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建议义“why not VP”的语用功能研究——兼谈与汉语“何不VP”结构的对比
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作者 刘丹 杨茜 《湖州师范学院学报》 2026年第1期105-114,共10页
建议是日常会话中常见的言语交际现象,作为其语言实现方式之一的“why not VP”结构也受到学界一定的关注。但现有研究大多停留在对此结构建议功能的讨论上,未对它的衍生功能进行探讨,也未将此结构与其他语言中的相似结构进行对比分析... 建议是日常会话中常见的言语交际现象,作为其语言实现方式之一的“why not VP”结构也受到学界一定的关注。但现有研究大多停留在对此结构建议功能的讨论上,未对它的衍生功能进行探讨,也未将此结构与其他语言中的相似结构进行对比分析。基于此,本文对表示建议义的结构“why not VP”的语用功能进行梳理,认为它已经从表示建议义的功能逐渐扩展到表达劝说、责问等话语功能,且这些功能均具有主观性或交互主观性。同时,还讨论了该结构交互主观性形成的原因,分析了其与汉语对应结构“何不VP”的异同之处。研究发现,两者在主语显现、标点符号使用及同义句式的种类上均存在差异。 展开更多
关键词 建议义“why not vp 语用功能 “何不vp
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猪轮状病毒VP4单克隆抗体的制备及抗原表位鉴定
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作者 赵佳莉 卞贤宇 +9 位作者 宋家鹏 王晨 汤学超 李运川 周金柱 朱雪蛟 陶然 董海龙 张雪寒 李彬 《中国农业科学》 北大核心 2026年第1期220-232,共13页
【背景】猪轮状病毒(porcine rotavirus,PoRV)是导致新生仔猪及幼龄仔猪病毒性腹泻的关键病原体之一,其感染可引发宿主严重的胃肠道功能紊乱,临床表现为脱水、腹泻甚至死亡,对全球养猪业造成巨大经济损失。VP4蛋白是PoRV病毒粒子表面关... 【背景】猪轮状病毒(porcine rotavirus,PoRV)是导致新生仔猪及幼龄仔猪病毒性腹泻的关键病原体之一,其感染可引发宿主严重的胃肠道功能紊乱,临床表现为脱水、腹泻甚至死亡,对全球养猪业造成巨大经济损失。VP4蛋白是PoRV病毒粒子表面关键的结构蛋白之一。VP4蛋白经胰蛋白酶水解后可生成VP8和VP5两个功能亚基,它们在病毒感染宿主细胞的初始阶段发挥核心作用,介导病毒吸附宿主细胞受体和随后的膜穿透过程。同时,VP4蛋白也是激发宿主免疫反应的重要靶抗原。然而,目前针对PoRV VP4蛋白的特异性单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb)研究相对匮乏,限制了相关诊断方法和新型疫苗的研发。【目的】制备针对PoRV VP4蛋白的mAb,在此基础上,对这些单克隆抗体进行全面的生物学特性分析,包括反应性、抗原表位类型(构象依赖型或线性)、亚型鉴定以及关键的中和活性评估,精确鉴定VP4蛋白上具有重要功能意义的抗原表位区域,为PoRV感染的精准诊断和新型疫苗设计提供支撑。【方法】以纯化的VP4*P23重组蛋白免疫BALB/c小鼠,运用脾细胞融合技术筛选杂交瘤细胞株,通过Western blot、间接免疫荧光(IFA)、免疫过氧化物酶单层试验(IPMA)鉴定单克隆抗体反应性,采用间接ELISA评估单抗对构象的敏感性。最后构建VP5蛋白的不同截短体鉴定靶向的抗原表位区域,通过体外中和实验评估VP5单抗的中和能力。【结果】成功获得26株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株,抗体亚型包括IgG1、IgG2a、IgG2b和IgM等多种亚型,其中轻链类型以κ链为主。在获得的26株单抗中,有15株被证实能够与天然的PoRV病毒粒子发生特异性反应(通过IFA和IPMA检测)。间接ELISA检测显示,mAb11、14、15、23为构象不敏感型单抗,mAb16、17、18、19、21、24、25、26为构象敏感型单抗,值得注意的是,mAb1、2、22这3株单抗在抗原变性后反应性反而增强。Western blot分析进一步聚焦于识别线性表位的单抗(mAb11,14,15),结果显示它们均能特异性识别VP5蛋白上约300—360位氨基酸区域内的线性表位,可能针对同一抗原表位。然而,体外中和试验评估表明这3株单抗对PoRV毒株无中和作用。【结论】成功制备多株靶向PoRV VP4蛋白的单克隆抗体,并鉴定了它们与天然病毒结合的能力。通过系统的表征,不仅明确了单抗的亚型分布和轻链类型,更重要的是对单抗的抗原识别特性进行了深入解析:成功区分了构象敏感型与构象不敏感型单抗,并精确定位了mAb11、14、15识别的线性抗原表位区域。研究成果为PoRV诊断试剂优化、亚单位疫苗研发提供了关键抗体资源,为深入研究VP4蛋白的免疫学功能及抗病毒机制奠定了基础。 展开更多
