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六味地黄丸通过调节髓源性抑制细胞对4T1细胞EMT及CSC特性表达的影响
1
作者 郑里翔 黄玲 +2 位作者 郭慧文 龚碧瑶 任小英 《中国实验方剂学杂志》 北大核心 2025年第12期1-10,共10页
目的:探究六味地黄丸含药血清(Liuwei Dihuangwan drug-containing serum,LDP)通过调节髓源性抑制细胞(MDSCs)对三阴性乳腺癌4T1细胞上皮间充质转化(EMT)及癌症干细胞(CSC)特性表达的影响。方法:SPF级雌性SD大鼠随机分为3组,分别予以0.3... 目的:探究六味地黄丸含药血清(Liuwei Dihuangwan drug-containing serum,LDP)通过调节髓源性抑制细胞(MDSCs)对三阴性乳腺癌4T1细胞上皮间充质转化(EMT)及癌症干细胞(CSC)特性表达的影响。方法:SPF级雌性SD大鼠随机分为3组,分别予以0.39、1.94、3.89 g·kg^(-1)·d^(-1)的六味地黄丸混悬液灌胃7 d后制备低、中、高LDP。将4T1细胞接种于SPF级雌性Balb/c小鼠乳腺皮下构建移植瘤小鼠模型,提取胫骨和股骨中骨髓细胞,在体外诱导成MDSCs。4T1与MDSCs细胞活力测定采用细胞增殖与活性检测(CCK-8)法;流式细胞术(FC)检测MDSCs数量及4T1细胞CSC表面标记物CD44、CD24的表达;细胞划痕实验、Transwell侵袭实验、平板克隆形成实验分别检测4T1细胞的迁移、侵袭和增殖能力;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测转化生长因子-β(TGF-β)、核转录因子-κB(NF-κB)、趋化因子配体2(CXCL2)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)蛋白表达;免疫荧光(IF)检测EMT相关蛋白E-cadherin、N-cadherin的表达。结果:与正常组比较,LDP对4T1细胞的细胞活力无明显的抑制作用,可明显降低MDSCs活力、数量及TGF-β蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。4T1细胞与MDSCs共培养后,4T1细胞迁移、侵袭和增殖能力均增加(P<0.05,P<0.01);NF-κB、CXCL2、N-cadherin表达及CSC(CD44^(+)CD24^(-))占比升高(P<0.05,P<0.01),E-cadherin表达降低(P<0.05)。LDP干预MDSCs后,再与4T1共培养,4T1细胞迁移、侵袭和增殖能力显著降低(P<0.01),NF-κB、CXCL2、N-cadherin表达均有所降低(P<0.05,P<0.01),E-cadherin表达明显升高(P<0.05,P<0.01),而对CSC(CD44^(+)CD24^(-))在4T1细胞中的占比差异无统计学意义,但LDP干预4T1细胞与MDSCs的共培养体系,CSC(CD44^(+)CD24^(-))占比下降(P<0.05,P<0.01)。结论:LDP可降低MDSCs活力、数量及TGF-β、NF-κB及CXCL2的表达,逆转EMT及降低CSC特性表达,抑制4T1细胞的迁移、侵袭和增殖。 展开更多
关键词 六味地黄丸含药血清 4t1细胞 髓源性抑制细胞 上皮间充质转化 干细胞特性
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α-常春藤皂苷通过调控PI3K/Akt信号通路对乳腺癌4T1细胞增殖、迁移和凋亡的影响 被引量：1
2
作者 王倩 马春宇 《中成药》 北大核心 2025年第5期1502-1508,共7页
目的 探讨α-常春藤皂苷对乳腺癌4T1细胞增殖、迁移和凋亡的影响。方法 用不同浓度α-常春藤皂苷(0、10、20、30、40、50、60μmol/L)处理4T1细胞,MTT法检测α-常春藤皂苷对4T1细胞增殖的影响。用不同浓度α-常春藤皂苷(0、10、20、30... 目的 探讨α-常春藤皂苷对乳腺癌4T1细胞增殖、迁移和凋亡的影响。方法 用不同浓度α-常春藤皂苷(0、10、20、30、40、50、60μmol/L)处理4T1细胞,MTT法检测α-常春藤皂苷对4T1细胞增殖的影响。用不同浓度α-常春藤皂苷(0、10、20、30、40μmol/L)处理4T1细胞,观察细胞形态;克隆形成实验检测细胞克隆形成能力;Hoechst 33342染色法检测细胞凋亡情况;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;细胞划痕实验观察细胞迁移能力;Western blot法检测细胞PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、Bax、Bcl-2、cleaved Caspase3、cleaved PARP、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白表达。结果 10~60μmol/L α-常春藤皂苷呈浓度依赖性地抑制4T1细胞增殖(P<0.01),其作用24 h的IC_(50)值约为29.8μmol/L。与对照组(0μmol/L)比较,α-常春藤皂苷30、40μmol/L组4T1细胞形态改变;细胞克隆形成能力下降(P<0.01);凋亡细胞数量增加(P<0.01);细胞凋亡率升高(P,<0.01);细胞迁移能力降低(P<0.01);p-PI3K、p-Akt、Bcl-2、N-cadherin、Vimentin蛋白表达降低(P<0.01),Bax、cleaved Caspase3、cleaved PARP、E-cadherin蛋白表达升高(P<0.01)。结论 常春藤皂苷可能通过抑制PI3K/Akt信号通路激活抑制乳腺癌4T1细胞增殖、迁移,并诱导其凋亡。 展开更多
