VEGF通过MAPK途径上调MC3T3-E1及C2C12细胞中Cbfa1基因的表达

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作者 裴育 夏维波 +2 位作者 邢小平 周学瀛 孟迅吾 《中华骨质疏松和骨矿盐疾病杂志》 2009年第2期120-126,共7页

目的研究生长因子VEGF对Cbfa1的调节作用及其与MAPK信号传导通路的关系。方法采用瞬时转染技术和RT-PCR方法。结果在MC3T3．E1细胞中，VEGF（1×10^-8～1×10^-6g·L^-1）作用24小时能够增加Cbfa1基因启动子活性，相对荧光... 目的研究生长因子VEGF对Cbfa1的调节作用及其与MAPK信号传导通路的关系。方法采用瞬时转染技术和RT-PCR方法。结果在MC3T3．E1细胞中，VEGF（1×10^-8～1×10^-6g·L^-1）作用24小时能够增加Cbfa1基因启动子活性，相对荧光素酶活性分别为对照组的1．29（P〈0．05），1．28（P〈0．01）和1．40（P〈0．05）。而加入PD98059（10μmol/L）后不但抑制了Cbfa1基因启动子活性的基础表达，而且完全阻断了VEGF所诱导的Cbfa1基因启动子活性的增加（P〈0．05）。C2C12细胞中不同浓度的VEGF处理组，其相对荧光素酶活性与对照组相比未见显著性差异。MC3T3-E1细胞中，VEGF处理前后，MC3T3-E1细胞中Cbfa1基因mRNA的表达水平未见显著变化。C2C12细胞中，VEGF处理后，第2天和第3天Cbfa1基因mRNA的表达由处理前的32．63±4．41，分别增加至46．56±2．70（P〈0．01）和50．35±5．62（P〈0．05）。PD98059阻断了C2C12细胞中VEGF对Cbfa1基因mRNA表达的上调作用。结论VEGF部分通过MAPK信号传导通路增加MC3T3-E1和C2C12细胞中小鼠Cbfa1基因启动子活性及mRNA的表达。 展开更多

关键词 核心结合因子A1 血管内皮细胞生长因子 有丝分裂原激活蛋白激酶 MC3T3-E1细胞 C2C12细胞

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尿酸对人骨髓间充质干细胞成骨分化中Cbfα1/Runx2表达的影响 被引量：17

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作者 张山山 杨乃龙 +2 位作者 徐丽丽 李百举 崔晶 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期363-366,344,共5页

目的观察不同浓度尿酸对人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)成骨分化过程中核心结合因子α1(Cbfα1/Runx2)表达变化的影响。方法以体外培养的健康成年hBMSCs为研究对象,分为5个组,分别为对照组(完全培养基组)和加入不同浓度尿酸(0 mmol/l、0.2 ... 目的观察不同浓度尿酸对人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)成骨分化过程中核心结合因子α1(Cbfα1/Runx2)表达变化的影响。方法以体外培养的健康成年hBMSCs为研究对象,分为5个组,分别为对照组(完全培养基组)和加入不同浓度尿酸(0 mmol/l、0.2 mmol/l、0.4 mmol/l、0.8mmol/l)的成骨诱导组,通过倒置显微镜观察细胞形态,碱性磷酸酶染色和茜素红染色鉴定细胞。在干预诱导第7天和第14天行RT-PCR检测Cbfα1/Runx2的表达。结果碱性磷酸酶染色和茜素红染色结果均阳性,表示诱导后细胞为成骨细胞。RT-PCR结果表明,对照组各时间点均无Cbfα1/Runx2表达,尿酸培养组随尿酸浓度增加和时间的延长,Cbfα1/Runx2表达逐渐增强,呈现时间依赖性和浓度依赖性。结论尿酸可能通过促进Cbfα1/Runx2的表达,从而促进hBMSCs向成骨细胞分化。 展开更多

关键词 尿酸 人骨髓间充质干细胞 成骨分化 Cbfcfal RUNX2

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核心结合因子α1促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的实验研究 被引量：19

