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LncRNA RMRP通过靶向调控miR-580-3p/RhoA轴抑制脂多糖诱导的肾小管上皮细胞损伤
1
作者 韩玲芝 张雪 +2 位作者 卢祥云 刘堃 邵春芝 《疑难病杂志》 2025年第11期1369-1377,共9页
目的 探讨长链非编码核糖核酸(LncRNA)线粒体RNA加工核糖核酸内切酶RNA组分(RMRP)是否可通过靶向调控微小核糖核酸(miR)-580-3p/Ras同源基因家族成员A(Rho A)轴抑制脂多糖(LPS)诱导的肾小管上皮细胞损伤。方法 于2024年5—10月在青岛市... 目的 探讨长链非编码核糖核酸(LncRNA)线粒体RNA加工核糖核酸内切酶RNA组分(RMRP)是否可通过靶向调控微小核糖核酸(miR)-580-3p/Ras同源基因家族成员A(Rho A)轴抑制脂多糖(LPS)诱导的肾小管上皮细胞损伤。方法 于2024年5—10月在青岛市胶州中心医院中心实验室进行实验。将体外正常培养的人肾小管上皮细胞HK-2记为对照(Control)组,使用LPS建立细胞损伤模型,根据不同处理方式分为模型(Model)组、sh-NC组、sh-RMRP组、sh-RMRP+anti-NC组、sh-RMRP+anti-miR-580-3p组。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测LncRNA RMRP、miR-580-3p、Rho A mRNA表达;双荧光素酶实验检测LncRNA RMRP与miR-580-3p、miR-580-3p与Rho A调控关系;细胞计数试剂盒-8(CCK8)实验检测细胞增殖;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;流式细胞仪检测细胞凋亡;蛋白免疫印迹(WB)检测Rho A、增殖细胞核抗原(PCNA)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达。结果 与Control组比较,Model组中LncRNA RMRP、Rho A mRNA及蛋白表达、细胞凋亡率、IL-1β、IL-6、TNF-α、Bax蛋白表达升高,miR-580-3p、HK-2细胞存活率、PCNA、Bcl-2蛋白表达降低(P<0.01);与Model组、sh-NC组比较,sh-RMRP组LncRNA RMRP、Rho A mRNA及蛋白表达、细胞凋亡率、IL-1β、IL-6、TNF-α、Bax表达降低,miR-580-3p、HK-2细胞存活率、PCNA、Bcl-2蛋白表达升高(P<0.01);与sh-RMRP组、sh-RMRP+anti-NC组比较,sh-RMRP+anti-miR-580-3p组中Rho A mRNA及蛋白表达、细胞凋亡率、IL-1β、IL-6、TNF-α、Bax蛋白表达升高,而miR-580-3p、HK-2细胞存活率、PCNA、Bcl-2表达降低(P<0.01);双荧光素酶实验显示,与mimic-NC组比较,miR-580-3p mimic组转染WT-RMRP、WT-RhoA的荧光素酶活性降低(P<0.01)。结论 敲低LncRNA RMRP可通过靶向调控miR-580-3p/Rho A轴抑制LPS诱导的HK-2细胞炎性反应及细胞凋亡,从而发挥抑制肾小管上皮细胞损伤的作用。 展开更多
关键词 急性肾损伤 肾小管上皮细胞 LncRNA RMRP miR-580-3p/Rho A轴 脂多糖
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聚焦中国需求,科乐收EVION 580智能联合收割机全球首发
2
作者 冯雪 《农业机械》 2025年第11期32-33,共2页
