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Immunofluorescent Labeling of Human HepG2 Cells with CdTe Quantum Dot Probe Conjugated with Anti-pan CK MAb
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作者 SUI Yu-jie ZHANG Gui-zhen +5 位作者 WANG Qian WANG Ya-li WU Mei DU Zhen-wu ZHANG Jie JIANG Ri-hua 《Chemical Research in Chinese Universities》 SCIE CAS CSCD 2011年第2期277-281,共5页
A relatively sensitive, specific, and photostable method for the detection of cytokeratin of cancer cells via conjugation with cadmium telluride quantum dots(CdTe QDs) was described. Water soluble CdTe QDs were conj... A relatively sensitive, specific, and photostable method for the detection of cytokeratin of cancer cells via conjugation with cadmium telluride quantum dots(CdTe QDs) was described. Water soluble CdTe QDs were conjugated to anti-pan-cytokeratin(CK) monoclonal antibody(MAb) through coupling reagent [1-ethyl-3-(3-dimethyla- mino propyl)carbodiimide, EDC] and the conjugates were purified by dialysis. The expression of pan CK protein in HepG2 cells was observed by immunocytochemistry and direct immunofluorescence via QDs-Ab conjugates respectively. Fluorescence intensity and photostability of QDs were compared with those of FITC(fluorescein isothiocyanate). The results show that the QDs-Ab conjugates recognized specifically pan CK protein in HepG2 cells. Compared with FITC, CdTe QDs had higher brightness and photostability without obvious photobleaching under continuous exciting light illumination for 30 min and after the placement at room temperature for 3 d. The results indicate that conjugates of CdTe quantum dot with anti-pan CK MAb can be used for labeling cancer cells derived from epithelial tissues, which provides the basis for the detection of circulating tumor cells(CTCs). 展开更多
关键词 Quantum dot Pan-cytokeratin Immunofluorescence labeling Fluorescence photostability
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The Application of Quantum Dots Double-Labeling Immunofluorescence Technology in Detection of PR and CD146 in Paraffin-Embedded Tissue Sections of Endometrioid Adenocarcinoma
