乙型肝炎肝硬化患者外周血iNKT细胞活化标志物CD38和HLA-DR表达水平与肝损伤程度相关性 被引量：5

1

作者 陈卫红 陈艳 曾珍 《肝脏》 2016年第1期9-12,16,共5页

目的探讨乙型肝炎肝硬化(LC)患者血清iNKT细胞数量、活化标志物CD38和HLA-DR表达水平与肝损伤程度的关系。方法采用流式细胞仪检测LC患者外周血iNKT细胞频率及CD38和HLA-DR分子在iNKT细胞上的表达水平,分析其与LC患者肝功能Child-Pugh... 目的探讨乙型肝炎肝硬化(LC)患者血清iNKT细胞数量、活化标志物CD38和HLA-DR表达水平与肝损伤程度的关系。方法采用流式细胞仪检测LC患者外周血iNKT细胞频率及CD38和HLA-DR分子在iNKT细胞上的表达水平,分析其与LC患者肝功能Child-Pugh分级、MELD评分及临床肝功能指标相关性。两组数据比较采用MannWhitney U检验,相关性分析采用Spearman rank检验。结果与健康对照组相比,LC患者组iNKT细胞频率为0.106%,显著降低(P=0.026),CD4^+iNKT细胞比例为66.7%,显著升高(P<0.01),CD4-iNKT细胞比例为31.2%,显著降低(P<0.01);CD38和HLA-DR在iNKT、CD4^+iNKT和CD4-iNKT细胞上表达水平分别为14.2%、24.9%,18.8%、19.1%,18.4%、36.9%,明显升高(P<0.05),随着Child-Pugh分级有逐渐升高的趋势,但分级之间差异无统计学意义。CD4^+iNKT细胞上CD38和HAL-DR分子表达水平与ALB呈显著负相关(r=-0.496,P=0.019;r=-0.501,P=0.018)。结论 LC患者iNKT细胞频率明显降低;活化水平显著升高,且与肝功能损害程度相关,提示iNKT细胞可能参与LC肝损伤。 展开更多

关键词 乙型肝炎肝硬化 inkt细胞 CD4+inkt细胞 CD4-inkt细胞

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iNKT细胞对肿瘤细胞系杀伤的敏感性研究

2

作者 陈兰 杨淑琳 +7 位作者 邓沫 柯追 杨永庆 华坚 张骅 宛玉花 权德贤 郭献灵 《同济大学学报(医学版)》 2025年第3期347-353,共7页

目的检测多种肿瘤细胞系的CD1d表达情况,探讨iNKT细胞对不同肿瘤细胞系杀伤的敏感性。方法将肿瘤细胞系制备成单细胞悬液,使用CD1d抗体与肿瘤细胞共孵育,通过流式细胞术检测CD1d在各种肿瘤细胞系中的表达;将iNKT细胞与肿瘤细胞按照效靶... 目的检测多种肿瘤细胞系的CD1d表达情况,探讨iNKT细胞对不同肿瘤细胞系杀伤的敏感性。方法将肿瘤细胞系制备成单细胞悬液,使用CD1d抗体与肿瘤细胞共孵育,通过流式细胞术检测CD1d在各种肿瘤细胞系中的表达;将iNKT细胞与肿瘤细胞按照效靶比E:T=10:1、5:1和1:1共孵育,RTCA eSight成像检测仪监测iNKT细胞对肿瘤细胞杀伤情况,流式细胞术检测iNKT细胞表面分子的表达,ELISA检测iNKT细胞激活后的细胞因子分泌。结果在Jurkat、Jeko-1、U2OS、A375、Hep-3B细胞系均可检测到CD1d表达,其阳性比例分别为98.40%、93.80%、67.10%、43.80%、11.00%;而在肿瘤细胞系Huh7、OVCAR3、MKN45、AGS、H460、MKN7、MDA-MB-453中CD1d为阴性。激活的iNKT细胞表达NK细胞激活受体CD226、NKG2D,同时能够迅速分泌大量的细胞因子和细胞毒性分子如IFNγ和颗粒酶B等。结论iNKT细胞对CD1d阳性(除Jeko-1细胞)及阴性肿瘤细胞系具有广泛杀伤能力,且在高效靶比时杀伤效果最强;α-Galcer可增强iNKT细胞对CD1d阳性肿瘤细胞系的杀伤能力。 展开更多

关键词 CD1D inkt细胞 α-半乳糖酰神经酰胺 细胞因子

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iNKT细胞体外刺激方法筛选及雷公藤甲素在体外活化iNKT细胞的条件

