BCSP31蛋白双抗夹心ELISA定量方法的建立及应用 被引量：1

1

作者 陈凯楠 李金斗 +5 位作者 丁佳欣 冯嘉轩 于喜冰 单春晖 汪思捷 丁壮 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期699-705,共7页

通过原核表达系统制备、纯化布鲁菌嵌合病毒样颗粒疫苗核心组分BCSP31蛋白,并将其作为免疫原及标准品分别免疫新西兰大白兔(1mg/只)和BALB/c鼠(200μg/只)制备兔源捕获多克隆抗体和鼠源检测多克隆抗体,对双抗夹心ELISA方法的捕获抗体和... 通过原核表达系统制备、纯化布鲁菌嵌合病毒样颗粒疫苗核心组分BCSP31蛋白,并将其作为免疫原及标准品分别免疫新西兰大白兔(1mg/只)和BALB/c鼠(200μg/只)制备兔源捕获多克隆抗体和鼠源检测多克隆抗体,对双抗夹心ELISA方法的捕获抗体和检测抗体最佳稀释倍数、封闭液种类及封闭条件、酶标二抗工作条件等参数进行优化,结果显示兔多克隆抗体最佳包被浓度和鼠多克隆抗体最佳稀释倍数均为1∶1600、3%脱脂奶粉封闭1h、酶标二抗最佳稀释倍数为1∶4000、酶标二抗孵育时间1h、显色时间为15min的条件下建立的双抗夹心ELISA方法效果最好。按照上述最佳反应条件对布鲁菌嵌合病毒样颗粒疫苗(BCSP31-cVLPs)核心抗原成分BCSP31蛋白进行定量检测,并对其敏感性、特异性、重复性等性能进行评价,结果显示1μL布鲁菌嵌合病毒样颗粒中的BCSP31含量约占总蛋白含量的14.187%;将布鲁菌嵌合病毒样颗粒稀释640倍后,P/N值仍大于2.1,有较高的敏感性;与FAdV、IBDV、NDV、AIV等其他病毒样颗粒均无交叉反应,特异性高;批间和批内变异系数均在10%以下,重复性良好。该方法的建立为推进布鲁菌嵌合病毒样颗粒疫苗的质量控制标准建立及商品化奠定了基础。 展开更多

关键词 布鲁菌病嵌合病毒样颗粒 bcsp31蛋白 双抗夹心ELISA方法 参数优化 应用

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布氏杆菌BCSP_(31)/pVAX1重组表达质粒的构建及其免疫保护效果的研究 被引量：7

2

作者 李鹏 罗德炎 +3 位作者 高永辉 张松乐 宋艳 王希良 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期493-497,共5页

目的构建布氏杆菌BCSP31/pVAX1重组表达质粒,免疫BALB/c小鼠,观察其免疫应答及免疫保护效果。方法克隆BCSP31基因,构建BCSP31/pVAX1重组表达质粒。转染COS7细胞,免疫组化检测其BCSP31蛋白抗原的表达。BCSP31/pVAX1重组表达质粒肌肉注射... 目的构建布氏杆菌BCSP31/pVAX1重组表达质粒,免疫BALB/c小鼠,观察其免疫应答及免疫保护效果。方法克隆BCSP31基因,构建BCSP31/pVAX1重组表达质粒。转染COS7细胞,免疫组化检测其BCSP31蛋白抗原的表达。BCSP31/pVAX1重组表达质粒肌肉注射免疫BALB/c小鼠,观察特异性体液免疫和细胞免疫效果。进一步用1.25×104布氏杆菌A544强毒株腹腔攻毒,观察BCSP31/pVAX1重组表达质粒的免疫保护效果。结果扩增的BCSP31保护性抗原基因片断在牛、羊和猪布氏杆菌株中具有高度保守性,构建的BCSP31/pVAX1重组表达质粒在COS7细胞有目的蛋白抗原的表达。制备的BCSP31/pVAX1重组表达质粒肌肉免疫BALB/c小鼠4次,ELISA检测BCSP31/pVAX1重组表达质粒产生了较高水平的特异性IgG抗体,并随免疫次数增加抗体的滴度也递增,且抗体亚型以IgG2a为主,表明主要引起Th1型的免疫应答。FCM检测BCSP31/pVAX1重组表达质粒的CD4+/CD8+比值明显下降,说明激发了显著的CTL效应。MTT测定BCSP31/pVAX1重组表达质粒的淋巴细胞增殖能力与对照组比较差异显著。布氏杆菌A544强毒株攻毒后,动物存活及脾组织细菌数与对照组比较有显著性差异,说明BCSP31/pVAX1重组表达质粒能够产生有效的保护效果。结论研制的BCSP31/pVAX1重组表达质粒免疫BALB/c小鼠能产生高水平的特异性体液免疫和细胞免疫,以细胞免疫为主,并产生有效的免疫保护效果,为布氏杆菌病新型疫苗的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 布氏杆菌bcsp31 重组表达质粒 免疫应答 免疫保护