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作者 李华壮 周跃 郭国宁 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期121-124,共4页

目的观察核心结合因子α1(corebinding factorα1,Cbfα1)对兔骨髓间充质干细胞(marrowmesench ymalstemcells,MSCs)的促成骨效应。方法体外分离培养日本大白兔MSCs,按培养方法的不同分为3组。对照组:常规培养;单纯诱导组:以条件培养液... 目的观察核心结合因子α1(corebinding factorα1,Cbfα1)对兔骨髓间充质干细胞(marrowmesench ymalstemcells,MSCs)的促成骨效应。方法体外分离培养日本大白兔MSCs,按培养方法的不同分为3组。对照组:常规培养;单纯诱导组:以条件培养液(低糖DMEM+10%胎牛血清+10mmol/L地塞米松+50mg/L维生素C+10mmol/Lβ-甘油磷酸钠)培养;实验组:以AdEasy1/Cbfα1转染MSCs,加入条件培养液培养。在诱导3d,1、2、3和4周时,行组织学观察和免疫组织化学等方法检测成骨标志碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,ALP)和骨钙素的表达。结果体外培养兔MSCs生长良好,实验组AdEasy1/Cbfα1转染后90%以上MSCs表达绿色荧光蛋白。实验组及单纯诱导组ALP染色呈棕黑色阳性,随培养时间延长逐渐加深,对照组仅少量散在细胞ALP呈弱阳性;第1、2、3和4周实验组ALP浓度与单纯诱导组及对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组及单纯诱导组从2周开始有红色的阳性染色矿化结节出现,对照组为阴性,结节数目随时间推移而增多。实验组及单纯诱导组1周时有少量骨钙素染色阳性,2、3及4周时大量出现,对照组为阴性。结论应用Cbfα1可促进兔MSCs向成骨细胞分化,其分子机制仍需进一步深入研究。 展开更多

关键词 核心结合因子Α1 骨髓间充质干细胞 成骨细胞 分化 兔

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钠离子调节成骨细胞功能及其相关基因的差异性变化 被引量：5

4

作者 卢丽 林晓慧 +5 位作者 陈珺 陆幸妍 吴亮 贾欢欢 万超 李青南 《广东医学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期299-302,共4页

目的探讨钠离子(Na+)对大鼠成骨细胞成骨功能的调节,及其相关基因mRNA的变化。方法应用CCK-8试剂盒和碱性磷酸酶(AKP)试剂盒检测5种不同浓度Na+对成骨细胞增殖和分化的影响。再从中选用低(1×10-4mol/L)、中(0.1 mol/L)、高(0.5 mol... 目的探讨钠离子(Na+)对大鼠成骨细胞成骨功能的调节,及其相关基因mRNA的变化。方法应用CCK-8试剂盒和碱性磷酸酶(AKP)试剂盒检测5种不同浓度Na+对成骨细胞增殖和分化的影响。再从中选用低(1×10-4mol/L)、中(0.1 mol/L)、高(0.5 mol/L)3种浓度,于处理细胞15、30、120 min时,通过RT-PCR测定Na+对成骨细胞成骨功能相关基因OPN、Cbfa1 mRNA转录的影响。结果在1×10-4～1 mol/L范围内,与正常组相比,低浓度Na+明显促进成骨细胞分化,使AKP活性增加,高浓度则呈抑制作用,而Na+对成骨细胞的正常增殖无影响。RT-PCR结果显示与正常组相比,低浓度Na+显著地上调成骨细胞OPN、Cbfa1 mRNA的转录,高浓度则呈抑制作用。然而OPN、Cbfa1基因对Na+调节作出反应所需的时间存在差异,Cbfa1基因在经处理30 min时即可出现mRNA转录变化,而OPN基因则在处理120 min时才出现相应改变。结论 Na+可直接调节成骨细胞成骨功能,低浓度促进成骨细胞分化和相关功能基因OPN、Cbfa1的增加,而高浓度则显示抑制作用;且各基因转录变化具有时间差异。 展开更多

