BC047440-siRNA对肝癌HepG2细胞增殖抑制及其分子机制的初步探讨 被引量：10

1

作者 刘世呈 李靖 +4 位作者 黄小兵 杨彤翰 梁平 郑璐 赵弘智 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第23期2207-2211,共5页

目的利用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制肝癌相关基因BC047440的表达,观察其受抑制后对细胞增殖能力的影响并初步分析其抑制增殖的分子机制。方法设计针对BC047440基因的siRNA,构建pGenSil-1-BC047440-siRNA真核表达载体... 目的利用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制肝癌相关基因BC047440的表达,观察其受抑制后对细胞增殖能力的影响并初步分析其抑制增殖的分子机制。方法设计针对BC047440基因的siRNA,构建pGenSil-1-BC047440-siRNA真核表达载体。分别用脂质体法将介导siRNA的真核绿色荧光表达载体pGenSil-1-BC047440-siRNA、空载体质粒pGenSil-1转染人肝癌HepG2细胞建立稳定细胞株;随后实验分为3组:转染siRNA表达载体组(PP2)、转染空质粒组(PP1)和未处理的亲本HepG2细胞组(PP0)。采用荧光定量PCR检测BC047440mRNA表达变化;CCK-8分析细胞增殖活性;平板克隆形成实验检测单个细胞的增殖能力;最后选取NF-κB下游增殖相关基因c-myc、bcl-2、cyclin D1,用荧光定量PCR检测其mRNA水平的变化。结果成功转染并获得PP1、PP2组抗性克隆,PP2组与PP0组比较,BC047440mRNA水平明显降低,抑制率约为75%;细胞增殖实验中PP2组细胞增殖能力明显降低,平板克隆形成实验结果显示PP2组克隆形成率为(8.42±0.82)%,明显低于PP1组[(39.31±5.39)%]和PP0组[(40.96±3.21)%](P<0.01)。检测NF-κB下游增殖相关的几个基因时发现PP2组c-myc mRNA表达明显降低,约为PP0组的12/25;其余基因无明显变化。结论干扰BC047440基因表达可以抑制肝癌细胞的增殖,初步揭示BC047440基因可以对c-myc起正向调控作用,从而促进肝癌细胞的增殖,提示抑制BC047440基因可能成为控制人肝癌细胞生长的有效靶点。 展开更多

关键词 bc047440 HEPG2 C-MYC 人肝癌细胞siRNA

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BC047440基因通过NF-κB调节HepG2细胞增殖的初步研究 被引量：5

2

作者 黄小兵 梁平 +4 位作者 李靖 郑璐 刘世呈 韩克强 赵弘智 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第22期2090-2092,共3页

目的观察BC047440基因能否通过增强NF-κB的活化而促进HepG2细胞的增殖。方法设计针对BC047440基因的小干扰RNA(siRNA),构建pGenesil-1-BC047440-siRNA真核表达载体,用脂质体法将介导siRNA的真核绿色荧光表达载体pGenesil-1-BC047440-si... 目的观察BC047440基因能否通过增强NF-κB的活化而促进HepG2细胞的增殖。方法设计针对BC047440基因的小干扰RNA(siRNA),构建pGenesil-1-BC047440-siRNA真核表达载体,用脂质体法将介导siRNA的真核绿色荧光表达载体pGenesil-1-BC047440-siRNA、pGenesil-1-HK-siRNA转染人肝癌HepG2细胞建立稳定细胞株;实验分为3组:转染siRNA表达载体组、无关质粒组和未处理的亲本HepG2细胞组。采用平板克隆形成实验分析细胞的增殖活性,通过Western blot检测细胞质p50含量,EMSA检测NF-κB的核转位,荧光素酶试验检测各组细胞的NF-κB活化情况。结果细胞增殖实验显示转染siRNA组细胞增殖能力明显降低,BC047440基因沉默后的HepG2的细胞质p50含量低于野生株HepG2,NF-κB核转位低于野生株HepG2,其荧光素酶和海肾荧光素酶活性比值只有野生株的1/4。结论BC047440基因能促进肝癌细胞的增殖,其调节机制可通过NF-κB信号途径实现,提示BC047440基因可能成为抑制人肝癌细胞生长的有效靶点。 展开更多

