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鸡Akirin同源基因的克隆与组织表达分析 被引量:6
1
作者 满朝来 李响 曹敏 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期55-61,共7页
Akirin是最近被发现的,在果蝇和小鼠的免疫炎症反应和调控肌肉发生再生中起着重要作用的新基因.本实验采用电子克隆技术成功克隆获得了海兰褐鸡Akirin基因的全长编码序列.利用生物信息学方法对Akirin基因进行序列分析和预测,并利用半定... Akirin是最近被发现的,在果蝇和小鼠的免疫炎症反应和调控肌肉发生再生中起着重要作用的新基因.本实验采用电子克隆技术成功克隆获得了海兰褐鸡Akirin基因的全长编码序列.利用生物信息学方法对Akirin基因进行序列分析和预测,并利用半定量RT-PCR技术对雏鸡和成鸡的Akirin基因进行组织表达谱分析.结果表明,鸡Akirin同源基因可读框长576 bp,进化保守高,编码蛋白的氨基酸序列存在PFAM、RGS、TOP1Bc、UTG、HMG和low complexity sequence几种结构域,和蛋白激酶C磷酸化位点、酪氨酸激酶磷酸化位点和N端豆蔻酰化位点3个功能位点,同时在鸡Akirin的3′非翻译区预测到1个microRNA靶位点.Akirin在鸡的心、脾、脑等多种组织中广泛表达,推测鸡Akirin基因是一个可能具有多种功能作用的新基因.本研究将为深入研究鸡Akirin基因功能作用奠定基础. 展开更多
关键词 akirin基因 表达谱 半定量RT-PCR MICRORNA
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家蚕微孢子虫感染BmN细胞的差异表达基因筛选及Akirin的原核表达 被引量:2
2
作者 邱海洪 何欣怡 +2 位作者 李明乾 何祥康 鲁兴萌 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期673-679,共7页
为探究家蚕微孢子虫(Nosema bombycis,Nb)感染宿主细胞的分子机制,以感染Nb的家蚕卵巢上皮细胞(BmN)为材料,通过GeneFishing技术进行基因差异表达分析,发现感染Nb的BmN细胞有10个基因被诱导或抑制表达,这些差异表达基因功能涉及蛋白质... 为探究家蚕微孢子虫(Nosema bombycis,Nb)感染宿主细胞的分子机制,以感染Nb的家蚕卵巢上皮细胞(BmN)为材料,通过GeneFishing技术进行基因差异表达分析,发现感染Nb的BmN细胞有10个基因被诱导或抑制表达,这些差异表达基因功能涉及蛋白质合成、细胞信号转导、线粒体呼吸链电子传递、细胞能量代谢、细胞免疫及一些未知功能。运用RT-PCR方法克隆在感染Nb的BmN细胞中差异表达的免疫相关基因Akirin,获得一个长588 bp的完整ORF,编码195个氨基酸,预测蛋白质分子质量21.98 kD,等电点为8.97,属于碱性蛋白,该蛋白质经SignalP在线预测未见信号肽。通过原核表达获得家蚕Akirin的外源融合表达蛋白,为进一步研究家蚕Akirin在家蚕先天免疫系统中的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 家蚕微孢子虫 家蚕卵巢上皮细胞系 差异表达基因 akirin基因
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猪Akirin2基因的定位及其影响IL-1β和IL-6 mRNA表达的研究 被引量:4
3
作者 徐志坤 薄联峰 +4 位作者 温俊歌 孙岩 郜原 吴江 张德礼 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2011年第11期25-27,I0002,共4页
本研究旨在研究猪新天然免疫相关基因Akirin2所表达的蛋白在细胞中的定位,以及在受到外源刺激物LPS刺激时,对细胞因子IL-6和IL-1βmRNA表达的影响。本试验用实验室构建好的pEGFP-Akirin2真核表达载体转染猪脐静脉血管内皮细胞(SUVEC),... 本研究旨在研究猪新天然免疫相关基因Akirin2所表达的蛋白在细胞中的定位,以及在受到外源刺激物LPS刺激时,对细胞因子IL-6和IL-1βmRNA表达的影响。本试验用实验室构建好的pEGFP-Akirin2真核表达载体转染猪脐静脉血管内皮细胞(SUVEC),用激光共聚焦显微镜分析Akirin2在SUVEC的定位,并用LPS作为外源刺激物刺激转染Akirin2基因的细胞,荧光实时定量分析细胞因子IL-6和IL-1βmRNA表达量的变化。结果表明,Akirin2基因编码的蛋白严格定位于细胞核之内,并在核仁区有明显表达,在LPS刺激后,Akirin2基因对细胞因子IL-6和IL-1βmRNA表达量都具有明显上调作用。本研究证实了Akirin2蛋白的亚细胞定位及其对细胞因子表达的影响,为Akirin2基因的作用机制的进一步研究奠定了基础。 展开更多