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作者 Jianping Zheng Qing Huang +3 位作者 Lei Zhang Yong Chen Jinpeng Jiang Cunjian Yi 《Yangtze Medicine》 2017年第1期1-7,共7页
Objective: The aim was to detect the expression of PR and CD146 in paraf-fin-embedded tissue sections of endometrioid adenocarcinoma by using QDs double-labeling immunofluorescence, and evaluate the applied value of Q... Objective: The aim was to detect the expression of PR and CD146 in paraf-fin-embedded tissue sections of endometrioid adenocarcinoma by using QDs double-labeling immunofluorescence, and evaluate the applied value of QDs double-labeling immunofluorescence in endometrioid adenocarcinoma. Methods: To detect the expression of PR and CD146 on 140 cases of paraffin-embedded tissue sections of endometrioid adenocarcinoma by using QDS double-labeling immunofluorescence. Results: The co-expression of PR and CD146 in the endometrioid adenocarcinoma can be detected by QDs double-labeling immunofluorescence, and there was no correlation between them (P > 0.05). Conclusion: QDs double-labeling immunofluorescence can detect the localization and co-expression of PR and CD146 in the endometrioid adenocarcinoma. 展开更多
关键词 ENDOMETRIOID Adenocarcinoma PR CD146 QDs Double-labeling IMMUNOFLUORESCENCE
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R-藻红蛋白标记抗体荧光探针的高效制备及其在禽流感病毒检测中的应用 被引量:13
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作者 颜世敢 朱丽萍 +3 位作者 张玉忠 周百成 张秀美 李雁冰 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期92-96,共5页
用适宜摩尔浓度的异型双功能交联剂SPDP将R-藻红蛋白与纯化的禽流感病毒H9亚型多克隆抗体交联,并经高效液相色谱纯化制备R-藻红蛋白标记抗体荧光探针。以溴化氰活化的琼脂糖微球为固相载体,采用双抗体夹心法建立固相免疫荧光检测法,以... 用适宜摩尔浓度的异型双功能交联剂SPDP将R-藻红蛋白与纯化的禽流感病毒H9亚型多克隆抗体交联,并经高效液相色谱纯化制备R-藻红蛋白标记抗体荧光探针。以溴化氰活化的琼脂糖微球为固相载体,采用双抗体夹心法建立固相免疫荧光检测法,以制备的R-藻红蛋白标记抗体荧光探针检测禽流感病毒H9尿囊毒。结果表明,阳性微球在蓝、绿光激发下发射桔黄色荧光,荧光明亮,无背景光干扰,特异性好,灵敏度高,可检测蛋白浓度为1.85×10-5mg.mL-1的H9亚型尿囊毒。R-藻红蛋白标记探针的检测灵敏度高于FITC标记探针,R-藻红蛋白可替代FITC或与FITC等荧光染料一起用于多色荧光免疫检测。 展开更多
关键词 R-藻红蛋白 荧光标记 固相免疫荧光检测 禽流感病毒
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抑郁大鼠海马微管相关蛋白pMAP-2和p-Tau表达的研究 被引量:5
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作者 隋竹欣 李珍 +2 位作者 刘昊 袁杨 王海涛 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期175-180,共6页