关键词 α-常春藤皂苷 乳腺癌4t1细胞 PI3K/AKT信号通路 增殖 迁移 凋亡
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运用慢病毒系统构建稳定表达CD19-FLUC-GFP的4T1细胞系 被引量：1
3
作者 郭雨洁 程奕宁 +1 位作者 汪洋 刘滨磊 《湖北工业大学学报》 2025年第2期68-72,共5页
为构建稳定表达CD19、萤火虫荧光素酶(FLUC)和绿色荧光蛋白(GFP)的乳腺癌4T1细胞系,以用作CD19嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)的靶细胞模型,通过提取质粒、慢病毒包装及浓缩,感染4T1细胞后,经嘌呤霉素筛选和有限稀释法获得单克隆稳转细胞株4T... 为构建稳定表达CD19、萤火虫荧光素酶(FLUC)和绿色荧光蛋白(GFP)的乳腺癌4T1细胞系,以用作CD19嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)的靶细胞模型,通过提取质粒、慢病毒包装及浓缩,感染4T1细胞后,经嘌呤霉素筛选和有限稀释法获得单克隆稳转细胞株4T1-CD19-FLUC-GFP。实时定量PCR和流式细胞术检测显示,4T1-CD19-FLUC-GFP细胞中CD19的mRNA和膜蛋白表达水平显著高于对照组4T1细胞。体内实验中,腋下植瘤4T1-CD19-FLUC-GFP细胞一周后,活体成像仪可检测到腋下部位的荧光信号。结果表明,成功构建了稳定表达CD19-FLUC-GFP的4T1细胞株,为CAR-T细胞抗肿瘤疗效机制研究提供了可靠的靶细胞模型和研究基础。 展开更多
关键词 4t1细胞 慢病毒 CD19 绿色荧光蛋白 萤火虫荧光素酶
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基于PI3K/Akt信号通路探讨连翘归尾煎对4T1乳腺癌荷瘤小鼠肿瘤抑制作用及机制
4
作者 陈瑾 雒慧娟 +2 位作者 翟康欣 遆安航 张淑蓉 《山西中医药大学学报》 2025年第6期610-615,共6页
目的:基于PI3K/Akt信号通路研究连翘归尾煎对4T1乳腺癌荷瘤小鼠的影响,探讨连翘归尾煎抗乳腺癌的作用及机制。方法:将小鼠4T1乳腺癌细胞接种于18只BALB/c小鼠建立乳腺癌荷瘤小鼠模型,随机分为模型组(生理盐水,灌胃给药)、CTX组(环磷酰胺... 目的:基于PI3K/Akt信号通路研究连翘归尾煎对4T1乳腺癌荷瘤小鼠的影响,探讨连翘归尾煎抗乳腺癌的作用及机制。方法:将小鼠4T1乳腺癌细胞接种于18只BALB/c小鼠建立乳腺癌荷瘤小鼠模型,随机分为模型组(生理盐水,灌胃给药)、CTX组(环磷酰胺,20 mg/kg·d,腹腔注射给药)、连翘归尾煎组(8.6 g/kg·d,灌胃给药),每组6只,连续给药14 d,观察小鼠体质量、肿瘤重量、体积的变化,计算肿瘤抑制率;HE染色观察肿瘤组织形态学变化;TUNEL法检测肿瘤组织细胞的凋亡;Western blot法检测肿瘤组织中PI3K/Akt信号通路相关蛋白PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt表达水平,以及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9表达水平。结果:与模型组比较,连翘归尾煎组乳腺癌小鼠的肿瘤质量明显降低,肿瘤抑制率为26.67%(P<0.05);HE染色结果显示连翘归尾煎可加重肿瘤组织坏死程度;TUNEL染色结果显示连翘归尾煎可诱导小鼠乳腺癌肿瘤组织细胞凋亡,凋亡率明显增加(P<0.05);Western blot实验结果显示连翘归尾煎可降低p-PI3K、p-Akt蛋白以及凋亡相关蛋白Bcl-2蛋白表达量,同时升高Bax、Caspase-3、Caspase-9蛋白表达量,Bax/Bcl-2显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论:连翘归尾煎能有效抑制4T1乳腺癌小鼠移植瘤生长,其作用机制可能是通过PI3K/Akt信号通路,调控相关凋亡蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9的表达水平。 展开更多
关键词 连翘归尾煎 乳腺癌 4t1乳腺癌细胞 PI3K/AKT信号通路 作用机制
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苗药血人参不同提取部位体内外对乳腺癌4T1细胞的影响 被引量：15
5
作者 段丽 张永萍 +1 位作者 缪艳燕 傅建 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期2902-2907,共6页