关键词 akirin2基因 LPS 细胞定位 细胞因子 QRT-PCR
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猪akirin2基因的克隆与真核表达 被引量:3
4
作者 曹金锁 柳超 +3 位作者 蒋朋飞 赵振华 陈新雨 张德礼 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2010年第8期11-13,共3页
Trizol法从猪脾脏中提取总RNA,RT-PCR方法得到猪Akirin2的完整编码区,软件分析猪Akirin2的核酸序列与蛋白序列,进行染色体定位。将Akirin2构建到带有荧光标记的真核表达载体pEGFP-C1中,通过脂质体转染法将pEGFP-Akirin2转入猪脐静脉血... Trizol法从猪脾脏中提取总RNA,RT-PCR方法得到猪Akirin2的完整编码区,软件分析猪Akirin2的核酸序列与蛋白序列,进行染色体定位。将Akirin2构建到带有荧光标记的真核表达载体pEGFP-C1中,通过脂质体转染法将pEGFP-Akirin2转入猪脐静脉血管内皮细胞系(SUVEC)中进行表达。结果表明,该序列编码203个氨基酸,猪akirin2基因定位于猪1号染色体,含有4个外显子,猪与牛的Akirin2蛋白高度同源。重组表达质粒pEGFP-Akirin2经双酶切鉴定和测序分析,表明构建成功,pEGFP-Akirin2转染SUVEC细胞后,经荧光检测证实转入的akirin2基因得到表达。研究结果为探讨猪Aki-rin2蛋白在免疫调控中的功能提供了基础数据。 展开更多
关键词 akirin2基因 克隆 染色体定位 真核表达
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Akirin基因研究进展 被引量:1
5
作者 满朝来 李凤 +2 位作者 唐高霞 甄鑫 弭晓菊 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期106-109,共4页
Akirin是近来发现的在骨骼肌生长发育和免疫反应中具有重要作用的基因。简要综述了akirin基因与免疫反应、骨骼肌发育和再生、myostatin基因和NF-κB因子的关系,同时分析了禽类akirin2基因的研究进展,最后对akirin基因的应用前景也进行... Akirin是近来发现的在骨骼肌生长发育和免疫反应中具有重要作用的基因。简要综述了akirin基因与免疫反应、骨骼肌发育和再生、myostatin基因和NF-κB因子的关系,同时分析了禽类akirin2基因的研究进展,最后对akirin基因的应用前景也进行了简单探讨,以期为akirin基因在医学和畜牧业中的深入研究和应用提供参考。 展开更多
关键词 akirin基因 免疫 骨骼肌 MYOSTATIN NF-ΚB
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靶向akirin2基因shRNA真核表达载体的构建及其干扰效率的测定 被引量:1
6
作者 郭豫杰 张伟强 +5 位作者 李赛赛 王月影 鲁维飞 高会贞 李宏基 杨国宇 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第8期76-80,290,共6页
为了抑制C2C12细胞中akirin2基因的表达,试验采用siRNA表达载体法构建了靶向akirin2基因的RNA干扰(RNAi)真核表达载体。首先针对akirin2基因设计并合成了相应的干扰序列,退火后将其与RNAi表达载体psiRNA-h7SKGFPzeo进行连接,构建成干扰... 为了抑制C2C12细胞中akirin2基因的表达,试验采用siRNA表达载体法构建了靶向akirin2基因的RNA干扰(RNAi)真核表达载体。首先针对akirin2基因设计并合成了相应的干扰序列,退火后将其与RNAi表达载体psiRNA-h7SKGFPzeo进行连接,构建成干扰载体akirin2-pshRNA0、akirin2-pshRNA1。将构建好的载体通过Turbofect转染试剂转染小鼠成肌细胞C2C12,通过荧光定量PCR检测其干扰效率,经酶切和测序鉴定所构建的akirin2基因RNA干扰载体与设计序列完全相符。结果表明:重组干扰载体akirin2-pshRNA0和akirin2-pshRNA1构建成功。将重组RNAi载体转染C2C12细胞,与正常对照组相比,转染akirin2-pshRNA1组的akirin2基因mRNA相对表达量显著降低,表达量下调了60.62%(P<0.05)。说明试验构建的靶向akirin2基因的RNAi载体akirin2-pshRNA1可以有效地抑制C2C12细胞中akirin2基因的表达。 展开更多