目的:观察微管蛋白p MAP-2和p-Tau在抑郁大鼠海马的表达变化情况,探讨海马微管蛋白与抑郁症的关系和意义。方法:通过利用慢性不可预见性温和应激(chronic unpredicted mild stress,CUMS)建立大鼠抑郁症模型,对照组和模型组分别采用糖水... 目的:观察微管蛋白p MAP-2和p-Tau在抑郁大鼠海马的表达变化情况,探讨海马微管蛋白与抑郁症的关系和意义。方法:通过利用慢性不可预见性温和应激(chronic unpredicted mild stress,CUMS)建立大鼠抑郁症模型,对照组和模型组分别采用糖水偏好实验、旷场实验以及Morris水迷宫对其行为进行学检测,采用尼氏染色观察海马神经元的形态学变化,对照组和模型组造模后1、7、14、28 d分批处死大鼠,用Western Blot方法检测海马组织中p-MAP-2和p-Tau的蛋白表达水平,免疫荧光双标观察海马组织中p-MAP-2和p-Tau定位分布。结果:糖水偏好实验:模型组糖水消耗量和糖水偏好百分比分别低于对照组(P<0.01);旷场实验:模型组行走总路程、中央活动时间、直立次数和修饰行为分别低于对照组(P<0.01);Morris水迷宫模型组平均逃避潜伏期高于对照组(P<0.01)。CUMS后1 d大鼠海马p-MAP-2和p-Tau蛋白的表达低于对照组,7 d后开始升高,14 d明显高于对照组,28 d仍略高于对照组。p-MAP-2和p-Tau免疫荧光双标结果显示:部分神经元的胞浆内p-MAP-2和pTau同时表达,表明p-MAP-2和p-Tau有部分共定位。结论:p-MAP-2和p-Tau在抑郁模型大鼠海马出现先降低后增高的现象,因此我们推测在应激抑郁症发病过程中,p-MAP-2和p-Tau蛋白表达的变化可能影响微管的稳定性,破坏细胞骨架稳态,从而影响海马神经元的结构改变。 展开更多
关键词 抑郁症 海马 微管相关蛋白 免疫荧光双标 大鼠
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藻胆蛋白免疫荧光法检测血清HBsAg的初步结果 被引量:5
5
作者 吴萍 顾铭 +1 位作者 戚艺华 欧阳藩 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第6期461-463,共3页
目的 研制藻胆蛋白荧光标记诊断试剂盒。方法结合检测乙 肝病毒表面抗原(HBsAg),以硝酸纤维素膜作为固相包 被载体,采用藻胆蛋白免疫荧光一步法检测和酶联免疫吸附(ELISA)法对定值的标准质控 抗原HBsAg样品以及500份血清样品进行同时测... 目的 研制藻胆蛋白荧光标记诊断试剂盒。方法结合检测乙 肝病毒表面抗原(HBsAg),以硝酸纤维素膜作为固相包 被载体,采用藻胆蛋白免疫荧光一步法检测和酶联免疫吸附(ELISA)法对定值的标准质控 抗原HBsAg样品以及500份血清样品进行同时测定。结果目前本法用于血清抗原的检测是可行的,与ELISA法比较,无假阳性现象,随机检出 率达96.6%。结论进一步提高该方法的检出灵敏 度,使之有望成为一种优良、安全、快速的检测标记方法。 展开更多
关键词 藻胆蛋白 免疫 荧光标记法 乙型肝炎 HBSAG
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量子点-CK19抗体荧光探针对乳腺癌细胞免疫荧光标记及毒性研究 被引量:12
6
作者 郑少鸾 王本忠 +3 位作者 朱立新 许小亮 尹乃强 黄乾鹏 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 北大核心 2014年第2期81-85,共5页
目的:制备量子点-细胞角蛋白19抗体(cytokeratin,CK19)荧光探针,利用其光学性质和特异性识别能力对乳腺癌细胞株MDA-MB-231进行荧光标记,并探讨其细胞毒性。方法:用水热法合成CdTeS量子点,并将其与CK19抗体连接。通过直接免疫荧光法,利... 目的:制备量子点-细胞角蛋白19抗体(cytokeratin,CK19)荧光探针,利用其光学性质和特异性识别能力对乳腺癌细胞株MDA-MB-231进行荧光标记,并探讨其细胞毒性。方法:用水热法合成CdTeS量子点,并将其与CK19抗体连接。通过直接免疫荧光法,利用合成的量子点-CK19抗体探针对乳腺癌细胞株MDA-MB-231进行荧光标记,并观察探针在细胞内的分布。分别采用流式细胞术和MTT法,检测探针作用后细胞凋亡情况和增殖变化。结果:量子点-CK19抗体探针能与抗原特异性结合,荧光显微镜和激光共聚焦显微镜示,该探针能有效对乳腺癌细胞株MDA-MB-231进行特异性荧光标记,荧光主要位于细胞质和细胞膜,荧光清晰明亮,持续时间长。与对照组相比,量子点-CK19抗体探针浓度≤2nmol/L时,对照组乳腺癌细胞株MDA-MB-231的凋亡率为(3.763±0.130)%,0.25nmol/L组为(3.760±0.161)%,0.5nmol/L组为(3.827±0.107)%,1nmol/L组为(3.947±0.081)%,2nmol/L组为(4.013±0.055)%。单因素方差分析结果显示,各剂量组与对照组比较,差异无统计学意义,F=3.023,P=0.071。量子点-CK19抗体探针可抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖,F=133.407,P<0.001;且存在时间-效应(F=299.142,P<0.001)和剂量-效应(F=9.105,P<0.001)关系,随着探针浓度的增加和作用时间的延长,A值逐渐减小,但除了浓度2nmol/L作用48h外,其余各组的抑制率均<7%。结论:成功制备了量子点-CK19抗体荧光探针,该探针能有效对乳腺癌细胞株MDA-MB-231进行荧光标记,且具有良好的光学性质和较低的细胞毒性。 展开更多
