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猪囊尾蚴病重组DNA疫苗pcDNA3.1-TSO45-4B在小鼠体内的表达及诱导的细胞免疫效应 被引量：2
1
作者 王媛媛 孙新 +6 位作者 方强 胡守锋 杨小迪 张莺莺 陈兴智 王雪梅 夏惠 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2007年第4期262-265,共4页
目的观察基于六钩蚴期的猪囊尾蚴病基因疫苗pcDNA3.1-TSO45-4B在小鼠体内的表达及诱导的小鼠细胞免疫应答。方法将真核重组表达质粒pcDNA3.1-TSO45-4B肌注小鼠,RT-PCR方法扩增出目的条带;ELISA方法检测小鼠血清细胞因子IL-2、IL-4及IFN... 目的观察基于六钩蚴期的猪囊尾蚴病基因疫苗pcDNA3.1-TSO45-4B在小鼠体内的表达及诱导的小鼠细胞免疫应答。方法将真核重组表达质粒pcDNA3.1-TSO45-4B肌注小鼠,RT-PCR方法扩增出目的条带;ELISA方法检测小鼠血清细胞因子IL-2、IL-4及IFN-γ含量。结果RT-PCR产物为单一条带,大小为456bp,与TSO45-4B大小一致。免疫小鼠第2周细胞因子含量达到较高水平,第4周达到最高水平,第8周开始下降。结论基于猪囊尾蚴保护性抗原TSO45-4B的DNA疫苗能在小鼠体内表达并有效诱导细胞免疫效应。 展开更多
关键词 猪囊尾蚴 pcdna 3 1-TSO45—4B 疫苗 RT—PCR 细胞免疫
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pcDNA 3.1-AKR1B10真核表达载体的构建
2
作者 杨少龙 徐文涛 石斌 《现代诊断与治疗》 CAS 2012年第2期95-97,共3页
从胰腺癌PaTu8988S细胞中提取总RNA,并克隆AKR1B10基因,构建pcDNA 3.1-AKR1B10真核表达载体。转化感受态大肠杆菌DH5α细胞,提质粒,酶切及测序鉴定,pcDNA 3.1-AKR1B10真核表达载体构建成功。
关键词 AKR1B10 pcdna3.1 真核表达载体
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猪囊尾蚴病重组DNA疫苗pcDNA3．1-TSO45W在小鼠体内诱导的体液免疫效应 被引量：3
3
作者 王媛媛 杨小迪 +5 位作者 孙新 陶志勇 常雪莲 王小莉 方强 夏惠 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2014年第3期242-244,248,共4页
目的观察基于六钩蚴期的猪囊尾蚴病基因疫苗TS045W诱导的小鼠体液免疫应答。方法碱裂解法大量制备重组质粒pcDNA3．1TS045W及对照质粒pcDNA3．1。将45只雌性昆明小鼠（4～6周）随机分为3组，每组15只。A组（生理盐水组）：每只小鼠肌肉... 目的观察基于六钩蚴期的猪囊尾蚴病基因疫苗TS045W诱导的小鼠体液免疫应答。方法碱裂解法大量制备重组质粒pcDNA3．1TS045W及对照质粒pcDNA3．1。将45只雌性昆明小鼠（4～6周）随机分为3组，每组15只。A组（生理盐水组）：每只小鼠肌肉注射生理盐水100ul；B组（空质粒pcDNA3．1对照组）：每只小鼠肌肉注射空质粒l。0扯g；C组（重组质粒pcDNA3．1-TSO45W组）：每只小鼠肌肉注射重组质粒100肛g。分别于免疫后2、4、6、8、10周以ELISA方法检测小鼠血清免疫球蛋白IgG，IgM及IgA含量。结果pcDNA3．1-TSO45—4B免疫组小鼠血清IgG、IgM、IgA均于第4周开始升高，分别为（17．36±1．85）μg／ml、（9．25±1．78）μg／ml和（9．41±0．88）μg／ml，并分别于第8、第6、第8周达到最高，含量分别为（24．26±2．52）μg／ml、（10．69±0．52）μg／ml和（11．22±1．23）μg／ml，与空质粒对照组（B组）和生理盐水对照组（A组）比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论猪囊尾蚴保护性抗原TSO45WDNA疫苗能在小鼠体内诱导体液免疫效应。 展开更多