3

作者 梁晓婧 陈欣 +5 位作者 农程 李亮 丁健 张陆勇 江振洲 王欣之 《中国药物警戒》 2025年第2期147-154,共8页

目的雷公藤甲素(Triotolide,TP)活化恒定自然杀伤T(iNKT)细胞导致小鼠肝损伤。因此,考察iNKT细胞的体外刺激方法和TP在体外活化iNKT细胞的条件。方法使用佛波酯(PMA)与离子霉素(ION)组合、抗CD3e与CD28抗体组合的2种方式,流式细胞术检测... 目的雷公藤甲素(Triotolide,TP)活化恒定自然杀伤T(iNKT)细胞导致小鼠肝损伤。因此,考察iNKT细胞的体外刺激方法和TP在体外活化iNKT细胞的条件。方法使用佛波酯(PMA)与离子霉素(ION)组合、抗CD3e与CD28抗体组合的2种方式,流式细胞术检测iNKT细胞系DN32.D3细胞表面活化标志物CD69和分泌的IL-2;使用不同浓度PMA刺激小鼠肝脏非实质细胞,流式细胞术检测iNKT细胞表面CD69和分泌IFN-γ、IL-4、IL-17、IL-10水平,分析体外活化iNKT细胞的最佳方法条件,进而分析TP体外活化iNKT细胞的最佳方法条件。结果PMA和ION联合刺激,PMA为50 ng·mL^(-1)时,iNKT细胞活化效果最佳。当加入抗原递呈细胞(APC)RBL-CD1d共培养时,TP可活化DN32.D3细胞。结论PMA和ION组合,PMA为50 ng·mL^(-1)时,iNKT细胞活化效果最好;且TP活化iNKT细胞需要APC的存在。 展开更多

关键词 雷公藤甲素 佛波酯 恒定自然杀伤T细胞 肝脏 DN32.D3细胞 体外活化 流式细胞术 小鼠

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3种品系小鼠iNKT细胞组织特异性分布

4

作者 刘慧芳 高翔 +2 位作者 赵会娟 陈胜德 孟明 《医学研究与教育》 CAS 2018年第6期10-18,共9页

目的比较3种品系小鼠外周血、胸腺、脾脏和肝脏中iNKT细胞频率及胸腺、脾脏、肝脏iNKT细胞中iNKT1、iNKT2亚群比例的差异。方法分别以DBA/1、NOD/Lt J及C57BL/6J 3种品系小鼠为研究对象,分离健康小鼠外周血、胸腺、脾脏和肝脏的淋巴细胞... 目的比较3种品系小鼠外周血、胸腺、脾脏和肝脏中iNKT细胞频率及胸腺、脾脏、肝脏iNKT细胞中iNKT1、iNKT2亚群比例的差异。方法分别以DBA/1、NOD/Lt J及C57BL/6J 3种品系小鼠为研究对象,分离健康小鼠外周血、胸腺、脾脏和肝脏的淋巴细胞,采用FCM检测各组织器官中TCRβ和CD1d四聚体双阳性的iNKT细胞频率,并根据核内PLZF和T-bet的表达水平确定iNKT1和iNKT2亚群。结果 (1) 3种品系小鼠外周血中iNKT细胞频率最低,肝脏中iNKT细胞频率最高,脾脏和胸腺iNKT细胞频率介于两者之间。其中,C57BL/6J小鼠胸腺iNKT细胞频率显著低于DBA/1及NOD/Lt J小鼠,肝脏iNKT细胞频率显著高于其他2品系小鼠; NOD/Lt J小鼠脾脏、肝脏iNKT细胞频率显著低于C57BL/6J及DBA/1小鼠。(2) 3种品系小鼠胸腺iNKT细胞中iNKT2亚群占比较高,脾脏、肝脏中iNKT细胞以iNKT1亚群为主。其中,C57BL/6J小鼠胸腺iNKT2亚群比例最低; NOD/Lt J小鼠胸腺iNKT2亚群比例最高,脾脏、肝脏iNKT1亚群比例较高。结论 DBA/1、NOD/Lt J及C57BL/6J 3种品系小鼠,同一品系小鼠不同组织器官iNKT细胞频率及亚群比例,不同品系小鼠同一组织器官iNKT细胞频率及亚群比例存在很大差异。 展开更多

关键词 3种品系小鼠 inkt细胞 inkt1 inkt2

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活动性结核病人PBMCs中转录因子PLZF的表达降低与iNKT细胞的减少相关 被引量：6

5

作者 刘艳华 翟斐 +3 位作者 王心静 曹志红 杨秉芬 程小星 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期831-834,839,共5页