2025年10月26日,在中国国际农业机械展览会开幕首日,科乐收全球首发EVION 580智能联合收割机。凭借先进的智能化技术与多工况适应性实现“德国品质+中国适配”的双重突破,为中国规模化农业发展注入新动能。1中德协同开发,精准匹配国内... 2025年10月26日,在中国国际农业机械展览会开幕首日,科乐收全球首发EVION 580智能联合收割机。凭借先进的智能化技术与多工况适应性实现“德国品质+中国适配”的双重突破,为中国规模化农业发展注入新动能。1中德协同开发,精准匹配国内市场需求科乐收在发布会上表示,EVION 580是一款为中国用户量身打造的战略性产品,其融合了科乐收80余年的收获技术经验,由科乐收德国总部与中国团队联合开发,兼具高效率、智能化与可靠性。 展开更多
关键词 EVION 580 智能联合收割机
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科乐收EVION 580智能联合收割机全球首发
3
作者 刘佳妮 《农机质量与监督》 2025年第11期43-44,共2页
10月26—28日,中国国际农业机械展览会在武汉盛大举行。科乐收(CLAAS)携旗下创新产品亮相,并于10月26日隆重发布全新EVION 580智能联合收割机。该机型专为中国作业环境量身打造,标志着CLAAS在本地化创新与智能农业装备领域迈出又一重要... 10月26—28日,中国国际农业机械展览会在武汉盛大举行。科乐收(CLAAS)携旗下创新产品亮相,并于10月26日隆重发布全新EVION 580智能联合收割机。该机型专为中国作业环境量身打造,标志着CLAAS在本地化创新与智能农业装备领域迈出又一重要步伐。 展开更多
关键词 EVION 580 智能联合收割机
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ZNF580基因原核表达载体的构建与鉴定
4
作者 何立英 孙慧燕 张文成 《武警医学院学报》 CAS 2007年第3期219-221,共3页
【目的】构建ZNF580基因原核表达载体,为获得大量重组ZNF580蛋白并制备其多克隆抗体奠定基础。【方法】根据ZNF580cDNA序列的开读框架设计上、下游引物,利用PCR技术扩增ZNF580开放阅读框cD-NA序列,将PCR扩增的目的片段与载体pET30a分别... 【目的】构建ZNF580基因原核表达载体,为获得大量重组ZNF580蛋白并制备其多克隆抗体奠定基础。【方法】根据ZNF580cDNA序列的开读框架设计上、下游引物,利用PCR技术扩增ZNF580开放阅读框cD-NA序列,将PCR扩增的目的片段与载体pET30a分别双酶切、回收纯化后做定向连接,EcoRI、XhoI双酶切电泳筛选、鉴定并测序。【结果】双酶切pET30a-ZNF580,电泳分析插入片段长度为524 bp,与预期的结果一致,经连接点两端进行测序,测序结果显示接头两端序列连接正确。【结论】成功构建原核表达载体pET30a-ZNF580。 展开更多
关键词 ZNF580基因 原核表达载体 pET30a-ZNF580
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弱筋小麦新品种鄂麦580的选育及栽培技术 被引量：8
5
作者 刘易科 佟汉文 +3 位作者 朱展望 张宇庆 陈泠 高春保 《作物杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期158-159,5,共2页
鄂麦580(区试号51180)是湖北省农业科学院粮食作物研究所选育的优质弱筋小麦新品种,2012年8月通过湖北省农作物品种审定委员会审定(编号:鄂审麦2012001),该品种产量高、品质优、综合农艺性状优良,适宜湖北省麦区种植。规范化播种、合理... 鄂麦580(区试号51180)是湖北省农业科学院粮食作物研究所选育的优质弱筋小麦新品种,2012年8月通过湖北省农作物品种审定委员会审定(编号:鄂审麦2012001),该品种产量高、品质优、综合农艺性状优良,适宜湖北省麦区种植。规范化播种、合理施肥、沟厢配套、及时清沟排渍、及时进行病虫草害的防治、适时收获是确保鄂麦580高产优质的关键栽培措施。 展开更多
