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腺病毒12型E1B 55kD癌蛋白与人Daxx相互作用 被引量:2
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作者 万艳平 吴移谋 +1 位作者 谭立志 廖端芳 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期22-24,共3页
目的研究腺病毒(adenovirus,Ad)12型E1B 55kD癌蛋白(ad12 E1B 55kD)与人Daxx(human Daxx,hDaxx)的相互作用及作用部位。方法利用细胞内外共免疫沉淀反应研究Ad12 E1B 55kD与bDaxx的直接结合反应,通过酵母双杂交体系测定两种蛋白质的相... 目的研究腺病毒(adenovirus,Ad)12型E1B 55kD癌蛋白(ad12 E1B 55kD)与人Daxx(human Daxx,hDaxx)的相互作用及作用部位。方法利用细胞内外共免疫沉淀反应研究Ad12 E1B 55kD与bDaxx的直接结合反应,通过酵母双杂交体系测定两种蛋白质的相互作用。结果酵母双杂交试验结果显示Ad12 E1B 55kD通过全序列氨基酸(amino acid,aa)与hDaxx结合并发生相互作用。共免疫沉淀反应和Western blot结果证实Ad12 E1B 55KD能在细胞内外与hDaxx直接结合。结论Ad12 E1B55kD与hDaxx结合并发生相互作用。 展开更多
关键词 腺病毒12型E1B55kd癌蛋白 人Daxx 酵母双杂交测定 相互作用
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腺病毒E1B55kD癌蛋白与hDaxx的相互作用 被引量:2
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作者 万艳平 吴移谋 +1 位作者 谭立志 廖端芳 《中国病毒学》 CSCD 2002年第3期230-233,共4页
为了探讨腺病毒 (adenovirus,Ad)E1B 5 5kD癌蛋白 (AdE1B 5 5kD)打破hDaxx和PML共定位细胞核的作用机制 ,本文利用体内外共免疫沉淀反应研究AdE1B 5 5kD与hDaxx的结合反应 ,并通过酵母双杂交体系测定两种蛋白质的相互作用及其作用的氨... 为了探讨腺病毒 (adenovirus,Ad)E1B 5 5kD癌蛋白 (AdE1B 5 5kD)打破hDaxx和PML共定位细胞核的作用机制 ,本文利用体内外共免疫沉淀反应研究AdE1B 5 5kD与hDaxx的结合反应 ,并通过酵母双杂交体系测定两种蛋白质的相互作用及其作用的氨基酸残基序列。结果显示 :Ad2E1B 5 5kD通过C端 5 8个氨基酸 (aa)与hDaxx结合并发生相互作用。Ad12E1B 5 5kD与hDaxx结合需全序列aa及其构象。共免疫沉淀反应和Westernblot结果证实Ad2 / 5或Ad12E1B 5 展开更多
关键词 腺病毒 E1B55kd癌蛋白 HDAXX 相互作用
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hDaxx与12型腺病毒E1B 55KD癌蛋白在体内外的结合反应
3
作者 万艳平 吴移谋 +3 位作者 粟盛梅 余敏君 尹卫国 杨长顺 《实用预防医学》 CAS 2002年第4期293-295,共3页
目的 研究 12型腺病毒 (Adenovirus12 ,Ad12 ) E1B5 5 KD癌蛋白 (Ad12 E1B5 5 KD)打破 h Daxx与急性早幼粒细胞性白血病蛋白 (promyelocytic leukemia protein,PML)在细胞核共定位的机制。 方法 构建 h Daxx原核细胞表达质粒 p QE30 ... 目的 研究 12型腺病毒 (Adenovirus12 ,Ad12 ) E1B5 5 KD癌蛋白 (Ad12 E1B5 5 KD)打破 h Daxx与急性早幼粒细胞性白血病蛋白 (promyelocytic leukemia protein,PML)在细胞核共定位的机制。 方法 构建 h Daxx原核细胞表达质粒 p QE30 / h Daxx,并在大肠杆菌 (E.coli) BL2 1中诱导表达 ,用镍—氮基三乙酸 (Ni- NTA)琼脂糖加以纯化。通过体内外共免疫沉淀反应 ,Western blot方法研究 h Daxx与 Ad12 E1B5 5 KD直接结合反应。 结果 质粒 p QE30 / h Daxx在E.coli BL2 1中成功诱导表达了 h Daxx,其 N端有 6个组氨酸分子附着 (6 His- h Daxx)。Western blot结果显示 h Daxx在体内外与 Ad12 E1B5 5 KD发生直接结合反应。 结论 表达并获得纯化的 6 His- h Daxx,h Daxx能在体内外与 Ad12 E1B5 5 KD直接结合。 展开更多
关键词 HDAXX 12型腺病毒E1B 55kd癌蛋白 共免疫沉淀反应 急性早幼粒细胞性白血病
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腺病毒2型E1B55KD癌蛋白与hDaxx相互作用
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作者 万艳平 吴移谋 谭立志 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 2003年第2期10-12,共3页