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羊布鲁氏菌BCSP31、OMP31、L7/L12基因的原核表达载体构建及表达 被引量：8

3

作者 司瑞 白文涛 +5 位作者 张芳琳 刘艳丽 胡刚 吴兴安 阎岩 徐志凯 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第11期961-964,共4页

目的构建羊布鲁氏菌外膜蛋白BCSP31、OMP31和L7/L12基因的重组表达质粒,并在原核系统中表达。方法根据羊布鲁氏菌M5株外膜蛋白BCSP31、OMP31和抗原L7/L12蛋白基因序列设计引物,分别扩增出大小约为1kb、730bp和380bp的目的基因片断,插入p... 目的构建羊布鲁氏菌外膜蛋白BCSP31、OMP31和L7/L12基因的重组表达质粒,并在原核系统中表达。方法根据羊布鲁氏菌M5株外膜蛋白BCSP31、OMP31和抗原L7/L12蛋白基因序列设计引物,分别扩增出大小约为1kb、730bp和380bp的目的基因片断,插入pGEM7Zf(+)中测序并进行分析。将3种基因片段亚克隆入pGEX-4T-1中,转化大肠杆菌,IPTG诱导表达,用SDS-PAGE及Western-blot进行分析鉴定。结果SDS-PAGE结果表明3个目的蛋白均以融合蛋白的方式成功表达,在相对分子量57kDa、49kDa、38kDa处有表达条带,经薄层扫描分析,目的蛋白分别占全菌蛋白的42%、36%、40%。Western-blot证实3种融合蛋白均能被布鲁氏菌免疫兔血清识别。结论成功构建了3种蛋白的表达载体并进行了高效表达,3种蛋白均具有良好的免疫原性。 展开更多

关键词 羊布鲁氏菌 bcsp31蛋白 OMP31蛋白 L7/L12蛋白 基因表达

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8株布氏杆菌BCSP31基因的序列分析 被引量：12

4

作者 丁家波 毛开荣 +3 位作者 陈小云 程君生 戴志红 蒋玉文 《中国兽药杂志》 2006年第3期13-16,共4页

参照GenBank中布氏杆菌的全基因组序列,设计一对特异性引物,通过PCR方法,扩增了8株来自3个布氏杆菌种的布氏杆菌表面蛋白31(BCSP31)全基因。PCR产物经克隆和序列分析后发现,该基因非常保守,8株不同菌株间的同源性高于99.3%;进化关系分... 参照GenBank中布氏杆菌的全基因组序列,设计一对特异性引物,通过PCR方法,扩增了8株来自3个布氏杆菌种的布氏杆菌表面蛋白31(BCSP31)全基因。PCR产物经克隆和序列分析后发现,该基因非常保守,8株不同菌株间的同源性高于99.3%;进化关系分析显示,5株中国来源的菌株(S2,M5,M111,M28,A387)显示了最近的同源关系,其中2个弱毒菌株S2和M5的BCSP31基因序列100%同源。3株外国来源的菌株(S19,2308,Rev.1)中,S19和2308同源性为100%。Rev.1与其他7株布氏杆菌BCSP31基因均有较大的差异。序列分析结果表明,BCSP31基因序列差异与布氏杆菌的种属和毒力无相关性。 展开更多

关键词 布氏杆菌 bcsp31基因 序列分析

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流产布鲁氏菌BCSP31基因在大肠杆菌中的可溶性高效表达 被引量：1

5

作者 曹小安 邱昌庆 +1 位作者 周继章 蔺国珍 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期683-686,共4页

