文摘[目的]探究蛋白酪氨酸激酶2β(protein tyrosine kinase 2 beta,PTK2B)介导自然杀伤细胞的杀伤作用及影响肺癌细胞恶性生物学行为的作用机制。[方法]收集2022年1月至12月于南通市第一人民医院就诊的35例肺癌患者和35人健康志愿者的外周血,采用密度梯度离心对外周血单核细胞进行分离,使用磁性活化细胞分选人细胞分离试剂盒从外周血单核细胞中分离选择细胞。应用RT-PCR技术及Western blot检测细胞中PTK2B表达水平。流式细胞术检测外周血中NKG2D、NKp30和NKp46水平;ELISA法检测外周血中干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)水平。体外培养NK-92细胞并敲低PTK2B表达,RT-qPCR和Western blot检测NK-92细胞中PTK2B的表达。白细胞介素2(interleukin-2,IL-2)刺激NK-92细胞,ELISA检测TNF-α和IFN-γ表达。随后,IL-2刺激的NK-92细胞与A549细胞以不同的比例(10∶1,5∶1,2.5∶1)共培养,流式细胞术和乳酸脱氢酶法评估NK-92细胞对A549细胞的毒性,CCK-8检测细胞活力,细胞克隆形成实验检测细胞增殖,Transwell检测细胞侵袭。[结果]与对照组相比,肺癌患者中PTK2B mRNA和蛋白水平升高(1.15±0.51 vs 3.51±1.25,0.40±0.10 vs 0.82±0.15)(P均<0.001),NKG2D(48.86±8.03 vs 27.26±11.56,P<0.001)、NKp30(23.77±7.9 vs 16.10±7.03,P<0.001)、IFN-γ[(14.25±2.29)ng/mL vs(4.17±0.87)ng/mL,P<0.001]和TNF-α[(212.50±22.57)pg/mL vs(59.19±17.94)pg/mL,P<0.001]水平降低,但细胞活化受体NKp46表达无显著性差异(16.96±4.88 vs 18.20±6.73,P>0.05)。敲低PTK2B上调NKG2D和NKp30、NKp46表达水平,以及增加NK细胞产生IFN-γ、颗粒酶B和穿孔素水平。敲低PTK2B表达增强细胞对A549细胞的细胞毒性、细胞活力、增殖和侵袭降低,并能抑制A549细胞恶性生物学行为。[结论]PTK2B通过抑制自然杀伤细胞的杀伤作用,从而促进肺癌细胞的增殖和侵袭。