关键词 akirin2 RNA干扰(RNAI) SHRNA C2C12细胞系 干扰表达载体
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鸡Akirin2基因对传染性法氏囊病病毒VP2 DNA疫苗免疫反应的影响
7
作者 刘传高 钟楚红 +6 位作者 任广彩 朱娇娇 赵大伟 叶俊贤 赵兵 温良海 陈瑞爱 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期1128-1134,共7页
为了探讨鸡Akirin2基因对传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2 DNA疫苗诱导的免疫反应的影响,将同时表达VP2蛋白和Akirin2蛋白的重组质粒免疫14日龄SPF鸡,14 d后加强免疫,最后以IBDV BC6-85强毒攻击。结果显示,Akirin2基因能够增强VP2 DNA疫苗... 为了探讨鸡Akirin2基因对传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2 DNA疫苗诱导的免疫反应的影响,将同时表达VP2蛋白和Akirin2蛋白的重组质粒免疫14日龄SPF鸡,14 d后加强免疫,最后以IBDV BC6-85强毒攻击。结果显示,Akirin2基因能够增强VP2 DNA疫苗诱导的特异性免疫反应,提高外周血淋巴细胞的增殖能力,影响细胞因子TNF-α、IFN-γ、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-9、IL-10、IL-17和IL-18的表达水平。与单独免疫表达Akirin2蛋白或VP2蛋白的重组质粒对上述细胞因子表达的影响有一定差异。 展开更多
关键词 akirin2 传染性法氏囊病病毒 VP2 DNA疫苗 免疫反应
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猪akirin2基因的组织表达谱及序列分析
8
作者 郭豫杰 高会贞 +3 位作者 李宏基 王月影 李奎 杨国宇 《江苏农业科学》 北大核心 2016年第1期25-28,共4页
克隆猪的akirin2基因,并对该基因在猪的18个组织中的分布进行研究。猪akirin2基因编码区全长为612 bp(Gen Bank登录号KC140110.1),推测的氨基酸序列包含203个氨基酸,为酸性蛋白。利用BLAST工具对克隆到的猪akirin2基因序列与人、大鼠、... 克隆猪的akirin2基因,并对该基因在猪的18个组织中的分布进行研究。猪akirin2基因编码区全长为612 bp(Gen Bank登录号KC140110.1),推测的氨基酸序列包含203个氨基酸,为酸性蛋白。利用BLAST工具对克隆到的猪akirin2基因序列与人、大鼠、小鼠、绵羊和牛的序列进行同源性比较。采用软件对氨基酸序列进行分析,用相关序列的比对结果进行系统进化树分析。组织分布结果显示,猪akirin2基因在脑组织中高表达,在淋巴、睾丸中表达量相对较低,在心脏、十二指肠、直肠、皮肤、胸腺中几乎检测不到该基因的表达。序列分析结果显示,猪akirin2基因与绵羊和牛的同源性最高,均为96%,与人、小鼠、大鼠的同源性分别为95%、91%、89%。氨基酸序列分析发现,存在1个10个肽的核定位信号序列19-PASPKRRRCA-28,推测的氨基酸序列的二级结构中含有2个a-螺旋。在重建的系统进化树上,几个不同物种的akirin2蛋白分成3支,结果表明猪akirin2与人、牛和羊的亲缘关系比其与小鼠和大鼠的近,与鸡的亲缘关系最远。 展开更多
关键词 akirin2基因 克隆 组织分布 序列分析 基因功能
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IBDV VP2与Gallus Akirin2真核双表达载体的构建及应用
9
作者 刘传高 钟楚红 +3 位作者 任广彩 朱娇娇 赵大伟 陈瑞爱 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期2061-2067,共7页