设计1对引物,突变除去布鲁氏菌BCSP31(细胞表面蛋白31)基因的N端信号肽氨基酸序列,经NotⅠ和EcoRⅠ酶切后与相同处理的表达载体pGEX-4T-1连接,转化BL21(DE3)感受态细胞。酶切及PCR扩增鉴定,获得阳性克隆,测序证明其阅读框完全正确。用I... 设计1对引物,突变除去布鲁氏菌BCSP31(细胞表面蛋白31)基因的N端信号肽氨基酸序列,经NotⅠ和EcoRⅠ酶切后与相同处理的表达载体pGEX-4T-1连接,转化BL21(DE3)感受态细胞。酶切及PCR扩增鉴定,获得阳性克隆,测序证明其阅读框完全正确。用IPTG诱导表达构建成功的阳性克隆,对产物进行SDS-PAGE和Western-blotting检测,发现表达产物出现预期分子量57 kD的融合蛋白,该蛋白能与牛流产布鲁氏菌阳性血清发生反应,进一步证明目的蛋白主要以可溶性形式存在,表达量约占总蛋白的40%,应用GST琼脂糖凝胶FF纯化可得到纯度较高的表达产物。 展开更多

关键词 流产布鲁氏菌 bcsp31基因 克隆 可溶性表达

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羊布鲁菌BCSP31蛋白表达纯化及其单克隆抗体的制备

6

作者 张蕾 白文涛 +4 位作者 张芳琳 吴兴安 史梦远 王海涛 徐志凯 《第四军医大学学报》 北大核心 2009年第3期221-224,共4页

目的:表达并纯化羊布鲁菌BCSP31蛋白,制备其单克隆抗体(mAb).方法:采用GST亲和层析纯化的方法纯化BCSP31蛋白.用纯化的BCSP31蛋白免疫小鼠,将小鼠脾细胞与骨髓瘤Sp2/0细胞融合,ELISA间接法筛选阳性克隆,3次克隆化后建立杂交瘤细胞系.采... 目的:表达并纯化羊布鲁菌BCSP31蛋白,制备其单克隆抗体(mAb).方法:采用GST亲和层析纯化的方法纯化BCSP31蛋白.用纯化的BCSP31蛋白免疫小鼠,将小鼠脾细胞与骨髓瘤Sp2/0细胞融合,ELISA间接法筛选阳性克隆,3次克隆化后建立杂交瘤细胞系.采用小鼠腹腔接种杂交瘤细胞制备腹水,正辛酸-硫酸铵法纯化mAb.采用Western Blot和ELISA等方法鉴定mAb特性.结果:GST-BCSP31融合蛋白在25℃诱导时为可溶性表达,经亲和层析纯化,获得BCSP31纯化蛋白0.5 g/L;Western Blot检测结果显示所获蛋白可与兔抗布鲁菌阳性血清特异性反应.获得2株mAb,分别命名为1F1,1E5.结论:BCSP31蛋白的纯化及其mAb的制备为布鲁菌病的诊断与防治奠定了一定的物质基础. 展开更多

关键词 羊布鲁菌 bcsp31蛋白 蛋白纯化 单克隆抗体

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过表达UGPase基因和BCSP31基因的重组流产布氏杆菌的构建与鉴定 被引量：1

7

作者 梁佳茗 钱晶 +7 位作者 卜昭阳 郎需龙 王莉 王秀然 杨艳玲 王晓旭 屈海龙 王兴龙 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期44-49,共6页

为提高流产布氏杆菌S19疫苗株的免疫保护效果,分别扩增流产布氏杆菌UGPase基因和BCSP31基因,将其插入含有双启动子pR/pL序列的广宿主穿梭质粒pBBR1MCS-PT中,电转至流产布氏杆菌S19感受态细胞并经抗性基因筛选,采用PCR法对重组菌株的遗... 为提高流产布氏杆菌S19疫苗株的免疫保护效果,分别扩增流产布氏杆菌UGPase基因和BCSP31基因,将其插入含有双启动子pR/pL序列的广宿主穿梭质粒pBBR1MCS-PT中,电转至流产布氏杆菌S19感受态细胞并经抗性基因筛选,采用PCR法对重组菌株的遗传稳定性进行检测,利用蛋白分析手段对目的基因的表达情况进行分析。PCR检测结果显示,构建的重组流产布氏杆菌S19-UGPase株和S19-BCSP31株的遗传性状稳定。SDS-PAGE与Western-blot结果显示,在33和31ku处可见明显条带,且与His标签抗体的反应位置一致,表明目的蛋白获得正确表达。结果表明,构建的过表达重组流产布氏杆菌S19-UGPase株和S19-BCSP31株能够稳定表达目的基因,为下一步开展S19-UGPase株和S19-BCSP31株免疫效果的评价奠定了基础。 展开更多