目的研究血人参提取物体内外对乳腺癌4T1细胞的影响。方法采用MTT法检测血人参不同提取部位体外对4T1细胞的抗肿瘤活性,计算细胞增殖抑制率及半数抑制浓度(IC50);建立小鼠4T1实体瘤模型,随机分为模型组、血人参不同提取部位(石油醚部位... 目的研究血人参提取物体内外对乳腺癌4T1细胞的影响。方法采用MTT法检测血人参不同提取部位体外对4T1细胞的抗肿瘤活性,计算细胞增殖抑制率及半数抑制浓度(IC50);建立小鼠4T1实体瘤模型,随机分为模型组、血人参不同提取部位(石油醚部位、醋酸乙酯部位、正丁醇部位、水部位、乙醇提取物)组、顺铂组,给药15 d后观察小鼠脏器指数、体质量,计算抑瘤率,进行肿瘤病理切片,观察病理改变。结果血人参醋酸乙酯部位、正丁醇部位及乙醇提取物对4T1细胞的IC50值分别为228.9、323.4、322.6μg/m L;血人参石油醚部位组、醋酸乙酯部位组、正丁醇部位组、水部位组、乙醇提取物组及顺铂组对4T1荷瘤小鼠的抑瘤率分别为(55.88±6.68)%、(66.67±14.32)%、(65.71±12.38)%、(53.81±16.17)%、(43.73±25.73)%、(76.85±11.38)%;血人参不同提取部位组中,石油醚部位组具有降低脾指数、升高胸腺指数及白细胞介素(IL-2)水平的作用;从肿瘤体积和抑瘤率结果来看是醋酸乙酯部位最好。HE染色显示石油醚部位组肿瘤细胞明显比模型组少,细胞排列松散,病理性核分裂现象、肿瘤细胞浸润较模型组少,有少量淋巴细胞、巨噬细胞浸润。结论血人参提取物在体内外对4T1细胞生长具有一定的抑制作用,其体内作用机制可能是增强机体的免疫力,从而达到抑制肿瘤生长的效果。 展开更多
关键词 血人参提取物 抗肿瘤 乳腺癌4t1细胞 增殖 脏器指数 免疫功能
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BALB/c小鼠乳腺癌4T1细胞株移植模型的建立 被引量：14
6
作者 严丽 李莉 +3 位作者 郝芳 申伟 张霖雷 郭浩 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期794-796,共3页
目的:应用来源于BALB/c小鼠的4T1乳腺癌细胞株建立BALB/c小鼠乳腺癌模型,选择最佳的模型制作方法。方法:90只BALB/c小鼠随机分为3组,每组30只,分别接种1×106ml-1、1×107ml-1、1×108ml-14T1乳腺癌细胞株细胞悬液。每组小... 目的:应用来源于BALB/c小鼠的4T1乳腺癌细胞株建立BALB/c小鼠乳腺癌模型,选择最佳的模型制作方法。方法:90只BALB/c小鼠随机分为3组,每组30只,分别接种1×106ml-1、1×107ml-1、1×108ml-14T1乳腺癌细胞株细胞悬液。每组小鼠再随机分两组分别接种于胸壁和侧腹壁。比较各组的成瘤时间、成瘤率和8周存活率,并用C-erbB-2免疫组化法检查肿瘤病理状态。结果:细胞浓度为1×107ml-1时,肿瘤成瘤率高,生长稳定;4T1细胞不同部位接种不影响成瘤率及生长;C-erbB-2免疫组织化学检查均为阳性。结论:应用1×107ml-1浓度的4T1细胞进行接种是最佳的模型制作方法。 展开更多
关键词 乳腺癌 BALBc小鼠 4t1细胞株
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雷公藤甲素通过抗ER磷酸化抑制小鼠4T1乳腺癌增殖作用研究 被引量：13
7
作者 潘国凤 高建莉 +2 位作者 张奇 吕圭源 陈素红 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第23期4129-4133,共5页
雷公藤甲素(triptolide,TP)具有显著的抑制肿瘤作用。本研究采用MTT法和结晶紫染色法检测TP对小鼠乳腺癌细胞4T1增殖的影响;流式细胞仪检测TP诱导的4T1细胞凋亡率;Western blot检测4T1中相关蛋白雌激素受体α(estrogen reporterα,ERα)... 雷公藤甲素(triptolide,TP)具有显著的抑制肿瘤作用。本研究采用MTT法和结晶紫染色法检测TP对小鼠乳腺癌细胞4T1增殖的影响;流式细胞仪检测TP诱导的4T1细胞凋亡率;Western blot检测4T1中相关蛋白雌激素受体α(estrogen reporterα,ERα),磷酸化ERα(p-ERα),ERβ,p-ERβ,细胞外信号调节的蛋白激酶(ERK),p-ERK,p38,p-p38,c-Jun氨基末端激酶(SAPK/JNK),p-SAPK/JNK的表达。给药30 d后,活体荧光示踪技术观察TP对4T1-Luc细胞接种的BALB/c雌性小鼠乳腺癌的荧光强度,同时检测肿瘤体积和质量,计算抑瘤率。肿瘤组织苏木素-伊红(HE)染色后观察病理变化;免疫组织化学法(IHC)分析肿瘤组织ERα及ERβ的表达情况。发现TP体外浓度为100,10,1,0.1μmol·L-1时可显著抑制4T1乳腺癌细胞的增殖,诱导细胞凋亡。TP剂量为200μg·kg-1时能抑制小鼠乳腺癌的增殖,TP的抗乳腺癌增殖作用与降低ERα,ERβ的磷酸化密切相关,但与MAPK通路的活化无明显相关性。 展开更多
关键词 雷公藤甲素 小鼠4t1乳腺癌细胞 抑制增殖 雌激素受体 活体荧光示踪
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贝母素甲、贝母素乙对4T1乳腺癌细胞炎性微环境的干预调节作用 被引量：20
8