目的:比较活动性结核病人和健康人外周血单个核细胞(PBMCs)中转录因子PLZF(Promyelocytic leukemiazinc finger)的表达和iNKT细胞含量的差异,研究活动性结核病人PBMCs中PLZF的表达与iNKT细胞含量的相关性。方法:采集活动性结核病人和健... 目的:比较活动性结核病人和健康人外周血单个核细胞(PBMCs)中转录因子PLZF(Promyelocytic leukemiazinc finger)的表达和iNKT细胞含量的差异,研究活动性结核病人PBMCs中PLZF的表达与iNKT细胞含量的相关性。方法:采集活动性结核病人和健康人新鲜的抗凝血,淋巴细胞分离液分离PBMCs。每个样本的PBMCs分两份,一份细胞用Trizol法提取总RNA,荧光定量PCR检测PLZF mRNA的相对表达量;另一份细胞用特异性抗体标记iNKT细胞,流式细胞仪检测iNKT细胞的含量。统计学软件分析两组样本PLZF的表达和iNKT细胞含量的差异,以及PLZF的表达与iNKT细胞含量的相关性。结果:活动性结核病人PMBCs中PLZF的表达和iNKT细胞含量均显著低于健康对照(P值分别为0.010 2和0.001 2),PLZF的表达与iNKT细胞的含量成正相关(r=0.480 4,P=0.027 5)。结论:活动性结核病人PLZF的表达降低与iNKT细胞百分含量的减少相关。 展开更多

关键词 活动性结核病人 PLZF inkt细胞

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慢性乙型肝炎患者iNKT细胞PD-1表达的变化 被引量：6

6

作者 张建明 陈春波 +3 位作者 陈敏 孙航 石统东 任红 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期433-437,共5页

目的检测慢性乙型病毒性肝炎患者外周血中iNKT细胞比例、细胞因子分泌能力以及其表面程序性死亡因子1(programmed death 1,PD-1)的表达情况。方法采集慢性乙型肝炎患者外周血,利用CD3、TCR Vα24、TCR Vβ11、CD279单克隆抗体标记后经... 目的检测慢性乙型病毒性肝炎患者外周血中iNKT细胞比例、细胞因子分泌能力以及其表面程序性死亡因子1(programmed death 1,PD-1)的表达情况。方法采集慢性乙型肝炎患者外周血,利用CD3、TCR Vα24、TCR Vβ11、CD279单克隆抗体标记后经流式细胞术直接检测iNKT细胞比例及其PD-1表达比例;采用PMA+Ionomycin体外活化iNKT细胞后流式细胞术检测其胞内IFN-γ分泌情况。结果慢性乙型肝炎患者外周血iNKT细胞比例[(0.09±0.04)%]与健康对照者[(0.11±0.07)%]相比无明显差异,但体外活化后胞内IFN-γ分泌量减少[(24.64±7.71)%vs(42.35±11.60)%],且iNKT细胞PD-1表达升高[(36.7±9.7)%vs(16.2±5.4)%]。结论慢性乙型肝炎患者外周血iNKT细胞功能的下降可能与其表面负性刺激分子PD-1表达上调密切相关。 展开更多

关键词 慢性乙型肝炎 inkt细胞 程序性死亡因子1(PD-1) IFN-Γ

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慢性HBV感染者血清IL-15和外周血iNKT细胞水平变化及相关性研究 被引量：8

7

作者 张鑫 黄凌鹰 +5 位作者 周振华 李曼 高亚婷 孙学华 金树根 高月求 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2017年第9期1016-1021,共6页

目的探讨慢性乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)感染者血清IL-15和外周血恒定自然杀伤T(invariant nature killer T,i NKT)细胞水平的变化。方法收集54例慢性HBV感染者和15名健康者外周血,分离血清和外周血单个核细胞(PBMC);ELISA法检测... 目的探讨慢性乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)感染者血清IL-15和外周血恒定自然杀伤T(invariant nature killer T,i NKT)细胞水平的变化。方法收集54例慢性HBV感染者和15名健康者外周血,分离血清和外周血单个核细胞(PBMC);ELISA法检测血清中IL-15水平;流式细胞术检测i NKT细胞占T细胞的比例,PMA、BFA和ionomycin处理PBMC后,流式细胞术检测i NKT分泌的IFN-γ和TNF-α水平,并利用Pearson法进行相关性分析。结果与正常对照者相比,免疫清除期患者血清中IL-15水平明显升高(P<0.05),免疫耐受期患者高于正常对照者,低于免疫清除组,差异无统计学意义(P>0.05);免疫清除期和免疫耐受期患者血清ALT水平和HBV DNA载量与IL-15水平无明显相关性(P>0.05)。免疫清除期患者外周血i NKT细胞比例显著降低,免疫耐受期患者略升高,但差异无统计学意义(P>0.05)。免疫耐受期和清除期患者外周血i NKT细胞分泌IFN-γ和TNF-α的细胞比例略有升高,但差异无统计学意义(P>0.05)。免疫耐受期和免疫清除期患者i NKT细胞分泌IFN-γ水平与IL-15水平呈正相关;免疫耐受期和免疫清除期患者i NKT细胞分泌TNF-α水平与IL-15水平无相关性(P>0.05)。结论慢性HBV感染者血清中IL-15水平升高,且外周血i NKT细胞数量减少,且不同感染状态患者血清IL-15水平和外周血i NKT细胞数量呈动态变化。 展开更多