关键词 bc047440 HEPG2 人肝癌细胞 SIRNA

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BC047440基因在肝细胞癌中的表达及其意义 被引量：15

3

作者 郑璐 李靖 +3 位作者 杨彤翰 赵弘智 梁平 黄小兵 《中国普通外科杂志》 CAS CSCD 2006年第8期582-585,共4页

目的探讨肝癌相关的新基因BC 0 4 7 4 4 0在肝细胞癌(HCC)中的表达及其病理学意义。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)半定量检测3 6例HCC及其相应的癌旁肝组织中BC 0 4 7 4 4 0 mRNA的表达,并将该基因在HCC中的表达分为过高表达组及... 目的探讨肝癌相关的新基因BC 0 4 7 4 4 0在肝细胞癌(HCC)中的表达及其病理学意义。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)半定量检测3 6例HCC及其相应的癌旁肝组织中BC 0 4 7 4 4 0 mRNA的表达,并将该基因在HCC中的表达分为过高表达组及较高表达组,分析其与肿瘤病理变化的关系。结果3 6例HCC中BC 0 4 7 4 4 0基因mRNA的表达较癌旁肝组织高,其平均光密度比值分别为0.2 5 9 4±0.0 9 2 8和0.0 9 4 2±0.0 4 4 3,差异有极显著性意义(P<0.0 1);过高表达组与较高表达组相比较,前者肝癌直径较大,门静脉受侵较严重,差异有显著性(P<0.0 5)。结论BC 0 4 7 4 4 0基因与HCC的发生、发展和侵袭转移有关。 展开更多

关键词 肝肿瘤/病理学 肝细胞癌/病理学 基因-bc047440

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新基因BC047440在多种肿瘤组织中的表达及其意义 被引量：3

4

作者 郑璐 李靖 +3 位作者 梁平 杨彤翰 黄小兵 刘世呈 《中国普外基础与临床杂志》 CAS 2008年第3期185-189,共5页

目的探讨新基因BC047440在多种恶性肿瘤及对应癌旁组织中的表达,对该基因的癌表达谱进行初步研究。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)半定量检测肝癌、胆管癌、胃癌、大肠癌、神经胶质瘤、乳腺癌及其相对应的癌旁组织中BC047440 mRNA... 目的探讨新基因BC047440在多种恶性肿瘤及对应癌旁组织中的表达,对该基因的癌表达谱进行初步研究。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)半定量检测肝癌、胆管癌、胃癌、大肠癌、神经胶质瘤、乳腺癌及其相对应的癌旁组织中BC047440 mRNA的表达。结果在48例肿瘤中,BC047440基因的mRNA表达在肝癌、胃癌、胆管癌、大肠癌中较其对应癌旁组织高,差异有统计学意义(P<0.05或0.01);在神经胶质瘤及瘤旁脑组织中均呈高表达,表达量差异无统计学意义(P>0.05);在乳腺癌及其对应癌旁组织中不表达或低表达(P>0.05)。临床病理学分析提示,BC047440基因的表达水平与肝癌及胃肠道肿瘤的生长、侵袭和转移能力有关。结论BC047440基因在肝癌、胃癌、胆管癌、大肠癌及神经胶质瘤中广泛高表达,在这些肿瘤发病过程中可能是一个通过表达升高而发挥功能的结构基因。 展开更多

关键词 肿瘤 癌基因bc047440 逆转录聚合酶链反应 半定量

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重组BC047440蛋白的表达及其对人肝癌细胞系HepG2增殖的影响 被引量：1

5

作者 郑璐 梁平 +4 位作者 李靖 黄小兵 杨彤翰 左国华 王梁 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第19期2049-2052,共4页