为提高传染性法氏囊病(IBD)VP2DNA疫苗的免疫效力,将优化合成的IBDV VP2与Gallus Akirin2串联基因定向克隆至真核表达载体pTriEx-4,获得重组质粒pVP2-Akirin2。体外转染293T细胞,提取表达产物进行SDSPAGE和Western blot分析,结果显示:在... 为提高传染性法氏囊病(IBD)VP2DNA疫苗的免疫效力,将优化合成的IBDV VP2与Gallus Akirin2串联基因定向克隆至真核表达载体pTriEx-4,获得重组质粒pVP2-Akirin2。体外转染293T细胞,提取表达产物进行SDSPAGE和Western blot分析,结果显示:在58 000和35 000附近各有一蛋白条带,分别能与鸡IBD阳性血清和兔Akirin2多克隆抗体发生特异性反应。将pVP2-Akirin2与同期构建的pVP2对照质粒分别免疫SPF鸡,加强免疫2周后,攻IBDV BC6-85强毒,4d后统计保护率,并监测免疫过程中血清IBD抗体滴度和IBDV中和抗体滴度的动态变化,结果显示:SPF鸡二免后14d,pVP2-Akirin2组血清IBD抗体滴度和IBDV中和抗体滴度均极显著高于pVP2组(P<0.01),且对IBDV强毒株BC6-85攻击的保护率为75%,高于pVP2对照组(55%)。结果表明:Gallus Akirin2基因对IBD VP2DNA疫苗具有明显的免疫增强作用。 展开更多
关键词 传染性法氏囊病 VP2 akirin2 双表达 免疫增强
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华贵栉孔扇贝Akirin 2基因的克隆与表达分析
10
作者 陈金辉 冼昶华 +1 位作者 罗月红 林曼芬 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期3952-3959,共8页
为了解Akirin 在华贵栉孔扇贝(Chlamys nobilis)中的作用,本研究分离了华贵栉孔扇贝Akirin 2 基因(命名为CnAkirin 2),并描述了CnAkirin 2 的特征。使用转录组分析和PCR 方法获得了CnAkirin 2 cDNA序列,通过序列比对分析了Akirin 氨基... 为了解Akirin 在华贵栉孔扇贝(Chlamys nobilis)中的作用,本研究分离了华贵栉孔扇贝Akirin 2 基因(命名为CnAkirin 2),并描述了CnAkirin 2 的特征。使用转录组分析和PCR 方法获得了CnAkirin 2 cDNA序列,通过序列比对分析了Akirin 氨基酸序列在不同物种中的保守性,使用MEGA 7.0 软件的邻接法构建了Akirin 2 的系统进化树,使用实时定量PCR 分析了Akirin 2 在华贵栉孔扇贝6 种不同组织中的表达。结果显示:该基因序列全长1 888 bp,开放阅读框长597 bp,编码氨基酸198 个;CnAkirin 2 的预测分子量为22.11 kD,理论等电点pI 为9.30,具有核定位信号PKRRRCM;不同物种Akirin 氨基酸多序列比对结果显示,推译的CnAkirin 2 氨基酸序列与其他物种Akirin 氨基酸序列在N 端和C 端具有高度相似性;使用邻接法构建的系统进化树显示CnAkirin 2 与牡蛎和其它扇贝等贝类Akirin 聚为一支;实时定量PCR 结果表明CnAkirin 2在不同组织中均有表达,其中在精巢表达量最高,其次为卵巢,在其它组织中的表达水平最低,推测其可能在性腺发育过程中发挥重要作用。本研究为探索CnAkirin 2 在华贵栉孔扇贝中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 华贵栉孔扇贝 akirin 2 表达分析
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德国小蠊Akirin基因的克隆及表达分析
11
作者 陈静 张道伟 吕燕丽 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期1907-1914,共8页