关键词 量子点 细胞角蛋白19 乳腺癌细胞 免疫荧光标记 细胞毒性
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叶酸对胎鼠神经干细胞体外增殖的影响 被引量:4
7
作者 张绪梅 黄国伟 +2 位作者 姬长珍 张文治 苏心 《营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期144-147,152,共5页
目的探讨叶酸对体外培养的胚胎大鼠神经干细胞(neural stem cells,NSCs)增殖的影响。方法本研究采用显微解剖、机械吹打、无血清悬浮培养方法分离培养鼠胚大脑NSCs,用巢蛋白(nestin)免疫荧光染色对其进行鉴定,5'-溴脱氧尿嘧啶(BrdU... 目的探讨叶酸对体外培养的胚胎大鼠神经干细胞(neural stem cells,NSCs)增殖的影响。方法本研究采用显微解剖、机械吹打、无血清悬浮培养方法分离培养鼠胚大脑NSCs,用巢蛋白(nestin)免疫荧光染色对其进行鉴定,5'-溴脱氧尿嘧啶(BrdU)掺入法检测细胞增殖状态;设立正常对照组,叶酸低、高剂量(培养液中添加叶酸4.0 40 mg/L)和叶酸缺乏组(培养液中添加叶酸拮抗剂甲氨蝶呤0.4mg/L);通过nestin+BrdU免疫荧光双标记和绘制细胞生长曲线(MTT法)检测叶酸对细胞增殖状态的影响。结果无血清培养液中可形成大量呈nestin抗原阳性细胞组成的神经球,BrdU免疫标记证实培养的NSCs具有增殖能力。免疫荧光双标记和MTT结果显示,两个叶酸干预组NSCs增殖能力较对照组显著增强。结论体外培养的胚胎大鼠NSCs具有增殖和自我更新的能力;叶酸可以在一定程度上增强NSCs的增殖能力,促进神经干细胞的生长。 展开更多
关键词 叶酸 神经干细胞 NESTIN BRDU 免疫荧光双标记
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人参皂苷Rg1通过自噬抑制Raw 264.7巨噬细胞凋亡 被引量:10
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作者 凌露 杨萍 +4 位作者 盖盛坤 刘燃 陈媛丽 陆地 孙林 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期599-606,共8页
目的探讨人参皂苷Rg1在血清剥夺诱导的Raw 264.7巨噬细胞自噬和凋亡中的作用及其机制。方法体外培养小鼠Raw 264.7巨噬细胞随机分为空白对照组、不同时间(12、24、36、48和60h)血清剥夺处理组、人参皂苷Rg1(50μmol/L)+不同时间(24、36... 目的探讨人参皂苷Rg1在血清剥夺诱导的Raw 264.7巨噬细胞自噬和凋亡中的作用及其机制。方法体外培养小鼠Raw 264.7巨噬细胞随机分为空白对照组、不同时间(12、24、36、48和60h)血清剥夺处理组、人参皂苷Rg1(50μmol/L)+不同时间(24、36和48h)血清剥夺处理组;依据最佳血清剥夺时间进一步分为空白对照组、血清剥夺(36h)处理组、人参皂苷Rg1(50μmol/L)+血清剥夺(36h)处理组、人参皂苷Rg1(50μmol/L)+血清剥夺(36h)+3-甲基腺嘌呤(3-MA)(5mmol/L,1h)处理组。采用Western blotting检测LC3、Atg 5、Beclin 1、cleaved Caspase-3、Bcl-2及Bax蛋白水平的表达变化;采用免疫荧光双标记检测细胞内LC3蛋白水平表达的变化;采用Hoechst 33342/PI荧光双染检测细胞凋亡的变化。结果不同时间(12、24、36、48和60h)血清剥夺诱导Raw264.7巨噬细胞凋亡;与血清剥夺处理组相比,人参皂苷Rg1处理组LC3、Atg 5及Beclin 1蛋白表达水平显著上调;加入3-MA抑制剂后,凋亡细胞较人参皂苷Rg1处理组明显增多,且Bcl-2蛋白表达水平明显下调的同时,cleaved Caspase-3和Bax蛋白表达水平则显著上调。结论人参皂苷Rg1通过促进血清剥夺诱导的Raw 264.7巨噬细胞自噬,发挥抗凋亡的保护作用。 展开更多
关键词 人参皂苷RG1 自噬 RAW 264.7巨噬细胞 免疫印迹法 免疫荧光双标记法 Hochest 33342/PI荧光双染 小鼠