目的构建原核表达载体,制备重组BC047440蛋白并观察不同浓度的重组蛋白对HepG2细胞增殖的影响。方法提取肝癌组织总RNA,经逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增BC047440cDNA,克隆入质粒pMD19-T,转化E.coliDH5α,酶切目的基因片段,插入质粒... 目的构建原核表达载体,制备重组BC047440蛋白并观察不同浓度的重组蛋白对HepG2细胞增殖的影响。方法提取肝癌组织总RNA,经逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增BC047440cDNA,克隆入质粒pMD19-T,转化E.coliDH5α,酶切目的基因片段,插入质粒pET-28a(+),转化E.coliBL21,IPTG诱导蛋白表达,SDS-PAGE电泳鉴定表达产物,提取重组BC047440蛋白,MTT法和流式细胞术检测不同浓度重组蛋白对HepG2细胞增殖的影响,Westernblot检测重组蛋白作用后HepG2细胞表达Ki67蛋白的变化。结果克隆、鉴定BC047440基因,构建其原核表达载体,成功制备并纯化BC047440重组蛋白。1.0、10.0、20.0μg/ml浓度重组BC047440蛋白分别作用HepG2细胞48h后,细胞增殖率分别为124.0%、136.1%、126.6%,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。流式细胞术结果提示,对照组的细胞增殖常数(PI)为26.1,重组蛋白处理组PI为48.6,二者差异具有统计学意义(P<0.05)。重组BC047440蛋白作用HepG2细胞后,Ki67蛋白的相对表达量为(0.317±0.062),对照组的相对表达量为(0.177±0.037),二者差异具有统计学意义(P<0.05)。结论制备的重组BC047440蛋白具有直接促进HepG2细胞增殖和促进其表达Ki67蛋白的作用,可能是一种新的促进肝癌增殖蛋白。 展开更多

关键词 bc047440 肝癌 增殖 KI67

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沉默BC047440基因对HepG2细胞侵袭能力的影响 被引量：1

6

作者 黄小兵 李靖 +4 位作者 梁平 郑璐 韩克强 刘世呈 赵弘智 《中国普通外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期49-52,共4页

目的观察沉默BC047440基因后对HepG2细胞侵袭能力的影响。方法实验分为3组,即HepG2细胞转染siRNA的沉默组,HepG2细胞转染无关质粒组及未转染的HepG2细胞组。利用前期构建的BC047440基因的小干扰RNA(siRNA)沉默BC047440基因,然后用MTT法... 目的观察沉默BC047440基因后对HepG2细胞侵袭能力的影响。方法实验分为3组,即HepG2细胞转染siRNA的沉默组,HepG2细胞转染无关质粒组及未转染的HepG2细胞组。利用前期构建的BC047440基因的小干扰RNA(siRNA)沉默BC047440基因,然后用MTT法检测细胞黏附率,细胞划痕法检测细胞迁移能力,Boyden小室法检测细胞侵袭性。结果沉默组的细胞黏附率在20 min和40 min时与HepG2细胞组和无关质粒组比较,差异无统计学意义(P>0.05),但在60 min时沉默组显著低于后2组(P<0.05);划痕实验显示划痕48h后,无关质粒组和HepG2细胞组划痕区已基本长满,而沉默组划痕依然明显;接种16 h后无关质粒组和HepG2细胞组侵袭到Boyden小室下室面的细胞数明显多于沉默(P<0.05)。而无关质粒组与HepG2细胞组间差异均无显著性(P>0.05)。结论沉默BC047440基因后可明显抑制HepG2细胞其在细胞外基质上的黏附能力、运动能力和体外侵袭能力,提示BC047440基因可增加肝癌的转移侵袭性。 展开更多

关键词 基因 bc047440 人肝癌细胞 肿瘤侵润 SIRNA 转染

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慢病毒载体介导的人肝癌HepG2细胞BC047440基因沉默 被引量：6

7

作者 钟扬 李靖 +4 位作者 黄小兵 郑璐 杨彤翰 赵弘智 梁平 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期744-748,共5页