Akirin基因是新近发现的在果蝇NF-κB依赖的Imd信号通路调控中不可或缺的转录因子。在除果蝇以外的昆虫中,Akirin基因是否参与Imd通路的调控,亦或对NF-κB依赖的Toll通路也有调控作用还未有报道。本研究旨在初步研究德国小蠊Blattella g... Akirin基因是新近发现的在果蝇NF-κB依赖的Imd信号通路调控中不可或缺的转录因子。在除果蝇以外的昆虫中,Akirin基因是否参与Imd通路的调控,亦或对NF-κB依赖的Toll通路也有调控作用还未有报道。本研究旨在初步研究德国小蠊Blattella germanica中Akirin基因的基本特征、在不同组织中的表达模式及注射法RNAi实验对Akirin基因沉默效果,以期为Akirin基因功能的研究奠定基础。通过与已报道的其它昆虫的Akirin基因进行同源比对,利用RACE(rapid amplification of c DNA ends)技术,成功从德国小蠊中克隆到1个Akirin基因,该基因全长864 bp,开放阅读框(ORF)大小为543 bp,编码180个氨基酸。蛋白序列比对及进化树结果显示,Akirin基因有非常保守的核定位信号序列,且与内华达古白蚁Zootermopsis nevadensis的亲缘关系最近,同源性为86%。荧光定量PCR的结果表明Akirin基因在德国小蠊检测的4个组织中均有表达,但表达水平有差异,在血淋巴的表达水平最高,其次为脂肪体。通过注射法RNAi实验成功抑制了Akirin基因的表达水平,并且RNAi的效果随时间的延长而更强,在注射72 h后,Akirin基因m RNA的表达水平下降了90%。上述研究为Akirin基因的功能及德国小蠊防治研究提供了科学依据。 展开更多
关键词 德国小蠊 akirin基因 克隆 表达 RNA干扰
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鸭Akirin2基因克隆、序列分析与组织表达特性研究 被引量:3
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作者 代飞 黄锎靓 +3 位作者 刘贺贺 韩春春 李亮 王继文 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期33-38,共6页
为研究Akirin2基因在鸭生物体中的功能,本试验通过RT-PCR扩增了鸭Akirin2基因,并采用荧光定量PCR方法检测了其在40日龄北京鸭不同组织中的表达差异。序列分析结果表明,鸭Akirin2基因CDS区全长594bp,编码197个氨基酸,氨基酸水平上与鸡的... 为研究Akirin2基因在鸭生物体中的功能,本试验通过RT-PCR扩增了鸭Akirin2基因,并采用荧光定量PCR方法检测了其在40日龄北京鸭不同组织中的表达差异。序列分析结果表明,鸭Akirin2基因CDS区全长594bp,编码197个氨基酸,氨基酸水平上与鸡的相似性达99%,其氨基酸序列二级结构具有哺乳动物Akirin1和Akirin2氨基酸二级结构域的共同区域;荧光定量结果表明,鸭Akirin2在肌肉和免疫器官脾脏中都有表达。以上结果支持了鸟类Akirin2可能具有与哺乳动物中Akirin1和Akirin2共同功能的观点,为进一步研究Akirin2基因在鸟类肌肉发育中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 akirin2 序列分析 荧光定量PCR
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Akirin2基因在肉鸭胸肌和腿肌中的发育表达研究 被引量:3
13
作者 王万霞 黄锎靓 +4 位作者 刘贺贺 代飞 寇洁 李亮 王继文 《中国家禽》 北大核心 2010年第9期15-18,共4页
Akirin基因家族中Akirin2基因与哺乳动物肌纤维类型密切相关。鸟类中仅有Akirin2基因,为研究Akirin2与鸭肌纤维类型的关系,本文比较了鸭10、14、18、22、27日胚龄及出生后1周龄(P7d)胸肌和腿肌的发育差异,并采用QRT-PCR法检测了Akirin2... Akirin基因家族中Akirin2基因与哺乳动物肌纤维类型密切相关。鸟类中仅有Akirin2基因,为研究Akirin2与鸭肌纤维类型的关系,本文比较了鸭10、14、18、22、27日胚龄及出生后1周龄(P7d)胸肌和腿肌的发育差异,并采用QRT-PCR法检测了Akirin2在以上各阶段胸肌、腿肌中的发育性表达。结果表明,Akirin2基因的表达与胸肌肌纤维的发育关系密切,其表达的增高伴随肌纤维直径的增粗;相反,在腿肌中Akirin2的表达降低伴随肌纤维直径的增粗。因此,Akirin2基因与鸟类红肌纤维发育关系密切,其有可能是鸭胸肌发育以及肌纤维类型组成的关键基因之一,值得在今后的基础研究和育种研究中引起重视。 展开更多
关键词 akirin2 胸肌 腿肌 QRT—PCR 肌纤维发育
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牦牛Akirin1基因克隆、生物信息学及组织表达分析 被引量:1
