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六味地黄丸通过调节髓源性抑制细胞对4T1细胞EMT及CSC特性表达的影响
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作者 郑里翔 黄玲 +2 位作者 郭慧文 龚碧瑶 任小英 《中国实验方剂学杂志》 北大核心 2025年第12期1-10,共10页
目的:探究六味地黄丸含药血清(Liuwei Dihuangwan drug-containing serum,LDP)通过调节髓源性抑制细胞(MDSCs)对三阴性乳腺癌4T1细胞上皮间充质转化(EMT)及癌症干细胞(CSC)特性表达的影响。方法:SPF级雌性SD大鼠随机分为3组,分别予以0.3... 目的:探究六味地黄丸含药血清(Liuwei Dihuangwan drug-containing serum,LDP)通过调节髓源性抑制细胞(MDSCs)对三阴性乳腺癌4T1细胞上皮间充质转化(EMT)及癌症干细胞(CSC)特性表达的影响。方法:SPF级雌性SD大鼠随机分为3组,分别予以0.39、1.94、3.89 g·kg^(-1)·d^(-1)的六味地黄丸混悬液灌胃7 d后制备低、中、高LDP。将4T1细胞接种于SPF级雌性Balb/c小鼠乳腺皮下构建移植瘤小鼠模型,提取胫骨和股骨中骨髓细胞,在体外诱导成MDSCs。4T1与MDSCs细胞活力测定采用细胞增殖与活性检测(CCK-8)法;流式细胞术(FC)检测MDSCs数量及4T1细胞CSC表面标记物CD44、CD24的表达;细胞划痕实验、Transwell侵袭实验、平板克隆形成实验分别检测4T1细胞的迁移、侵袭和增殖能力;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测转化生长因子-β(TGF-β)、核转录因子-κB(NF-κB)、趋化因子配体2(CXCL2)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)蛋白表达;免疫荧光(IF)检测EMT相关蛋白E-cadherin、N-cadherin的表达。结果:与正常组比较,LDP对4T1细胞的细胞活力无明显的抑制作用,可明显降低MDSCs活力、数量及TGF-β蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。4T1细胞与MDSCs共培养后,4T1细胞迁移、侵袭和增殖能力均增加(P<0.05,P<0.01);NF-κB、CXCL2、N-cadherin表达及CSC(CD44^(+)CD24^(-))占比升高(P<0.05,P<0.01),E-cadherin表达降低(P<0.05)。LDP干预MDSCs后,再与4T1共培养,4T1细胞迁移、侵袭和增殖能力显著降低(P<0.01),NF-κB、CXCL2、N-cadherin表达均有所降低(P<0.05,P<0.01),E-cadherin表达明显升高(P<0.05,P<0.01),而对CSC(CD44^(+)CD24^(-))在4T1细胞中的占比差异无统计学意义,但LDP干预4T1细胞与MDSCs的共培养体系,CSC(CD44^(+)CD24^(-))占比下降(P<0.05,P<0.01)。结论:LDP可降低MDSCs活力、数量及TGF-β、NF-κB及CXCL2的表达,逆转EMT及降低CSC特性表达,抑制4T1细胞的迁移、侵袭和增殖。 展开更多
关键词 六味地黄丸含药血清 4t1细胞 髓源性抑制细胞 上皮间充质转化 干细胞特性
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α-常春藤皂苷通过调控PI3K/Akt信号通路对乳腺癌4T1细胞增殖、迁移和凋亡的影响
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作者 王倩 马春宇 《中成药》 北大核心 2025年第5期1502-1508,共7页
目的 探讨α-常春藤皂苷对乳腺癌4T1细胞增殖、迁移和凋亡的影响。方法 用不同浓度α-常春藤皂苷(0、10、20、30、40、50、60μmol/L)处理4T1细胞,MTT法检测α-常春藤皂苷对4T1细胞增殖的影响。用不同浓度α-常春藤皂苷(0、10、20、30... 目的 探讨α-常春藤皂苷对乳腺癌4T1细胞增殖、迁移和凋亡的影响。方法 用不同浓度α-常春藤皂苷(0、10、20、30、40、50、60μmol/L)处理4T1细胞,MTT法检测α-常春藤皂苷对4T1细胞增殖的影响。用不同浓度α-常春藤皂苷(0、10、20、30、40μmol/L)处理4T1细胞,观察细胞形态;克隆形成实验检测细胞克隆形成能力;Hoechst 33342染色法检测细胞凋亡情况;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;细胞划痕实验观察细胞迁移能力;Western blot法检测细胞PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、Bax、Bcl-2、cleaved Caspase3、cleaved PARP、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白表达。结果 10~60μmol/L α-常春藤皂苷呈浓度依赖性地抑制4T1细胞增殖(P<0.01),其作用24 h的IC_(50)值约为29.8μmol/L。与对照组(0μmol/L)比较,α-常春藤皂苷30、40μmol/L组4T1细胞形态改变;细胞克隆形成能力下降(P<0.01);凋亡细胞数量增加(P<0.01);细胞凋亡率升高(P,<0.01);细胞迁移能力降低(P<0.01);p-PI3K、p-Akt、Bcl-2、N-cadherin、Vimentin蛋白表达降低(P<0.01),Bax、cleaved Caspase3、cleaved PARP、E-cadherin蛋白表达升高(P<0.01)。结论 常春藤皂苷可能通过抑制PI3K/Akt信号通路激活抑制乳腺癌4T1细胞增殖、迁移,并诱导其凋亡。 展开更多