关键词 流产布氏杆菌 UGPase基因 bcsp31基因 疫苗候选株

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嵌合布鲁菌BCSP31病毒样颗粒的免疫效果评价 被引量：2

8

作者 李金斗 丁佳欣 +7 位作者 徐小洪 钱晶 张頔 费亦东 王玮琦 钦琪 尹仁福 丁壮 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期655-660,共6页

新城疫病毒样颗粒已开发成一种高效递送外源蛋白的载体平台。本研究在小鼠模型中开展了嵌合布鲁菌BCSP31病毒样颗粒(BCSP31-cVLPs)免疫原性及其保护效力评价。体内试验数据表明,BCSP31-cVLPs能有效激活脾脏中树突状细胞,进而促进初始型C... 新城疫病毒样颗粒已开发成一种高效递送外源蛋白的载体平台。本研究在小鼠模型中开展了嵌合布鲁菌BCSP31病毒样颗粒(BCSP31-cVLPs)免疫原性及其保护效力评价。体内试验数据表明,BCSP31-cVLPs能有效激活脾脏中树突状细胞,进而促进初始型CD3^+CD4^+ T的活化。ELISA法检测小鼠血清结果表明,BCSP31-cVLPs可刺激机体产生针对重组BCSP31蛋白的特异性抗体水平,且呈剂量依赖性。流式细胞术检测结果显示,BCSP31-cVLPs可激活T细胞并使其分化。攻毒结果表明,BCSP31-cVLPs具有与疫苗株M5相当的免疫保护效力。本研究为新型布鲁菌疫苗的研制提供了数据支撑,并扩展了新城疫病毒样颗粒疫苗载体平台的应用。 展开更多

关键词 新城疫病毒样颗粒 布鲁菌 bcsp31蛋白 树突状细胞 免疫效果

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布鲁菌二联BCSP31-L7/L12-IL-2嵌合病毒样颗粒疫苗候选株的构建与鉴定 被引量：1

9

作者 邹映雪 黄天鸿 +6 位作者 冯嘉轩 丁佳欣 陈铭桦 陈凯楠 郭春红 张頔 丁壮 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期865-871,共7页

布鲁菌病的传统疫苗存在接种后干扰血清学诊断及可能出现毒力返强等缺点,严重干扰疫病监测,影响疫病净化。因此,本研究基于新城疫病毒样颗粒(ND virus like particles,ND VLPs)载体平台,利用昆虫杆状病毒表达系统和GPI锚定策略,以免疫... 布鲁菌病的传统疫苗存在接种后干扰血清学诊断及可能出现毒力返强等缺点,严重干扰疫病监测,影响疫病净化。因此,本研究基于新城疫病毒样颗粒(ND virus like particles,ND VLPs)载体平台,利用昆虫杆状病毒表达系统和GPI锚定策略,以免疫增强因子IL-2、高保守性的保护性抗原蛋白L7/L12(来源猪种S2株)和羊种BCSP31蛋白(来源羊种M5株)为靶点,构建绿色、安全的布鲁菌二联嵌合型病毒样颗粒新型疫苗候选株(BCSP31-L7/L12-IL-2 cVLPs)。PCR及免疫荧光结果表明成功构建了表达IL-2和L7/L12蛋白的重组杆状病毒,Western blot结果显示该cVLPs各组分蛋白正确表达,透射电镜观察可见表面展示纤突结构、大小约为100 nm的粒子,表明布鲁菌二联嵌合型病毒样颗粒BCSP31-L7/L12-IL-2 cVLPs构建成功。 展开更多

