为探究中华卤虫(Artemia sinica)热激蛋白HSP70的分子功能及其在生态适应中的作用机制,文章以运城盐湖中华卤虫为研究对象,通过RT-PCR扩增获得AsHSP70基因完整开放阅读框(ORF)。将目的片段克隆至pGEX-4T-1表达载体,转化BL21(DE3)plySs...为探究中华卤虫(Artemia sinica)热激蛋白HSP70的分子功能及其在生态适应中的作用机制,文章以运城盐湖中华卤虫为研究对象,通过RT-PCR扩增获得AsHSP70基因完整开放阅读框(ORF)。将目的片段克隆至pGEX-4T-1表达载体,转化BL21(DE3)plySs感受态细胞。SDS-PAGE分析显示,IPTG诱导后可成功表达约98.3 kDa的GST-AsHSP70融合蛋白。通过优化表达条件,发现37℃、1 mM IPTG诱导4 h总蛋白表达量最高;25℃、0.5 mM IPTG诱导4 h可显著提高蛋白产量。文章建立了运城盐湖卤虫AsHSP70基因的高效原核表达体系,为后续解析HSP70在极端环境适应中的分子机制以及开发其作为免疫佐剂的潜在应用提供了技术基础。展开更多
文摘为探究中华卤虫(Artemia sinica)热激蛋白HSP70的分子功能及其在生态适应中的作用机制,文章以运城盐湖中华卤虫为研究对象,通过RT-PCR扩增获得AsHSP70基因完整开放阅读框(ORF)。将目的片段克隆至pGEX-4T-1表达载体,转化BL21(DE3)plySs感受态细胞。SDS-PAGE分析显示,IPTG诱导后可成功表达约98.3 kDa的GST-AsHSP70融合蛋白。通过优化表达条件,发现37℃、1 mM IPTG诱导4 h总蛋白表达量最高;25℃、0.5 mM IPTG诱导4 h可显著提高蛋白产量。文章建立了运城盐湖卤虫AsHSP70基因的高效原核表达体系,为后续解析HSP70在极端环境适应中的分子机制以及开发其作为免疫佐剂的潜在应用提供了技术基础。