关键词 猪轮状病毒 vp4蛋白 单克隆抗体 抗原表位 诊断
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从能否去掉“的”再探“NP的VP”结构
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作者 闫晓凤 《现代语言学》 2026年第1期755-761,共7页
从“这本书的出版”引发的关于“NP的VP”的结构问题学术界已展开众多讨论。不同于大多聚焦于词类及其转换的研究,本文从实际语料出发,将重点讨论能否去掉“的”,分析这一特殊用法的表现特征及形成的原因。本文发现,在去掉“的”不影响... 从“这本书的出版”引发的关于“NP的VP”的结构问题学术界已展开众多讨论。不同于大多聚焦于词类及其转换的研究,本文从实际语料出发,将重点讨论能否去掉“的”,分析这一特殊用法的表现特征及形成的原因。本文发现,在去掉“的”不影响语用的句子中,VP主要由一般或具体的动词构成,并与前面的名词构成主动关系;在去掉“的”后不成立或难以成立的句子中,动词多为抽象的动词,转化为名词义的能力较强,对“的”依赖性较强,此时动词与“的”前面的名词多构成被动关系。后者中的动词很可能是兼类词,其名词义与动词义都被广泛应用。上述现象表明,“NP的VP”结构中“的”的可省略性,与动词的名物化倾向及其兼类属性密切相关。 展开更多
关键词 名物化 NP的vp 动词 兼类
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柯萨奇病毒A16型VP1-VP4基因克隆及其表达产物的抗原相关性分析 被引量:4
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作者 宋远斌 何思杰 +4 位作者 余楠 陈欣欣 王斌 车小燕 曾其毅 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1713-1717,共5页
目的克隆并表达柯萨奇病毒A16型VP1-VP4蛋白基因,初步分析其抗原相关性。方法抽提病毒RNA,经RT-PCR方法分别扩增出VP1-VP4蛋白基因片段,经克隆后,在QIA表达系统中表达,表达产物经8 mol/L尿素洗涤及镍柱亲和层析纯化后,用柯萨奇病毒A16... 目的克隆并表达柯萨奇病毒A16型VP1-VP4蛋白基因,初步分析其抗原相关性。方法抽提病毒RNA,经RT-PCR方法分别扩增出VP1-VP4蛋白基因片段,经克隆后,在QIA表达系统中表达,表达产物经8 mol/L尿素洗涤及镍柱亲和层析纯化后,用柯萨奇病毒A16型病毒免疫兔血清及肠道病毒71型病毒免疫兔血清对重组蛋白进行Western blotting及ELISA分析其抗原相关性及交叉反应性。结果成功构建的重组质粒pQE30a/VP1-VP4并经IPTG诱导,重组蛋白VP1-VP4高效表达并纯化成功,经Western blotting及ELISA证实重组蛋白VP1-VP4可以被CVA16免疫兔血清特异识别,部分与肠道病毒71型免疫血清存在交叉反应。结论在大肠杆菌M15中高效表达出柯萨奇病毒A16型VP1-VP4蛋白,经纯化产物具有较强的抗原反应性。 展开更多
关键词 柯萨奇病毒A16型 vp1蛋白 vp2蛋白 vp3蛋白 vp4蛋白 克隆 原核表达 抗原反应性
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大西洋鲑传染性胰腺坏死病病毒VP2蛋白和VP3蛋白重组腺病毒载体的构建及其表达 被引量:1
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作者 李守湖 秦闯 +1 位作者 李新苍 石建高 《水产科技情报》 2025年第1期26-32,共7页
传染性胰腺坏死病(infectious pancreatic necrosis,IPN)是由传染性胰腺坏死病病毒(infectious pancreatic necrosis virus,IPNV)引起的一种主要危害鲑科鱼类的传染病。为克隆传染性胰腺坏死病病毒(IPNV)VP2基因和VP3基因,并构建其重组... 传染性胰腺坏死病(infectious pancreatic necrosis,IPN)是由传染性胰腺坏死病病毒(infectious pancreatic necrosis virus,IPNV)引起的一种主要危害鲑科鱼类的传染病。