关键词 布鲁菌 新城疫病毒样颗粒载体 二联嵌合型病毒样颗粒疫苗 L7/L12蛋白 bcsp31蛋白

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通过置换作用清除牛种布氏菌BCSP31基因

10

作者 S.M.Halling 唐浏英 杨发莲 《地方病译丛》 北大核心 1993年第4期22-26,共5页

牛种布氏菌是一种兼细胞内寄生菌,主要宿主是牛,但它可以感染人,从而产生波状热。怀孕约母牛感染可以导致流产,成为美国南部主要的经济问题。目前用的 S19苗消除牛的布氏菌感染是有限的,因为确实区分不开自然感染的和菌苗免疫的动物。... 牛种布氏菌是一种兼细胞内寄生菌,主要宿主是牛,但它可以感染人,从而产生波状热。怀孕约母牛感染可以导致流产,成为美国南部主要的经济问题。目前用的 S19苗消除牛的布氏菌感染是有限的,因为确实区分不开自然感染的和菌苗免疫的动物。应用分子生物学基因技术既提高对发病机理的分子学基础的理解,又可改善菌苗的抗病能力。 展开更多

关键词 牛布鲁氏杆菌 bcsp31基因 清除

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安徽省亳州市布鲁氏菌病病原学监测及其分子特征分析

11

作者 康晓东 王俊 +6 位作者 钱树生 王祥英 汤云飞 怀雪飞 姜栋栋 刘正祥 柳燕 《安徽医科大学学报》 北大核心 2025年第5期964-970,共7页

目的了解安徽省亳州市布鲁氏菌病患者群的分布及病菌流行的型别和基因特征,为制定本地区布鲁氏菌病预防与控制策略提供依据。方法对采集的698份血液样本进行虎红平板凝集试验(RBPT)和试管凝集试验(TAT),收集被检测者流行病学资料,对检... 目的了解安徽省亳州市布鲁氏菌病患者群的分布及病菌流行的型别和基因特征,为制定本地区布鲁氏菌病预防与控制策略提供依据。方法对采集的698份血液样本进行虎红平板凝集试验(RBPT)和试管凝集试验(TAT),收集被检测者流行病学资料,对检测结果进行统计分析;培养并提取阳性菌株基因组DNA,采用16S rRNA测序方法进行分离菌株的分子鉴定和分型,通过Clustal W和MEGA 7进行序列比对分析,结果与BCSP31-PCR及AMOS-PCR的检测结果进行比较。结果血清学检测共测出阳性样本66份,阳性检出率为9.46%;检出率最高的人群主要从事活羊宰杀工作;培养出的10株阳性菌株16S rRNA基因测序结果显示,均与羊种布鲁氏菌亲缘关系较近,进化树显示在同一分枝上,与BCSP31-PCR、AMOS-PCR鉴定结果一致。结论羊种布鲁氏菌在本地区传播中处于优势地位,从事羊养殖、屠宰、售卖等职业的人群为高风险人群;该研究结果为本地区的患者群体分布及布鲁氏菌病基因分型和溯源研究提供了分子生物学证据,同时也验证了16S rRNA进行分子溯源的有效性。 展开更多

关键词 布鲁氏菌病 病原学监测 bcsp31聚合酶链式反应 AMOS聚合酶链式反应 16S rRNA 羊种布鲁氏菌

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布氏杆菌31×10^3外膜蛋白的研究进展 被引量：1

12

作者 唐浏英 《国外医学（微生物学分册）》 1997年第5期26-28,共3页

布氏杆菌细胞表面蛋白（ＢＣＳＰ３１）是一种从布氏杆菌细胞表面提取的相对分子质量（Ｍｒ）为３１×１０＾３的蛋白质。这种蛋白质在布氏杆菌的６个种中具有保守性，同时其表达又具有多态性。ＢＣＳＰ３１对小鼠和ｌｅｍｉｎｇｓ... 布氏杆菌细胞表面蛋白（ＢＣＳＰ３１）是一种从布氏杆菌细胞表面提取的相对分子质量（Ｍｒ）为３１×１０＾３的蛋白质。这种蛋白质在布氏杆菌的６个种中具有保守性，同时其表达又具有多态性。ＢＣＳＰ３１对小鼠和ｌｅｍｉｎｇｓ预防接种能产生保护性作用，是一种保护性抗原成分，可望用于研制成具有免疫原性的布氏杆菌亚单位菌苗。 展开更多