关键词 小麦 鄂麦580 品种选育 栽培技术
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大鼠心肌缺血-再灌注损伤中转录因子ZFP580表达的变化 被引量：3
6
作者 孟祥艳 宋立新 +4 位作者 罗玉玉 董化江 郭敏 梁彦军 张文成 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期1127-1131,共5页
目的:研究核转录因子锌指蛋白580(ZFP580)在大鼠心肌缺血-再灌注(I-R)损伤中表达的变化,探讨其可能的作用。方法:48只SD大鼠分为:(1)假手术组;(2)I-R组,结扎冠状动脉左前降支30 min后恢复血液灌注;(3)L-精氨酸(L-Arg)预处理+I-R组,于缺... 目的:研究核转录因子锌指蛋白580(ZFP580)在大鼠心肌缺血-再灌注(I-R)损伤中表达的变化,探讨其可能的作用。方法:48只SD大鼠分为:(1)假手术组;(2)I-R组,结扎冠状动脉左前降支30 min后恢复血液灌注;(3)L-精氨酸(L-Arg)预处理+I-R组,于缺血前给予L-Arg 300 mg/kg,重复I-R组操作;(4)L-Arg预处理+sham组。(2)、(3)组于I-R后1 h或4 h处死动物。各组大鼠取心肌标本HE染色,光镜下计数心肌组织中中性粒细胞数。检测血清中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)活性及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)浓度,半定量RT-PCR或免疫组化染色分析ZFP580及内皮型一氧化氮合酶(eNOS)在心肌细胞的表达。结果:I-R后,缺血区心肌细胞肿胀,周围大量中性粒细胞浸润,血清LDH、CK活性及TNF-α浓度升高,心肌ZFP580和eNOS表达下调(P<0.05)。应用L-Arg预处理+I-R后,血清LDH、CK活性及TNF-α浓度降低,心肌ZFP580和eNOS的表达回升。结论:心肌I-R损伤引起ZFP580表达下调。ZFP580及eNOS的表达上调可能是L-Arg预处理拮抗心肌I-R损伤的机制之一。 展开更多
关键词 锌指蛋白580 缺血-再灌注 精氨酸
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ZNF580-EGFP融合蛋白的亚细胞定位研究 被引量：6
7
作者 张文成 孙慧燕 孟祥艳 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期1590-1594,共5页
目的:构建增强型绿色荧光报告蛋白(EGFP)与人ZNF580融合蛋白的真核表达载体,转染MGC803细胞进行表达,研究ZNF580-EGFP融合蛋白在MGC803细胞的亚细胞定位。方法:利用PCR技术扩增ZNF580基因cDNA开放阅读框架全编码区、N端编码区、C端编码... 目的:构建增强型绿色荧光报告蛋白(EGFP)与人ZNF580融合蛋白的真核表达载体,转染MGC803细胞进行表达,研究ZNF580-EGFP融合蛋白在MGC803细胞的亚细胞定位。方法:利用PCR技术扩增ZNF580基因cDNA开放阅读框架全编码区、N端编码区、C端编码区,分别克隆到真核表达载体pEGFP-C1,BglⅡ及HindⅢ双酶切电泳筛选、鉴定并测序。荧光显微镜下观察ZNF580-EGFP在MGC803细胞中的表达及亚细胞定位。结果:酶切pEGFP-ZNF580(1-172)、pEGFP-ZNF580(1-93)、pEGFP-ZNF580(94-172),电泳分析插入片段长度分别为:526bp、289bp、247bp,经连接点两端进行测序证实连接正确。pEGFP-ZNF580(1-172)、pEGFP-ZNF580(94-172)表达的ZNF580-EGFP融合蛋白定位在MGC803细胞核。结论:成功构建真核表达载体并在MGC803细胞中得到表达,分析其核定位信号可能位于ZNF580蛋白的C端C2H2型锌指主构域94-172位氨基酸区间。 展开更多