作者 张玉人 林洪生 张英 《中国中医基础医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1504-1506,共3页
目的:研究贝母素甲、乙对4T1乳腺癌细胞的干预抑制及对其肿瘤炎性微环境的调节作用。方法:CCK-8检测贝母素甲、乙对4T1细胞抑制率;ELISA法检测炎性相关因子TGF-β、VEGF、MMP-9、MCP-1的分泌量;RT-PCR检测TGF-β、VEGF、MMP-9mRNA表达... 目的:研究贝母素甲、乙对4T1乳腺癌细胞的干预抑制及对其肿瘤炎性微环境的调节作用。方法:CCK-8检测贝母素甲、乙对4T1细胞抑制率;ELISA法检测炎性相关因子TGF-β、VEGF、MMP-9、MCP-1的分泌量;RT-PCR检测TGF-β、VEGF、MMP-9mRNA表达情况。结果:贝母素甲、乙对4T1乳腺癌细胞具有抑制作用;贝母素甲、乙可分别下调4T1细胞TGF-β,VEGF、MCP-1及MMP-9分泌量(P<0.05,P<0.01);贝母素甲、乙可降低4T1细胞TGF-β、VEGF等mRNA表达(P<0.05,P<0.01)。结论:贝母素甲、乙对4T1乳腺癌细胞具有显著抑制作用,可通过抑制炎性相关因子的释放调节微环境。 展开更多
关键词 贝母素甲 贝母素乙 4t1细胞 乳腺癌细胞 炎性微环境
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小鼠乳腺癌4T1细胞中肿瘤干细胞样细胞的富集和鉴定 被引量：5
9
作者 王欣荣 单保恩 +5 位作者 艾军 刘丽华 刘月彩 张超 张海谱 刘登湘 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期381-385,共5页
目的：无血清培养基（serum-free medium,SFM）悬浮培养小鼠乳腺癌细胞株4T1,富集并鉴定4T1细胞株中肿瘤干细胞样细胞。方法：通过含EGF、bFGF和B27等细胞因子的SFM培养富集4T1细胞中肿瘤干细胞样细胞,将其接种于含血清培养基（serum-su... 目的：无血清培养基（serum-free medium,SFM）悬浮培养小鼠乳腺癌细胞株4T1,富集并鉴定4T1细胞株中肿瘤干细胞样细胞。方法：通过含EGF、bFGF和B27等细胞因子的SFM培养富集4T1细胞中肿瘤干细胞样细胞,将其接种于含血清培养基（serum-supplemented medium,SSM）,观察4T1肿瘤干细胞样细胞分化情况。应用细胞表面标志CD44^＋CD24^-/low和Hoechst33342染色法检测4T1细胞中肿瘤干细胞样细胞的比例,小鼠致瘤实验验证不同培养条件下4T1肿瘤干细胞样细胞的致瘤能力。结果：4T1细胞在SFM中能够存活、增殖,并形成细胞球,细胞球可连续传代,若重新接种于SSM中可贴壁分化。4T1细胞球中CD44^＋CD24^-/low细胞比例为6.4%68.9%,侧群（side population,SP）细胞比例为7.3%61.2%,均显著高于SSM中培养的4T1细胞（P〈0.05）;随着SFM中细胞球传代次数增加,CD44^＋CD24^-/low细胞和SP细胞的比例逐渐升高。小鼠致瘤实验结果显示,富集了肿瘤干细胞的细胞球比常规培养4T1细胞的致瘤性更强。结论：乳腺癌4T1细胞可在含多种生长因子的SFM中悬浮生长并形成细胞球,4T1细胞中含有的乳腺癌干细胞样细胞可通过SFM培养法富集。 展开更多
关键词 无血清悬浮培养 乳腺癌4t1细胞 肿瘤干细胞 CD44^+CD24^-/low 侧群细胞
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苦豆子总生物碱对小鼠乳腺癌4T1细胞体外增殖抑制及诱导凋亡作用的研究 被引量：6
10
作者 李建光 牛清芝 +2 位作者 杨晓艺 曾诚 黄伟 《新疆医科大学学报》 CAS 2015年第1期44-46,51,共4页
目的研究苦豆子总生物碱对小鼠乳腺癌4T1细胞体外增殖抑制及诱导凋亡作用。方法苦豆子总生物碱提取并纯化,处理成澄清的药物溶液后用于细胞给药。CCK-8法测定不同浓度的苦豆子总生物碱作用24h后4T1细胞存活率。流式细胞术检测给药24h后... 目的研究苦豆子总生物碱对小鼠乳腺癌4T1细胞体外增殖抑制及诱导凋亡作用。方法苦豆子总生物碱提取并纯化,处理成澄清的药物溶液后用于细胞给药。CCK-8法测定不同浓度的苦豆子总生物碱作用24h后4T1细胞存活率。流式细胞术检测给药24h后4T1细胞凋亡率。结果与对照组比较,实验组药物浓度为5.00mg/mL时,4T1细胞存活率为63.05%;药物浓度为10.00mg/mL时,4T1细胞存活率为20.30%,随着给药浓度的增加,细胞存活率呈明显下降趋势。实验组药物浓度为6.25mg/mL时,细胞凋亡率为11.4%;药物浓度为10.00mg/mL时,细胞凋亡率为41.7%,随着给药浓度的增加,细胞凋亡率明显增加。结论苦豆子总生物碱能诱导细胞凋亡,对小鼠乳腺癌4T1细胞的增殖有明显抑制作用。 展开更多
关键词 苦豆子总生物碱 4t1 细胞 细胞增殖 抑制 细胞凋亡
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桔梗不同配伍对乳腺癌高转移潜能细胞4T1增殖及侵袭的影响 被引量：7
11
作者 吴金娜 龚旭初 +2 位作者 陈海东 杨万富 刘胜 《世界中医药》 CAS 2016年第9期1856-1859,共4页