关键词 α-常春藤皂苷 乳腺癌4t1细胞 PI3K/AKT信号通路 增殖 迁移 凋亡
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运用慢病毒系统构建稳定表达CD19-FLUC-GFP的4T1细胞系
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作者 郭雨洁 程奕宁 +1 位作者 汪洋 刘滨磊 《湖北工业大学学报》 2025年第2期68-72,共5页
为构建稳定表达CD19、萤火虫荧光素酶(FLUC)和绿色荧光蛋白(GFP)的乳腺癌4T1细胞系,以用作CD19嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)的靶细胞模型,通过提取质粒、慢病毒包装及浓缩,感染4T1细胞后,经嘌呤霉素筛选和有限稀释法获得单克隆稳转细胞株4T... 为构建稳定表达CD19、萤火虫荧光素酶(FLUC)和绿色荧光蛋白(GFP)的乳腺癌4T1细胞系,以用作CD19嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)的靶细胞模型,通过提取质粒、慢病毒包装及浓缩,感染4T1细胞后,经嘌呤霉素筛选和有限稀释法获得单克隆稳转细胞株4T1-CD19-FLUC-GFP。实时定量PCR和流式细胞术检测显示,4T1-CD19-FLUC-GFP细胞中CD19的mRNA和膜蛋白表达水平显著高于对照组4T1细胞。体内实验中,腋下植瘤4T1-CD19-FLUC-GFP细胞一周后,活体成像仪可检测到腋下部位的荧光信号。结果表明,成功构建了稳定表达CD19-FLUC-GFP的4T1细胞株,为CAR-T细胞抗肿瘤疗效机制研究提供了可靠的靶细胞模型和研究基础。 展开更多
关键词 4t1细胞 慢病毒 CD19 绿色荧光蛋白 萤火虫荧光素酶
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基于PI3K/Akt信号通路探讨连翘归尾煎对4T1乳腺癌荷瘤小鼠肿瘤抑制作用及机制
4
作者 陈瑾 雒慧娟 +2 位作者 翟康欣 遆安航 张淑蓉 《山西中医药大学学报》 2025年第6期610-615,共6页
目的:基于PI3K/Akt信号通路研究连翘归尾煎对4T1乳腺癌荷瘤小鼠的影响,探讨连翘归尾煎抗乳腺癌的作用及机制。方法:将小鼠4T1乳腺癌细胞接种于18只BALB/c小鼠建立乳腺癌荷瘤小鼠模型,随机分为模型组(生理盐水,灌胃给药)、CTX组(环磷酰胺... 目的:基于PI3K/Akt信号通路研究连翘归尾煎对4T1乳腺癌荷瘤小鼠的影响,探讨连翘归尾煎抗乳腺癌的作用及机制。方法:将小鼠4T1乳腺癌细胞接种于18只BALB/c小鼠建立乳腺癌荷瘤小鼠模型,随机分为模型组(生理盐水,灌胃给药)、CTX组(环磷酰胺,20 mg/kg·d,腹腔注射给药)、连翘归尾煎组(8.6 g/kg·d,灌胃给药),每组6只,连续给药14 d,观察小鼠体质量、肿瘤重量、体积的变化,计算肿瘤抑制率;HE染色观察肿瘤组织形态学变化;TUNEL法检测肿瘤组织细胞的凋亡;Western blot法检测肿瘤组织中PI3K/Akt信号通路相关蛋白PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt表达水平,以及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9表达水平。结果:与模型组比较,连翘归尾煎组乳腺癌小鼠的肿瘤质量明显降低,肿瘤抑制率为26.67%(P<0.05);HE染色结果显示连翘归尾煎可加重肿瘤组织坏死程度;TUNEL染色结果显示连翘归尾煎可诱导小鼠乳腺癌肿瘤组织细胞凋亡,凋亡率明显增加(P<0.05);Western blot实验结果显示连翘归尾煎可降低p-PI3K、p-Akt蛋白以及凋亡相关蛋白Bcl-2蛋白表达量,同时升高Bax、Caspase-3、Caspase-9蛋白表达量,Bax/Bcl-2显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论:连翘归尾煎能有效抑制4T1乳腺癌小鼠移植瘤生长,其作用机制可能是通过PI3K/Akt信号通路,调控相关凋亡蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9的表达水平。 展开更多
关键词 连翘归尾煎 乳腺癌 4t1乳腺癌细胞 PI3K/AKT信号通路 作用机制
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氧化石墨烯负载精氨酸纳米体系对乳腺癌4T1细胞的影响和生物安全性初步评价
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作者 谢黎崖 卓素联 +2 位作者 张真 侯振清 田海娜 《药物生物技术》 CAS 2024年第5期479-483,共5页
文章主要研究氧化石墨烯负载精氨酸纳米体系(GO-Arg-SL)对乳腺癌4T1细胞的影响,并对其进行生物安全性的初步评价。选择乳腺癌4T1细胞为研究对象,采用激光共聚焦荧光显微镜和流式细胞术观察GO-Arg-SL对4T1细胞产生NO的影响;采用MTT法和活... 文章主要研究氧化石墨烯负载精氨酸纳米体系(GO-Arg-SL)对乳腺癌4T1细胞的影响,并对其进行生物安全性的初步评价。选择乳腺癌4T1细胞为研究对象,采用激光共聚焦荧光显微镜和流式细胞术观察GO-Arg-SL对4T1细胞产生NO的影响;采用MTT法和活/死细胞染色法,观察4T1细胞的抑制和杀伤情况,评价GO-Arg-SL对4T1细胞的毒性;采用BALB/c小鼠进行生物安全性实验,观察溶血情况,检测血生化和血常规。结果表明,GO-Arg-SL能使4T1细胞内产生大量的NO;GO-Arg-SL能抑制4T1细胞的生长,加激光照射组的抑制和杀伤能力更强;溶血结果符合规定,血生化和血常规维持在正常范围内。说明GO-Arg-SL光热协同NO气体具有优异的细胞杀伤能力,并且具有良好的生物安全性。 展开更多