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作者 马荣 路建卫 +7 位作者 赵雪 扎老 成述儒 喇永福 吴晓云 包鹏甲 郭宪 梁春年 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2024年第S1期267-273,共7页
为探究牦牛Akirin1基因的序列特征,详细了解其组织表达特性。以甘南牦牛肌肉组织cDNA为模板,利用RT-PCR技术克隆甘南牦牛Akirin1基因CDS序列,并使用多种生物在线软件及工具进行生物信息学分析,再利用qPCR技术检测Akirin1基因在甘南牦牛... 为探究牦牛Akirin1基因的序列特征,详细了解其组织表达特性。以甘南牦牛肌肉组织cDNA为模板,利用RT-PCR技术克隆甘南牦牛Akirin1基因CDS序列,并使用多种生物在线软件及工具进行生物信息学分析,再利用qPCR技术检测Akirin1基因在甘南牦牛心、肝、脾、肺、肾、肌肉、脂肪和睾丸组织中表达差异。结果显示,甘南牦牛Akirin1基因CDS长579 bp,共编码192个氨基酸,基因编码的蛋白分子式为C_(964)H_(1525)N_(275)O_(291)S_(8),蛋白理论等电点为8.91,不稳定系数和总平均亲水性分别为84.14,-0.822,属于不稳定亲水性蛋白;蛋白潜在磷酸化位点有29个,分别为14个丝氨酸,11个苏氨酸和4个酪氨酸;无信号肽和跨膜螺旋结构,亚细胞定位显示,主要存在于细胞核中,属于非分泌型蛋白;蛋白高级结构主要由39.06%的α-螺旋和56.25%的无规则卷曲结构组成。同源性分析比对牦牛与普通牛亲缘关系最近,符合实际情况,说明Akirin1基因在进化过程中相对具有一定保守性。实时荧光定量结果显示,Akirin1基因在成年甘南牦牛心、肝、脾、肺、肾、肌肉和脂肪组织均有所表达,而在肾脏组织中相对表达最多,显著高于其他组织,在肌肉和肝脏组织中表达相对较少。本试验为进一步研究牦牛Akirin1基因功能特征提供一定的理论基础。 展开更多
关键词 牦牛 akirin1基因 克隆 生物信息学分析 组织表达分析
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鸡Akirin2和GM-CSF促进传染性法氏囊病病毒VP2基因DNA疫苗免疫效果的研究 被引量:2
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作者 任广彩 刘传高 +4 位作者 黄妙容 黄文科 钟楚红 刘郁夫 陈瑞爱 《动物医学进展》 北大核心 2017年第10期13-20,共8页
为提高鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因DNA疫苗的免疫效力,将IBDV VP2、鸡Akirin2和鸡GM-CSF三基因编码区串联后克隆到真核表达载体pTriEx-4上,用构建的pT-VP2-Akirin2-GM-CSF重组质粒体外转染293T细胞,然后提取表达产物进行SDS-PAGE分析... 为提高鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因DNA疫苗的免疫效力,将IBDV VP2、鸡Akirin2和鸡GM-CSF三基因编码区串联后克隆到真核表达载体pTriEx-4上,用构建的pT-VP2-Akirin2-GM-CSF重组质粒体外转染293T细胞,然后提取表达产物进行SDS-PAGE分析。结果在58、35、22ku附近各有一蛋白条带。用pT-VP2-Akirin2-GM-CSF免疫SPF鸡,加强免疫2周后,攻IBDV BC6-85强毒,4d后统计保护率。结果发现,注射14d后,pT-VP2-Akirin2-GM-CSF质粒免疫组血清中能检测到特异性IBDV抗体和IBDV中和抗体,第28天,该组鸡的抗体滴度极显著高于空白对照组(P<0.01),该组鸡外周血淋巴细胞增殖能力也极显著高于空白对照组(P<0.01)。说明VP2-Akirin2-GM-CSF三基因串联DNA疫苗有很好的应用前景。 展开更多
关键词 鸡传染性法氏囊病 VP2基因 akirin 鸡GM—CSF DNA疫苗
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知母皂苷AⅢ对肝癌细胞Akirin2基因表达及细胞增殖的抑制作用 被引量:2
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作者 孙琦 王洪博 +1 位作者 高玮 孙豪 《中西医结合肝病杂志》 CAS 2024年第1期28-34,共7页