关键词 猪囊尾蚴 pcdna 3 1-TS045W 疫苗 体液免疫
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HOGG1特异性锤头状核酶真核表达载体的构建及鉴定 被引量：1
4
作者 张勤 张遵真 衡正昌 《毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期111-113,共3页
目的　设计并合成人8 羟基鸟嘌呤 DNA糖苷酶(HOGG1)特异性的锤头状核酶(hammerheadribozyme)基因并构建其真核表达载体。鉴定含有核酶靶基因HOGG1cDNA保守序列的真核表达载体。方法　运用计算机软件人工设计并合成核酶基因(RZ) ,将核酶... 目的　设计并合成人8 羟基鸟嘌呤 DNA糖苷酶(HOGG1)特异性的锤头状核酶(hammerheadribozyme)基因并构建其真核表达载体。鉴定含有核酶靶基因HOGG1cDNA保守序列的真核表达载体。方法　运用计算机软件人工设计并合成核酶基因(RZ) ,将核酶基因克隆到真核表达载体pcDNA 3 1中,重组子由BamHI和EcoRI酶切,琼脂糖凝胶电泳鉴定及DNA测序证实。含有HOGG1基因cDNA保守序列的真核表达载体经BamHI和EcoRI酶切电泳鉴定。结果　RZ人工合成后与pcDNA 3 1连接,酶切电泳及DNA测序证实合成的核酶基因序列正确并已被准确克隆入pcDNA 3 1的BamHI和EcoRI位点之间,命名为pcDNA 3 1 RZ。1 3kb的HOGG1基因cDNA保守序列准确克隆于pcDNA 3 1的BamHI和EcoRI酶切位点之间,命名为pcDNA 3 1 HOGG1。结论　成功合成HOGG1特异性的锤头状核酶基因并构建了该基因的真核表达载体,以及核酶靶基因的真核表达载体。 展开更多
关键词 G1特异性 真核表达载体pcdna3.1 鉴定 HOGG1 基因CDNA 8-羟基鸟嘌呤 琼脂糖凝胶电泳 锤头状核酶基因 DNA测序 保守序列 计算机软件 基因克隆 人工合成 基因序列 靶基因 酶切 糖苷酶 重组子 克隆人 设计 准确 位点
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重组hPPAR-α受体表达质粒的构建 被引量：1
5
作者 唐小峦 《海峡药学》 2014年第9期144-145,共2页
目的构建人PPAR-α受体的重组表达质粒。方法从基因库获取人PPAR-α基因蛋白编码区全长序列,依照引物设计原则及编码序列上已有酶切位点设计引物并添加酶切位点。从正常肝组织细胞提取总RNA,逆转录得cDNA,PCR扩增目的片段,克隆到pcDNA3.... 目的构建人PPAR-α受体的重组表达质粒。方法从基因库获取人PPAR-α基因蛋白编码区全长序列,依照引物设计原则及编码序列上已有酶切位点设计引物并添加酶切位点。从正常肝组织细胞提取总RNA,逆转录得cDNA,PCR扩增目的片段,克隆到pcDNA3.1真核表达载体,测序鉴定重组质粒目的基因蛋白编码区全长序列及开放阅读框的正确性,命名为pcDNA-hPPAR-α。结果核酸测序结果表明所得pcDNA-hPPAR-α的蛋白编码全长序列与基因库一致,正向插入载体pcDNA3.1多克隆位点NheⅠ和KpnⅠ之间,开放阅读框正确。结论成功构建重组质粒pcDNA-hPPAR-α。 展开更多
关键词 PPAR-Α 质粒 pcdna3.1
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人端粒酶催化亚单位(hTERT)特异性锤头状核酶真核表达载体的构建及鉴定