关键词 氧化石墨烯负载精氨酸纳米体系 4t1细胞 BALB/C小鼠 细胞毒性 活/死细胞染色法 生物安全性
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共载β-榄香烯和纳米氧化石墨烯的可注射型脂质体水凝胶治疗4T1乳腺癌的作用 被引量:1
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作者 王子昂 李一菁 +4 位作者 陈家琦 朱艳慧 王白燕 贾永艳 祝侠丽 《中国现代应用药学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第19期2608-2616,共9页
目的结合808 nm激光照射,探讨共载β-榄香烯(β-elemene,ELE)和甘草次酸修饰纳米氧化石墨烯(glycyrrhetinic acid modified nano graphene oxide,GA/NGO)的可注射型脂质体水凝胶(injectable liposome hydrogels,Lip-gel)用于4T1乳腺癌光... 目的结合808 nm激光照射,探讨共载β-榄香烯(β-elemene,ELE)和甘草次酸修饰纳米氧化石墨烯(glycyrrhetinic acid modified nano graphene oxide,GA/NGO)的可注射型脂质体水凝胶(injectable liposome hydrogels,Lip-gel)用于4T1乳腺癌光热-化协同靶向治疗。方法以4T1乳腺癌细胞为模型,采用MTT、激光共聚焦等技术进行细胞抑制和摄取试验;以4T1雌性BALB/c小鼠为模型,采用红外热成像、活体成像、ELISA等方法评价ELE-GA/NGO-Lip-gel的体内分布和抗肿瘤活性。结果与ELE溶液相比,ELE-GA/NGO-Lip-gel能够显著抑制4T1细胞的增殖(P<0.001),并具有浓度和时间依赖性。经瘤内注射给药后,ELE-GA/NGO-Lip-gel在荷瘤小鼠体内具有良好的光热转换效应,且在肿瘤组织的滞留时间较长。药效学试验中ELE-GA/NGO-Lip-gel组小鼠体质量无明显变化、相对肿瘤体积变化较小,HE和TUNEL病理切片结果显示ELE-GA/NGO-Lip-gel可引起荷瘤小鼠的肿瘤细胞出现大面积凋亡。ELE-GA/NGO-Lip-gel可显著降低荷瘤小鼠血清中TNF-α、IFN-γ、IL-6的含量(P<0.001)。结论ELE-GA/NGO-Lip-gel结合近红外光照射后对4T1乳腺癌的体内外抗肿瘤活性增强。 展开更多
关键词 Β-榄香烯 纳米氧化石墨烯 脂质体水凝胶 光热-化治疗 4t1乳腺癌
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基于PiggyBac转座系统构建稳定表达UL19基因的小鼠乳腺癌细胞系4T1 被引量:1
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作者 赵晓彤 王欣雅 +2 位作者 刘滨磊 胡翰 汪洋 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期4138-4148,共11页
为研究溶瘤Ⅱ型单纯疱疹病毒(oncolytic herpes simplex virus type 2,oHSV2)主要衣壳蛋白VP5蛋白(由UL19基因编码)调控免疫细胞抗肿瘤的机制,本研究通过PiggyBac转座系统构建了稳定表达VP5蛋白、近红外荧光蛋白(near-infrared fluoresc... 为研究溶瘤Ⅱ型单纯疱疹病毒(oncolytic herpes simplex virus type 2,oHSV2)主要衣壳蛋白VP5蛋白(由UL19基因编码)调控免疫细胞抗肿瘤的机制,本研究通过PiggyBac转座系统构建了稳定表达VP5蛋白、近红外荧光蛋白(near-infrared fluorescent protein,iRFP)和绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的小鼠乳腺癌细胞4T1-iRFP-VP5-GFP细胞系。通过流式细胞术及免疫印迹法筛选GFP及VP5高表达的单克隆细胞系,检测所构建细胞系中UL19基因表达稳定性。经SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR、免疫印迹法检测,连续传代至15代的4T1-iRFP-VP5-GFP细胞中的UL19基因拷贝数及VP5蛋白表达量均显著高于瞬转UL19基因的4T1细胞,证明UL19基因稳定插入至4T1细胞基因组中。实时无标记动态细胞分析技术(real time cellanalysis,RTCA)监测4T1-iRFP-VP5-GFP细胞显示具有与其亲代细胞4T1相似的生长活性。进一步研究证实,NK92细胞对4T1-iRFP-VP5-GFP细胞的杀伤能力显著高于4T1细胞。本研究为阐述VP5蛋白在4T1细胞中通过HLA-E分子调控包括T细胞、NK细胞在内的免疫细胞发挥抗肿瘤功能奠定了基础。 展开更多
关键词 溶瘤Ⅱ型单纯疱疹病毒 VP5蛋白 PiggyBac转座系统 4t1细胞
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水疱性口炎病毒对小鼠乳腺癌4T1细胞荷瘤小鼠抗肿瘤免疫、移植瘤生长与肺转移的影响
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作者 李玉迁 徐庆胜 +4 位作者 魏洪 王皞 王硕石 蒋立娜 袁心怡 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期452-461,共10页