目的:应用MTT比色法及Transwell试验检测桔梗配伍不同中药对乳腺癌高转移潜能细胞4T1增殖及侵袭能力的影响。方法:给予SD大鼠中药煎剂灌胃,制备含药血清。应用MTT比色法检测桔梗不同配伍含药血清对4T1细胞增殖的影响;应用Transwell实验... 目的:应用MTT比色法及Transwell试验检测桔梗配伍不同中药对乳腺癌高转移潜能细胞4T1增殖及侵袭能力的影响。方法:给予SD大鼠中药煎剂灌胃,制备含药血清。应用MTT比色法检测桔梗不同配伍含药血清对4T1细胞增殖的影响;应用Transwell实验检测桔梗不同配伍含药血清对4T1细胞侵袭能力的影响。结果:桔梗及桔梗配伍不同中药组含药血清干预24 h后,对4T1细胞的增殖均有一定的抑制作用。各组含药血清对乳腺癌高转移潜能细胞4T1的增殖抑制率分别为桔梗组30.75%、桔梗加麦冬组34.44%、桔梗加蛇床子组44.71%、桔梗加莪术组49.84%。Transwell实验结果显示,桔梗及桔梗配伍不同中药各组均能降低透过小室的4T1细胞数,对于乳腺癌高转移潜能细胞4T1的侵袭能力有显著的抑制作用,同模型组比较差异有统计学意义(P<0.01)。同桔梗单用组比较,桔梗配伍不同中药组的抑制作用较强,其中桔梗配伍麦冬组及桔梗配伍蛇床子组效果显著,差异有统计学意义(P<0.01),桔梗配伍莪术组在抑制作用方面虽然由于桔梗单用组,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:桔梗及桔梗配伍不同治则中药对乳腺癌高转移潜能细胞4T1的增殖及侵袭有不同程度的抑制作用。 展开更多
关键词 桔梗 配伍 4t1细胞 肺转移
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5-FU对小鼠乳腺癌4T1细胞株中肿瘤干细胞样细胞的富集作用 被引量：5
12
作者 王欣荣 刘登湘 +1 位作者 刘丽华 单保恩 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期478-485,共8页
目的:探讨以氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)处理并通过荷瘤小鼠模型体内传代的方法富集乳腺癌干细胞样细胞的可行性,为靶向肿瘤干细胞治疗奠定基础。方法:以乳腺癌细胞株4T1皮下接种小鼠制备荷瘤模型,以一定剂量5-FU腹腔注射4周;处死小... 目的:探讨以氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)处理并通过荷瘤小鼠模型体内传代的方法富集乳腺癌干细胞样细胞的可行性,为靶向肿瘤干细胞治疗奠定基础。方法:以乳腺癌细胞株4T1皮下接种小鼠制备荷瘤模型,以一定剂量5-FU腹腔注射4周;处死小鼠后取肿瘤组织制成细胞悬液,并接种小鼠制备下一代小鼠荷瘤模型,5-FU处理及再次传代方法同上,共传4代。对照组小鼠给予生理盐水注射,其余处理同模型组。流式细胞术检测各代肿瘤组织中CD44+CD24-/low细胞比例,Hoe-chast 33342染色法检测侧群(side population,SP)细胞的比例,免疫组化法检测CD55和ALDH1蛋白的表达,倒置显微镜观察乳腺癌细胞微球体的形成,小鼠致瘤实验检测不同肿瘤细胞的致瘤能力。结果:各代对照组小鼠模型肿瘤组织中CD44+CD24-/low细胞比例为(11.5±0.9)%,SP细胞比例为(9.7±1.3)%,ALDH1表达阴性,CD55强阳性表达细胞数为(0.6±0.3)%,乳腺癌细胞微球体比例为(0.5±0.2)%;5-FU处理组4代小鼠模型肿瘤组织中CD44+CD24-/low细胞比例分别为(49.8±1.2)%、(56.8%±1.7)%、(66.4±1.5)%、(69.0±1.6)%,SP细胞比例分别为(25.0±1.2)%、(42.6±2.8)%、(58.4±2.1)%、(61.3±2.6)%,ALDH1阳性表达细胞比例为(3.8±0.7)%、(14.1±2.4)%、(25.2±3.1)%、(27.5±2.7)%,CD55强阳性细胞比例为(7.8±1.6)%、(10.1±2.0)%、(15.6±1.4)%、(17.3±1.9)%,乳腺癌细胞微球体形成比例为(5.9±0.4)%;两组各相应指标之间差异均具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。5-FU作用后富集了肿瘤干细胞的第3代肿瘤细胞的致瘤作用显著强于对照组细胞(P<0.05)。结论:5-FU作用并通过荷瘤小鼠体内传代能够富集小鼠乳腺癌4T1细胞株中的肿瘤干细胞样细胞。 展开更多
关键词 乳腺癌4t1细胞株 乳腺癌干细胞 5-氟尿嘧啶 化学治疗
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山慈菇提取液对小鼠4T1乳腺癌细胞抑制作用机制的研究 被引量：24
13
作者 刘银花 钟世军 +1 位作者 曾涛 陈臻 《湖北农业科学》 2016年第1期134-137,共4页