关键词 IL-15 慢性HBV感染 inkt细胞

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CD3＋CD56＋NKT细胞与Vα24~＋iNKT细胞的检测及其表型特点分析 被引量：7

8

作者 姚春艳 姜丽娜 +1 位作者 邱晓静 李柏青 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期490-494,共5页

为了比较CD3+CD56+NKT细胞与CD3+TCRVα24+iNKT细胞在外周血淋巴细胞中的相对比例及其表面分子表达的差别,本研究采集了健康人外周全血,用四色荧光抗体染色和流式细胞术检测CD3+CD56+NKT细胞和CD3+TCRVα24+iNKT细胞在淋巴细胞中的比例... 为了比较CD3+CD56+NKT细胞与CD3+TCRVα24+iNKT细胞在外周血淋巴细胞中的相对比例及其表面分子表达的差别,本研究采集了健康人外周全血,用四色荧光抗体染色和流式细胞术检测CD3+CD56+NKT细胞和CD3+TCRVα24+iNKT细胞在淋巴细胞中的比例,及其亚群表型及活化分子CD69的表达情况。检测结果表明,在正常人外周血淋巴细胞中CD3+CD56+NKT细胞所占比例为3.90%±2.89%,以CD8亚群占多数(57.61%±17.35%);而CD3+TCRVα24+iNKT细胞所占比例仅为0.39%±0.19%,且以CD4亚群占多数(56.60%±19.66%)。两种NKT细胞的相对数量之间存在显著正相关(r=0.467,P<0.05),但两类细胞之间极少重叠。CD16和CD161在CD3+CD56+NKT细胞上的表达量显著高于在CD3+TCRVα24+iNKT细胞上的表达量(P均<0.01)。活化分子CD69在两种细胞上的表达量均较低(P>0.05)。本研究结果表明,正常人外周血CD3+CD56+NKT细胞与CD3+TCRVα24+iNKT细胞在相对数量、亚群及表型上存在显著差异,是两种截然不同的NKT细胞。 展开更多

关键词 NKT细胞 inkt细胞 CD16 CD161

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结核病患者外周血中iNKT细胞的数量显著降低 被引量：4

9

作者 刘艳华 王心静 +3 位作者 曹志红 董梅 佟爱华 程小星 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期1017-1019,共3页

目的:比较结核病患者和健康对照外周血iNKT细胞数量的差异,分析结核病患者伴发糖尿病对外周血iNKT细胞数量的影响。方法:采集37例结核病患者和12例健康志愿者的静脉血,用特异性抗体anti-Vα24-PE/anti-Vβ11-FITC标记iNKT细胞,流式细胞... 目的:比较结核病患者和健康对照外周血iNKT细胞数量的差异,分析结核病患者伴发糖尿病对外周血iNKT细胞数量的影响。方法:采集37例结核病患者和12例健康志愿者的静脉血,用特异性抗体anti-Vα24-PE/anti-Vβ11-FITC标记iNKT细胞,流式细胞术(FCM)检测外周血中iNKT细胞的含量。结果:结核病患者和健康对照外周血iNKT细胞的百分含量分别为0.01%(0.24%/0.00%)和0.08%(0.19%/0.00%),差异显著(P<0.01)。伴发糖尿病的结核病患者和非糖尿病的结核病患者iNKT细胞的百分含量分别为0.015%(0.09%/0.00%)和0.01%(0.24%/0.00%),差异无统计学意义(P>0.05)。结论:结核病患者外周血中iNKT细胞数量明显减少,伴发糖尿病对结核病患者外周血iNKT细胞数量没有显著影响。 展开更多

关键词 inkt细胞 结核病 外周血 糖尿病 流式细胞术

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含噻唑烷-4-酮的免疫刺激剂CH2a增强人iNKT细胞的功能 被引量：2

10

作者 孟明 李春晓 +5 位作者 王泽瑞 韩华 史建红 陈华 李小六 陈冬志 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期345-349,共5页

目的研究含噻唑烷-4-酮的糖类衍生小分子免疫刺激剂CH2a对人iNKT细胞功能的影响。方法分离健康人外周血单个核细胞(PBMC),经α-半乳糖神经酰胺(α-Galcer)和IL-2体外扩增后,利用磁珠分选分离纯化得到恒定型自然杀伤T细胞(iNKT细胞)。5(... 目的研究含噻唑烷-4-酮的糖类衍生小分子免疫刺激剂CH2a对人iNKT细胞功能的影响。方法分离健康人外周血单个核细胞(PBMC),经α-半乳糖神经酰胺(α-Galcer)和IL-2体外扩增后,利用磁珠分选分离纯化得到恒定型自然杀伤T细胞(iNKT细胞)。5(6)-羧基二乙酸荧光黄琥珀酰亚胺酯(CFDA-SE)标记的纯化iNKT细胞,与CH2a共孵育后,流式细胞术检测细胞增殖和分代,IFN-γ和IL-4的表达;MTT法定量检测细胞增殖率及对K562细胞的杀伤活性。ELISA检测CH2a处理细胞培养基中IFN-γ和IL-4水平。结果 CH2a能显著促进IL-2引起的iNKT细胞体外增殖;提高IFN-γ和IL-4的生成量及IFN-γ/IL-4的比值;并显著增强iNKT细胞的杀伤活性。结论 CH2a有可能通过诱导iNKT分泌Th1类的细胞因子,调节T细胞向Th1分化,从而增强细胞免疫功能;同时显著提高iNKT的细胞毒功能。 展开更多