目的:探究野生型水疱性口炎病毒印第安纳株(VSV-IN)对小鼠三阴性乳腺癌4T1细胞移植模型小鼠的免疫调节及肿瘤转移的影响。方法:VSV以MOI=1、MOI=10、MOI=100感染4T1细胞12、24、48 h后,CCK-8法检测4T1细胞死亡率,划痕愈合实验检测细胞... 目的:探究野生型水疱性口炎病毒印第安纳株(VSV-IN)对小鼠三阴性乳腺癌4T1细胞移植模型小鼠的免疫调节及肿瘤转移的影响。方法:VSV以MOI=1、MOI=10、MOI=100感染4T1细胞12、24、48 h后,CCK-8法检测4T1细胞死亡率,划痕愈合实验检测细胞迁移能力,qPCR检测细胞中E-cadherin、MMP-2、MMP-9 mRNA的表达。于雌性BALB/c小鼠脂肪垫接种1×10^(6)个/mL的4T1细胞0.1 mL,构建4T1细胞荷瘤小鼠模型,待小鼠肿瘤体积达200 mm3,分别向移植瘤内注射PBS、紫杉醇(TAX)(15 mg/kg)、VSV-IN(1×10^(6)pfu/只),每周1次。给药4次后,处死小鼠、剥离完整移植瘤组织,测量肿瘤体积及质量,肺组织病理切片经H-E染色后观察肿瘤肺部转移结节,流式细胞术检测脾组织中T细胞亚群比例,ELISA法检测小鼠血清IL-6及TNF-α水平,利用GEPIA在线分析乳腺肿中迁移相关蛋白mRNA的表达,免疫组化法检测肿瘤中MMP-2、MMP-9与E-cadherin的表达,利用蛋白-蛋白对接技术预测VSV-IN的G蛋白、M蛋白与ERK2、E-cadherin的亲和力。结果:经MOI=10、100的VSV-IN处理48 h后,4T1细胞死亡率显著高于对照组(均P<0.01);与对照组相比,VSV-IN组(MOI=10)细胞迁移率明显降低(P<0.01),MMP-9 mRNA的相对表达量明显降低(P<0.05);与对照组小鼠相比,VSV-IN组移植瘤生长较对照组减缓且终点体积显著减小(P<0.05),VSV-IN组小鼠肺转移结节数量显著减少[(12.86±1.86)vs(24±3.67)个,P<0.01],脾内CD4^(+)T、CD8^(+)T细胞比例显著升高(均P<0.05),血清TNF-α、IL-6含量显著升高(均P<0.01);GEPIA分析发现在乳腺癌中E-cadherin、MMP-9表达水平均高于癌旁组织(P<0.05);VSV-IN组小鼠肿瘤细胞内MMP-9表达明显低于对照组(P<0.05);VSV-IN的G、M蛋白与ERK2的结合自由能分别为–11.7 kcal/mol、–6.4 kcal/mol。结论:野生型VSV-IN可抑制4T1细胞荷瘤小鼠的移植瘤生长及转移,这可能与其促进抗肿瘤免疫及调控迁移相关蛋白表达有关。 展开更多
关键词 野生型水疱性口炎病毒 三阴性乳腺癌 4t1细胞 迁移 蛋白-蛋白对接
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桦褐孔菌提取物对4T1乳腺癌小鼠的抗肿瘤作用
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作者 韩超 赵金鹏 +1 位作者 李岩 石丽丽 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期988-991,1015,共5页
目的探究桦褐孔菌提取物对4T1荷瘤小鼠的体内抗肿瘤效果及其机制方法60只BALB/c雌性小鼠,随机数字法分为6组:空白对照组,4T1荷瘤模型组,25mg/kg环磷酰胺阳性对照组,桦褐孔菌提取物1、2、4g/kg剂量组,每组10只。除空白对照组外,将4T1小... 目的探究桦褐孔菌提取物对4T1荷瘤小鼠的体内抗肿瘤效果及其机制方法60只BALB/c雌性小鼠,随机数字法分为6组:空白对照组,4T1荷瘤模型组,25mg/kg环磷酰胺阳性对照组,桦褐孔菌提取物1、2、4g/kg剂量组,每组10只。除空白对照组外,将4T1小鼠乳腺癌细胞接种于小鼠胸部脂肪垫处5d,建立4T1荷瘤小鼠动物模型。阳性对照组和桦褐孔菌提取物干预组每天灌胃给予受试物一次,空白对照组和模型组灌胃等量蒸馏水,连续给药21d。称量小鼠体重、瘤重,计算抑瘤率、脾脏指数和胸腺指数,免疫组化法检测细胞周期相关蛋白CyclinB1、CyclinD1、CDK4表达情况,并进行瘤体组织病理学观察。结果小鼠在接种乳腺癌细胞第5天,接种部位均可触摸到结节,表明造模成功。与模型组比较,桦褐孔菌提取物低、中(P<0.05)和高(P<0.01)剂量组小鼠瘤重均减轻,抑瘤率为16.0%~34.4%,且抑瘤率随着桦褐孔菌提取物剂量增加而逐渐增加;桦褐孔菌提取物各剂量组脾脏指数明显高于模型组(P<0.05);桦褐孔菌提取物各剂量组小鼠瘤体中细胞周期蛋白CyclinB1、CyclinD1、CDK4的表达水平均下调,除低剂量组CDK4蛋白外,差异均有统计学意义(P<0.01),且随着桦褐孔菌提取物剂量的增加,周期蛋白的下调量也逐渐增加。病理分析表明桦褐孔菌提取物可抑制肿瘤细胞增殖,并导致肿瘤细胞发生坏死。结论桦褐孔菌提取物具有一定的抑制肿瘤生长作用,作用机制可能与抑制细胞周期蛋白表达相关。 展开更多
关键词 桦褐孔菌提取物 4t1荷瘤小鼠 抗肿瘤 细胞周期
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基于mRNA高通量测序初探雷帕霉素联合鞭毛蛋白体外抑制4T1乳腺癌细胞的机制
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作者 方云 陈曦 +4 位作者 张景 罗力 陈瑶 谭聪研 袁军 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期1629-1634,共6页