关键词 钠离子 成骨细胞 碱性磷酸酶 OPN CBFA1

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体外诱导C2C12细胞向成骨细胞的分化 被引量：4

5

作者 张勇 杨彤涛 +3 位作者 胡运生 廖博 文艳华 范清宇 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2013年第5期473-477,共5页

目的成骨细胞特异性转录因子a1(core binding factor a1,Cbfa1)通过调节生长因子和骨特异性细胞外基质蛋白的基因表达而参与成骨细胞的分化和骨发育过程。文中构建成Cbfa1,以腺病毒载体转染成肌细胞C2C12,为种子细胞构建组织工程化骨。... 目的成骨细胞特异性转录因子a1(core binding factor a1,Cbfa1)通过调节生长因子和骨特异性细胞外基质蛋白的基因表达而参与成骨细胞的分化和骨发育过程。文中构建成Cbfa1,以腺病毒载体转染成肌细胞C2C12,为种子细胞构建组织工程化骨。方法体外培养小鼠成肌细胞C2C12,用重组腺病毒质粒pAd-IL-31介导Cbfa1/Osf2基因瞬时转染小鼠成肌C2C12细胞,Western blot检测Cbfa1蛋白表达。结果 Cbfa1蛋白表达、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性测定、骨钙素(osteocalcin,OCN)分泌量以及茜素红染色感染组明显高于对照组。结论成肌细胞C2C12可以作为种子细胞构建组织工程化骨。 展开更多

关键词 成骨细胞特异性转录因子a1 成肌细胞C2C12 Western BLOT

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金雀异黄酮对体外培养缺氧大鼠骨髓间充质干细胞增殖与成骨分化的影响 被引量：9

6

作者 韩桂秋 葛宝丰 +1 位作者 陈克明 马慧萍 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第16期1248-1253,共6页

目的观察金雀异黄酮对缺氧体外培养大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖与成骨分化的影响。方法采用贴壁筛选法体外培养BMSCs并用三气培养箱建立缺氧模型。设常氧对照组、缺氧对照组和缺氧加药组,其中缺氧加药组细分为1×10-8、1×... 目的观察金雀异黄酮对缺氧体外培养大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖与成骨分化的影响。方法采用贴壁筛选法体外培养BMSCs并用三气培养箱建立缺氧模型。设常氧对照组、缺氧对照组和缺氧加药组,其中缺氧加药组细分为1×10-8、1×10-7和1×10-6 mol.L-1组金雀异黄酮组,缺氧处理36 h后分析各组的细胞增殖和成骨性指标包括碱性磷酸酶(ALP)活性、Ⅰ型胶原表达、钙盐沉积量和钙化结节面积等,并用Real Time RT-PCR法检测Runx2和骨形成蛋白(BMP)-2的基因表达情况。结果与缺氧对照组比较,金雀异黄酮抑制BMSCs增殖,显著提高ALP活性、Ⅰ型胶原表达量、钙盐沉积量和钙化结节面积,并提高基因Runx2和BMP-2的表达水平,且呈现出剂量依赖性特点。结论金雀异黄酮具有抑制缺氧BMSCs增殖并促进其成骨分化的作用。 展开更多

关键词 金雀异黄酮 骨髓间充质干细胞 缺氧 成骨性分化 增殖 I型胶原 碱性磷酸酶 核心结合因子A1 骨形态蛋白-2

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小鼠cbfa1部分编码区在大肠杆菌中的表达和纯化 被引量：1