关键词 ZNF580-EGFP融合蛋白 真核表达载体 绿色荧光蛋白 亚细胞定位
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ZNF580在1-磷酸鞘氨醇诱导内皮细胞迁移和增殖中的作用 被引量：4
8
作者 韦淑萍 孙慧燕 +1 位作者 刘未 张文成 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期2119-2124,共6页
目的:研究人锌指蛋白ZNF580在1-磷酸鞘氨醇(sphingosine 1-phosphate,S1P)诱导内皮细胞迁移和增殖中的作用,为探讨ZNF580功能提供科学依据。方法:RT-PCR检测S1P受体在EA.hy926细胞的表达情况;不同浓度(0～10μmol/L)S1P刺激EA.hy926细... 目的:研究人锌指蛋白ZNF580在1-磷酸鞘氨醇(sphingosine 1-phosphate,S1P)诱导内皮细胞迁移和增殖中的作用,为探讨ZNF580功能提供科学依据。方法:RT-PCR检测S1P受体在EA.hy926细胞的表达情况;不同浓度(0～10μmol/L)S1P刺激EA.hy926细胞不同时间(0～12 h)后,RT-PCR和Western blotting检测S1P对ZNF580表达的影响;利用p38 MAPK信号通路特异性抑制剂SB203580研究S1P是否通过此信号通路影响ZNF580的表达;脂质体转染法获得瞬时过表达和瞬时低表达ZNF580的EA.hy926细胞;Transwell实验及MTT比色法分析ZNF580对内皮细胞迁移和增殖活性的影响。结果:EA.hy926细胞表达S1P1、S1P3和S1P5三种受体,其cDNA的特异性扩增产物分别为352 bp、701 bp和236 bp;S1P刺激EA.hy926细胞后,ZNF580的表达呈现剂量和时间依赖性增高;SB203580能够抑制S1P诱导的ZNF580的上调作用;ZNF580过表达(低表达)后内皮细胞迁移和增殖活性明显增强(减弱)。结论:S1P通过p38 MAPK信号通路影响ZNF580的表达;ZNF580在内皮细胞迁移和增殖过程中起着重要的调控作用。 展开更多
关键词 1-磷酸鞘氨醇 内皮细胞 ZNF580
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履行不能与合同终止——以《民法典》第580条第2款为中心 被引量：29
9
作者 石佳友 《现代法学》 CSSCI 北大核心 2021年第4期31-45,共15页
《民法典》第580条第2款新规定的“履行不能情形下的合同终止条款”是合同编部分最为重要的修订,曾引发高度关注与争议。该条文通过赋予当事人请求司法机关终止存在终局性履行不能的合同,进而实现打破合同僵局的功能。本条的引入可填补... 《民法典》第580条第2款新规定的“履行不能情形下的合同终止条款”是合同编部分最为重要的修订,曾引发高度关注与争议。该条文通过赋予当事人请求司法机关终止存在终局性履行不能的合同,进而实现打破合同僵局的功能。本条的引入可填补立法的漏洞,且不会构成对现有合同法体系的颠覆或破坏。双务合同的风险负担及履行抗辩规则均无法有效解决合同僵局问题。在法律适用上,“致使不能实现合同目的”这一构成要件旨在防止可能出现的滥用;未来应考虑通过司法解释或指导性案例将本条扩张适用至金钱债务所引发的合同僵局;第580条第2款在适用上将可产生某种“外溢效应”。 展开更多
关键词 履行不能 合同僵局 第580条第2款 合同终止 合同解除
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M580×8大型螺纹加工工艺及实践 被引量：1
10
作者 齐桂华 姜国华 《大电机技术》 北大核心 2013年第2期57-58,62,共3页