目的:利用mRNA高通量测序初步探讨雷帕霉素(Rapa)联合鞭毛蛋白(FliC)体外抑制4T1乳腺癌细胞的机制。方法:将4T1乳腺癌细胞分为对照(control)组、Rapa组、FliC组、Rapa+FliC组等4组,CCK-8法与流式细胞术检测细胞活力、凋亡的变化情况。同... 目的:利用mRNA高通量测序初步探讨雷帕霉素(Rapa)联合鞭毛蛋白(FliC)体外抑制4T1乳腺癌细胞的机制。方法:将4T1乳腺癌细胞分为对照(control)组、Rapa组、FliC组、Rapa+FliC组等4组,CCK-8法与流式细胞术检测细胞活力、凋亡的变化情况。同时,通过mRNA高通量测序,对差异表达基因(DEGs)进行KEGG通路分析;此外,通过STRING分析Rapa+FliC组与Rapa组两组间的DEGs,构建DEGs的蛋白相互作用(PPI)网络、筛选Hub基因。结果:CCK-8和流式细胞术检测结果显示,Rapa+FliC对4T1乳腺癌细胞的活力抑制率和凋亡率都显著高于Rapa和FliC(P<0.05)。转录组测序结果显示,Rapa组和control组之间共有579个DEGs,主要富集于PI3K/Akt等信号通路;FliC组和control组之间的DEGs主要富集于Nod样受体等信号通路;Rapa+FliC组与Rapa组之间共有150个DEGs,主要富集于mTOR等信号通路。从PPI网络中,成功筛选出Atm、Itga2等10个Hub基因。结论:Rapa+FliC可能通过PI3K/Akt/mTOR信号通路,在体外抑制4T1乳腺癌细胞活力,促进细胞凋亡;Atm和Itga2基因可能是两者联合作用的关键基因。 展开更多
关键词 mRNA高通量测序 4t1乳腺癌细胞 雷帕霉素 鞭毛蛋白
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白藜芦醇通过下调LRP5/6表达抑制小鼠乳腺癌4T1细胞增殖
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作者 温著珍 沃达 +1 位作者 朱伟东 任丹妮 《福建中医药》 2024年第6期29-34,共6页
目的通过体外实验研究白藜芦醇(RES)抑制小鼠乳腺癌4T1细胞增殖的作用机制。方法将处于对数生长期小鼠乳腺癌4T1细胞消化后接种于3.5 cm细胞皿中,分别加入0、2.5、5、10、20μmol/L的RES干预72 h,使用倒置显微镜拍照观察法和台盼蓝计数... 目的通过体外实验研究白藜芦醇(RES)抑制小鼠乳腺癌4T1细胞增殖的作用机制。方法将处于对数生长期小鼠乳腺癌4T1细胞消化后接种于3.5 cm细胞皿中,分别加入0、2.5、5、10、20μmol/L的RES干预72 h,使用倒置显微镜拍照观察法和台盼蓝计数法检测RES干预后细胞密度和活细胞浓度;Western blot检测低密度脂蛋白相关受体结合蛋白5(LRP5)、低密度脂蛋白相关受体结合蛋白6(LRP6)蛋白表达量。再将细胞分为对照组、RES组,分别加入0μmol/L和前述所筛选的最佳干预浓度的RES干预72 h,Western blot检测β-连环蛋白(β-catenin)核蛋白表达量。接着将细胞分为siCtr组、siLRP5组、siLRP6组、siβ-catenin组,siCtr组给予正常培养,siLRP5组加入LRP5小干扰RNA(siRNA)沉默LRP5基因,siLRP6组加入LRP6 siRNA沉默LRP6基因,siβ-catenin组加入β-catenin siRNA沉默β-catenin基因,使用倒置显微镜拍照和台盼蓝计数检测上述4组细胞密度和活细胞浓度;Western blot检测LRP5、LRP6和β-catenin蛋白表达量。最后将细胞分为Vector组、Vector+RES组、LRP5组、LRP5+RES组、LRP6组、LRP6+RES组、N端缺失的β-catenin突变体组(β-cateninΔN组)、β-cateninΔN+RES组,Vector组给予正常培养,Vector+RES组加入前述所筛选的最佳干预浓度的RES干预,LRP5组加入过表达LRP5质粒,LRP5+RES组加入过表达LRP5质粒联合RES最佳干预浓度,LRP6组加入过表达LRP6质粒,LRP6+RES组加入过表达LRP6质粒联合RES最佳干预浓度干预,β-cateninΔN组加入过表达β-cateninΔN质粒,β-cateninΔN+RES组加入过表达β-cateninΔN质粒联合10μmol/L的RES干预。使用倒置显微镜拍照和台盼蓝计数检测上述8组细胞密度和活细胞浓度;Western blot检测LRP5、LRP6和β-catenin蛋白表达量。结果与0μmol/L RES组比较,10、20μmol/L RES组细胞密度和活细胞浓度均降低(P<0.05),对LRP5、LRP6蛋白表达下调显著(P<0.05),故后续选用10μmol/L浓度的RES进行干预。与对照组比较,RES组β-catenin核蛋白表达量下调(P<0.05);与siCtr组比较,siLRP5组、siLRP6组和siβ-catenin组细胞密度和活细胞浓度降低(P<0.05);与Vector组比较,Vector+RES组细胞密度和活细胞浓度降低(P<0.05);与Vector+RES组比较,LRP5+RES组、LRP6+RES组和β-cateninΔN+RES组细胞密度和活细胞浓度升高(P<0.05)。结论白藜芦醇可阻止小鼠乳腺癌4T1细胞增殖,其机制与通过下调LRP5、LRP6表达抑制Wnt/β-catenin信号通路激活有关。 展开更多
关键词 乳腺癌 白藜芦醇 4t1细胞 LRP5/6 WNT/Β-CATENIN信号通路
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苗药血人参不同提取部位体内外对乳腺癌4T1细胞的影响 被引量:15
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作者 段丽 张永萍 +1 位作者 缪艳燕 傅建 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期2902-2907,共6页