关键词 inkt细胞 磁珠分选 IFN-Γ IL-4 免疫刺激剂

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含噻唑烷-4-酮的免疫调节剂对RA患者iNKT细胞免疫调节功能的影响 被引量：1

11

作者 孟明 张雪娇 +4 位作者 瓮沛杉 许鸣华 陈丹 侯明辉 陈冬志 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期218-222,共5页

目的:研究新型合成的含噻唑烷-4-酮的免疫调节剂(CH1b)对活动期RA患者iNKT细胞免疫调节功能的影响。方法:从RA患者外周血中分离得到单个核淋巴细胞(PBMC),α-Galcer和IL-2体外刺激扩增后,经磁珠分选(MACS)得到纯化的iNKT细胞,分成对照组... 目的:研究新型合成的含噻唑烷-4-酮的免疫调节剂(CH1b)对活动期RA患者iNKT细胞免疫调节功能的影响。方法:从RA患者外周血中分离得到单个核淋巴细胞(PBMC),α-Galcer和IL-2体外刺激扩增后,经磁珠分选(MACS)得到纯化的iNKT细胞,分成对照组(IL-2)、α-Galcer组(IL-2+α-Galcer)、CH1b组(IL-2+CH1b)。采用MTT法测定各组RA患者iNKT细胞增殖率;MILLIPLEX MAP Human Cytokine/Chemokine kit检测各组RA患者iNKT细胞培养上清中IFN-γ和IL-4的水平;采用RT-PCR方法检测各组RA患者iNKT细胞中IFN-γmRNA和IL-4 mRNA的表达水平。结果:与对照组和α-Galcer组相比,CH1b组iNKT细胞增殖率明显增加(P<0.05);与对照组相比,α-Galcer组IFN-γ和IL-4分泌水平明显增加(P<0.05),CH1b组IFN-γ和IL-4的分泌量也明显增加,IFN-γ/IL-4明显降低(P<0.05);与对照组相比,α-Galcer组IFN-γmRNA与IL-4 mRNA表达均明显增高,CH1b组IFN-γmRNA表达差异不明显,IL-4 mRNA的表达明显增高。结论:新型合成的免疫调节剂(CH1b)可促进活动期RA患者活化的iNKT细胞增殖,并促进IL-4的分泌,上调IL-4 mRNA的表达,诱导iNKT细胞向Th2方向分化,对恢复RA病人体内免疫平衡具有重要意义。 展开更多

关键词 类风湿关节炎 inkt细胞 免疫调节剂 IFN-Γ/IL-4

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Vα14iNKT细胞对异基因骨髓移植GVHD具有抑制作用 被引量：2

12

作者 杨洁 刘嬿 +2 位作者 聂晓绚 任亚娜 范华骅 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期190-195,共6页

研究初步探讨了在同种异基因骨髓移植中过继性输注体外扩增的Vα14iNKT细胞对急性GVHD的抑制作用。小鼠脾细胞体外经α-GalCer和IL-2的联合刺激扩增得到Vα14iNKT细胞。建立C57BL/6→DBA/2小鼠急性GVHD模型,即急性GVHD组。在此模型基础... 研究初步探讨了在同种异基因骨髓移植中过继性输注体外扩增的Vα14iNKT细胞对急性GVHD的抑制作用。小鼠脾细胞体外经α-GalCer和IL-2的联合刺激扩增得到Vα14iNKT细胞。建立C57BL/6→DBA/2小鼠急性GVHD模型,即急性GVHD组。在此模型基础上,过继性输注供鼠Vα14iNKT细胞,即实验组。对各组受鼠GVHD发病情况、相关病理学检查、生存情况及血清中Th1/Th2型细胞因子的变化情况进行比较。结果是在体外刺激下,Vα14iNKT细胞能分泌Th1/Th2型细胞因子。体内实验发现,与急性GVHD组相比,实验组受鼠在移植后GVHD各项病症明显减轻,生存期显著延长。另外,通过对血清中细胞因子的测定发现,在骨髓移植后第7天,实验组IL-4分泌量显著高于急性GVHD组;而IFN-γ水平无显著性差异。表明体外诱导的供者Vα14iNKT细胞能通过调节Th1/Th2型细胞因子的产生有效地抑制急性GVHD。这为体外扩增的供者iNKT抑制GVHD的作用机制及NKT细胞疗法的临床运用提供了新的思路。 展开更多