本文介绍了在数控镗床上数控编程加工M580×8大型内螺纹和M580×8大型外螺纹的工艺方法及用螺纹内径千分尺和螺纹外径千分尺测量螺纹尺寸的方法。在大型螺纹加工过程中如何选择切削参数,如何控制螺纹的加工质量和大型内、外螺... 本文介绍了在数控镗床上数控编程加工M580×8大型内螺纹和M580×8大型外螺纹的工艺方法及用螺纹内径千分尺和螺纹外径千分尺测量螺纹尺寸的方法。在大型螺纹加工过程中如何选择切削参数,如何控制螺纹的加工质量和大型内、外螺纹加工后螺纹预装配方法及预装重要性等。 展开更多
关键词 M580×8大型螺纹内螺纹 M580×8大型螺纹外螺纹 螺纹测量
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锌指基因ZFP580在大鼠心肌缺血损伤中的表达 被引量：6
11
作者 孟祥艳 孙慧燕 +1 位作者 孔麟麟 张文成 《武警医学院学报》 CAS 2010年第1期1-3,F0002,共4页
【目的】观察大鼠ZFP580基因在急性心肌缺血的不同时期的表达变化,以初步探讨锌指基因ZFP580在心肌缺血损伤中的作用。【方法】腹腔注射异丙肾上腺素(ISO)建立大鼠急性心肌缺血模型,分别于ISO注射后1h、24h取材,对照组腹腔注射等量生理... 【目的】观察大鼠ZFP580基因在急性心肌缺血的不同时期的表达变化,以初步探讨锌指基因ZFP580在心肌缺血损伤中的作用。【方法】腹腔注射异丙肾上腺素(ISO)建立大鼠急性心肌缺血模型,分别于ISO注射后1h、24h取材,对照组腹腔注射等量生理盐水。观察心肌形态学改变,检测血清中乳酸脱氢酶(LDH)及肌酸激酶(CK)的含量,半定量RT-PCR及免疫组化方法分析ZFP580 mRNA及蛋白水平的表达变化。【结果】ISO处理组大鼠心肌组织广泛缺血损伤,血清LDH、CK含量明显升高(P<0.05),心室肌ZFP580mRNA表达下调(P<0.05),免疫组化染色阳性细胞百分率明显降低,以ISO注射1h后变化更为明显。【结论】ZFP580是心肌缺血损伤的早期调控基因之一,其表达下调可能参与了心肌缺血损伤的形成。 展开更多
关键词 锌指基因 ZFP580 异丙肾上腺素 心肌缺血
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ZNF580与EGFP融合蛋白表达载体的构建及其在HEK293细胞的表达和定位 被引量：6
12
作者 张文成 孙慧燕 +1 位作者 罗玉玉 崔明亮 《武警医学院学报》 CAS 2008年第3期161-165,F0003,共6页
[目的]构建人ZNF580与增强型绿色荧光蛋白（EGFP）融合蛋白真核表达载体,转染细胞进行瞬时表达,分析ZNF580-EGFP融合蛋白在人胚肾HEK293细胞中的表达和亚细胞定位。[方法]利用PCR技术扩增ZNF580基因cDNA开放阅读框架全编码区（编码1-17... [目的]构建人ZNF580与增强型绿色荧光蛋白（EGFP）融合蛋白真核表达载体,转染细胞进行瞬时表达,分析ZNF580-EGFP融合蛋白在人胚肾HEK293细胞中的表达和亚细胞定位。[方法]利用PCR技术扩增ZNF580基因cDNA开放阅读框架全编码区（编码1-172位氨基酸）、N端编码区（编码1-93位氨基酸）、C端编码区（编码94-172位氨基酸）,分别克隆到真核表达载体pEGFP-C1,BglΠ及HindШ双酶切筛选鉴定并测序。荧光显微镜下观察ZNF580-EGFP在HEK293细胞中的表达及亚细胞定位。[结果]pEGFP-ZNF580（1-172）、pEGFP-ZNF580（94-172）表达的ZNF580-EGFP融合蛋白聚集于HEK293细胞核。[结论]ZNF580蛋白的核定位信号位于其C端C2H2型锌指主构域（94-172位氨基酸区间）。 展开更多
关键词 增强型绿色荧光蛋白 ZNF580基因 亚细胞定位 HEK293细胞
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酵母双杂交筛选与转录因子ZNF580相互作用的蛋白 被引量：1
13
