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多主棒孢SdhB-H278R突变位点AS-real-time PCR定量检测体系的建立 被引量：4
1
作者 孙炳学 石延霞 +3 位作者 朱发娣 谢学文 柴阿丽 李宝聚 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第24期4647-4658,共12页
【目的】建立一种快速、高效、定量检测黄瓜多主棒孢(Corynespora cassiicola)琥珀酸脱氢酶B亚基(SdhB)H278R突变的实时荧光定量PCR(AS-real-time PCR)检测方法,并进行效果验证。【方法】从北京市大兴区采集、分离纯化病原菌,获得24株... 【目的】建立一种快速、高效、定量检测黄瓜多主棒孢(Corynespora cassiicola)琥珀酸脱氢酶B亚基(SdhB)H278R突变的实时荧光定量PCR(AS-real-time PCR)检测方法,并进行效果验证。【方法】从北京市大兴区采集、分离纯化病原菌,获得24株多主棒孢的单孢菌株,采用菌丝生长速率法测定其对啶酰菌胺的EC50,随机选取4株敏感(S)和8株抗性(R)菌株测其菌丝生长速率、产孢量和致病性。采用引物对Cc-SdhB-F/R测定多主棒孢SdhB基因序列,检测SdhB的碱基变化。基于多主棒孢SdhB的相同核酸序列和SNP位点设计内参引物B-H278R-TY-F/R和特异性引物B-H278R-2F/2R14,建立并优化AS-real-time PCR定量检测体系,并对引物的特异性、熔解曲线和灵敏度进行评价。利用该体系分别检测含有H278R不同突变比例的DNA和孢子悬浮液。【结果】测定的24个菌株中,敏感菌株占66.7%,EC50值为0.057—0.563μg·mL^(-1);抗性菌株占33.3%,EC50值为5.395—11.710μg·mL^(-1)。抗性和敏感菌株仅在菌丝生长速率方面存在显著性差异,且菌丝生长速率与EC50之间存在显著负相关。在产孢量和致病性方面不存在显著性差异。测序分析发现抗性菌株均携带SdhB-H278R突变。本研究设计的引物B-H278R-2F和B-H278R-2F2R14特异性强,仅对多主棒孢SdhB-H278R突变菌株的DNA有扩增条带,对其余供试菌株均无条带扩增。普通AS-PCR检测的灵敏度为91 pg·μL^(-1),而AS-real-time PCR的灵敏度可达9.1 pg·μL^(-1),灵敏度为普通AS-PCR的10倍。以基因组DNA为标准品,构建的AS-real-time PCR标准曲线ΔCT值与相对模板浓度的对数有良好的线性关系,相关系数为0.9857,扩增效率为92.59%。熔解曲线吸收峰单一,内参引物B-H278R-TY-F/R和特异性引物B-H278R-2F/2R14分别在87.81℃和91.62℃处出现单一特异性峰。用DNA和孢子悬浮液对标准曲线进行验证,结果表明随着相对模板浓度逐渐降低,该检测体系的准确性逐渐升高且检测下限为5%,同时预期值与试验值呈线性相关(R^2=0.9998和R^2=0.9922)。【结论】建立了一种高效、定量、快速的AS-real-time PCR检测体系用于SdhB-H278R突变位点的检测,可为杀菌剂的抗性治理提供理论依据。 展开更多
关键词 黄瓜 多主棒孢 as-real-time PCR 抗药性 琥珀酸脱氢酶B亚基 啶酰菌胺
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辣椒胞质雄性不育相关基因的克隆及表达 被引量：4
2
作者 王述彬 刁卫平 +3 位作者 刘金兵 潘宝贵 戈伟 郭广君 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2014年第4期833-838,共6页
为分离辣椒细胞质雄性不育基因,并阐明其不育机理,本研究以辣椒细胞质雄性不育系21A及保持系21B的线粒体DNA为材料进行SRAP分析。结果显示,在21A中获得3条多态性条带。对多态性条带回收、克隆和测序分析后发现,这3个片断(分别命名为CMS... 为分离辣椒细胞质雄性不育基因,并阐明其不育机理,本研究以辣椒细胞质雄性不育系21A及保持系21B的线粒体DNA为材料进行SRAP分析。结果显示,在21A中获得3条多态性条带。对多态性条带回收、克隆和测序分析后发现,这3个片断(分别命名为CMS721、CMS394、CMS285)在GenBank中都与能量代谢途径有关。针对序列特征设计SCAR引物,对21A和21B的基因组DNA进行扩增验证,3对引物只在21A中扩增出目的条带,表明已成功地将SRAP标记转化为SCAR标记。利用荧光定量PCR技术对CMS721、CMS394和CMS285基因在21A不同组织(根、茎、叶和花)中的表达情况进行了分析。结果表明:3个基因只在不育系中表达,且在不同的组织中均有表达,但表达量差异很大,其中基因CMS721表达量在中花蕾中迅速下降,推测该基因控制辣椒花药中与能量代谢相关的蛋白质的表达,从而引起小孢子发育障碍,最终导致雄性不育。 展开更多