目的:研究Akirin2在人肝癌组织中的表达及知母皂苷AⅢ(TA-Ⅲ)抑制人肝癌细胞(HepG2)增殖和促进凋亡的潜在机制。方法:应用RT-qPCR法和免疫组织化学法检测103例肝癌组织中Akirin2的表达。应用MTT法分别检测Akirin2过表达组、Akirin2 inhi... 目的:研究Akirin2在人肝癌组织中的表达及知母皂苷AⅢ(TA-Ⅲ)抑制人肝癌细胞(HepG2)增殖和促进凋亡的潜在机制。方法:应用RT-qPCR法和免疫组织化学法检测103例肝癌组织中Akirin2的表达。应用MTT法分别检测Akirin2过表达组、Akirin2 inhibitor组以及不同浓度TA-Ⅲ(0、5、10、20、40 mol/L)、紫杉醇组(80 g/ml)干预后对HepG2细胞增殖活力的影响;平板克隆实验和流式细胞术分别检测Akirin2过表达、Akirin2抑制以及TA-Ⅲ干预后对HepG2细胞克隆、凋亡的影响;Akirin2和凋亡蛋白采用WB法检测。TA-Ⅲ(40 mol/L)处理HepG2细胞的同时转染Akirin2 mimics(TA-Ⅲ+Akirin2过表达组),比较过表达Akirin2对TA-Ⅲ干预细胞增殖、凋亡的影响。结果:肝癌患者肝癌组织中Akirin2呈显著高表达(P<0.05),且Akirin2的高表达与患者的不良预后独立相关(P<0.05)。Akirin2过表达组的细胞增殖能力、克隆能力显著高于对照组(P<0.05),凋亡相关蛋白表达和细胞凋亡率低于对照组(P<0.05)。Akirin2 inhibitor组的细胞增殖能力、克隆能力显著低于对照组(P<0.05),凋亡相关蛋白表达和细胞凋亡率高于对照组(P<0.05)。TA-Ⅲ处理组的HepG2细胞增殖活力显著抑制,细胞增殖活性抑制与干预浓度、时间成正比。TA-Ⅲ不同浓度处理HepG2细胞增殖活力、细胞克隆能力、Akirin2蛋白表达显著低于对照组(P<0.05),细胞凋亡率和凋亡蛋白显著高于对照组(P<0.05)。Akirin2过表达后,TA-Ⅲ对HepG2细胞的细胞增殖能力细胞凋亡率和凋亡相关蛋白的影响作用被部分逆转。结论:Akirin2在肝癌中呈显著高表达,TA-Ⅲ可通过抑制Akirin2表达抑制癌细胞增殖,促进凋亡。 展开更多
关键词 HEPG2细胞 知母皂苷AⅢ 增殖 akirin2凋亡
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美仁牦牛Akirin1基因克隆及在不同组织中的表达 被引量:1
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作者 马小勇 杨国武 +5 位作者 杨树猛 丁考仁青 唐月琴 赵雪 张艳丽 梁春年 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 2023年第6期20-30,共11页
【目的】Akirin1基因是调控成肌细胞分化的关键基因,克隆美仁牦牛Akirin1基因编码区(CDS)序列进行生物信息学分析,并检测该基因在各组织间的表达特征,为研究调控牦牛肌肉生长的基因功能提供理论依据。【方法】利用RT-PCR技术克隆美仁牦... 【目的】Akirin1基因是调控成肌细胞分化的关键基因,克隆美仁牦牛Akirin1基因编码区(CDS)序列进行生物信息学分析,并检测该基因在各组织间的表达特征,为研究调控牦牛肌肉生长的基因功能提供理论依据。【方法】利用RT-PCR技术克隆美仁牦牛Akirin1基因CDS区序列,通过生物信息学软件分析蛋白理化性质和结构,预测蛋白信号肽和磷酸化位点及构建系统进化树;通过qPCR技术检测Akirin1基因在美仁牦牛成年牛各组织间及胎牛肌肉中mRNA的表达水平。【结果】美仁牦牛Akirin1基因CDS区全长579 bp,编192个氨基酸,蛋白相对分子质量为21879.86u,理论等电点8.91,总平均亲水性-0.822,为亲水性蛋白;系统进化树表明:美仁牦牛与普通牛和印度水牛亲缘关系最近,同源性分别为100%、98.44%;Akirin1蛋白有29处磷酸化位点,无信号肽和跨膜区,主要在细胞核中发挥生物学功能;美仁牦牛Akirin1蛋白主要是由α-螺旋和无规则卷曲组成。Akirin1基因在美仁牦牛脂肪组织中表达量最高,与其他组织比较差异显著(P<0.05),且肌肉和心脏组织中的表达量最低;胎牛背最长肌中Akirin1基因表达量显著高于成年牛(P<0.05)。【结论】美仁牦牛Akirin1蛋白为亲水性蛋白,无跨膜结构域,美仁牦牛Akirin1基因与普通牛和印度水牛亲缘关系最近,表明该基因高度保守;Akirin1基因在美仁牦牛不同组织中的表达差异显著,且在胎牛背最长肌中的表达量高于成年牛,推测该基因的表达在牦牛早期的生长发育阶段发挥了重要作用。 展开更多
关键词 美仁牦牛 akirin1 成肌细胞 基因克隆 实时荧光定量PCR