7

作者 余擎 肖明振 +2 位作者 吴补领 田宇 林媛 《现代口腔医学杂志》 CAS CSCD 2003年第5期389-391,共3页

目的　在大肠杆菌中表达cbfa1肽段并进行纯化 ,为进一步制备抗体奠定基础。方法　构建 pRSETA -cbfa1原核表达重组质粒 ,转化大肠杆菌BL2 1,IPTG诱导蛋白表达 ,采用Ni-NTA亲和层析柱进行初步纯化。结果　成功地将 2 0 4bp的cbfa1片段插... 目的　在大肠杆菌中表达cbfa1肽段并进行纯化 ,为进一步制备抗体奠定基础。方法　构建 pRSETA -cbfa1原核表达重组质粒 ,转化大肠杆菌BL2 1,IPTG诱导蛋白表达 ,采用Ni-NTA亲和层析柱进行初步纯化。结果　成功地将 2 0 4bp的cbfa1片段插入 pRSETA原核表达载体中 ,且位于T7启动子下游、读框正确 ,在0 .1mmol/L的IPTG诱导下 ,SDS -PAGE电泳可见在约 14KD处有蛋白新生带 ,用Ni-NTA柱亲和层析纯化融合蛋白 ,得到的cbfa1蛋白纯度大于 95 %。 展开更多

关键词 大肠杆菌 小鼠 cbfal肽段 编码区 基因表达 纯化 抗体 制备 原核表达 重组质粒 构建

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核心结合因子a1、骨形成蛋白及骨桥素在小鼠牙周组织发育中的免疫组化定位研究 被引量：1

8

作者 杨丕山 潘克清 +1 位作者 李纾 姜波 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期487-490,共4页

目的探讨核心结合因子a1、骨形成蛋白和骨桥素3者在小鼠牙周组织发育过程中的时间和空间分布特点、表达意义及它们之间的相互作用。方法用SABC免疫组化法检测3者在出生后不同时期小鼠牙周组织发育中的表达及特点。结果牙齿发育早期,仅... 目的探讨核心结合因子a1、骨形成蛋白和骨桥素3者在小鼠牙周组织发育过程中的时间和空间分布特点、表达意义及它们之间的相互作用。方法用SABC免疫组化法检测3者在出生后不同时期小鼠牙周组织发育中的表达及特点。结果牙齿发育早期,仅骨形成蛋白在牙囊细胞中表达;当牙根开始发育后,3者皆在牙周膜细胞、成牙骨质细胞中表达,但骨形成蛋白在无细胞牙骨质和细胞牙骨质中皆不表达,核心结合因子a1在细胞牙骨质中表达,而骨桥素则在无细胞牙骨质、细胞牙骨质和牙槽骨表面皆呈强阳性表达。结论核心结合因子a1、骨形成蛋白、骨桥素3者皆参与牙周组织的发育,对矿化和生长发育发挥重要作用。 展开更多

关键词 核心结合因子A1 骨形成蛋白 骨桥素

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正畸牙移动过程中Cbfa1/Osf2在牙周组织中的表达 被引量：2

9

作者 吕琦 周洪 《口腔医学研究》 CAS CSCD 2007年第3期270-272,共3页

目的:了解Cbfa1/Osf2在牙周组织中的表达及变化,探讨其在牙周组织改建中的作用,为进一步深入研究正畸牙移动的机制奠定基础。方法:建立大鼠正畸牙移动的动物模型,并采用免疫组织化学的方法检测Cbfa1/Osf2在此过程中的表达。结果:Cbfa1/O... 目的:了解Cbfa1/Osf2在牙周组织中的表达及变化,探讨其在牙周组织改建中的作用,为进一步深入研究正畸牙移动的机制奠定基础。方法:建立大鼠正畸牙移动的动物模型,并采用免疫组织化学的方法检测Cbfa1/Osf2在此过程中的表达。结果:Cbfa1/Osf2在加力组牙周组织中的表达明显强于对照组,且张力侧表达强于压力侧;其中成骨细胞、成纤维细胞及破骨细胞均为强表达。结论:Cbfa1/Osf2参与了牙移动过程中牙周组织的改建,可能在牙周膜细胞向成骨细胞转化及新骨形成中起到了重要的作用。 展开更多

关键词 核心结合因子 牙周膜细胞 正畸牙移动 免疫组化

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正畸牙移动过程中CBFa1/Osf2和BMPs在牙周组织中的表达 被引量：1