关键词 辣椒 细胞质雄性不育 基因表达 qRT—PCR
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视神经横断后生长抑制因子Nogo及其受体NgR mRNA表达的变化及意义 被引量：1
3
作者 尹小磊 叶剑 +4 位作者 袁容娣 陈春林 郑政 霍妍 邹欢 《标记免疫分析与临床》 CAS 2011年第5期326-329,共4页
观察大鼠视神经横断后Nogo-A及其受体NgR mRNA表达的变化。将36只正常成年SD大鼠随机分为三组,视神经横断7d组、14d组和正常对照组,每组12只。分别提取视神经组织,使用实时荧光定量聚合酶链式反应法定量分析Nogo-A及NgR mRNA表达量的变... 观察大鼠视神经横断后Nogo-A及其受体NgR mRNA表达的变化。将36只正常成年SD大鼠随机分为三组,视神经横断7d组、14d组和正常对照组,每组12只。分别提取视神经组织,使用实时荧光定量聚合酶链式反应法定量分析Nogo-A及NgR mRNA表达量的变化。实验结果显示,在大鼠的视神经组织中存在Nogo-A及其受体NgR基因的表达。与对照组相比,视神经横断7d后Nogo-A表达显著减少(P<0.05);视神经横断14d后,其表达较横断7d组显著增加(P<0.05),但仍明显低于对照组(P<0.05)。NgR在视神经横断7d后与对照组相比,表达显著减少(P<0.05),视神经横断14d后,其表达较横断7d组无显著差异(P>0.05)。视神经完全横断伤后Nogo-A mRNA表达先下降再升高,NgR mRNA表达下降并基本保持在同一水平。 展开更多
关键词 视神经 轴突横断术 大鼠 生长抑制因子 实时荧光定量聚合酶链式反应
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民用电传飞机颤振/ASE试飞风险控制技术 被引量：1
4
作者 王海刚 张绍云 《航空工程进展》 CSCD 2022年第1期101-106,共6页
现有颤振/ASE试飞风险控制技术相关研究不够系统全面,未充分考虑民用电传飞机试飞特点及机上试飞工程师的作用。系统地研究民用电传飞机颤振/ASE试飞风险控制技术,包括理论评估、测试改装、试飞方法、试飞风险分析、风险降低措施和应急... 现有颤振/ASE试飞风险控制技术相关研究不够系统全面,未充分考虑民用电传飞机试飞特点及机上试飞工程师的作用。系统地研究民用电传飞机颤振/ASE试飞风险控制技术,包括理论评估、测试改装、试飞方法、试飞风险分析、风险降低措施和应急处置程序制定等;针对识别出的颤振/ASE不稳定、不良操稳特性和局部结构损坏等风险源,提出振动超限或异常时客舱试飞工程师切断激励的新技术,开发地面监控专用软件用于实时颤振/ASE裕度定量分析;在某型号试飞中应用该技术进行颤振/ASE试飞科目验证。结果表明:该风险控制技术能够有效降低试飞风险和成本,人工切断技术可在1 s内中止激励保障飞机结构安全,实时分析技术可以快速准确计算稳定裕度并且提高试飞效率。 展开更多
关键词 颤振/ASE试飞 扫频激励 风险评估 人工切断 实时分析
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c-Met在子宫内膜腺癌中的作用 被引量：1
5
作者 庄晓苹 林琼琼 +1 位作者 金纬纬 董迎 《医学研究杂志》 2013年第5期90-93,共4页
目的研究c-Met在子宫内膜腺癌中的表达及其与临床病理参数的关系。方法采用免疫组化和实时荧光定量PCR方法分别检测60例子宫内膜腺癌组织和20例正常子内膜组织中c-Met蛋白和c-Met mRNA的表达。结果 c-Met蛋白的表达与子宫内膜腺癌的组... 目的研究c-Met在子宫内膜腺癌中的表达及其与临床病理参数的关系。方法采用免疫组化和实时荧光定量PCR方法分别检测60例子宫内膜腺癌组织和20例正常子内膜组织中c-Met蛋白和c-Met mRNA的表达。结果 c-Met蛋白的表达与子宫内膜腺癌的组织学分级以及肌层浸润深度有关(P<0.05),与年龄、绝经、临床分期、淋巴结转移无关(P>0.05)。c-Met mRNA在癌组织中的表达量明显高于其在正常子宫内膜组织中的表达量,差异有统计学意义(P<0.01);并且与子宫内膜腺癌组织的分化程度有关(P=0.017)。结论 c-Met的高表达在子宫内膜腺癌的发生发展中起重要作用。 展开更多