探索山慈菇提取液对小鼠4T1细胞抑制作用机制。采用水煎法制备山慈菇提取液,MTT比色法检测小鼠4T1细胞的增殖活性,Annexin V/PI双染流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡。结果表明,山慈菇提取液对4T1细胞有明显的增殖抑制作用(P<0.05),并呈... 探索山慈菇提取液对小鼠4T1细胞抑制作用机制。采用水煎法制备山慈菇提取液,MTT比色法检测小鼠4T1细胞的增殖活性,Annexin V/PI双染流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡。结果表明,山慈菇提取液对4T1细胞有明显的增殖抑制作用(P<0.05),并呈剂量依赖关系。山慈菇提取液诱导小鼠4T1细胞凋亡效果明显,并有剂量依赖性。山慈菇提取液对小鼠乳腺癌细胞有明显的增殖抑制和诱导其细胞凋亡的作用。 展开更多
关键词 山慈菇 4t1细胞 增殖抑制 细胞凋亡
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不同接种量荧光素酶标记小鼠乳腺癌细胞4T1在小鼠体内生长及肺转移的比较 被引量：8
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作者 李小颖 马元武 +1 位作者 张旭 张连峰 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2012年第1期14-17,I0003,共5页
目的采用活体成像技术比较四种剂量荧光素酶标记肿瘤细胞在小鼠体内生长及肺转移情况,为光学标记肿瘤模型的药物筛选或机制研究提供参考资料。方法以荧光素酶作为报告基因导入小鼠乳腺癌细胞4T1中,经G418筛选获得稳定表达荧光素酶的细... 目的采用活体成像技术比较四种剂量荧光素酶标记肿瘤细胞在小鼠体内生长及肺转移情况,为光学标记肿瘤模型的药物筛选或机制研究提供参考资料。方法以荧光素酶作为报告基因导入小鼠乳腺癌细胞4T1中,经G418筛选获得稳定表达荧光素酶的细胞克隆并扩大培养。标记细胞稀释成1×107细胞/mL,2×107细胞/mL,5×107细胞/mL和1×108细胞/mL四种剂量,取0.1 mL接种于BALB/c小鼠右侧第二对乳腺脂肪垫内,制作小鼠原位乳腺癌模型,比较肿瘤细胞在小鼠体内生长及肺转移情况。结果获得稳定表达荧光素酶基因的细胞克隆,在致瘤性方面和亲代细胞无明显差别,四种剂量细胞接种BALB/c小鼠后,均有肿瘤生长,接种第28天时,四种剂量接种的原位移植瘤大小没有明显差别,但接种两个高剂量肿瘤细胞的小鼠组各有2只小鼠死亡;接种后31 d,发现四种剂量接种的原位移植瘤均发生不同程度的转移,随着观察天数的增加,转移程度逐渐严重,接种后42 d,小鼠陆续发生死亡。结论根据转移和死亡情况,确定接种1×106个细胞/只不仅肺转移明显,而且存活时间一般超过45 d,比高剂量接种存活时间长,为最佳肺转移剂量。 展开更多
关键词 4t1小鼠乳腺癌细胞株 荧光素酶 肺转移 肿瘤模型
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活体生物发光示踪术观察中国被毛孢抑制小鼠4T1-luc乳腺癌肺转移作用 被引量：3
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作者 傅惠英 屠珏 +3 位作者 凌云 张利棕 寿旗扬 陈民利 《浙江中医药大学学报》 CAS 2013年第2期121-124,共4页
[目的]利用活体生物发光成像技术,探讨中国被毛孢菌丝体对小鼠乳腺癌肺转移的影响。[方法]4T1-luc乳腺癌细胞原位接种于50只BALB/c小鼠2周后,取40只荷瘤小鼠,分成4组,即模型组(10mL.kg-1NS)、HSM低剂量组(1.0g.kg-1HSM)、HSM高剂量组(2.... [目的]利用活体生物发光成像技术,探讨中国被毛孢菌丝体对小鼠乳腺癌肺转移的影响。[方法]4T1-luc乳腺癌细胞原位接种于50只BALB/c小鼠2周后,取40只荷瘤小鼠,分成4组,即模型组(10mL.kg-1NS)、HSM低剂量组(1.0g.kg-1HSM)、HSM高剂量组(2.0g.kg-1HSM)、阳性组(20mg.kg-1CTX),每组10只,连续给药21d;测定各组小鼠原位肿瘤体积和重量,并用活体生物发光成像仪观察各组小鼠乳腺癌肺转移情况。[结果]小鼠灌胃给予1.0g.kg-1、2.0g.kg-1HSM后,原位肿瘤体积和重量明显降低(P<0.05,P<0.01),原位肿瘤抑瘤率分别为22.92%和32.50%;给予2.0g.kg-1HSM的小鼠乳腺癌肺转移明显减少(P<0.01),乳腺癌肺转移的抑制率为51.77%。[结论]中国被毛孢菌丝体具有较好的抑制小鼠乳腺癌肺转移作用。 展开更多
关键词 中国被毛孢菌丝体 4t1-luc乳腺癌 肺转移 生物发光示踪术
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抗癌防移片对4T1小鼠乳腺癌影响的研究 被引量：3
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作者 侯超 胡志希 +2 位作者 曾柏荣 李琳 陈龙娇 《湖南中医药大学学报》 CAS 2014年第4期6-9,共4页