6
作者 樊丽 许景伟 邹宇 《齐齐哈尔医学院学报》 2008年第21期2564-2566,共3页
目的设计并合成人TERT特异性的锤头状核酶(hammerhead ribozyme)基因并构建其真核表达载体。含有核酶靶基因hTERTcDNA保守序列的T载体pMD18-T-hTERT的构建。方法运用计算机软件人工设计并合成核酶基因(RZ),将核酶基因克隆到真核表达载体... 目的设计并合成人TERT特异性的锤头状核酶(hammerhead ribozyme)基因并构建其真核表达载体。含有核酶靶基因hTERTcDNA保守序列的T载体pMD18-T-hTERT的构建。方法运用计算机软件人工设计并合成核酶基因(RZ),将核酶基因克隆到真核表达载体pcDNA 3.1(+)中,重组子由BamH I和EcoR I酶切,琼脂糖凝胶电泳鉴定及DNA测序。RT-PCR法扩增目的基因cDNA保守序列,与pMD-18进行T-A连接,重组子经菌液PCR及测序鉴定。结果RZ人工合成后与pcDNA 3.1(+)连接,酶切电泳及DNA测序证实合成的核酶基因序列正确并已被准确克隆入pcDNA 3.1(+)的BamH I和EcoR I位点之间,命名为pcDNA 3.1-RZ。220bp的hTERT基因cDNA保守序列准确克隆于pMD18-T,命名为pMD18-T-hTERT。结论成功合成hTERT特异性的锤头状核酶基因并构建了该基因的真核表达载体,以及核酶靶基因的pMD18-T-hTERT载体。 展开更多
关键词 HTERT 锤头状核酶 真核表达载体pcdna3.1(+)
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hSAMP32基因疫苗的构建及对小鼠生育的影响
7
作者 石冰涛 刘锦 《河南职工医学院学报》 2010年第6期637-639,共3页
目的构建hSAMP32避孕疫苗,研究其对小鼠生育率的影响。方法扩增hSAMP32基因片段;hSAMP32基因测序;重组质粒pcDNA3.1(+)-hSAMP32的构建;观察BALB/c小鼠生殖能力是否受到影响。结果经对比,目的基因组较对照组穿卵率明显下降。结论 hSAMP3... 目的构建hSAMP32避孕疫苗,研究其对小鼠生育率的影响。方法扩增hSAMP32基因片段;hSAMP32基因测序;重组质粒pcDNA3.1(+)-hSAMP32的构建;观察BALB/c小鼠生殖能力是否受到影响。结果经对比,目的基因组较对照组穿卵率明显下降。结论 hSAMP32基因可以降低BALB/c小鼠的生殖能力。 展开更多
关键词 hSAMP32 基因枪 pcdna3.1(+) PGEX-4T3 基因疫苗 RT—PCR
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人GRP78基因真核表达载体的构建及鉴定 被引量：1
8
作者 吴琼 蔡云鹏 +1 位作者 汤海澎 魏嘉 《辽宁医学院学报》 CAS 2007年第4期26-28,共3页
目的利用PCR技术克隆人GRP78基因编码基因(约2000bp)。方法将PCR产物连接到pcDNA3.1(+)载体上,酶切鉴定后测序分析。结果序列分析表明,扩增片段与GenBank里登陆的序列同源性为100%。并以pcDNA3.1(+)表达载体为框架结构,尝试构建真核表... 目的利用PCR技术克隆人GRP78基因编码基因(约2000bp)。方法将PCR产物连接到pcDNA3.1(+)载体上,酶切鉴定后测序分析。结果序列分析表明,扩增片段与GenBank里登陆的序列同源性为100%。并以pcDNA3.1(+)表达载体为框架结构,尝试构建真核表达载体。结论测序分析结果表明序列同源性为100%。 展开更多
关键词 人GRP78基因 表达载体pcdna3.1(+) 真核细胞
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