背景:研究证实,含血小板反应蛋白模体的金属蛋白酶与整合素前体8(A disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs 8,ADAMTS8)对纤维化具有一定的调控作用,因此,深入探讨ADAMTS8对增生性瘢痕的作用机制具有重要临床意...背景:研究证实,含血小板反应蛋白模体的金属蛋白酶与整合素前体8(A disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs 8,ADAMTS8)对纤维化具有一定的调控作用,因此,深入探讨ADAMTS8对增生性瘢痕的作用机制具有重要临床意义。目的:探讨ADAMTS8对增生性瘢痕的调控作用。方法:①免疫组化染色检测人体正常皮肤组织与增生性瘢痕组织中Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、α-平滑肌肌动蛋白及ADAMTS8的表达。Western blot检测人体正常皮肤组织与增生性瘢痕组织中ADAMTS8蛋白表达,以增生性瘢痕为阳性样本,正常皮肤为阴性样本,绘制受试者工作特征曲线,分析ADAMTS8预测区分正常皮肤与增生性瘢痕的能力。②通过STRING 12.0平台对ADAMTS8构建蛋白质-蛋白质相互作用网络,对获取的靶点进行GO功能富集和KEGG通路富集分析。③分离培养人增生性瘢痕组织成纤维细胞,将第3-6代成纤维细胞分3组处理:对照组常规培养,Ad-NC组转染空载体腺病毒,Ad-ADAMTS8组转染含ADAMTS8过表达的腺病毒,CCK-8法、EdU染色检测细胞增殖活力,流式细胞术、TUNEL染色检测细胞凋亡情况。结果与结论:①免疫组化染色显示,增生性瘢痕中Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、α-平滑肌肌动蛋白表达高于正常皮肤(P<0.001),ADAMTS8表达低于正常皮肤(P<0.001)。Western blot检测显示,增生性瘢痕中ADAMTS8蛋白表达低于正常皮肤(P<0.001)。受试者工作特征曲线显示,ADAMTS8预测发生增生性瘢痕的曲线下面积为0.86,说明ADAMTS8具有良好区分增生性瘢痕和正常皮肤的能力。②通过STRING数据库筛选出排名前41的基因,KEGG富集显示ADAMTS8主要参与细胞外基质受体相互作用、磷脂酰肌醇-3-激酶-蛋白激酶B信号通路及胞葬作用等生物学过程和关键机制;GO富集显示ADAMTS8参与凋亡相关的通路富集,包括成纤维细胞生长因子受体信号通路的负向调控、成纤维细胞生长因子的结合、细胞凋亡的负向调控和细胞凋亡过程。③CCK-8法、EdU染色显示,过表达ADAMTS8可抑制增生性瘢痕成纤维细胞增殖;流式细胞术、TUNEL染色显示,过表达ADAMTS8可促进增生性瘢痕成纤维细胞凋亡。④结果表明,ADAMTS8在人增生性瘢中表达降低,ADAMTS8过表达可抑制增生性瘢痕成纤维细胞增殖、促进增生性瘢痕成纤维细胞凋亡。展开更多