关键词 布鲁杆菌 bcsp31 研究进展

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广东省布鲁氏菌病病原学特征分析 被引量：11

13

作者 陈经雕 邓小玲 +4 位作者 柯碧霞 刘美真 谭海玲 钟豪杰 柯昌文 《疾病监测》 CAS 2008年第5期277-279,共3页

目的从表型和分子生物学水平鉴定广东省2005-2006年分离的布鲁氏菌菌株,应用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型方法分析与省内及既往菌株的同源性。方法运用常规方法鉴定了6株布鲁氏菌菌株,进一步用BCSP31-PCR技术和PFGE方法进行种的水平区分及... 目的从表型和分子生物学水平鉴定广东省2005-2006年分离的布鲁氏菌菌株,应用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型方法分析与省内及既往菌株的同源性。方法运用常规方法鉴定了6株布鲁氏菌菌株,进一步用BCSP31-PCR技术和PFGE方法进行种的水平区分及同源性分析。结果6株菌均为羊种3型,属特异性基因BCSP31阳性,菌株间的PFGE分型相似值介于69.2%～100%。结论广东省这2年分离的布鲁氏菌菌株均为羊种3型,与1985年比较发生了种的改变,PFGE方法可在种的水平区分布鲁氏菌的3个种。 展开更多

关键词 布鲁氏菌 分析 脉冲场凝胶电泳 bcsp31-pcr

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两例小熊猫疑似布鲁菌感染的鉴别诊断 被引量：2

14

作者 黄祥明 杨洋 +8 位作者 吴孔菊 罗永久 于爽 任志华 石锦江 徐晓阳 兰景超 彭广能 钟志军 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第4期100-102,209,共4页

为了研究小熊猫这类野生动物是否存在布鲁菌感染,采用虎红平板凝集试验(RBPT)、试管凝集试验(SAT)及BCSP31-PCR对成都大熊猫繁育研究基地小熊猫保护研究中心产房饲养的小熊猫进行了布鲁菌病的血清学及分子生物学调查。结果表明:有2只小... 为了研究小熊猫这类野生动物是否存在布鲁菌感染,采用虎红平板凝集试验(RBPT)、试管凝集试验(SAT)及BCSP31-PCR对成都大熊猫繁育研究基地小熊猫保护研究中心产房饲养的小熊猫进行了布鲁菌病的血清学及分子生物学调查。结果表明:有2只小熊猫RBPT检测阳性,表示疑似布鲁菌感染,而进一步采用SAT及BCSP31-PCR诊断为阴性,排除了RBPT检测为阳性的2只小熊猫感染布鲁菌的可能性。说明RBPT存在假阳性结果,临床诊断此病时应结合分子生物学技术等进行鉴别诊断。 展开更多

关键词 小熊猫 疑似布鲁菌感染 鉴别诊断 虎红平板凝集试验 试管凝集试验 bcsp31-pcr

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布鲁菌种属鉴定多重PCR方法的建立及初步应用 被引量：13

15

作者 丁家波 张存帅 +5 位作者 彭小兵 蒋颖 程君生 张尔利 蒋玉文 毛开荣 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期594-597,共4页

用BCSP31作为布鲁菌属特异性基因,以IS711基因拷贝数差异作为布鲁菌种间特异性标志,建立了布鲁菌种属特异性的多重PCR鉴定方法。用建立的多重PCR方法对11株(牛种A19,A544,A387;羊种M111,M28,M16;犬种RM6/66;绵羊种63/290;猪种S2,rS2,S13... 用BCSP31作为布鲁菌属特异性基因,以IS711基因拷贝数差异作为布鲁菌种间特异性标志,建立了布鲁菌种属特异性的多重PCR鉴定方法。用建立的多重PCR方法对11株(牛种A19,A544,A387;羊种M111,M28,M16;犬种RM6/66;绵羊种63/290;猪种S2,rS2,S1330)不同种来源的布鲁菌菌体和基因组进行鉴定,结果牛种菌能扩增大小分别为494,223,178bp3条带,羊种菌能扩增出大小分别为733,223,178bp3条带,犬种菌能扩增出大小分别为223,178bp2条带,绵羊种菌能扩增出大小分别为976,223,178bp3条带,猪种菌能扩增出大小分别为285,223,178bp3条带,均与预期一致;而作为对照的大肠杆菌、胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌、流产沙门菌和都柏林沙门菌,均未扩增出任何条带。结果表明,本研究所建立的方法具有良好的特异性,能够区分不同种源的布鲁菌,可用于布鲁菌种属的快速鉴定和流行病学调查。 展开更多