目的 :研究腺病毒 (adenovirus ,Ad) 2型E1B 5 5KD癌蛋白 (Ad2E1B 5 5KD)与人Daxx(humanDaxx ,hDaxx)的相互作用及作用部位。方法 :利用共免疫沉淀反应研究Ad2 / 5E1B 5 5KD与hDaxx的结合反应 ,通过酵母双杂交体系测定两种蛋白质的相互... 目的 :研究腺病毒 (adenovirus ,Ad) 2型E1B 5 5KD癌蛋白 (Ad2E1B 5 5KD)与人Daxx(humanDaxx ,hDaxx)的相互作用及作用部位。方法 :利用共免疫沉淀反应研究Ad2 / 5E1B 5 5KD与hDaxx的结合反应 ,通过酵母双杂交体系测定两种蛋白质的相互作用。结果 :酵母双杂交试验结果显示Ad2E1B 5 5KD通过C端 5 8个氨基酸 (aminoacid ,aa)与hDaxx结合并发生相互作用。共免疫沉淀反应和Westernblot结果证实Ad2 / 5E1B 5 5KD能在细胞内外与hDaxx直接结合。结论 :Ad2E1B 5 5KD与hDaxx结合并发生相互作用。 展开更多
关键词 腺病毒2型E1B 55kd癌蛋白 HDAXX 酵母双杂交测定 相互作用
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E1B-55KD基因缺陷腺病毒联合热疗对肿瘤的治疗作用
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作者 张丽娟 吴英 +6 位作者 叶琳 罗阳 刘冀 孙涛 宋文 闫萍 张旭 《沈阳医学院学报》 2009年第3期148-150,共3页
目的:通过基因治疗与温热治疗方法相结合,观测两者治疗手段是否有协同作用。方法:将40只荷瘤小鼠随机分为4组,A组:E1B-55KD基因缺陷腺病毒感染组;B组:温热治疗组;C组:E1B-55KD基因缺陷腺病毒感染+温热治疗组;D组:空白对照组。治疗前后... 目的:通过基因治疗与温热治疗方法相结合,观测两者治疗手段是否有协同作用。方法:将40只荷瘤小鼠随机分为4组,A组:E1B-55KD基因缺陷腺病毒感染组;B组:温热治疗组;C组:E1B-55KD基因缺陷腺病毒感染+温热治疗组;D组:空白对照组。治疗前后测量瘤体直径,实验前后取瘤体称重;Western蛋白分析对HSP进行定位、定量检测;流式细胞仪进行T细胞亚群检测,计算CD3+、CD4+、CD8+细胞含量,CD4+/CD8+值。结果:(1)A、B、C组肿瘤体积较D组均有减少,提示与对照组相比,各治疗组均有不同程度的肿瘤抑制作用,而C组小鼠肿瘤生长受抑最为明显。(2)A、B、C组瘤重分别与D组比较,结果均有减少,其中C组减少最为明显。(3)B、C两组小鼠肿瘤组织经加热后,细胞浆内的热休克蛋白较未加热的A、D两组明显增加。(4)A、B、C组与D组相比较CD8(CTL)均有提高,而以C组t最为显著,提示联合治疗组对CTL增殖的刺激作用更加显著。结论:E1B-55KD基因缺陷腺病毒联合热疗对肿瘤的治疗有协同作用。 展开更多
关键词 E1B-55kd基因 腺病毒 热疗 热休克蛋白
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癌特异性双靶向载体的安全性及其携带基因的杀伤性 被引量:10
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作者 王娟 顾锦法 +4 位作者 杨水云 肖田 齐荣 孙兰英 刘新垣 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第4期385-392,共8页
背景与目的:我们创导的“癌症的靶向双基因-病毒治疗”策略可消灭移植性肿瘤,目前最重要的是要提高其安全性,使其只靶向肿瘤细胞,而在正常细胞内不复制或者很少复制。本研究旨在构建肿瘤特异性的双靶向腺病毒TD55,并研究其安全性;在TD5... 背景与目的:我们创导的“癌症的靶向双基因-病毒治疗”策略可消灭移植性肿瘤,目前最重要的是要提高其安全性,使其只靶向肿瘤细胞,而在正常细胞内不复制或者很少复制。本研究旨在构建肿瘤特异性的双靶向腺病毒TD55,并研究其安全性;在TD55中插入凋亡基因TRAIL,构建成TD55-TRAIL,研究其杀伤性。方法:用hTERT启动子控制腺病毒复制必需的E1A基因,并将E1B55KD基因删除,构建肿瘤特异性的双靶向腺病毒TD55,使其只靶向p53功能缺乏的肿瘤。在TD55中插入凋亡基因TRAIL,构建成TD55-TRAIL,通过分子克隆构建质粒pTD55和pTD55-TRAIL,并与包装腺病毒的大质粒pBHGE3在293细胞中同源重组,得到腺病毒TD55和TD55-TRAIL。构建好的病毒体外感染人胚肺细胞MRC5、WI38,人结肠癌细胞SW620、HCT116、人肺癌细胞A549,分别用结晶紫染色法和MTT法检测其对细胞生长的影响。用流式细胞仪测定肿瘤细胞的凋亡率。结果:结晶紫染色结果和MTT结果表明,双靶向腺病毒TD55-TRAIL对正常细胞MRC5和WI38的杀伤作用比ZD55-TRAIL小很多。病毒复制能力分析表明,单靶向腺病毒在正常细胞中的复制倍数是双靶向腺病毒的3~5倍。TD55和TD55-TRAIL均能引起SW620细胞的凋亡,后者是前者的3.3倍。结论:双靶向腺病毒TD55-TRAIL对正常细胞的安全性比以往所构建的单靶向腺病毒ZD55-TRAIL更好,说明双靶向载体TD55比单靶向载体ZD55靶向性更高,如做为治疗药物可增加安全性,在治疗中可大大增加药物的安全性。携带的TRAIL基因能引起肿瘤细胞的凋亡,杀伤力较TD55增加数倍。 展开更多