目的构建BC047440基因RNAi慢病毒干扰载体,并检测其对人肝癌细胞系HepG2细胞中BC047440基因的沉默效果。方法针对已经筛选确定的BC047440基因RNAi有效靶序列,合成BC047440基因特异性shRNA序列,退火形成双链DNA,与经HpaⅠ和XhoⅠ双酶切后... 目的构建BC047440基因RNAi慢病毒干扰载体,并检测其对人肝癌细胞系HepG2细胞中BC047440基因的沉默效果。方法针对已经筛选确定的BC047440基因RNAi有效靶序列,合成BC047440基因特异性shRNA序列,退火形成双链DNA,与经HpaⅠ和XhoⅠ双酶切后的pFU-GW-iRNA载体连接产生pFU-GW-shBC047440慢病毒载体,PCR、DNA测序鉴定阳性克隆。用脂质体转染法将pFU-GW-shBC047440、pHelper 1.0载体和pHelper 2.0载体共转染293T细胞,产生具备感染能力的慢病毒。以293T细胞中绿色荧光蛋白的表达水平测定病毒滴度,并测定其对人肝癌细胞株HepG2细胞最适感染复数(MOI)。以最适MOI感染HepG2细胞,分BC047440-shRNA组、control-shRNA组和HepG2组;RT-PCR和Western blot检测各组细胞BC047440 mRNA及蛋白的表达差异。结果经PCR鉴定,成功构建BC047440基因RNAi慢病毒载体。测定慢病毒滴度为5×108TU/ml,其在HepG2细胞中最适MOI为20;RT-PCR和Western blot检测结果分别显示BC047440-shRNA组中BC047440 mRNA及BC047440蛋白表达较control-shRNA组和HepG2组明显降低,control-shRNA组与HepG2组间无明显差异。结论成功构建BC047440特异性RNAi慢病毒载体,感染人肝癌细胞系HepG2细胞后,实现了对HepG2细胞中BC047440基因的有效沉默。 展开更多

关键词 bc047440 RNA干扰 慢病毒载体 人肝癌细胞系HEPG2

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慢病毒介导BC047440基因沉默逆转HepG2/ADM细胞化疗耐药性机制的探讨 被引量：2

8

作者 王峥 郑璐 +3 位作者 黄小兵 杨彤翰 李靖 梁平 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期705-709,共5页

目的利用siRNA方法沉默HepG2/ADM细胞系中BC047440基因,观察其受抑制后对细胞多药耐药性的影响及其分子机制。方法建立BC047440蛋白在HepG2/ADM细胞系siRNA干扰模型,采用Western blot检测BC047440蛋白的表达;实验分3组:BC047440-shRNA组... 目的利用siRNA方法沉默HepG2/ADM细胞系中BC047440基因,观察其受抑制后对细胞多药耐药性的影响及其分子机制。方法建立BC047440蛋白在HepG2/ADM细胞系siRNA干扰模型,采用Western blot检测BC047440蛋白的表达;实验分3组:BC047440-shRNA组、control-shRNA组和HepG2/ADM组。CCK-8法分析阿霉素对细胞生长抑制率的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期分布;Western blot检测BC047440沉默后NF-κB蛋白表达的变化;Real-time PCR检测Survivin、CCNL1基因mRNA水平的变化。结果成功建立BC047440蛋白siRNA干扰模型;NF-κB蛋白表达BC047440-shRNA组约为HepG2/ADM组67.69%,约为control-shRNA组67.39%;细胞毒性实验中24、48 h阿霉素对BC047440-shRNA组细胞毒性作用明显增强;流式细胞仪检测结果显示BC047440-shRNA组细胞凋亡明显增多,细胞周期分布多停留于G1/G0期,S期细胞明显减少。Real-time PCR检测BC047440-shRNA组Survivin基因mRNA表达约为con-trol-shRNA组37%,约为HepG2/ADM组42%;检测BC047440-shRNA组CCNL1基因mRNA表达约为control-shRNA组3.5倍,约为HepG2/ADM组2.4倍。结论沉默BC047440基因可通过NF-κB信号通路及其下游Survivin、CCNL1信号逆转HepG2/ADM细胞的多药耐药性,提示BC047440基因可能是形成肝癌多药耐药的重要分子之一。 展开更多

关键词 bc047440 人多药耐药细胞系HepG2/ADM 核转录因子-ΚB Survivin CCNL1

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RNA干扰BC047440基因表达对HCT-8细胞增殖能力的影响 被引量：2