目的研究血人参提取物体内外对乳腺癌4T1细胞的影响。方法采用MTT法检测血人参不同提取部位体外对4T1细胞的抗肿瘤活性,计算细胞增殖抑制率及半数抑制浓度(IC50);建立小鼠4T1实体瘤模型,随机分为模型组、血人参不同提取部位(石油醚部位... 目的研究血人参提取物体内外对乳腺癌4T1细胞的影响。方法采用MTT法检测血人参不同提取部位体外对4T1细胞的抗肿瘤活性,计算细胞增殖抑制率及半数抑制浓度(IC50);建立小鼠4T1实体瘤模型,随机分为模型组、血人参不同提取部位(石油醚部位、醋酸乙酯部位、正丁醇部位、水部位、乙醇提取物)组、顺铂组,给药15 d后观察小鼠脏器指数、体质量,计算抑瘤率,进行肿瘤病理切片,观察病理改变。结果血人参醋酸乙酯部位、正丁醇部位及乙醇提取物对4T1细胞的IC50值分别为228.9、323.4、322.6μg/m L;血人参石油醚部位组、醋酸乙酯部位组、正丁醇部位组、水部位组、乙醇提取物组及顺铂组对4T1荷瘤小鼠的抑瘤率分别为(55.88±6.68)%、(66.67±14.32)%、(65.71±12.38)%、(53.81±16.17)%、(43.73±25.73)%、(76.85±11.38)%;血人参不同提取部位组中,石油醚部位组具有降低脾指数、升高胸腺指数及白细胞介素(IL-2)水平的作用;从肿瘤体积和抑瘤率结果来看是醋酸乙酯部位最好。HE染色显示石油醚部位组肿瘤细胞明显比模型组少,细胞排列松散,病理性核分裂现象、肿瘤细胞浸润较模型组少,有少量淋巴细胞、巨噬细胞浸润。结论血人参提取物在体内外对4T1细胞生长具有一定的抑制作用,其体内作用机制可能是增强机体的免疫力,从而达到抑制肿瘤生长的效果。 展开更多
关键词 血人参提取物 抗肿瘤 乳腺癌4t1细胞 增殖 脏器指数 免疫功能
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BALB/c小鼠乳腺癌4T1细胞株移植模型的建立 被引量:14
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作者 严丽 李莉 +3 位作者 郝芳 申伟 张霖雷 郭浩 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期794-796,共3页
目的:应用来源于BALB/c小鼠的4T1乳腺癌细胞株建立BALB/c小鼠乳腺癌模型,选择最佳的模型制作方法。方法:90只BALB/c小鼠随机分为3组,每组30只,分别接种1×106ml-1、1×107ml-1、1×108ml-14T1乳腺癌细胞株细胞悬液。每组小... 目的:应用来源于BALB/c小鼠的4T1乳腺癌细胞株建立BALB/c小鼠乳腺癌模型,选择最佳的模型制作方法。方法:90只BALB/c小鼠随机分为3组,每组30只,分别接种1×106ml-1、1×107ml-1、1×108ml-14T1乳腺癌细胞株细胞悬液。每组小鼠再随机分两组分别接种于胸壁和侧腹壁。比较各组的成瘤时间、成瘤率和8周存活率,并用C-erbB-2免疫组化法检查肿瘤病理状态。结果:细胞浓度为1×107ml-1时,肿瘤成瘤率高,生长稳定;4T1细胞不同部位接种不影响成瘤率及生长;C-erbB-2免疫组织化学检查均为阳性。结论:应用1×107ml-1浓度的4T1细胞进行接种是最佳的模型制作方法。 展开更多
关键词 乳腺癌 BALBc小鼠 4t1细胞株
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雷公藤甲素通过抗ER磷酸化抑制小鼠4T1乳腺癌增殖作用研究 被引量:13
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作者 潘国凤 高建莉 +2 位作者 张奇 吕圭源 陈素红 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第23期4129-4133,共5页
雷公藤甲素(triptolide,TP)具有显著的抑制肿瘤作用。本研究采用MTT法和结晶紫染色法检测TP对小鼠乳腺癌细胞4T1增殖的影响;流式细胞仪检测TP诱导的4T1细胞凋亡率;Western blot检测4T1中相关蛋白雌激素受体α(estrogen reporterα,ERα)... 雷公藤甲素(triptolide,TP)具有显著的抑制肿瘤作用。本研究采用MTT法和结晶紫染色法检测TP对小鼠乳腺癌细胞4T1增殖的影响;流式细胞仪检测TP诱导的4T1细胞凋亡率;Western blot检测4T1中相关蛋白雌激素受体α(estrogen reporterα,ERα),磷酸化ERα(p-ERα),ERβ,p-ERβ,细胞外信号调节的蛋白激酶(ERK),p-ERK,p38,p-p38,c-Jun氨基末端激酶(SAPK/JNK),p-SAPK/JNK的表达。给药30 d后,活体荧光示踪技术观察TP对4T1-Luc细胞接种的BALB/c雌性小鼠乳腺癌的荧光强度,同时检测肿瘤体积和质量,计算抑瘤率。肿瘤组织苏木素-伊红(HE)染色后观察病理变化;免疫组织化学法(IHC)分析肿瘤组织ERα及ERβ的表达情况。发现TP体外浓度为100,10,1,0.1μmol·L-1时可显著抑制4T1乳腺癌细胞的增殖,诱导细胞凋亡。TP剂量为200μg·kg-1时能抑制小鼠乳腺癌的增殖,TP的抗乳腺癌增殖作用与降低ERα,ERβ的磷酸化密切相关,但与MAPK通路的活化无明显相关性。 展开更多
关键词 雷公藤甲素 小鼠4t1乳腺癌细胞 抑制增殖 雌激素受体 活体荧光示踪
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贝母素甲、贝母素乙对4T1乳腺癌细胞炎性微环境的干预调节作用 被引量:17
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作者 张玉人 林洪生 张英 《中国中医基础医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1504-1506,共3页