目的观察抗癌防移片对4T1小鼠乳腺癌的影响。方法建立4T1乳腺癌小鼠模型,随机分为空白对照组、模型组、环磷酰胺组和抗癌防移片组,分别给予药物或生理盐水,动态观察给药期间小鼠生活状况。给药4周后处死小鼠,测定小鼠体质量增加百分数,... 目的观察抗癌防移片对4T1小鼠乳腺癌的影响。方法建立4T1乳腺癌小鼠模型,随机分为空白对照组、模型组、环磷酰胺组和抗癌防移片组,分别给予药物或生理盐水,动态观察给药期间小鼠生活状况。给药4周后处死小鼠,测定小鼠体质量增加百分数,测量剥离瘤体积,计算瘤体积抑制率以及计数肺转移瘤灶个数。结果与模型组比较,抗癌防移片组小鼠肿瘤生长缓慢,肺转移瘤灶数量明显减少(P<0.05);与环磷酰胺组比较,抗癌防移片组药物毒副作用小(P<0.05),生活质量高,但其抑瘤防转移作用不及环磷酰胺(P<0.05)。结论抗癌防移片能抑制4T1小鼠乳腺癌生长与转移,改善小鼠生存质量。 展开更多
关键词 抗癌防移片 4t1小鼠乳腺癌 肿瘤体积 瘤体积抑制率 肺转移瘤灶数
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基于MEKK1/SEK1/JNK1/AP-1通路探讨三七总皂苷对4T1乳腺癌荷瘤小鼠肿瘤模型的影响 被引量：12
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作者 陆慧敏 孙文熙 +1 位作者 霍晨星 陈宝艳 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第24期75-81,共7页
目的:通过研究三七总皂苷对4T1乳腺癌荷瘤小鼠促分裂原激活的蛋白激酶的激酶1(MEKK1)/应激激活的蛋白激酶/细胞外信号调节的蛋白激酶(SAPK/Erk激酶,SEK1)/c-Jun氨基末端激酶1(JNK1)/激活蛋白-1(AP-1)通路的影响,探讨三七总皂苷抑制肿瘤... 目的:通过研究三七总皂苷对4T1乳腺癌荷瘤小鼠促分裂原激活的蛋白激酶的激酶1(MEKK1)/应激激活的蛋白激酶/细胞外信号调节的蛋白激酶(SAPK/Erk激酶,SEK1)/c-Jun氨基末端激酶1(JNK1)/激活蛋白-1(AP-1)通路的影响,探讨三七总皂苷抑制肿瘤的可能机制。方法:建立4T1乳腺癌荷瘤小鼠肿瘤模型,将48只造模成功的小鼠随机分为三七总皂苷低、中、高剂量组(10,20,40 mg·kg^-1)和模型组,每组12只,三七总皂苷各剂量组腹腔注射剂量为10 mL·kg^-1,模型组给予相同剂量的生理盐水,连续给药28 d。给药结束后分离肿瘤组织、称质量、切片、匀浆等,采用脱氧核苷酸末端转移酶(TdT)介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)染色检测肿瘤细胞凋亡;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肿瘤组织MEKK1,SEK1,JNK1,AP-1 mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测4T1乳腺癌荷瘤小鼠肿瘤组织MEKK1,SEK1,JNK1,AP-1蛋白表达。结果:与模型组比较,三七总皂苷中、高剂量组的肿瘤质量明显下降(P<0.05);肿瘤细胞凋亡数量随三七总皂苷剂量的升高明显升高(P<0.05);三七总皂苷中、高剂量组肿瘤组织中MEKK1,SEK1,JNK1,AP-1 mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论:三七总皂苷对4T1乳腺癌荷瘤小鼠肿瘤模型具有抑制作用,其作用机制可能与激活MEKK1/SEK1/JNK1/AP-1信号通路有关。 展开更多
关键词 三七总皂苷 4t1小鼠乳腺癌细胞 促分裂原激活的蛋白激酶的激酶1(MEKK1)/应激激活的蛋白激酶/细胞外信号调节的蛋白激酶(SAPK/Erk激酶 SEK1)/c-Jun氨基末端激酶1(JNK1)/激活蛋白-1(AP-1)通路 凋亡
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基于生物活体发光术观察寒凝血瘀证及热毒血瘀证与BALB/c小鼠4T1乳腺癌肺转移的相关性研究 被引量：3
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作者 黄健飞 郭勇 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期1085-1088,共4页
目的:利用生物活体发光技术探讨寒凝血瘀证及热毒血瘀证对BALB/c小鼠4T1乳腺癌肺转移的影响。方法:21只雌性BALB/c小鼠分为3组:单纯荷瘤组、寒凝血瘀荷瘤组及热毒血瘀荷瘤组,在中医证候造模结束后分别原位接种4T1-luc乳腺癌细胞,测定各... 目的:利用生物活体发光技术探讨寒凝血瘀证及热毒血瘀证对BALB/c小鼠4T1乳腺癌肺转移的影响。方法:21只雌性BALB/c小鼠分为3组:单纯荷瘤组、寒凝血瘀荷瘤组及热毒血瘀荷瘤组,在中医证候造模结束后分别原位接种4T1-luc乳腺癌细胞,测定各组小鼠原位肿瘤体积和体质量,并用活体生物发光成像仪动态观察各组小鼠乳腺癌肺转移情况。结果:在中医证候造模过程中,第7天时,热毒血瘀荷瘤组体质量较单纯荷瘤组及寒凝血瘀荷瘤组显著减轻(P<0.01,P<0.05),但随着时间推移,上述差异逐渐减小。荷瘤后,3组小鼠在原发肿瘤的生长体积方面无显著性差异。肺转移灶方面,3组在荷瘤的第21天无显著性差异;在荷瘤第28天,热毒血瘀荷瘤组的肺转移灶光子量数值最高,与另两组比较,差异显著(P<0.01)。结论:热毒血瘀证与4T1乳腺癌肺转移呈正相关,能促进4T1乳腺癌肺转移。 展开更多
关键词 寒凝血瘀证 热毒血瘀证 4t1-luc乳腺癌 肺转移 生物活体发光术