9

作者 唐亮 赵权 +3 位作者 宫鹏涛 李建华 杨举 张西臣 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2010年第11期1207-1209,1216,共4页

目的探讨RNA干扰结肠癌相关基因BC047440的表达对结肠癌细胞HCT-8增殖能力的影响。方法将BC047440基因shRNA干扰质粒pGPU6/GFP/Neo-BC047440-331(a1)、pGPU6/GFP/Neo-BC047440-451(a2)、pGPU6/GFP/Neo-BC047440-615(a3)、pGPU6/GFP/Neo-... 目的探讨RNA干扰结肠癌相关基因BC047440的表达对结肠癌细胞HCT-8增殖能力的影响。方法将BC047440基因shRNA干扰质粒pGPU6/GFP/Neo-BC047440-331(a1)、pGPU6/GFP/Neo-BC047440-451(a2)、pGPU6/GFP/Neo-BC047440-615(a3)、pGPU6/GFP/Neo-BC047440-756(a4)采用脂质体法转染结肠癌细胞HCT-8,荧光显微镜观察转染效率,荧光定量PCR法检测细胞BC047440基因mRNA的表达水平,MTT法分析细胞的增殖活性。结果细胞的转染效率为53%;干扰质粒a1、a2、a3、a4转染的HCT-8细胞BC047440基因mRNA的表达水平分别下降了36.1%、47.0%、53.8%和63.3%,a4质粒的干扰效率最高;细胞的增殖能力也明显下降。结论 BC047440基因RNA干扰质粒可明显抑制HCT-8细胞BC047440基因mRNA的表达及细胞的增殖,可能成为抑制结肠癌细胞生长的新基因。 展开更多

关键词 bc047440基因 结肠肿瘤 RNA干扰

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肝癌相关新基因BC047440反义真核表达载体构建及鉴定 被引量：2

10

作者 周建波 李靖 +4 位作者 赵弘智 郑璐 梁平 杨彤翰 黄小兵 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第15期1607-1609,共3页

目的构建肝癌相关新基因BC047440反义真核表达载体。方法提取人肝癌组织总RNA,逆转录酶-多聚酶链式反应(RT-PCR)扩增BC047440基因cDNA序列,经与pMD18-T simp le载体连接,筛选、克隆、抽提质粒和双酶切后,将纯化的BC047440基因cDNA序列... 目的构建肝癌相关新基因BC047440反义真核表达载体。方法提取人肝癌组织总RNA,逆转录酶-多聚酶链式反应(RT-PCR)扩增BC047440基因cDNA序列,经与pMD18-T simp le载体连接,筛选、克隆、抽提质粒和双酶切后,将纯化的BC047440基因cDNA序列反向插入真核表达载体pcDNA3.1(+)中,筛选、克隆、抽提质粒,从而构建BC047440基因反义真核表达载体pcDNA3.1(+)BC047440AS。结果经RT-PCR获得826 bp含限制性内切酶位点的cDNA片段,T载体克隆后经PCR扩增目的片段、测序,确定该片段为BC047440基因cDNA,进而构建反义真核表达载体pcDNA3.1(+)BC047440AS,并经PCR扩增目的片段,测序确证。结论成功构建了BC047440基因反义真核表达载体pcDNA3.1(+)BC047440AS,为进一步研究该基因功能奠定了基础。 展开更多

关键词 肝癌 bc047440反义基因 真核表达载体

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BC047440基因RNA干扰抑制肝癌HepG2细胞增殖 被引量：5