关键词 c—Met 子宫内膜腺癌 免疫组化 实时荧光定量 PCR
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2型糖尿病患者血浆miR-146a和miR-223的表达研究 被引量：1
6
作者 杨喜永 徐雪勤 +3 位作者 张爱荣 赵小燕 代建宇 郑锡铭 《现代医药卫生》 2023年第17期2941-2944,2948,共5页
目的探讨2型糖尿病(T2DM)患者血浆miR-146a和miR-223的表达水平,并探讨其对T2DM的临床诊断价值。方法选取2020年6月至2021年6月该院住院的T2DM患者126例作为T2DM组,另随机选取在该院体检中心同期进行健康体检者60例作为健康对照组。收集... 目的探讨2型糖尿病(T2DM)患者血浆miR-146a和miR-223的表达水平,并探讨其对T2DM的临床诊断价值。方法选取2020年6月至2021年6月该院住院的T2DM患者126例作为T2DM组,另随机选取在该院体检中心同期进行健康体检者60例作为健康对照组。收集2组受试者外周血,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测血浆miR-146a和miR-223的表达,采用Pearson法分析miR-146a和miR-223与患者监测指标之间的关系,采用受试者操作特征曲线(ROC曲线)评价其对T2DM的诊断价值。结果与健康对照组相比,T2DM组患者血浆miR-146a的表达量升高,miR-223的表达量降低,差异有统计学意义(P<0.01)。相关性分析显示,血浆miR-146a和miR-223的表达存在一定的相关性(r=0.445,P<0.05),同时miR-146a与病程、三酰甘油(TG)、胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和空腹血糖(FPG)呈正相关(P<0.05);miR-223与病程呈正相关(P<0.05),与TG、TC、LDL-C和FPG呈负相关(P<0.05),两者与体重指数、高密度脂蛋白胆固醇和糖化血红蛋白均无相关性(P>0.05)。ROC曲线分析显示,血浆miR-146a和miR-223诊断T2DM曲线下面积分别为0.792和0.832,联合检测的曲线下面积为0.917。结论血浆miR-146a和miR-223在T2DM患者中存在差异表达,可以作为诊断T2DM潜在的生物学标志物。 展开更多
关键词 MIR-146A miR-223 2型糖尿病 实时荧光定量聚合酶链反应
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定量检测hTERT mRNA对良、恶性腹水鉴别诊断的价值 被引量：1
7
作者 刘少平 方春华 +2 位作者 胡亚华 张险峰 朱燕莉 《临床消化病杂志》 2014年第5期286-288,共3页
[目的]定量检测腹水中人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)mRNA表达量,探讨其对良、恶性腹水的鉴别诊断价值。[方法]采用实时荧光定量RT-PCR定量检测31例良性疾病患者腹腔液(不伴腹水),82例良性腹水及119... [目的]定量检测腹水中人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)mRNA表达量,探讨其对良、恶性腹水的鉴别诊断价值。[方法]采用实时荧光定量RT-PCR定量检测31例良性疾病患者腹腔液(不伴腹水),82例良性腹水及119例恶性腹水中hTERT mRNA表达量,同时检测癌胚抗原(CEA)含量。[结果]恶性腹水组hTERT mRNA表达量和CEA含量显著高于良性腹水组及腹腔液组(P<0.001),hTERT mRNA对恶性腹水诊断的敏感性、特异性、总准确率分别为89.9%,96.3%,92.5%,敏感性、阴性预测值、总准确率显著高于CEA(P<0.01)。不同肿瘤导致的恶性腹水中hTERT mRNA表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。[结论]定量检测hTERT mRNA可成为良、恶性腹水鉴别诊断的高效肿瘤标志物。 展开更多
关键词 腹水 鉴别诊断实时荧光定量RT-PCR 人端粒酶逆转录酶
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