关键词 肿瘤 生物疗法 溶瘤腺病毒 HTERT启动子 E1B 55kd基因 TD55
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HSP70、突变型P53在复发性、耐药性卵巢癌中的表达及临床意义 被引量:3
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作者 李雅静 石红 《山西职工医学院学报》 CAS 2012年第6期15-19,共5页
目的:探讨卵巢初治和复发上皮癌组织中热休克蛋白70(HSP70)与突变型P53(mtP53)的表达情况及其在临床应用E1B-55KD缺陷型腺病毒联合化疗治疗卵巢癌中的意义,探索一种新的治疗方法。方法:采用免疫组化方法测定卵巢肿瘤组织中HSP70与mtP53... 目的:探讨卵巢初治和复发上皮癌组织中热休克蛋白70(HSP70)与突变型P53(mtP53)的表达情况及其在临床应用E1B-55KD缺陷型腺病毒联合化疗治疗卵巢癌中的意义,探索一种新的治疗方法。方法:采用免疫组化方法测定卵巢肿瘤组织中HSP70与mtP53的表达情况。同时用Western blot法测定卵巢癌患者血浆中HSP70在手术和化疗前后的表达情况。结果:卵巢癌组织中,复发性卵巢癌HSP70、mtP53阳性率明显高于初治卵巢癌(P<0.05);HSP70和mtP53的阳性强度在进展期、低分化卵巢癌中明显高于早期、高分化卵巢癌(P<0.05)。卵巢癌中HSP70和mtP53共同阳性率为55.9%(33/59);其中复发癌组织中,HSP70和mtP53共同阳性率明显高于初治癌。复发卵巢癌中,铂类耐药型卵巢癌HSP70、mtP53阳性率明显高于非耐药组(P<0.05)。血浆中HSP70在手术后第2~4天及化疗后第2天明显增高,术后第6天及化疗后第4天恢复原水平。结论:HSP70与mtP53在复发、耐药性卵巢癌中的高表达,使溶瘤性腺病毒的应用成为可能,腺病毒应用时机选择在手术或化疗后2 d之内可能效果更佳。 展开更多
关键词 卵巢癌 MTP53 HSP70 E1B-55kd缺陷型腺病毒
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BINDING AND INTERACTION OF TRANSCRIPTIONAL REGULATOR HUMAN DAXX WITH ADENOVIRUS12 E1B 55 KILODALTON ONCOPROTEIN 被引量:2
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作者 万艳平 吴移谋 +3 位作者 朱翠明 谭立志 余敏君 廖端芳 《Chinese Journal of Cancer Research》 SCIE CAS CSCD 2003年第4期273-276,共4页
Objective: To study the disruption of co- localization of human Daxx(hDaxx) with promyelocytic leukemia protein(PML) at the PML oncogenic domains (PODs) by the interaction of hDaxx with adenovirus(Ad) 12 E1B 55 Kiloda... Objective: To study the disruption of co- localization of human Daxx(hDaxx) with promyelocytic leukemia protein(PML) at the PML oncogenic domains (PODs) by the interaction of hDaxx with adenovirus(Ad) 12 E1B 55 Kilodalton Oncoprotein (Ad12 E1B 55kD). Methods: The direct binding reaction of hDaxx and Ad12 E1B 55kD was analyzed by coimmunoprecipitation and Western blotting in vivo or in vitro. The interaction of hDaxx with Ad12 E1B 55kD was studied using yeast two-hybrid assay. Results: hDaxx bounded directly to Ad12 E1B 55kD in vivo and in vitro. hDaxx interacted with full length Ad12 E1B 55kD. Conclusion: Transcriptional regulator hDaxx directly binds to and interacts with Ad12 E1B 55kD. 展开更多
关键词 Human Daxx Ad12 E1B 55kd BINDING INTERACTION
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