10

作者 吕琦 周洪 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 2007年第10期567-570,共4页

目的:通过比较CBFa1/Osf2和BMPs在牙周组织中的表达及变化,探讨在正畸骨改建过程中,这两个对骨形成起到重要作用的因子之间的相互关系,为进一步深入研究正畸牙移动的生物学机制奠定基础。方法:建立大鼠正畸牙移动的动物模型,并采用免疫... 目的:通过比较CBFa1/Osf2和BMPs在牙周组织中的表达及变化,探讨在正畸骨改建过程中,这两个对骨形成起到重要作用的因子之间的相互关系,为进一步深入研究正畸牙移动的生物学机制奠定基础。方法:建立大鼠正畸牙移动的动物模型,并采用免疫组织化学的方法检测CBFa1/Osf2和BMPs在此过程中的表达。结果:正畸牙移动过程中CBFa1/Osf2和BMPs在牙周组织的分布及表达变化的时间上具有明显的一致性;均表现为实验组表达明显强于对照组,张力侧表达强于压力侧;其中成骨细胞、成纤维细胞及破骨细胞均为强表达。结论:CBFa1/Osf2和BMPs均参与了正畸的骨改建过程,且可能在正畸骨改建中起到重要作用。 展开更多

关键词 核心结合因子 骨形成蛋白 正畸牙移动 免疫组化

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力敏感因子对软骨内成骨的调控作用

11

作者 王亚斐 刘畅 《国际口腔医学杂志》 CAS 北大核心 2015年第5期615-619,共5页

软骨内成骨是一个复杂有序的生物学过程,依赖于一系列力敏感因子的精确调控,而生物力影响着软骨内成骨中力敏感因子的表达。对软骨细胞施加力学刺激后,印第安刺猬蛋白(IHH)表达增加,细胞增殖加快。IHH通过与甲状旁腺素-甲状旁腺素相关肽... 软骨内成骨是一个复杂有序的生物学过程,依赖于一系列力敏感因子的精确调控,而生物力影响着软骨内成骨中力敏感因子的表达。对软骨细胞施加力学刺激后,印第安刺猬蛋白(IHH)表达增加,细胞增殖加快。IHH通过与甲状旁腺素-甲状旁腺素相关肽(PTHr P)受体形成的负反馈环路协调软骨细胞的增殖、成熟与分化,而IHH在调控软骨细胞增殖分化方面并非是PTHr P依赖性的。核心结合因子-α1不仅在软骨形成中,亦在血管侵入软骨过程中发挥作用,可刺激肥大软骨细胞中的血管内皮生长因子(VEGF)诱导血管侵入,促进软骨内骨化。VEGFA通过刺激内皮细胞的增殖和迁徙增加血管的通透性,而肥大软骨细胞基质降解、血管侵入是软骨内成骨的关键。VEGF在软骨内成骨过程中协调着软骨细胞增殖、破骨细胞功能、细胞外基质改建、血管增生和骨形成间的关系。生物力影响着软骨内成骨力敏感因子的表达,进而影响着软骨内成骨进程,理解其中的分子机制将有利于骨形成和骨修复研究。 展开更多

关键词 软骨内成骨 生物力 印第安刺猬蛋白 核心结合因子-α1 血管内皮细胞生长因子

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壮筋续骨汤对骨折大鼠骨痂组织中CTR和CBFα1表达的影响 被引量：3

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作者 宁驰 周缜 +1 位作者 侯海青 金利新 《中国中医骨伤科杂志》 CAS 2016年第7期1-6,共6页