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NKG2D配体RAE1ε对乳腺癌细胞4T1衍生MDSC功能的影响 被引量：1
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作者 钱莉 刘阳 +6 位作者 叶枫 刘露 王少卿 贾筱琴 傅奕 龚卫娟 田芳 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期721-726,共6页
目的:探讨表达小鼠NKG2D配体之一视黄酸早期转录因子1ε(retinoic acid early transcript 1ε,RAE1ε)的原B淋巴细胞Ba F3对乳腺癌细胞株4T1成瘤小鼠来源的髓系抑制性细胞(myeloid-derived suppressor cell,MDSC)功能的影响。方法:以小... 目的:探讨表达小鼠NKG2D配体之一视黄酸早期转录因子1ε(retinoic acid early transcript 1ε,RAE1ε)的原B淋巴细胞Ba F3对乳腺癌细胞株4T1成瘤小鼠来源的髓系抑制性细胞(myeloid-derived suppressor cell,MDSC)功能的影响。方法:以小鼠原B淋巴细胞株Ba F3为基础,构建表达RAE1ε的Ba F3-RAE1ε细胞以及表达空质粒的Ba F3-mock对照细胞。通过4T1原位肿瘤模型诱导产生CD11b+Gr-1+MDSC,将Ba F3-mock细胞和Ba F3-RAE1ε细胞作为刺激细胞,分别与脾MDSC共培养,流式细胞术检测MDSC表面CD40、CD80、F4/80、CD11c的表达和MDSC内活性氧(ROS)的水平;ELISA法检测共培养上清液IL-10、IL-4和IFN-γ的含量;Griess法检测共培养上清液一氮化氮(NO)的浓度。磁珠分选共培养体系中的MDSC,检测裂解后精氨酸酶的活性;另外,将分选后的MDSC与抗CD3/抗CD28抗体活化的脾细胞共培养,CFSE法检测活化的CD3+CD8+T细胞增殖情况。结果:成功获得4T1原位肿瘤模型来源的小鼠脾MDSC。与Ba F3-mock细胞相比,Ba F3-RAE1ε细胞刺激对MDSC分泌IL-4、IFN-γ、IL-10和NO的水平没有明显影响(P>0.05);对MDSC表达CD40、CD80、F4/80、CD11c和ROS也没有显著影响(P>0.05)。与Ba F3-mock细胞相比,Ba F3-RAE1ε细胞刺激显著提高MDSC的精氨酸酶活性(156.166±1.209 vs 110.135±7.356,P<0.01),并明显增强MDSC对CD8+T细胞增殖的抑制作用。结论:RAE-1ε在体外增强4T1成瘤小鼠来源的MDSC的抑制功能。 展开更多
关键词 视黄酸早期转录因子1ε 髓系抑制性细胞 精氨酸酶 乳腺癌4t1细胞
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定量蛋白质组学筛选及分析山慈菇酯提物抗4T1乳腺癌的新启示 被引量：6
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作者 曹晓东 张楠 +3 位作者 杨冬冬 刘颖 王赫 张子英 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 2021年第2期246-255,共10页
探讨山慈菇酯提物(ethyl acetate extract of Cremastra appendiculata,Cr Ap)作用于4T1乳腺癌癌组织中差异蛋白的表达变化,筛选Cr Ap抗4T1乳腺癌的靶点。采用定量蛋白质组学串联质量标签(TMT)标记技术对Cr Ap作用的4T1乳腺癌癌组织进... 探讨山慈菇酯提物(ethyl acetate extract of Cremastra appendiculata,Cr Ap)作用于4T1乳腺癌癌组织中差异蛋白的表达变化,筛选Cr Ap抗4T1乳腺癌的靶点。采用定量蛋白质组学串联质量标签(TMT)标记技术对Cr Ap作用的4T1乳腺癌癌组织进行检测,并筛选4T1组织中发生显著变化的差异蛋白。利用多重数据库对Cr Ap/CON差异蛋白进一步进行生物信息学分析,QPCR检测癌组织中Ly6G、S100a8、S100a9、Tmsb4x和GADPH的mRNA表达量。蛋白质组学共获得15个上调蛋白,1个下调蛋白,其中有4个上调差异蛋白与免疫调节功能密切相关。胸腺素β-4下调,而Toll 4受体结合蛋白、Toll样受体结合蛋白、肥大细胞表达膜蛋白1上调,基因本体论注释分析和功能聚类分析显示这些差异蛋白可能与Cr Ap产生抗乳腺癌作用相关;S100-a8、S100-a9蛋白上调可能与Cr Ap产生促凋亡作用和免疫调节过程相关。此外,KEGG富集通路多与免疫调控过程相关,其中癌症的转录失调通路、IL-17信号通路可能与Cr Ap抗4T1作用和免疫调节机制密切相关。QPCR结果显示Cr Ap能显著提高乳腺癌组织中Ly6G、S100a8、S100a9的表达,而降低Tmsb4x。TMT定量蛋白质组学能有效筛选Cr Ap抗4T1的差异蛋白,其中Cr Ap抗4T1乳腺癌机制和相关的免疫调控作用有望成为新的研究方向。 展开更多
关键词 4t1乳腺癌 蛋白质组学 串联质量标签 山慈菇
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