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白菜组织细胞微管间接免疫荧光检测体系的优化 被引量:3
9
作者 张静宜 侯喜林 +1 位作者 史公军 王利英 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期1551-1554,共4页
利用正交试验设计,从酶浓度、酶解时间、一抗稀释度、二抗稀释度4种因素3个水平对白菜组织细胞微管的间接免疫荧光检测体系进行了优化,确立了适合白菜组织细胞的微管免疫荧光检测体系———果胶酶和纤维素酶浓度均为1.0%,酶解时间1h;一... 利用正交试验设计,从酶浓度、酶解时间、一抗稀释度、二抗稀释度4种因素3个水平对白菜组织细胞微管的间接免疫荧光检测体系进行了优化,确立了适合白菜组织细胞的微管免疫荧光检测体系———果胶酶和纤维素酶浓度均为1.0%,酶解时间1h;一抗稀释浓度1∶100,孵育时间1h;二抗稀释浓度1∶500,孵育时间1h。使用优化后的微管免疫荧光检测体系在荧光显微镜上能够快速观察到白菜组织细胞内的微管。 展开更多
关键词 白菜 正交试验 微管 间接免疫荧光
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用于糖链抗原CA19-9实时动态活检的免疫双光子荧光标记试剂盒 被引量:3
10
作者 黄池宝 张道海 +4 位作者 曾伯平 刘其斌 陈华仕 康帅 陈晓远 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2016年第4期638-642,共5页
采用双光子荧光标记探针LP制备了免疫双光子荧光抗体LP-Ab,以特异性识别肿瘤标志物CA19-9(Ag)形成抗原-抗体复合物(LP-Ab·Ag),基于双光子诱导荧光机制用近红外激光(740 nm)激发LP-Ab·Ag,利用LP-Ab·Ag的双光子荧光实现了C... 采用双光子荧光标记探针LP制备了免疫双光子荧光抗体LP-Ab,以特异性识别肿瘤标志物CA19-9(Ag)形成抗原-抗体复合物(LP-Ab·Ag),基于双光子诱导荧光机制用近红外激光(740 nm)激发LP-Ab·Ag,利用LP-Ab·Ag的双光子荧光实现了CA19-9的高清晰度、高灵敏度及高分辨率的量化检测和实时动态成像,并制成用于糖链抗原CA19-9检测的简单便捷的双光子荧光标记试剂盒. 展开更多
关键词 糖链抗原CA19-9 抗CA19-9单克隆抗体(Ab19-9) 免疫荧光标记 双光子 活检
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HIV-1 gp41的酵母表面展示及表达优化 被引量:2
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作者 向柱方 林影 +2 位作者 叶波 韩双艳 赵树进 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期684-689,共6页
以His标签检测蛋白的表达,利用酿酒酵母表面展示系统,成功地将HIV-1 gp41片段锚定在酵母表面,并检测到gp41的活性。以pMD18T-gp41为模板,通过PCR技术克隆了gp41基因,将gp41基因通过双酶切连接到载体pICAS-His上,构建了gp41酵母表面展示... 以His标签检测蛋白的表达,利用酿酒酵母表面展示系统,成功地将HIV-1 gp41片段锚定在酵母表面,并检测到gp41的活性。以pMD18T-gp41为模板,通过PCR技术克隆了gp41基因,将gp41基因通过双酶切连接到载体pICAS-His上,构建了gp41酵母表面展示载体,并将其转化至酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)MT8-1中。重组菌经培养,利用免疫荧光染色方法进行染色,显微镜观察发现重组酵母细胞表面有绿色荧光,流式细胞仪结果进一步证实gp41正确折叠展示于酵母细胞表面。采用不同浓度的葡萄糖培养基进行表达优化。当葡萄糖浓度为1%时,82.46%的酵母细胞表达了gp41抗原;随着葡萄糖浓度升高,蛋白表达受到抑制。 展开更多
关键词 酵母展示技术 HIV-1 GP41 免疫荧光染色 流式细胞仪
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探讨HBsAg/Annexin V检测在HBV宫内传播中的意义 被引量:3
12
作者 曹宝花 门可 +3 位作者 徐德忠 闫永平 张景霞 王文勇 《第四军医大学学报》 北大核心 2004年第7期581-583,共3页