11

作者 黄小兵 李靖 +3 位作者 梁平 郑璐 刘世呈 韩克强 《中华消化外科杂志》 CAS CSCD 2008年第3期196-199,共4页

目的构建shRNA并干扰肝癌HepG2细胞中BC047440基因，观察其对肝癌HepG2细胞增殖的影响。方法根据BC047440基因序列，设计和合成两条特异表达该基因shRNA序列并克隆载体pGenesil-1，转染肝癌HepG2细胞并用定量PCR观察抑制BC047440基因表... 目的构建shRNA并干扰肝癌HepG2细胞中BC047440基因，观察其对肝癌HepG2细胞增殖的影响。方法根据BC047440基因序列，设计和合成两条特异表达该基因shRNA序列并克隆载体pGenesil-1，转染肝癌HepG2细胞并用定量PCR观察抑制BC047440基因表达的效果，并通过MTr法和流式细胞仪检测细胞增殖及细胞周期的变化。结果酶切和序列测定提示成功构建了特异表达BC047440基因的shRNA1和shRNA2两个质粒。shRNA1和shRNA2对BC047440mRNA的抑制率分别为80．22％和58．63％。干扰BC047440基因后，肝癌HepG2细胞增殖受到明显抑制，主要停滞在s期。结论构建的shRNA能有效干扰肝癌HepG2细胞BC047440基因的表达，并抑制肝癌HepG2细胞的增殖，提示BC047440基因和肝癌HepG2细胞增殖有关。 展开更多

关键词 bc047440基因 RNA干扰 肝肿瘤

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BC047440基因调控HepG2的NF-kB活性机制的实验研究 被引量：3

12

作者 黄小兵 梁平 +5 位作者 李靖 郑璐 刘世呈 韩克强 赵弘智 迟彦邦 《中华肝胆外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期134-137,共4页

目的应用基因芯片进行高通量分析沉默基因BC047440后相关基因表达谱的变化，以了解BC047440通过NF_KB信号途径上游的何种分子调控NF-KB活性。方法应用博奥公司提供的人全基因组基因芯片检测沉默BC047440基因后相关基因表达谱的改变，利... 目的应用基因芯片进行高通量分析沉默基因BC047440后相关基因表达谱的变化，以了解BC047440通过NF_KB信号途径上游的何种分子调控NF-KB活性。方法应用博奥公司提供的人全基因组基因芯片检测沉默BC047440基因后相关基因表达谱的改变，利用其数据库和MAs分析系统进行分析筛选，寻找NF-kB发生表达改变的上游分子并进行RT—PCR验证。结果沉默BC047440基因后有189个基因表达改变，其中130个基因上调表达2倍以上，59个基因下调表达超过50％，其中NF—kB信号途径上游分子中仅TRAF6下降为对照组的23．06％。RT—PCR验证TRAF6的mRNA的表达下降为对照组的29．5％，与基因芯片结果类似。结论应用基因芯片可以高通量高效率地分析沉默BC047440基因后的基因表达谱，BC047440基因可通过调控上游分子TRAF6作用于NF-KB信号途径来调控肝癌增殖。 展开更多

关键词 基因表达调节 bc047440基因 RNA干扰 DNA微阵列

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新基因BC047440原核表达载体构建及其重组蛋白的表达纯化

13

作者 郑璐 李靖 +3 位作者 梁平 黄小兵 刘世呈 左国华 《中华肝胆外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期934-937,共4页

目的构建肝癌相关新基因BC047440原核表达载体，表达并纯化出其重组蛋白。方法从HepG2细胞中提取总RNA，经逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）扩增BC047440cDNA，克隆进质粒pMD19-T，转化E．coliDH5a，测序正确后，酶切目的基因片段，插... 目的构建肝癌相关新基因BC047440原核表达载体，表达并纯化出其重组蛋白。方法从HepG2细胞中提取总RNA，经逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）扩增BC047440cDNA，克隆进质粒pMD19-T，转化E．coliDH5a，测序正确后，酶切目的基因片段，插入质粒pET-28a（＋），转化E．coliBL21，IPTG诱导蛋白表达，Ni—NTA柱亲和层析纯化重组蛋白。结果电泳证实RT-PCR扩增产物与预期目的基因BC047440长度一致。RT-PCR纯化产物与载体pMD19-T连接后，经蓝白斑筛选，挑出5个白色菌落做酶切鉴定，其中2个菌落被证实为阳性克隆。测定其基因序列，结果显示与Genbank公布的BC047440基因序列完全一致。将BC047440cDNA插入质粒pET一28a（＋），转化E．coliBL21，培养过夜后，挑选7个白色菌落做酶切鉴定，证实均为阳性克隆。IPTG诱导其中一个克隆表达蛋白，SDS-PAGE电泳分析表明，在相对分子质量23000左右出现新的蛋白表达条带，诱导4h后表达蛋白量最多，占菌体总蛋白的22．3％。将诱导3h的菌体超声破碎后，Ni柱亲和层析，50和125mmol／L咪唑洗脱液SDS-PAGE电泳显示出清晰的单一条带。结论成功构建BC047440基因原核表达载体，表达并纯化出重组蛋白，为深入研究其临床应用打下基础。 展开更多