作者 罗玉玉 杨蓉 +2 位作者 孔麟麟 任党丽 张文成 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期1120-1123,共4页
目的:寻找可能与锌指转录因子ZNF580存在相互作用的蛋白。方法:以ZNF580基因开放阅读框作为模版,PCR扩增后连接入酵母表达质粒pGB。诱饵质粒pGB-ZNF580经测序验证后转化酵母菌株Y190,人胎脑cDNA文库亦转化到能稳定表达诱饵蛋白的Y190酵... 目的:寻找可能与锌指转录因子ZNF580存在相互作用的蛋白。方法:以ZNF580基因开放阅读框作为模版,PCR扩增后连接入酵母表达质粒pGB。诱饵质粒pGB-ZNF580经测序验证后转化酵母菌株Y190,人胎脑cDNA文库亦转化到能稳定表达诱饵蛋白的Y190酵母菌株中,并铺到含有营养缺陷型培养基(SD/-Trp/-His/-Leu)的培养皿上进行初步筛选。所得阳性克隆再进行β-半乳糖苷酶克隆转移滤纸实验进一步去除假阳性。随机挑取部分阳性克隆,逐一转化入含有诱饵质粒的Y190酵母菌进行一对一验证。分离阳性克隆质粒测序,并应用生物信息学方法分析阳性克隆cDNA编码的蛋白。结果:确定了14种与ZNF580可能存在相互作用的蛋白。结论:初步探讨了ZNF580的功能及其可能参与的信号转导通路,为进一步研究转录因子ZNF580参与动脉粥样硬化的机制奠定了实验基础。 展开更多
关键词 ZNF580 转录因子 酵母双杂交 蛋白相互作用
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miR-580-3p靶向COL11A1调控肝癌细胞凋亡 被引量：1
14
作者 白亮 王宝太 +2 位作者 高志峰 蒋安 梁金强 《中南医学科学杂志》 CAS 2022年第6期805-808,882,共5页
目的探究miR-580-3p靶向COL11A1调控肝癌细胞凋亡的机制。方法纳入肝细胞癌(HCC)患者42例,实时荧光定量PCR检测肝癌组织、癌旁组织、人正常肝细胞(LO2、QSG-7701)和人肝癌细胞系(HepG2、Huh-7、Li-7、SK-Hep-1)中COL11A1 mRNA和miR-580... 目的探究miR-580-3p靶向COL11A1调控肝癌细胞凋亡的机制。方法纳入肝细胞癌(HCC)患者42例,实时荧光定量PCR检测肝癌组织、癌旁组织、人正常肝细胞(LO2、QSG-7701)和人肝癌细胞系(HepG2、Huh-7、Li-7、SK-Hep-1)中COL11A1 mRNA和miR-580-3p表达水平。过表达和敲低miR-580-3p后,CCK8法检测肝癌细胞增殖水平,流式细胞术检测细胞的凋亡水平和细胞周期。免疫印迹分析肝癌关键通路Akt/PI3K在miR-580-3p中的作用。结果与癌旁组织比较,肝癌组织COL11A1 mRNA表达升高,miR-580-3p表达降低;与人正常肝细胞系比较,人肝癌细胞系miR-580-3p表达降低、COL11A1 mRNA表达升高(P<0.05)。COL11A1mRNA与miR-580-3p表达呈负相关(P<0.05)。miR-580-3p过表达后,人肝癌细胞的增殖水平、COL11A1 mRNA降低,凋亡率升高;miR-580-3p敲低后上述趋势反之,细胞周期停滞在G1/S期。人肝癌细胞凋亡率COL11A1过表达后降低,敲低后升高。p-Akt、p-PI3K表达在敲低COL11A1或过表达miR-580-3p后降低,过表达COL11A1或敲低miR-580-3p后升高。结论肝癌细胞和肝癌组织miR-580-3p表达水平降低,miR-580-3p/COL11A1轴可能通过调控PI3K/Akt通路影响肝癌细胞凋亡。 展开更多
关键词 miR-580-3p COL11A1 肝癌 细胞凋亡 PI3K/AKT通路
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ZNF580基因对人脐静脉内皮细胞增殖和迁移的影响 被引量：2
15
