源病原微生物进行吞噬、降解,以维持细胞平衡。在卵巢中,卵泡颗粒细胞自噬对卵泡发育起着关键作用,失衡会导致闭锁。为探究miR-106a对牦牛卵泡颗粒细胞自... 自噬是细胞广泛存在的程序性死亡机制,通过对细胞内衰老细胞器、长寿命蛋白以及外源病原微生物进行吞噬、降解,以维持细胞平衡。在卵巢中,卵泡颗粒细胞自噬对卵泡发育起着关键作用,失衡会导致闭锁。为探究miR-106a对牦牛卵泡颗粒细胞自噬的影响,本试验通过体外分离培养牦牛卵泡颗粒细胞后,分别转染bta-miR-146a模拟物(bta-miR-146a mimics)和bta-miR-146a抑制剂(bta-miR-146a inhibitor),利用荧光定量RT-PCR法、Western Blot和激光共聚焦法检测细胞的自噬相关基因mRNA和蛋白表达情况。结果显示,转染bta-miR-146a mimic组与mimic NC组相比激光共聚焦可检测到LC3B蛋白荧光强度降低(P<0.01);荧光定量RT-PCR检测发现LC3B、Atg-5和Beclin-1自噬指示基因mRNA表达量均极显著降低(P<0.01);bta-miR-146a inhibitor组与bta-miR-146a inhibitor NC组相比LC3B、Atg-5和Beclin-1极显著升高(P<0.01),bta-miR-146a mimic组与bta-miR-146a inhibitor组相比,LC3B、Atg-5和Beclin-1自噬指示基因m RNA表达量极显著降低(P<0.01)。Western Blot检测发现bta-miR-146a inhibitor组自噬指示蛋白LC3B、Atg-5和Beclin-1表达最高,bta-miR-146a mimic组表达最低;bta-miR-146a mimic组与bta-miR-146a mimic NC组相比,LC3B、Atg-5和Beclin-1蛋白表达极显著降低(P<0.01),bta-miR-146a inhibitor组与bta-miR-146a inhibitor NC相比LC3B、Atg-5和Beclin-1蛋白表达极显著升高(P<0.01),bta-miR-146a mimic组与bta-miR-146a inhibitor组相比,自噬指示蛋白LC3B、Atg-5和Beclin-1的表达量极显著降低(P<0.01)。上述结果表明bta-miR-146a mimic抑制牦牛卵泡颗粒细胞的自噬,而bta-miR-146a inhibitor促进牦牛卵泡颗粒细胞的自噬。 展开更多
关键词 牦牛 bta-miR-146a 颗粒细胞 自噬
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牦牛KSR2基因的双荧光素酶质粒构建及其与bta-miR-22-3p的靶向验证
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作者 王硕 张敬博 +2 位作者 刘瑞冬 任晓丽 董海龙 《高原农业》 2024年第5期540-547,共8页
为了鉴定牦牛体内bta-miR-22-3p与KSR2之间的靶向关系,本研究采用miRNA Base数据库对牦牛体内bta-miR-22-3p的序列进行分析,并用Target scan软件预测牦牛bta-miR-22-3p于KSR2基因的3’UT R可能存在的结合位点,然后采用PCR扩增出包含bta-... 为了鉴定牦牛体内bta-miR-22-3p与KSR2之间的靶向关系,本研究采用miRNA Base数据库对牦牛体内bta-miR-22-3p的序列进行分析,并用Target scan软件预测牦牛bta-miR-22-3p于KSR2基因的3’UT R可能存在的结合位点,然后采用PCR扩增出包含bta-miR-22-3p结合位点的牦牛KSR2基因3'非编码区(3’UTR)片段,并构建出KSR2基因的3’UTR的野生型双荧光素酶报告基因质粒和突变型双荧光素酶报告基因质粒,并将其与bta-miR-22-3p mimics、mimics NC共转染至人胚肾细胞(HEK 293T细胞)中,检测其双荧光素酶活性。miRNA Base数据库中bta-miR-22-3p的序列为AAGCUGCCAGUUGAAGAACU G;Target scan预测出bta-miR-22-3p共有包括KSR2基因在内的568个潜在靶基因,其中包括612个保守位点和190个低保守位点,并且在KSR2基因3’UTR的829-836 bp处存在潜在的bta-miR-22-3p的结合位点;构建的野生型质粒和突变型质粒经双酶切后释放出大小315 bp的条带,测序结果与预期一致,说明质粒构建成功;bta-miR-22-3p mimics能够显著降低(P<0.01)KSR2野生型质粒双荧光素酶的活性。最终说明,牦牛KSR2基因3’UTR双荧光素酶报告基因载体构建成功,并且该基因与bta-miR-22-3p存在靶向关系。 展开更多
关键词 bta-miR-22-3p KSR2 双荧光素酶 牦牛
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BTA及其衍生物在3%Nacl溶液中对铜的缓蚀作用 被引量:6
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作者 卢小梅 徐艳萍 晏贡全 《江西电力职业技术学院学报》 CAS 2004年第3期8-10,共3页
对苯并三氮唑(BTA)及其衍生物在模拟海水的3%氯化钠溶液中对铜的缓蚀作用进行了试验分析。通过腐蚀速度测试和电化学阻抗测试,比较了在30±2℃时BTA及另外四种BTA衍生物对浸泡在相当宽pH范围内(pH2-12水溶液中铜的缓蚀效果。
关键词 bta bta衍生物 3%NaCl溶液 缓蚀作用
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BTA和钼酸钠对青铜的协同缓蚀作用研究 被引量:25
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作者 胡钢 吕国诚 +1 位作者 许淳淳 吴小红 《腐蚀科学与防护技术》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期25-28,共4页
采用动电位极化法、交流阻抗法研究了青铜试样在0.5 mol/L NaCl溶液中,苯并三唑(BTA)和Na2MoO4复合缓蚀剂对其电化学行为的影响,通过X射线光电子能谱技术分析了复合缓蚀剂在青铜表面形成的表面膜组成.结果表明,在0.5 mol/L NaCl溶液中,... 采用动电位极化法、交流阻抗法研究了青铜试样在0.5 mol/L NaCl溶液中,苯并三唑(BTA)和Na2MoO4复合缓蚀剂对其电化学行为的影响,通过X射线光电子能谱技术分析了复合缓蚀剂在青铜表面形成的表面膜组成.结果表明,在0.5 mol/L NaCl溶液中,BTA和Na2MoO4复配使用具有良好的协同缓蚀效果,增强了对青铜阳极过程的抑制作用,提高了青铜电极表面膜电阻和电极反应的界面电荷转移电阻.XPS表面分析结果证明,在BTA和Na2MoO4复合缓蚀剂的作用下,青铜表面生成[Cu(Ⅰ)BTA]聚合物保护膜,SnO2,PbO,MoO3等金属氧化物沉积在表面膜上,改善了表面膜的致密性,使其具有良好的抗氯离子腐蚀性能.从而提高了表面膜的保护性能,有效地保护了青铜基体. 展开更多
关键词 bta 钼酸钠 青铜 缓蚀剂 协同作用
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