目的 :揭示乙肝病毒 (hepatitisBvirus,HBV)感染胎盘滋养层细胞的可能方式 ,探讨乙肝表面抗原 /膜联蛋白V(HBsAg/AnnexinV)检测在HBV宫内传播机制研究的意义 .方法 :收集血清学HBsAg阳性孕妇足月胎盘组织 39例 ,经SABC免疫组化方法在其... 目的 :揭示乙肝病毒 (hepatitisBvirus,HBV)感染胎盘滋养层细胞的可能方式 ,探讨乙肝表面抗原 /膜联蛋白V(HBsAg/AnnexinV)检测在HBV宫内传播机制研究的意义 .方法 :收集血清学HBsAg阳性孕妇足月胎盘组织 39例 ,经SABC免疫组化方法在其中 2 3例中检测到HBsAg ,随机选取 7例采用免疫荧光双标记方法结合激光共聚焦技术检测HBsAg/An nexinV .结果 :血清学HBsAg阳性孕妇足月胎盘组织中HB sAg/AnnexinV共存于滋养层细胞胞质中 .结论 :提示在HBV宫内传播机制方面存在着这样一种可能 ,即AnnexinV结合并携带HBV进入滋养层细胞 ,从而使滋养层细胞受到HBV感染 . 展开更多
关键词 免疫荧光双标记 肝炎病毒 乙型 膜联蛋白V 胎盘
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碱性成纤维细胞生长因子在癫痫大鼠海马中的表达 被引量:4
13
作者 张广慧 张龙轩 +2 位作者 朱遂强 苟玉兰 许峰 《中国康复》 2005年第5期267-269,共3页
目的:探讨急性癫痫大鼠模型脑海马中碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的表达、分布及其意义。方法:将39只健康雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组(A组)3只、生理盐水组(B组)和癫痫模型组(C组)各18只,A组不处置,C组大鼠以氯化锂-匹罗卡品诱... 目的:探讨急性癫痫大鼠模型脑海马中碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的表达、分布及其意义。方法:将39只健康雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组(A组)3只、生理盐水组(B组)和癫痫模型组(C组)各18只,A组不处置,C组大鼠以氯化锂-匹罗卡品诱导急性癫痫模型,B组以相同体积的生理盐水代替匹罗卡品,A组大鼠处死,B、C组分别于造模后6、12、24 h及3、71、4 d时各处死3只,检测各组大鼠海马中bFGF的表达规律及其在海马细胞中的分布情况。结果:造模后A和B组海马区发现有bFGF蛋白的表达,但表达水平较C组低(P<0.05);C组癫痫发作后6 h海马区bFGF表达开始增加,24 h达高峰,以后逐渐下降,14 d时仍维持较高水平(P<0.05);bFGF主要表达于星形胶质细胞,CA2区部分神经元表达。结论:bFGF在急性癫痫大鼠模型脑海马中呈规律性表达,以星形胶质细胞表达为主,CA2区部分神经元表达;bFGF可能对癫痫后的脑损伤起保护作用。 展开更多
关键词 癫痫 免疫荧光 碱性成纤维细胞生长因子 大鼠
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藻胆蛋白免疫荧光法的初步探索 被引量:4
14
作者 吴萍 顾铭 +1 位作者 戚艺华 欧阳藩 《化工冶金》 EI CSCD 北大核心 2000年第4期375-378,共4页
采用CNBr活化的琼脂糖凝胶小珠作为固相载体,应用藻胆蛋白荧光标记物对血清可溶性抗原检测作了初步的探索. 结果表明, 藻胆蛋白免疫荧光法用于可溶性抗原检测不但可行,而且具有荧光强度高、可长期保存且无明显衰减等特点.
关键词 免疫标记 免疫荧光分析 藻胆蛋白荧光探针
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开设减数分裂同源染色体联会与重组观察实验 被引量:2
15
作者 王宏刚 魏远 +4 位作者 陈成彬 王春国 宋文芹 白艳玲 黄桂安 《实验技术与管理》 CAS 北大核心 2020年第6期39-41,76,共4页
同源染色体联会与重组是减数分裂过程中的重要生理事件,也是遗传学教学的重要知识点。在实验教学中,以小鼠睾丸为实验材料,制备减数分裂染色体展片。利用免疫荧光双标技术对联会复合体蛋白SCP3和SCP1进行标记,在荧光显微镜下观察减数分... 同源染色体联会与重组是减数分裂过程中的重要生理事件,也是遗传学教学的重要知识点。在实验教学中,以小鼠睾丸为实验材料,制备减数分裂染色体展片。利用免疫荧光双标技术对联会复合体蛋白SCP3和SCP1进行标记,在荧光显微镜下观察减数分裂前期Ⅰ各阶段联会复合体的形态特点。通过对联会复合体蛋白SCP3和MLH1进行免疫荧光标记可观察到减数分裂前期Ⅰ粗线期的联会复合体和重组节。该实验项目的开设,可以帮助学生更加直观地理解同源染色体联会与DNA同源重组的概念和意义,为其将来从事雄性不育机制的科学研究和临床诊断进行一定的知识储备。通过该实验,将免疫荧光双标技术引入实验教学,还可增强学生的科研兴趣,提高课程的教学质量,为创新性人才培养模式探索提供了思路。 展开更多
关键词 减数分裂 联会复合体 重组节 免疫荧光双标 实验教学
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量子点对膀胱癌BIU-87细胞抗原的标记检测 被引量:2