作者 张文成 韦淑萍 +2 位作者 孙慧燕 侯兵 呼文亮 《武警医学院学报》 CAS 2011年第8期605-608,F0002,共5页
【目的】研究人C2H2型锌指蛋白基因ZNF580在人脐静脉内皮细胞增殖和迁移中的作用。【方法】利用细胞转染技术获得瞬时过表达ZNF580的EA.hy926内皮细胞,并用半定量RT-PCR、Western blotting法检测ZNF580的表达情况;采用MTT比色法和细胞... 【目的】研究人C2H2型锌指蛋白基因ZNF580在人脐静脉内皮细胞增殖和迁移中的作用。【方法】利用细胞转染技术获得瞬时过表达ZNF580的EA.hy926内皮细胞,并用半定量RT-PCR、Western blotting法检测ZNF580的表达情况;采用MTT比色法和细胞迁移实验检测ZNF580对内皮细胞功能的影响。【结果】获得瞬时过表达ZNF580的内皮细胞(转染效率为60%),且ZNF580基因过表达内皮细胞增殖和迁移能力分别增强3倍和2.5倍。【结论】ZNF580能够促进内皮细胞增殖和迁移。 展开更多
关键词 ZNF580 锌指基因 内皮细胞 增殖 迁移
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C57BL/6小鼠ZFP580 C端编码基因的克隆及序列分析 被引量：3
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作者 孙慧燕 孟祥艳 +3 位作者 孔麟麟 罗玉玉 朱晔斌 张文成 《武警医学院学报》 CAS 2008年第12期1037-1040,共4页
【目的】克隆C57BL/6小鼠ZFP580 C端编码基因cDNA序列,并进行序列测定和分析。【方法】参照GENBANK公布的C57BL/6小鼠ZFP580 cDNA序列(注册号为AK005257),根据ZFP580 C端编码基因cDNA序列设计1对引物,采用RT-PCR技术,从C57BL/6小鼠的肾... 【目的】克隆C57BL/6小鼠ZFP580 C端编码基因cDNA序列,并进行序列测定和分析。【方法】参照GENBANK公布的C57BL/6小鼠ZFP580 cDNA序列(注册号为AK005257),根据ZFP580 C端编码基因cDNA序列设计1对引物,采用RT-PCR技术,从C57BL/6小鼠的肾脏组织中扩增ZFP580 C端编码基因cDNA序列,回收纯化后与T载体连接,构建重组子pMD18-T-ZFP580,转化大肠杆菌DH5α。阳性克隆以限制性酶切分析与PCR法鉴定后,测定序列并分析。【结果】自C57BL/6小鼠肾脏组织获得总RNA,扩增出255 bp的基因片段,成功构建阳性克隆重组子pMD-T-ZFP580,经双酶切和PCR鉴定与预期结果一致。所测定的C57BL/6小鼠ZFP580 C端基因cDNA序列与日本RIKEN基因组中心于GENBANK注册(注册号为AK005257)的完全一致,与人ZNF580 C端编码基因cDNA序列比较,核苷酸序列同源性为90%;该cDNA序列所编码的氨基酸序列与人ZNF580基因C端比较,同源性为100%,均编码有3个串联重复的C2H2型锌指蛋白主构域。其氨基酸序列与大鼠、犬、牛比较,同源性分别为100%、100%、98%。【结论】成功克隆C57BL/6小鼠ZFP580 C端编码基因,该基因在不同种属间高度保守。 展开更多
关键词 C57BL/6小鼠 ZFP580基因 基因克隆 序列分析
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锌指蛋白新基因ZNF580过表达对内皮细胞VEGF及MMP-2表达的影响 被引量：1
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作者 韦淑萍 孙慧艳 张文成 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第A10期1978-1978,共1页
关键词 ZNF580 内皮细胞 锌指蛋白 转染 重组质粒 细胞构建 下游靶 空载体 明胶酶谱法 脐静脉