目的:研究贝母素甲、乙对4T1乳腺癌细胞的干预抑制及对其肿瘤炎性微环境的调节作用。方法:CCK-8检测贝母素甲、乙对4T1细胞抑制率;ELISA法检测炎性相关因子TGF-β、VEGF、MMP-9、MCP-1的分泌量;RT-PCR检测TGF-β、VEGF、MMP-9mRNA表达... 目的:研究贝母素甲、乙对4T1乳腺癌细胞的干预抑制及对其肿瘤炎性微环境的调节作用。方法:CCK-8检测贝母素甲、乙对4T1细胞抑制率;ELISA法检测炎性相关因子TGF-β、VEGF、MMP-9、MCP-1的分泌量;RT-PCR检测TGF-β、VEGF、MMP-9mRNA表达情况。结果:贝母素甲、乙对4T1乳腺癌细胞具有抑制作用;贝母素甲、乙可分别下调4T1细胞TGF-β,VEGF、MCP-1及MMP-9分泌量(P<0.05,P<0.01);贝母素甲、乙可降低4T1细胞TGF-β、VEGF等mRNA表达(P<0.05,P<0.01)。结论:贝母素甲、乙对4T1乳腺癌细胞具有显著抑制作用,可通过抑制炎性相关因子的释放调节微环境。 展开更多
关键词 贝母素甲 贝母素乙 4t1细胞 乳腺癌细胞 炎性微环境
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小鼠乳腺癌4T1细胞中肿瘤干细胞样细胞的富集和鉴定 被引量:5
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作者 王欣荣 单保恩 +5 位作者 艾军 刘丽华 刘月彩 张超 张海谱 刘登湘 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期381-385,共5页
目的:无血清培养基(serum-free medium,SFM)悬浮培养小鼠乳腺癌细胞株4T1,富集并鉴定4T1细胞株中肿瘤干细胞样细胞。方法:通过含EGF、bFGF和B27等细胞因子的SFM培养富集4T1细胞中肿瘤干细胞样细胞,将其接种于含血清培养基(serum-su... 目的:无血清培养基(serum-free medium,SFM)悬浮培养小鼠乳腺癌细胞株4T1,富集并鉴定4T1细胞株中肿瘤干细胞样细胞。方法:通过含EGF、bFGF和B27等细胞因子的SFM培养富集4T1细胞中肿瘤干细胞样细胞,将其接种于含血清培养基(serum-supplemented medium,SSM),观察4T1肿瘤干细胞样细胞分化情况。应用细胞表面标志CD44^+CD24^-/low和Hoechst33342染色法检测4T1细胞中肿瘤干细胞样细胞的比例,小鼠致瘤实验验证不同培养条件下4T1肿瘤干细胞样细胞的致瘤能力。结果:4T1细胞在SFM中能够存活、增殖,并形成细胞球,细胞球可连续传代,若重新接种于SSM中可贴壁分化。4T1细胞球中CD44^+CD24^-/low细胞比例为6.4%68.9%,侧群(side population,SP)细胞比例为7.3%61.2%,均显著高于SSM中培养的4T1细胞(P〈0.05);随着SFM中细胞球传代次数增加,CD44^+CD24^-/low细胞和SP细胞的比例逐渐升高。小鼠致瘤实验结果显示,富集了肿瘤干细胞的细胞球比常规培养4T1细胞的致瘤性更强。结论:乳腺癌4T1细胞可在含多种生长因子的SFM中悬浮生长并形成细胞球,4T1细胞中含有的乳腺癌干细胞样细胞可通过SFM培养法富集。 展开更多
关键词 无血清悬浮培养 乳腺癌4t1细胞 肿瘤干细胞 CD44^+CD24^-/low 侧群细胞
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苦豆子总生物碱对小鼠乳腺癌4T1细胞体外增殖抑制及诱导凋亡作用的研究 被引量:6
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作者 李建光 牛清芝 +2 位作者 杨晓艺 曾诚 黄伟 《新疆医科大学学报》 CAS 2015年第1期44-46,51,共4页
目的研究苦豆子总生物碱对小鼠乳腺癌4T1细胞体外增殖抑制及诱导凋亡作用。方法苦豆子总生物碱提取并纯化,处理成澄清的药物溶液后用于细胞给药。CCK-8法测定不同浓度的苦豆子总生物碱作用24h后4T1细胞存活率。流式细胞术检测给药24h后... 目的研究苦豆子总生物碱对小鼠乳腺癌4T1细胞体外增殖抑制及诱导凋亡作用。方法苦豆子总生物碱提取并纯化,处理成澄清的药物溶液后用于细胞给药。CCK-8法测定不同浓度的苦豆子总生物碱作用24h后4T1细胞存活率。流式细胞术检测给药24h后4T1细胞凋亡率。结果与对照组比较,实验组药物浓度为5.00mg/mL时,4T1细胞存活率为63.05%;药物浓度为10.00mg/mL时,4T1细胞存活率为20.30%,随着给药浓度的增加,细胞存活率呈明显下降趋势。实验组药物浓度为6.25mg/mL时,细胞凋亡率为11.4%;药物浓度为10.00mg/mL时,细胞凋亡率为41.7%,随着给药浓度的增加,细胞凋亡率明显增加。结论苦豆子总生物碱能诱导细胞凋亡,对小鼠乳腺癌4T1细胞的增殖有明显抑制作用。 展开更多
关键词 苦豆子总生物碱 4t1 细胞 细胞增殖 抑制 细胞凋亡
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桔梗不同配伍对乳腺癌高转移潜能细胞4T1增殖及侵袭的影响 被引量:7
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作者 吴金娜 龚旭初 +2 位作者 陈海东 杨万富 刘胜 《世界中医药》 CAS 2016年第9期1856-1859,共4页