关键词 布鲁菌 bcsp31基因 IS711基因 多重PCR

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牛种布鲁杆菌PCR检测方法的研究 被引量：2

16

作者 王军 王瑞 申之义 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期1128-1132,共5页

为了弥补血清学和微生物学方法检测和诊断布鲁菌病的种种不足,建立用布鲁菌BCSP31聚合酶链反应(PCR)快速检测布鲁菌病原的方法。根据编码牛种布鲁菌31 000外膜蛋白基因序列设计的一对特异性引物,扩增出预期350bp的基因片段。结果,此方... 为了弥补血清学和微生物学方法检测和诊断布鲁菌病的种种不足,建立用布鲁菌BCSP31聚合酶链反应(PCR)快速检测布鲁菌病原的方法。根据编码牛种布鲁菌31 000外膜蛋白基因序列设计的一对特异性引物,扩增出预期350bp的基因片段。结果,此方法具有较高的特异性和敏感性,DNA最低检测量为0.42pg。结果表明,布鲁菌病原PCR快速检测方法的建立,对布鲁菌病的检疫及快速诊断具有十分重要的意义。 展开更多

关键词 布鲁菌 bcsp31 PCR检测

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内蒙古兴安盟地区布鲁氏菌流行株种型鉴定和体外药物敏感性分析 被引量：7

17

作者 袁海涛 崔建楠 +7 位作者 彩花 冯丽平 王红 郭长山 吴金泉 刘伟双 曲振红 蔡洪涛 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期826-830,共5页

目的了解内蒙古兴安盟布鲁氏菌流行株的主要种型,分析布鲁氏菌流行株的体外药物敏感性,指导临床治疗。方法选择内蒙古兴安盟布病发病率较高的旗县和人口密集的旗县,采集临床诊断的布病患者200份血液样本,用全自动血液培养仪培养分离出2... 目的了解内蒙古兴安盟布鲁氏菌流行株的主要种型,分析布鲁氏菌流行株的体外药物敏感性,指导临床治疗。方法选择内蒙古兴安盟布病发病率较高的旗县和人口密集的旗县,采集临床诊断的布病患者200份血液样本,用全自动血液培养仪培养分离出28株布鲁氏菌,用全自动生化鉴定系统、BCSP31-PCR及传统经典的方法进行种型鉴定,最后用肉汤微量稀释法对其中的25株布鲁氏菌进行13种抗生素的体外药敏试验。结果 28株布鲁氏菌中羊种3型18株(64.29%)和羊种1型10株(35.71%),进行药敏试验的25株菌中,100%菌株对多西环素、庆大霉素、链霉素、四环素均敏感,16%的菌株对利福平、头孢曲松的药物敏感性可能降低,20%的菌株对复方新诺明耐药,100%的菌株对阿奇霉素耐药。结论内蒙古兴安盟布鲁氏菌流行株主要是羊种3型和羊种1型,目前对一线方案药物较为敏感,在布病的急性期治疗上,宜规范化治疗,首选一线方案药物:多西环素、庆大霉素、链霉素、利福平。 展开更多

关键词 布鲁氏菌 种型鉴定 bcsp31-pcr 肉汤微量稀释法 药敏试验

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乌兰察布市布鲁氏菌临床分离株种型鉴定研究 被引量：1

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作者 刘志国 王妙 +2 位作者 常子丽 刘日宏 崔步云 《医学动物防制》 2016年第10期1131-1133,F0004,共4页

目的鉴定临床分离的布鲁氏菌的种型,为布病防控提供参考。方法用细菌染色法初步判定,用BCSP31-PCR和AMOS-PCR方法进行确证和种型鉴定。结果 10株实验菌株革兰氏染色呈阴性,柯氏染色呈红色;BCSP31-PCR扩增均有清晰明亮约223 bp大小的基... 目的鉴定临床分离的布鲁氏菌的种型,为布病防控提供参考。方法用细菌染色法初步判定,用BCSP31-PCR和AMOS-PCR方法进行确证和种型鉴定。结果 10株实验菌株革兰氏染色呈阴性,柯氏染色呈红色;BCSP31-PCR扩增均有清晰明亮约223 bp大小的基因片段;AMOS-PCR将实验菌株鉴定为羊种布鲁氏菌。结论实验分离鉴定的10株布鲁氏菌均为羊种布鲁氏菌,证实羊种布鲁氏菌为乌兰察布市的主要流行菌种,建议强化动物布病的防控。 展开更多