关键词 Vα14inkt细胞 GVHD TH1/TH2型细胞因子 同种异基因骨髓移植

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中药软肝饮对HBV转基因小鼠iNKT细胞及其表面PD-1、PD-L1表达的影响 被引量：3

13

作者 张国梁 张先姚 +4 位作者 侯勇 施美 韩啥 李梦梦 王姣 《中西医结合肝病杂志》 CAS 2021年第9期813-815,821,共4页

目的:研究中药软肝饮对HBV转基因小鼠iNKT细胞及其表面PD-1、PD-L1表达的影响,探讨中药软肝饮对HBV转基因小鼠抗病毒的作用机制。方法:将50只雌雄各半HBV转基因小鼠随机分为治疗组(高、中、低剂量软肝饮)、模型组、阳性对照组(恩替卡韦... 目的:研究中药软肝饮对HBV转基因小鼠iNKT细胞及其表面PD-1、PD-L1表达的影响,探讨中药软肝饮对HBV转基因小鼠抗病毒的作用机制。方法:将50只雌雄各半HBV转基因小鼠随机分为治疗组(高、中、低剂量软肝饮)、模型组、阳性对照组(恩替卡韦分散片)等5组,另用10只非HBV转基因小鼠作为空白对照。药物干预灌胃4周后处死小鼠,观察各组小鼠外周血及肝脏中iNKT细胞及其表面PD-1、PD-L1的表达。结果:与空白对照组相比,模型组小鼠外周血iNKT细胞表达明显降低,iNKT细胞表面PD-1、PD-L1的表达水平明显增高,差异有显著性意义(P<0.01);与模型组相比,治疗后软肝饮高剂量组和阳性对照组小鼠外周血iNKT细胞表达明显增高,iNKT细胞表面PD-1、PD-L1的表达水平有一定程度的降低,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05);软肝饮中剂量组小鼠外周血iNKT细胞表达有一定增加,有一定差异性(P<0.05),而iNKT细胞表面PD-1、PD-L1的表达水平无明显变化,无明显差异性;软肝饮低剂量组小鼠外周血iNKT细胞表达及iNKT细胞表面PD-1、PD-L1的表达无明显变化,无明显差异性(P>0.05)。HBV转基因小鼠肝脏中细胞iNKT的表达明显低于空白对照组,iNKT细胞表面PD-1、PD-L1的表达明显高于空白对照组,均有统计学意义(P<0.05);结论:中药软肝饮调控HBV转基因小鼠的免疫机制可能通过阻断iNKT细胞上PD-1/PD-L1信号通路,调控iNKT细胞功能发挥抗HBV作用。 展开更多

关键词 软肝饮 HBV DNA HBV转基因小鼠 inkt细胞 PD-1/PD-L1信号通路

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iNKT细胞多样性调节机制及其在疾病中的作用 被引量：1

14

作者 陈钰 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期84-86,共3页

关键词 inkt细胞 肿瘤 糖尿病 免疫性疾病

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iNKT细胞在脂多糖诱导的早产中的作用

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作者 李莉平 杨静 +2 位作者 杨宇 任丽华 康佳丽 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期126-129,共4页

目的探讨恒定自然杀伤T(iNKT)细胞在脂多糖(LPS)诱导的早产中的作用。方法野生型C56BL/6小鼠和缺乏iNKT细胞的Jα18-/-小鼠腹腔注射LPS建立炎症诱导性早产小鼠模型;计算早产率和死胎率;流式细胞术检测蜕膜活化型免疫细胞百分率和树突状... 目的探讨恒定自然杀伤T(iNKT)细胞在脂多糖(LPS)诱导的早产中的作用。方法野生型C56BL/6小鼠和缺乏iNKT细胞的Jα18-/-小鼠腹腔注射LPS建立炎症诱导性早产小鼠模型;计算早产率和死胎率;流式细胞术检测蜕膜活化型免疫细胞百分率和树突状细胞共刺激分子的表达。结果与野生型小鼠比较,LPS处理的Jα18-/-小鼠早产率和死胎率显著降低,蜕膜树突状细胞共刺激分子CD40、CD80和CD86的表达显著下降,蜕膜活化型树突状细胞、T细胞和NK细胞百分率明显减少。结论 iNKT细胞可能在LPS诱导的早产发生中具有重要作用。 展开更多

关键词 inkt细胞 早产 脂多糖 TOLL样受体4 炎症

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真核表达hCD1d二聚体的纯化及其对iNKT细胞的刺激效应

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作者 杨敬 吕燕霞 +2 位作者 翁秀芳 梁智辉 吴雄文 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期21-26,66,共7页