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绿色荧光蛋白报告基因与ZNF580基因重组真核表达载体的构建与鉴定 被引量：2
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作者 张文成 扎拉嘎胡 +1 位作者 陈莉 买霞 《武警医学院学报》 CAS 2005年第1期8-10,共3页
【目的】构建具有绿色荧光蛋白报告 (GFP)基因的ZNF5 80真核表达载体 ,为转染细胞提供基础。【方法】根据ZNF5 80cDNA序列的开读框架设计上、下游引物 ,利用PCR技术扩增ZNF5 80cDNA开放阅读框序列 ,将PCR目的片段与PGEM T载体连接并克... 【目的】构建具有绿色荧光蛋白报告 (GFP)基因的ZNF5 80真核表达载体 ,为转染细胞提供基础。【方法】根据ZNF5 80cDNA序列的开读框架设计上、下游引物 ,利用PCR技术扩增ZNF5 80cDNA开放阅读框序列 ,将PCR目的片段与PGEM T载体连接并克隆 ,酶切含目的片段PGEM T质粒及 pEGFP C1载体 ,回收纯化后做定向克隆连接 ,BglⅡ及HindⅢ双酶切电泳筛选、鉴定并测序。【结果】酶切 pEGFP C1 ZNF5 80 ,电泳分析插入片段长度为 :5 2 4bp ,与预期的结果一致 ,经连接点两端进行测序 ,测序结果显示接头两端序列连接正确。【结论】成功构建真核表达载体pEGFP C1 ZNF5 80。 展开更多
关键词 ZNF580 真核表达载体 绿色荧光蛋白
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锌指基因ZFP580参与大鼠心肌缺血-再灌注损伤及修复的研究 被引量：1
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作者 孟祥艳 张文成 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第A10期1989-1989,共1页
关键词 ZFP580 大鼠 锌指 再灌注 细胞保护作用 免疫组化分析 左旋精氨酸 修复过程
暂未订购
siRNA沉默ZNF580基因对内皮细胞MMP-2的表达及侵袭能力的影响 被引量：1
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作者 韦淑萍 孙慧燕 +1 位作者 牟心红 张文成 《武警医学院学报》 CAS 2011年第7期521-524,F0003,共5页
【目的】观察ZNF580基因沉默后内皮细胞MMP-2的表达及迁移和侵袭能力的变化,为探讨ZNF580基因功能提供科学依据。【方法】针对ZNF580基因不同部位设计并化学合成3对不同靶向小干扰RNA(siRNA),脂质体介导瞬时转染EA.hy926内皮细胞;应用... 【目的】观察ZNF580基因沉默后内皮细胞MMP-2的表达及迁移和侵袭能力的变化,为探讨ZNF580基因功能提供科学依据。【方法】针对ZNF580基因不同部位设计并化学合成3对不同靶向小干扰RNA(siRNA),脂质体介导瞬时转染EA.hy926内皮细胞;应用半定量RT-PCR、Western blotting及明胶酶谱检测转染前后内皮细胞ZNF580和MMP-2 mRNA、蛋白的表达及活性变化;运用划痕愈合实验和Transwell小室模型检测转染前后内皮细胞迁移和侵袭能力的改变。【结果】筛选出最佳干扰序列siRNA序列3;下调ZNF580基因表达后,MMP-2 mRNA的表达及明胶酶的活性均下调(P<0.05),且内皮细胞体外迁移和侵袭能力显著降低(P<0.01)。【结论】ZNF580在内皮细胞运动转移过程中具有重要作用,可能成为肿瘤基因治疗的一个新靶点。 展开更多
关键词 ZNF580 RNA干扰 内皮细胞 MMP-2 迁移
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