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天然免疫系统新成员Akirin的研究进展
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作者 张晓妍 安利国 杨桂文 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2011年第6期699-704,共6页
天然免疫系统是多细胞动物抵御细菌感染的第一道防线。Akirin是新近发现于果蝇中的天然免疫系统新成员,它在果蝇免疫缺陷(Imd)通路中发挥重要作用。Akirin同源基因广泛存在于从低等多细胞生物到高等脊椎动物中,进化上高度保守。已有的... 天然免疫系统是多细胞动物抵御细菌感染的第一道防线。Akirin是新近发现于果蝇中的天然免疫系统新成员,它在果蝇免疫缺陷(Imd)通路中发挥重要作用。Akirin同源基因广泛存在于从低等多细胞生物到高等脊椎动物中,进化上高度保守。已有的研究表明:Akirin在果蝇Imd通路和脊椎动物TLR通路下游,与NF-κB家族转录因子形成复合物,参与调控免疫相关靶基因的转录,是天然免疫调控机制中不可或缺的转录因子,其过表达或缺失直接影响动物对细菌的防御能力。近年来,Akirin在相关信号通路中的功能研究取得重大进展。该文对Akirin的结构、参与天然免疫的分子调控机制以及基因进化等方面进行综述。 展开更多
关键词 akirin 天然免疫 Imd信号通路 TLR信号通路 NF-KB
原文传递
Akirin1基因在肌肉发生中的作用
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作者 汪海鹏 原雪莹 倪华 《黑龙江动物繁殖》 2011年第4期11-14,共4页
Akirin1是2008年新发现的基因,其编码一个极为保守的核蛋白。研究表明,Akirin1在肌肉形成与重生中有重要作用,在C2C12细胞中的过表达能够促进生肌分化。Akirin1也能参与果蝇和小鼠的先天免疫反应,果蝇S2细胞缺失该基因后抵抗革兰氏阴性... Akirin1是2008年新发现的基因,其编码一个极为保守的核蛋白。研究表明,Akirin1在肌肉形成与重生中有重要作用,在C2C12细胞中的过表达能够促进生肌分化。Akirin1也能参与果蝇和小鼠的先天免疫反应,果蝇S2细胞缺失该基因后抵抗革兰氏阴性菌侵染的能力下降。尽管对Akirin1的研究日益增多,但是该基因的作用机制及相关表达调控尚未完全阐明。本文综述目前国内外对Akirin1的研究进展。 展开更多
关键词 akirin1 MYOSTATIN 生肌过程 肌肉重生
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天府肉羊Akirin2基因的分子克隆、序列分析及组织特异性表达
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作者 Ma J S 晋大鹏 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第10期204-204,共1页
Akirin2基因是一种核因子,是一个潜在的影响肉质性状的功能候选基因。为了更好地了解Akirin2基因的结构和功能,试验克隆了天府肉羊Akirin2基因cDNA。序列分析结果表明,天府肉羊Akirin2基因cDNA全编码序列(CDs)长579bp,编码192个氨基... Akirin2基因是一种核因子,是一个潜在的影响肉质性状的功能候选基因。为了更好地了解Akirin2基因的结构和功能,试验克隆了天府肉羊Akirin2基因cDNA。序列分析结果表明,天府肉羊Akirin2基因cDNA全编码序列(CDs)长579bp,编码192个氨基酸。对天府肉羊和其他物种Akirin2蛋白质序列构建系统进化树,结果发现,天府肉羊Akirin2与牛和绵羊Akirin2亲缘关系较近。RT-qPCR分析结果表明,Akirin2基因在心肌、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、腿肌、腹肌和背最长肌中表达,其中,在脾脏、肺脏和肾脏中高表达,在肝脏、心肌、腿肌、腹肌和背最长肌中低表达。mRNA表达结果表明,Akirin2基因在1~12个月天府肉羊背最长肌中的表达水平呈先上升后降低的趋势。Western blotting分析结果显示,仅能在肺脏和骨骼肌中检测到Akirin2蛋白。 展开更多
关键词 akirin2基因 完整的CDs 序列分析 表达分析 天府肉羊
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