目的建立真核表达的人CD1d(hCD1d)二聚体的纯化方法,并制备人工抗原提呈细胞,研究其对iNKT细胞的刺激效应。方法提取pFastBacTMDual+[β2m+CD1d/IgG1-Fc]昆虫杆状病毒质粒并转染至sf9细胞中,收集病毒感染上清,通过ELISA法鉴定融合蛋白中... 目的建立真核表达的人CD1d(hCD1d)二聚体的纯化方法,并制备人工抗原提呈细胞,研究其对iNKT细胞的刺激效应。方法提取pFastBacTMDual+[β2m+CD1d/IgG1-Fc]昆虫杆状病毒质粒并转染至sf9细胞中,收集病毒感染上清,通过ELISA法鉴定融合蛋白中人IgG-Fc、人CD1d和人β2m等组分并测定hCD1d二聚体浓度。探索保持hCD1d二聚体完整构象的亲和层析条件,对hCD1d二聚体进行纯化和浓缩。应用加载α-GalCer的hCD1d二聚体制备人工抗原提呈细胞刺激健康个体外周血单个核细胞(PBMC),检测Th1、Th2、Th17细胞因子分泌水平与iNKT细胞的扩增效率。结果收集的第4代病毒感染上清中目的蛋白表达量较高。抗Ig-Fc抗体ELISA、抗CD1d抗体与抗β2m抗体双抗夹心ELISA检测显示sf9细胞表达的hCD1d二聚体构象正确,两种方法检测的蛋白浓度分别为(1.05±0.20)μg/mL和(0.85±0.01)μg/mL。亲和层析纯化结果显示用pH2.5的0.1 mol/L柠檬酸可较好地实现hCD1d二聚体有效纯化。健康个体iNKT细胞经人工抗原提呈细胞刺激3 d后主要产生Th1型细胞因子,上清中IFN-γ、TNF-α含量分别为(1876.26±96.73)pg/mL和(1186.25±98.63)pg/mL,明显高于对照组(79.98±18.52)pg/mL和(29.96±4.43)pg/mL,差异具有统计学意义(均P<0.01),其余Th2型(IL-4)、Treg型(IL-10)和Th17型(IL-17)细胞因子未见明显升高,差异均无统计学意义(均P>0.05),与iNKT细胞接收刺激后分泌细胞因子谱基本一致。健康个体PBMC接受刺激后,iNKT细胞迅速扩增,刺激第7天iNKT细胞占PBMC(4.17±0.76)%,而未包被hCD1d二聚体的微球对照组iNKT细胞占PBMC的比例仅为(0.41±0.09)%。这些结果说明包被有hCD1d二聚体的人工抗原提呈细胞可特异性地刺激iNKT细胞分泌Th1型细胞因子并有效扩增。结论成功制备hCD1d二聚体,并建立基于人工抗原提呈细胞的iNKT细胞有效的刺激与扩增体系,为后续对iNKT细胞深入研究打下了基础。 展开更多

关键词 hCD1d二聚体 亲和层析 Α-GALCER inkt细胞 细胞因子

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Tim-3、PD-1和CD28表达与慢性乙肝患者肝脏iNKT细胞功能的关系 被引量：4

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作者 杨志欣 陈春波 +2 位作者 雷宇 任红 石统东 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期712-716,共5页

目的研究慢性乙肝患者肝脏中恒定自然杀伤T(invariant nature killer T,iNKT)细胞的功能与其表面Tim-3、PD-1、CD28表达的关系。方法无菌分离人体肝脏单个核细胞,建立α-半乳糖神经酰胺(α-GalCer)诱导慢性HBV感染后的iNKT细胞体外诱导... 目的研究慢性乙肝患者肝脏中恒定自然杀伤T(invariant nature killer T,iNKT)细胞的功能与其表面Tim-3、PD-1、CD28表达的关系。方法无菌分离人体肝脏单个核细胞,建立α-半乳糖神经酰胺(α-GalCer)诱导慢性HBV感染后的iNKT细胞体外诱导扩增模型,以流式细胞术检测体外培养基线水平0 h和72 h的iNKT细胞的表面Tim-3、PD-1、CD28的表达以及IL-4、IFN-γ的分泌情况;用ELISA法检测培养上清中IL-4、IFN-γ的水平;阻断PD-1、Tim-3及活化CD28信号通路,以流式和ELISA法检测IL-4+iNKT与IFN-γ+iNKT。结果慢性乙肝患者(实验组)肝脏中的iNKT细胞的比例明显低于正常人(对照组)(P<0.05);iNKT表面Tim-3、PD-1的表达明显增多(P<0.05),而CD28的表达则明显减少(P<0.05);iNKT细胞分泌IL-4、IFN-γ的功能明显降低(P<0.05);单一α-GalCer刺激培养72 h后,实验组IL-4+iNKT、IFN-γ+iNKT的表达没有明显变化(P>0.05),而阻断PD/PDL1、Tim-3/Tim-3L和(或)活化CD28/CD80信号通路后,IL-4+iNKT、IFN-γ+iNKT细胞的表达明显提高(P<0.05)。结论慢性乙肝患者肝脏iNKT细胞功能存在明显的缺陷,并提示负向调控因子Tim-3、PD-1表达的增加和正向调控因子CD28表达的降低可能与iNKT细胞功能的下调密切相关。 展开更多