16
作者 袁润 程帆 +1 位作者 张孝斌 余伟民 《武汉大学学报(医学版)》 CAS 2017年第1期28-30,35,共4页
目的:探讨不同的量子点免疫荧光组织化学方法对膀胱癌BIU-87细胞抗原特异性标记的效果,以优化细胞标记方法。方法:分别采用量子点免疫荧光组织化学三步法、二步法、一步法检测前列腺干细胞抗原(PSCA)在膀胱癌BIU-87细胞中的表达情况,观... 目的:探讨不同的量子点免疫荧光组织化学方法对膀胱癌BIU-87细胞抗原特异性标记的效果,以优化细胞标记方法。方法:分别采用量子点免疫荧光组织化学三步法、二步法、一步法检测前列腺干细胞抗原(PSCA)在膀胱癌BIU-87细胞中的表达情况,观察并分析三种方法特异性标记的效果。结果:PSCA特异性的表达于BIU-87细胞胞质或膜,三种方法在紫外光激发下均能观察到表达部位明显的红色荧光,三步法实验技术成熟,量子点标记的链霉亲和素性质稳定,检测灵敏度高,背景清晰,但实验步骤繁琐,耗时较长,不宜用于活细胞标记;二步法实验步骤和操作时间都相对有所减少,但量子点标记的二抗性质不稳定,非特异吸附较强;一步法操作简便,省时,标记效果明显,特异性强,但是标记一抗成本较高,且对一抗的剂量要求较大。结论:三种量子点荧光标记方法均能对固定细胞表面抗原进行特异性标记,需根据不同实验需求选择合适的标记方法以达到最佳实验效果。特异性一步法量子点荧光标记在活细胞及活体靶向成像示踪中具有巨大的应用前景。 展开更多
关键词 量子点 膀胱癌 BIU-87 细胞标记 免疫荧光
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骨髓间充质干细胞对大鼠硅沉着病纤维化形成的影响 被引量:7
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作者 都凌杰 李冉 +4 位作者 赵曼曼 王海涛 田艳霞 王焕 高俊玲 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期62-67,共6页
目的观察骨髓间充质干细胞(BMSCs)对大鼠硅沉着病(矽肺)纤维化形成的影响,并初步探讨其机制。方法体外分离、培养BMSCs。将54只健康雌性SD大鼠随机分为生理盐水对照组、硅沉着病模型组、干细胞移植组,每组18只。分别在造模后1、3、7、14... 目的观察骨髓间充质干细胞(BMSCs)对大鼠硅沉着病(矽肺)纤维化形成的影响,并初步探讨其机制。方法体外分离、培养BMSCs。将54只健康雌性SD大鼠随机分为生理盐水对照组、硅沉着病模型组、干细胞移植组,每组18只。分别在造模后1、3、7、14、28及56d处死各组大鼠,HE染色观察肺组织形态变化;Masson染色观察胶原增生情况;免疫荧光双标技术检测性别决定基因(sry)和肺泡表面活性蛋白C(SP-C)示踪雄性大鼠BMSCs在雌性硅沉着病大鼠肺组织内的分布及分化情况;免疫印迹法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达情况。结果 HE及Masson染色显示,细胞移植组大鼠肺组织肺泡炎、肺纤维化程度及胶原面积均轻于模型组。免疫荧光双标显示,细胞移植组的雌性大鼠肺组织中有sry阳性的细胞,并且部分sry阳性细胞同时表达SP-C。免疫印迹法结果显示,模型组肺组织TNF-α和MMP-9的蛋白表达均较对照组增高(P<0.05),不同时间点在肺组织内的表达有不同的特点;BMSCs移植组肺组织TNF-α和MMP-9的蛋白表达在各时间点均低于模型组,高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 BMSCs可以减轻二氧化硅(SiO2)所致的大鼠硅沉着病纤维化程度,可能与其在肺组织中分化为Ⅱ型肺泡上皮细胞,降低肺组织中TNF-α和MMP-9的蛋白表达有关。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 硅沉着病 性别决定基因 肺泡表面活性蛋白C 基质金属蛋白酶-9 免疫荧光双标 免疫印迹法 大鼠
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金黄色葡萄球菌功能蛋白的酵母表面展示 被引量:2
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作者 向柱方 林影 +2 位作者 王小宁 赵树进 韩双艳 《华南理工大学学报(自然科学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第11期105-109,共5页
