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ABCE1基因siRNA稳定转染小细胞肺癌细胞株阳性克隆的筛选 被引量：1
1
作者 黄波 王晓东 郎贤平 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期8-11,共4页
目的构建携带绿色荧光蛋白的ABCE1基因的siRNA表达载体,通过将载体转染入小细胞肺癌细胞株NCI-H446,筛选稳定转染细胞株。方法根据ABCE1的DNA序列设计3对siRNA引物,构建可用于筛选阳性克隆且带有绿色荧光的ABCE1基因siRNA表达载体ABCE1-... 目的构建携带绿色荧光蛋白的ABCE1基因的siRNA表达载体,通过将载体转染入小细胞肺癌细胞株NCI-H446,筛选稳定转染细胞株。方法根据ABCE1的DNA序列设计3对siRNA引物,构建可用于筛选阳性克隆且带有绿色荧光的ABCE1基因siRNA表达载体ABCE1-pRNAT-U6.1/Neo-siRNA-1、ABCE1-PRNAT-U6.1/Neo-siRNA-2及ABCE1-pRNAT-U6.1/Neo-siRNA-N,采用FUGENE-HD法将载体转染入NCI-H446细胞中,并以G418进行阳性克隆筛选,筛选ABCE1基因沉默的稳定转染细胞系。结果经酶切和DNA测序验证,证实ABCE1-pRNAT-U6.1/Neo-siRNA表达载体构建成功。将ABCE1基因siRNA表达载体成功转染小细胞肺癌细胞NCI-H446后,小细胞肺癌细胞内可见绿色荧光,通过G418筛选,获得了ABCE1基因沉默的小细胞肺癌细胞系,该细胞系的ABCE1水平明显低于未转染siRNA的小细胞肺癌细胞。结论成功的构建了ABCE1基因siRNA表达载体ABCE1-pRNAT-U6.1/Neo-siRNA。筛选出ABCE1基因沉默的稳定转染小细胞肺癌细胞系,为今后应用ABCE1基因siRNA表达载体研究ABCE1基因的作用机制提供实验基础。 展开更多
关键词 小细胞肺癌 ABCE1基因 SIRNA
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食管癌ABCE1乙酰化与KAT5、p300/CBP及PCAF表达相关性及临床意义
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作者 梁宗英 张乐 +2 位作者 赵宝山 侯继申 辛国华 《肿瘤学杂志》 CAS 2022年第2期122-127,共6页
[目的]探讨ABCE1乙酰化与乙酰基转移酶KAT5、p300/CBP及PCAF在食管癌中的表达相关性及其临床意义。[方法]选择70例食管鳞癌组织及其癌旁食管黏膜组织,采用免疫共沉淀检测组织中ABCE1乙酰化水平,qRT-PCR检测KAT5、p300/CBP及PCAF组织中m... [目的]探讨ABCE1乙酰化与乙酰基转移酶KAT5、p300/CBP及PCAF在食管癌中的表达相关性及其临床意义。[方法]选择70例食管鳞癌组织及其癌旁食管黏膜组织,采用免疫共沉淀检测组织中ABCE1乙酰化水平,qRT-PCR检测KAT5、p300/CBP及PCAF组织中mRNA相对表达量,免疫组织化(SP)和Western-blot检测蛋白表达,结合临床病理资料进行相关性分析。[结果 ]食管癌组织中ABCE1乙酰化率为65.34%±2.42%,高于正常食管黏膜的14.25%±1.15%(P<0.05);癌组织中KAT5与p300/CBP mRNA相对表达量为4.48±1.03和3.75±0.84,高于正常食管黏膜的1.13±0.14和1.44±0.37(P<0.05);癌组织中PCAF mRNA相对表达量为1.02±0.26,低于正常食管黏膜中的3.56±0.73(P<0.05);癌组织中KAT5、p300/CBP与PCAF的阳性表达率分别为75.71%(53/70)、68.57%(48/70)和24.28%(17/70),与正常食管黏膜的18.57%(13/70)、12.86%(9/70)和65.71%(46/70)相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。Western-blot结果显示,癌组织中KAT5、p300/CBP与PCAF的蛋白表达量分别为78.46%±4.14%、67.48%±3.78%和7.17%±1.46%,与正常食管黏膜的34.75%±2.38%、28.74%±2.15%和57.49%±2.47%相比,差异均有统计学意义(P<0.05);ABCE1乙酰化、KAT5、p300/CBP与PCAF的阳性表达与TNM分期、肿瘤分化程度及淋巴结转移密切相关(P<0.05)。食管癌中ABCE1乙酰化与PCAF的表达呈负相关,与KAT5和p300/CBP的表达呈正相关。[结论] ABCE1乙酰化与乙酰基转移酶PCAF、KAT5及p300/CBP的表达密切相关,其KAT5及p300/CBP高表达可能是催化ABCE1发生乙酰化的因子并促进了食管癌的发生和发展。 展开更多
关键词 食管肿瘤 ABCE1 乙酰化 乙酰基转移酶 临床意义
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