关键词 慢性乙肝患者 inkt细胞 TIM-3 PD-1 CD28

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探讨慢性HBV感染者外周血iNKT细胞水平变化

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作者 苏密龙 《中国卫生标准管理》 2019年第4期118-120,共3页

目的探讨慢性HBV感染者外周血i NKT细胞水平变化。方法选取2015年1月—2018年9月我院收治的确诊为慢性HBV感染者48例,分别处于免疫耐受期(13例)和免疫清除期(35例),另选取同期在我院的正常体检人群39例,采用流式细胞术检测iNKT细胞占T... 目的探讨慢性HBV感染者外周血i NKT细胞水平变化。方法选取2015年1月—2018年9月我院收治的确诊为慢性HBV感染者48例,分别处于免疫耐受期(13例)和免疫清除期(35例),另选取同期在我院的正常体检人群39例,采用流式细胞术检测iNKT细胞占T细胞的比例,经过PAM、BFA等处理后,检测i NKT分泌的TNF-γ和TNF-α水平。结果耐受期组和清除期组患者i NKT细胞占CD3^+T细胞的比例低于正常体检组,耐受期组患者的iNKT细胞占CD3+^+细胞的比例高于正常体检组(P> 0.05),清除期组患者iNKT细胞占CD3^+T细胞的比例低于耐受期组和正常体检组;耐受期组患者比例高于清除期组和正常体检组,差异有统计学意义(P <0.05)。结论慢性HBV感染患者机体可通过iNKT细胞分泌的IFN-γ和TNF-α来抑制HBV的复制过程,感染过程中外周血i NKT细胞有所数量减少。 展开更多

关键词 慢性感染 HBV inkt细胞 IFN-Γ TNF-α 免疫耐受

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mTOR对iNKT细胞发育和分化的影响 被引量：1

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作者 孙玉鸣 刘川 +3 位作者 王园园 尹晓琳 刘嘉琳 孟明 《医学研究与教育》 CAS 2017年第2期57-61,共5页

iNKT细胞是最近发现的一类具有重要免疫功能的特殊T细胞亚群。其发育分化受多种因素的影响,最新研究发现mTOR在iNKT细胞的发育分化中起关键作用。mTORC1控制着iNKT细胞阶段1、2、3的发育转变,且与PLZF互相调节影响iNKT细胞的发育分化,mT... iNKT细胞是最近发现的一类具有重要免疫功能的特殊T细胞亚群。其发育分化受多种因素的影响,最新研究发现mTOR在iNKT细胞的发育分化中起关键作用。mTORC1控制着iNKT细胞阶段1、2、3的发育转变,且与PLZF互相调节影响iNKT细胞的发育分化,mTORC2在iNKT细胞由阶段1到2转变过程中起重要作用。促进mTORC1与mTORC2活化的主要有RasGRP1、PDK1和Rhe B。旨在阐明mTOR对iNKT细胞发育分化的影响。 展开更多

关键词 inkt细胞 MTOR mTORC1 mTORC2

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影响iNKT细胞分化的信号通路研究进展 被引量：1

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作者 刘川 孙玉鸣 +2 位作者 王园园 刘嘉琳 孟明 《医学研究与教育》 CAS 2017年第3期44-47,共4页

iNKT细胞是一群连接固有免疫和适应性免疫的特殊桥梁细胞,在胸腺中发育并分化。近年研究发现,E蛋白家族(E2A、HEB)和早幼粒白血病锌指蛋白(PLZF)是调控iNKT细胞分化最早最基础的转录因子,在此基础之上,通过激活细胞内不同信号通路包括... iNKT细胞是一群连接固有免疫和适应性免疫的特殊桥梁细胞,在胸腺中发育并分化。近年研究发现,E蛋白家族(E2A、HEB)和早幼粒白血病锌指蛋白(PLZF)是调控iNKT细胞分化最早最基础的转录因子,在此基础之上,通过激活细胞内不同信号通路包括丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路、TGF-β/SMAD通路、PI3K/Akt/mTOR通路等,iNKT细胞可分化为五个亚群,至今研究较为透彻的为iNKT1、iNKT2、iNKT17亚群。就上述三条通路对iNKT细胞分化的影响展开综述。 展开更多

关键词 inkt细胞 信号通路 细胞分化 E蛋白 早幼粒白血病锌指蛋白

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