利用酿酒酵母表面展示系统,成功地将金黄色葡萄球菌功能蛋白ZZ锚定在酵母表面,并进一步用展示有蛋白ZZ的酵母细胞纯化出兔IgG.以pEZZ18为模板,通过PCR技术克隆了ZZ基因,将ZZ基因通过双酶切连接到穿梭载体pICAS,构建了酵母表面展示载体pI... 利用酿酒酵母表面展示系统,成功地将金黄色葡萄球菌功能蛋白ZZ锚定在酵母表面,并进一步用展示有蛋白ZZ的酵母细胞纯化出兔IgG.以pEZZ18为模板,通过PCR技术克隆了ZZ基因,将ZZ基因通过双酶切连接到穿梭载体pICAS,构建了酵母表面展示载体pICZZ,并将其转化至酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)MT8-1中.核酸电泳结果表明ZZ基因成功整合到了酵母基因组中.重组菌经培养,利用免疫荧光染色方法进行染色,显微镜观察表明ZZ蛋白已经展示在酵母细胞表面,流式细胞仪分析结果证实80.4%的酵母细胞表达了ZZ蛋白.利用展示有蛋白ZZ的酵母细胞吸附兔血清中的IgG,洗脱后进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺电脉,并进行W estern blot免疫印迹,结果表明,此重组酵母细胞纯化的兔IgG比标样兔IgG纯度更高. 展开更多
关键词 酿酒酵母 金黄色葡萄球菌蛋白ZZ 免疫荧光染色 流式细胞仪
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水溶性CdTe量子点-广谱抗细胞角蛋白单克隆抗体荧光探针的制备及其对肝癌细胞HepG2的免疫荧光标记 被引量:1
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作者 隋玉杰 王茜 +5 位作者 王雅丽 吴枚 郑锦花 杜珍武 张玉成 张桂珍 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期628-631,共4页
目的制备水溶性CdTe量子点-广谱抗细胞角蛋白单克隆抗体(QDs-MAb)荧光探针,并对其特异免疫性识别能力和荧光稳定性进行检测。方法在EDC偶联剂的作用下,将水溶性CdTe量子点与广谱细胞角蛋白单克隆抗体(PanCK)进行了连接;对肝癌细胞HepG2... 目的制备水溶性CdTe量子点-广谱抗细胞角蛋白单克隆抗体(QDs-MAb)荧光探针,并对其特异免疫性识别能力和荧光稳定性进行检测。方法在EDC偶联剂的作用下,将水溶性CdTe量子点与广谱细胞角蛋白单克隆抗体(PanCK)进行了连接;对肝癌细胞HepG2采用免疫细胞化学法和QDs-MAb单抗荧光探针直接免疫荧光标记法观察比较PanCK蛋白在细胞内的分布;将量子点与传统的荧光染料FITC的荧光强度和荧光稳定性进行了比较。结果QDs-MAb单抗荧光探针对HepG2细胞内的PanCK分子具有特异性的识别能力;与FITC相比,QDs-MAb荧光探针荧光度更强,光化学稳定性更好,激发光连续照射30min及室温放置3d后均未见明显淬灭。结论本实验成功制备了QDs-MAb荧光探针,为半导体量子点用于上皮来源的肿瘤细胞内PanCK分子的相关检测提供了科学依据。 展开更多
关键词 量子点 角蛋白 免疫荧光标记 荧光稳定性
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MMP-9/IgA和TIMP-1/IgA在IgA肾病患者肾组织中的共表达及意义 被引量:9
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作者 师锁柱 张雪光 陈香美 《军医进修学院学报》 CAS 2011年第12期1269-1270,1273,共3页
目的观察基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及其组织抑制因子-1(TIMP-1)和免疫球蛋白A(IgA)在IgA肾病不同病变肾小球内共表达情况,探讨IgA沉积在IgA肾病进展中的作用。方法采用石蜡切片免疫荧光双标记技术,对56例不同病理分级IgA肾病(Lee氏分级Ⅰ... 目的观察基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及其组织抑制因子-1(TIMP-1)和免疫球蛋白A(IgA)在IgA肾病不同病变肾小球内共表达情况,探讨IgA沉积在IgA肾病进展中的作用。方法采用石蜡切片免疫荧光双标记技术,对56例不同病理分级IgA肾病(Lee氏分级Ⅰ-Ⅴ级)患者肾组织中MMP-9/IgA、TIMP-1/IgA共表达变化进行检测。结果在Lee氏分级Ⅰ-Ⅱ级肾小球中TIMP-1/IgA有少量表达,MMP-9/IgA表达最多。Lee氏分级Ⅲ级肾小球中TIMP-1/IgA表达增多,MMP-9/IgA表达减少,在Lee氏分级Ⅳ-Ⅴ级重度系膜病变肾小球内TIMP-1/IgA表达最多,MMP-9/IgA有少量表达,而在硬化肾小球内两者表达最少。结论在IgA肾病进展过程中随着肾小球内IgA沉积增多,肾小球内TIMP-1表达逐渐增高,MMP-9表达逐渐减少,提示IgA沉积引起的MMP-9/TIMP-1失衡参与了IgA肾病肾小球硬化过程。 展开更多
关键词 IGA肾病 基质金属蛋白酶-9 基质金属蛋白酶组织抑制因子-1 石蜡切片 免疫荧光双标记
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