目的:应用MTT比色法及Transwell试验检测桔梗配伍不同中药对乳腺癌高转移潜能细胞4T1增殖及侵袭能力的影响。方法:给予SD大鼠中药煎剂灌胃,制备含药血清。应用MTT比色法检测桔梗不同配伍含药血清对4T1细胞增殖的影响;应用Transwell实验... 目的:应用MTT比色法及Transwell试验检测桔梗配伍不同中药对乳腺癌高转移潜能细胞4T1增殖及侵袭能力的影响。方法:给予SD大鼠中药煎剂灌胃,制备含药血清。应用MTT比色法检测桔梗不同配伍含药血清对4T1细胞增殖的影响;应用Transwell实验检测桔梗不同配伍含药血清对4T1细胞侵袭能力的影响。结果:桔梗及桔梗配伍不同中药组含药血清干预24 h后,对4T1细胞的增殖均有一定的抑制作用。各组含药血清对乳腺癌高转移潜能细胞4T1的增殖抑制率分别为桔梗组30.75%、桔梗加麦冬组34.44%、桔梗加蛇床子组44.71%、桔梗加莪术组49.84%。Transwell实验结果显示,桔梗及桔梗配伍不同中药各组均能降低透过小室的4T1细胞数,对于乳腺癌高转移潜能细胞4T1的侵袭能力有显著的抑制作用,同模型组比较差异有统计学意义(P<0.01)。同桔梗单用组比较,桔梗配伍不同中药组的抑制作用较强,其中桔梗配伍麦冬组及桔梗配伍蛇床子组效果显著,差异有统计学意义(P<0.01),桔梗配伍莪术组在抑制作用方面虽然由于桔梗单用组,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:桔梗及桔梗配伍不同治则中药对乳腺癌高转移潜能细胞4T1的增殖及侵袭有不同程度的抑制作用。 展开更多
关键词 桔梗 配伍 4t1细胞 肺转移
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5-FU对小鼠乳腺癌4T1细胞株中肿瘤干细胞样细胞的富集作用 被引量:5
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作者 王欣荣 刘登湘 +1 位作者 刘丽华 单保恩 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期478-485,共8页
目的:探讨以氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)处理并通过荷瘤小鼠模型体内传代的方法富集乳腺癌干细胞样细胞的可行性,为靶向肿瘤干细胞治疗奠定基础。方法:以乳腺癌细胞株4T1皮下接种小鼠制备荷瘤模型,以一定剂量5-FU腹腔注射4周;处死小... 目的:探讨以氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)处理并通过荷瘤小鼠模型体内传代的方法富集乳腺癌干细胞样细胞的可行性,为靶向肿瘤干细胞治疗奠定基础。方法:以乳腺癌细胞株4T1皮下接种小鼠制备荷瘤模型,以一定剂量5-FU腹腔注射4周;处死小鼠后取肿瘤组织制成细胞悬液,并接种小鼠制备下一代小鼠荷瘤模型,5-FU处理及再次传代方法同上,共传4代。对照组小鼠给予生理盐水注射,其余处理同模型组。流式细胞术检测各代肿瘤组织中CD44+CD24-/low细胞比例,Hoe-chast 33342染色法检测侧群(side population,SP)细胞的比例,免疫组化法检测CD55和ALDH1蛋白的表达,倒置显微镜观察乳腺癌细胞微球体的形成,小鼠致瘤实验检测不同肿瘤细胞的致瘤能力。结果:各代对照组小鼠模型肿瘤组织中CD44+CD24-/low细胞比例为(11.5±0.9)%,SP细胞比例为(9.7±1.3)%,ALDH1表达阴性,CD55强阳性表达细胞数为(0.6±0.3)%,乳腺癌细胞微球体比例为(0.5±0.2)%;5-FU处理组4代小鼠模型肿瘤组织中CD44+CD24-/low细胞比例分别为(49.8±1.2)%、(56.8%±1.7)%、(66.4±1.5)%、(69.0±1.6)%,SP细胞比例分别为(25.0±1.2)%、(42.6±2.8)%、(58.4±2.1)%、(61.3±2.6)%,ALDH1阳性表达细胞比例为(3.8±0.7)%、(14.1±2.4)%、(25.2±3.1)%、(27.5±2.7)%,CD55强阳性细胞比例为(7.8±1.6)%、(10.1±2.0)%、(15.6±1.4)%、(17.3±1.9)%,乳腺癌细胞微球体形成比例为(5.9±0.4)%;两组各相应指标之间差异均具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。5-FU作用后富集了肿瘤干细胞的第3代肿瘤细胞的致瘤作用显著强于对照组细胞(P<0.05)。结论:5-FU作用并通过荷瘤小鼠体内传代能够富集小鼠乳腺癌4T1细胞株中的肿瘤干细胞样细胞。 展开更多
关键词 乳腺癌4t1细胞株 乳腺癌干细胞 5-氟尿嘧啶 化学治疗
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山慈菇提取液对小鼠4T1乳腺癌细胞抑制作用机制的研究 被引量:24
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作者 刘银花 钟世军 +1 位作者 曾涛 陈臻 《湖北农业科学》 2016年第1期134-137,共4页
探索山慈菇提取液对小鼠4T1细胞抑制作用机制。采用水煎法制备山慈菇提取液,MTT比色法检测小鼠4T1细胞的增殖活性,Annexin V/PI双染流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡。结果表明,山慈菇提取液对4T1细胞有明显的增殖抑制作用(P<0.05),并呈... 探索山慈菇提取液对小鼠4T1细胞抑制作用机制。采用水煎法制备山慈菇提取液,MTT比色法检测小鼠4T1细胞的增殖活性,Annexin V/PI双染流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡。结果表明,山慈菇提取液对4T1细胞有明显的增殖抑制作用(P<0.05),并呈剂量依赖关系。山慈菇提取液诱导小鼠4T1细胞凋亡效果明显,并有剂量依赖性。山慈菇提取液对小鼠乳腺癌细胞有明显的增殖抑制和诱导其细胞凋亡的作用。 展开更多
关键词 山慈菇 4t1细胞 增殖抑制 细胞凋亡
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