目的：研究壮筋续骨汤对骨折大鼠骨痂组织降钙素受体（CTR）、核心结合因子α1（CBFα1）表达的影响。方法：成年健康雄性Wistar大鼠60只,用线锯切断股骨中段制备骨折模型,以壮筋续骨汤水煎液灌胃治疗。苏木精-伊红染色观察骨痂组织病... 目的：研究壮筋续骨汤对骨折大鼠骨痂组织降钙素受体（CTR）、核心结合因子α1（CBFα1）表达的影响。方法：成年健康雄性Wistar大鼠60只,用线锯切断股骨中段制备骨折模型,以壮筋续骨汤水煎液灌胃治疗。苏木精-伊红染色观察骨痂组织病理变化,免疫组织化学染色检测骨痂组织中CTR和CBFα1的表达量。结果：骨折断端在骨折第7天主要为炎性细胞及肉芽组织所填充,第14天为纤维性骨痂组织,第21天为软骨性骨痂,第28天有大量骨小梁形成。骨折后7-21d,对照组与实验组骨痂组织CTR表达逐渐增多（t=2.428,3.003;P=0.008,0.027）;第28天时对照组表达显著减少（t=2.816,P=0.012）,实验组表达保持较高水平且显著高于对照组（t=3.042,P=0.01）。骨折后7-28d骨痂组织中CBFα1表达一直保持在较高水平,实验组各时间段的表达强度均显著高于对照组（t=2.598,2.639,3.128,3.679;P=0.003,0.009,0.022,0.023）。结论：壮筋续骨汤可能通过上调骨痂组织中CBFα1的表达而促进骨折愈合,通过调节破骨细胞的功能状态促进软骨性骨痂的软骨内骨化和重塑。 展开更多

关键词 壮筋续骨汤 大鼠 骨折 降钙素受体(CTR) 核心结合因子α1(CBFα1)

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核结合因子a1基因修饰的皮肤成纤维细胞修复骨缺损的实验研究 被引量：6

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作者 肖德常 邓廉夫 +10 位作者 杨庆铭 谭延斌 吕学敏 张伟 冯伟 何亚峰 梁静 朱雅萍 齐进 周琦 王君 《中华外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第22期1565-1568,共4页

目的探讨核结合因子 al(Cbfal)基因修饰的兔皮肤成纤维细胞与煅烧骨构建的移植材料对长骨大段骨缺损的修复作用。方法分离、纯化、培养兔皮肤成纤维细胞(RSF),应用pSG5-cbfal 及 pSG5质粒分别转染 RSF,获得 pSG5-Cbfal/RSF 及 pSG5/RSF... 目的探讨核结合因子 al(Cbfal)基因修饰的兔皮肤成纤维细胞与煅烧骨构建的移植材料对长骨大段骨缺损的修复作用。方法分离、纯化、培养兔皮肤成纤维细胞(RSF),应用pSG5-cbfal 及 pSG5质粒分别转染 RSF,获得 pSG5-Cbfal/RSF 及 pSG5/RSF,培养生长48 h 后,分别接种于长2 cm、直径4 mm 的圆柱状牛煅烧骨(TBC)上,制成 pSG5-Cbfal/RSF/TBC 及 pSG5/RSF/TBC复合物材料。制备兔桡骨中部长2 cm 的骨缺损模型,随机分组后,植入 pSG5-Cbfal/RSF/TBC 材料作为实验组(Ⅰ组),以 pSGS/RSF/TBC 材料植入组(Ⅱ组)、单纯 TBC 材料植入组(Ⅲ组)和无植入材料的自然修复组(Ⅳ组)作为对照,每组6只(12个桡骨)动物。分别于术后第4周及第12周摄 X 线片检查并最终获取骨折处标本,对植骨处进行三点抗折弯测试、脱钙骨组织切片的 HE 染色和 Masson染色及新生骨小梁图像计量分析。结果Ⅰ组标本骨质生长活跃,有大量新生骨小梁,生物力学性能良好,骨缺损处已完成早期愈合及修复;Ⅱ组、Ⅲ组及Ⅳ组无明显新生骨形成,未显示骨修复现象。结论 Cbfa1 基因修饰的兔皮肤成纤维细胞经与煅烧骨复合植入兔体内后,能完成对大段骨缺损的修复。 展开更多

关键词 成纤维细胞 转染 核结合因子a1基因 骨缺损 骨修复

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