关键词 癌 肝细胞 bc047440 基因克隆

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肝细胞癌高表达新基因BC047440功能的研究 被引量：3

14

作者 周建波 李靖 +2 位作者 梁平 杨彤翰 黄小兵 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期288-290,共3页

目的探讨肝细胞癌高表达新基因BC047440在肝癌形成中的作用。方法通过 DOTAP^(TM)脂质体介导的转染技术,将BC047440基因反义真核表达载体导入HepG2肝癌细胞,经 C418筛选,获得稳定表达BC047440反义基因的HepG2肝癌细胞。采用半定量RT-PC... 目的探讨肝细胞癌高表达新基因BC047440在肝癌形成中的作用。方法通过 DOTAP^(TM)脂质体介导的转染技术,将BC047440基因反义真核表达载体导入HepG2肝癌细胞,经 C418筛选,获得稳定表达BC047440反义基因的HepG2肝癌细胞。采用半定量RT-PCR检测反义基因对转染细胞的内源性BC047440基因抑制效果,噻唑蓝(MTT)比色法观察转染细胞生长曲线及流式细胞术比较细胞周期的变化。结果转染BC047440反义基因的肝癌细胞内源性BC047440 基因受到有效抑制,细胞生长速度明显减慢,细胞周期中G_1,期细胞比例明显增高。结论肝细胞癌高表达基因BC047440可能是一个新的肝癌相关基因,在肝癌中的异常高表达可能对肝癌的发生发展具有一定的促进作用。 展开更多

关键词 肝癌 bc047440 反义基因

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BC047440通过ERK1/2-β-catenin信号通路调控肝癌干细胞分化的分子机制研究 被引量：2

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作者 尤楠 王峥 +1 位作者 吴柯 王梁 《重庆医学》 CAS 2023年第11期1627-1632,共6页

目的探讨BC047440与细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)-β-连环蛋白(β-catenin)信号通路之间的关系及其对肝癌干细胞(LCSCs)分化的调控作用。方法采用shRNA慢病毒技术抑制LCSCs中BC047440的表达,实验用LCSCs分为BC047440抑制组(sLCSCs组)... 目的探讨BC047440与细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)-β-连环蛋白(β-catenin)信号通路之间的关系及其对肝癌干细胞(LCSCs)分化的调控作用。方法采用shRNA慢病毒技术抑制LCSCs中BC047440的表达,实验用LCSCs分为BC047440抑制组(sLCSCs组),空白组(LCSCs组)。在指定时间点,利用酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测两组细胞血清清蛋白(ALB)和甲胎蛋白(AFP)表达水平,肝细胞合成代谢功能采用糖原染色实验和吲哚菁绿摄取实验检测,电镜检测两组细胞超微结构形态学变化,采用Western blot检测各组细胞中ERK1/2、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)、β-catenin蛋白表达水平。通过激酶特异抑制剂PD98059抑制sLCSCs组中ERK1/2的活性后,观察β-catenin、ALB和AFP表达水平。结果shRNA慢病毒处理可以抑制LCSCs组中BC047440表达;抑制BC047440表达后,LCSCs组向成熟细胞分化导致干细胞特性减弱。进一步分子机制的研究证实,shRNA抑制BC0474407后,p-ERK1/2表达上升、β-catenin表达下降,进一步抑制sLCSCs组中ERK1/2的活性后,可上调β-catenin表达,部分恢复LCSCs组干细胞特性。结论BC047440可参与调控LCSCs分化,该分化过程可能通过ERK1/2-β-catenin信号通路实现。 展开更多

关键词 肝癌干细胞 bc047440 细胞外信号调节激酶1/2 Β-连环蛋白 分化

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