关键词 布鲁氏菌 bcsp31-pcr AMOS-pcr 种型鉴定

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呼伦贝尔地区牛体表寄生蜱中羊种布鲁氏菌的分离与鉴定 被引量：7

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作者 黄天鹏 郭旭 +4 位作者 孙长云 陈经雕 朝木丽格 武婕 格日勒图 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期415-424,共10页

【目的】阐明牛体表寄生草原革蜱与牛羊布鲁氏菌病的相关性,为内蒙古地区布鲁氏菌溯源调查及防控提供基础数据。【方法】通过传统形态学及分子生物学相结合的方法,对呼伦贝尔地区采集的191只蜱虫进行种型鉴定;以牛体表采集的寄生蜱为材... 【目的】阐明牛体表寄生草原革蜱与牛羊布鲁氏菌病的相关性,为内蒙古地区布鲁氏菌溯源调查及防控提供基础数据。【方法】通过传统形态学及分子生物学相结合的方法,对呼伦贝尔地区采集的191只蜱虫进行种型鉴定;以牛体表采集的寄生蜱为材料,应用布鲁氏菌选择性培养基从蜱体内分离可疑细菌;将可疑细菌进行分离培养,菌落的形态学观察,以及革兰氏染色和柯氏染色镜检初步鉴定可疑细菌的种属;经PCR方法扩增布鲁氏菌的Bcsp31和Omp22基因序列,并应用MEGA 7.0软件构建系统遗传进化树;运用AMOS-PCR、单项特异性血清凝集试验、染料抑菌和噬菌体裂解试验对分离的可疑菌进行分型鉴定。【结果】该地区优势蜱种被鉴定为草原革蜱,并成功在其体内分离到4株可疑细菌;经革兰氏染色镜检发现该菌属于革兰氏阴性短杆菌,柯氏染色后菌体呈红色短杆菌,并通过PCR方法成功克隆出布鲁氏菌的Bcsp31和Omp22基因序列,经过基因序列测序及BLAST比对分析,发现与布鲁氏菌参考序列相似度均在99.0%以上。应用MEGA 7.0软件成功构建遗传进化树,分离菌株序列与布鲁氏菌属的已知序列聚类在同一分支;运用AMOS-PCR和布鲁氏菌常规分型鉴定试验,确定4株分离菌均属于羊种布鲁氏菌。【结论】成功在呼伦贝尔地区牛体表采集的草原革蜱体内分离到4株羊种布鲁氏菌,表明草原革蜱作为吸血节肢动物,可能在不同宿主之间的布病传播过程中发挥重要作用。本论文为内蒙古地区布鲁氏菌溯源调查和防控提供基础数据。 展开更多

关键词 布鲁氏菌 草原革蜱 分子生物学 bcsp31 Omp22

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16S rDNA和ITS2基因序列分析用于难鉴定病原菌分子诊断 被引量：4

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作者 陆文婷 程灿灿 芮勇宇 《华南国防医学杂志》 CAS 2015年第6期435-438,共4页

目的利用16S rDNA和转录间隔区2(internal transcribed spacer 2,ITS2)基因序列分析方法对难鉴定病原菌进行分子诊断。方法对某三甲医院4年来的220株难鉴定细菌和130株难鉴定真菌,聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)分别扩增1... 目的利用16S rDNA和转录间隔区2(internal transcribed spacer 2,ITS2)基因序列分析方法对难鉴定病原菌进行分子诊断。方法对某三甲医院4年来的220株难鉴定细菌和130株难鉴定真菌,聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)分别扩增16S rDNA和ITS2基因并测序PCR扩增布鲁氏菌特异基因,并测序进行区分布鲁氏菌和人苍白杆菌,直接从血液标本中提取细菌DNA进行16S rDNA扩增,并与BD Phoenix100微生物分析仪结果进行对比。结果 220株中8株尚未在国内临床感染标本中报道,2株尚未在国外临床报道;130株真菌中2株尚未在国内临床感染中报道。布鲁氏菌特异基因BCSP31可区分布鲁氏菌和人苍白杆菌。100例血培养标本中发现10例16S rDNA和仪器法鉴定结果不一致,以16S rDNA鉴定结果为准。结论核糖体基因序列分析可以作为临床难鉴定细菌和真菌的分子生物学诊断方法,某些细菌的特异基因检测可作为辅助鉴定方法。 展开更多

关键词 细菌 真菌 16S RDNA 转录间隔区2 bcsp31

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