为克隆传染性胰腺坏死病病毒(IPNV)VP2基因和VP3基因,并构建其重组腺病毒载体,利用PCR方法分别扩增出IPNV VP2基因和VP3基因,通过多基因片段同源重组技术将IPNV VP2基因和VP3基因克隆到pAd-Track-CMV载体,经过线性化后与pAd-easy-1载体在BJ5183菌体内进行同源重组,构建出重组腺病毒质粒;通过PCR及NotⅠ和HindⅢ双酶切鉴定,再经PacⅠ线性化后用于转染293T细胞,获得重组腺病毒;通过绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的表达监控重组腺病毒的复制情况,用Western-blotting法分别检测IPNV VP2蛋白和VP3蛋白的表达,并测定重组病毒滴度。结果显示,分别克隆出IPNV VP2和VP3基因,基因总长度为2211 bp,构建出目的基因重组腺病毒载体,该病毒在293T细胞中分别表达出蛋白分子质量约为54 kD和26 kD的产物,滴度为1.0×10^(9)个/mL TCID_(50)。结果表明,已成功获得IPNV VP2基因和VP3基因重组腺病毒,该病毒在293T细胞中滴度较高,能够稳定表达。传染性胰腺坏死病病毒VP2蛋白和VP3蛋白重组腺病毒载体的成功构建可为大西洋鲑传染性胰腺坏死病活载体疫苗的研制提供参考。 展开更多
关键词 大西洋鲑 传染性胰腺坏死病 vp2基因 vp3基因 腺病毒载体
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朝鲜语“VP_1+■+VP_2”结构在汉语中的对应形式 被引量:2
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作者 南日 《汉语学习》 CSSCI 北大核心 2009年第5期75-79,共5页
朝鲜语的"VP1+■+VP2"结构在汉语中最常见的对应形式有两种,即分别由结构助词"地"和"得"构成的"VP1+地+VP2"结构和"VP1+得+VP2"结构。本文主要讨论朝、汉两种语言这些结构的特点以... 朝鲜语的"VP1+■+VP2"结构在汉语中最常见的对应形式有两种,即分别由结构助词"地"和"得"构成的"VP1+地+VP2"结构和"VP1+得+VP2"结构。本文主要讨论朝、汉两种语言这些结构的特点以及对应规律。本文通过对大量的朝、汉语对译语料的分析,认为朝、汉语的这种对应关系主要取决于语义。 展开更多
关键词 vp1+ +vp2” vp1+地+vp2” vp1+得+vp2” 对应
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一起猪轮状病毒感染的实验室诊断及VP4、VP7基因序列分析
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作者 周锋涛 刘洋 +2 位作者 张振 刘淑华 李莲瑞 《湖南畜牧兽医》 2025年第6期27-30,共4页
为探究新疆阿克苏地区某一规模化猪场引发仔猪腹泻的病原体,采集病死仔猪肠道内容物,进行细菌分离鉴定,并采用荧光定量RT-PCR技术对猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎(TGEV)、猪轮状病毒(PoRV)进行病原检测。结果显示,样本中PoRV... 为探究新疆阿克苏地区某一规模化猪场引发仔猪腹泻的病原体,采集病死仔猪肠道内容物,进行细菌分离鉴定,并采用荧光定量RT-PCR技术对猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎(TGEV)、猪轮状病毒(PoRV)进行病原检测。结果显示,样本中PoRV检测呈阳性,提示该猪场仔猪腹泻的病原体为猪轮状病毒。设计并合成针对PoRV毒株VP4、VP7基因的特异性引物,进行RT-PCR扩增实验,并对扩增产物进行测序及同源性分析。结果表明,该毒株VP4基因序列与P[6]型参考株的核苷酸同源性为82.0%~92.3%,而VP7基因序列与G4型参考株的核苷酸同源性达到93.1%。据此判定,引发此次疫情的病原体为G4 P[6]基因型猪轮状病毒。研究为后续有效预防和控制疫情提供了重要依据。 展开更多
关键词 规模化猪场 仔猪腹泻 轮状病毒 vp4 vp7
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携带FPV VP2基因的重组减毒鼠伤寒沙门菌口服疫苗免疫原性研究
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作者 陈慧敏 王文婕 +7 位作者 韩新雨 贾钰航 余祖华 贾艳艳 廖成水 丁轲 尚珂 陈松彪 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第7期947-952,共6页
本试验旨在评价表达泛猫白细胞减少综合症病毒(FPV)VP2蛋白的重组减毒鼠伤寒沙门菌SL1344ΔcrpΔasd口服疫苗的免疫原性。将重组菌按照10^(6)CFU/只的剂量口服免疫6周龄雌性KM小鼠,在免疫后第7、14、21、28、35和42天进行称重,检测VP2... 本试验旨在评价表达泛猫白细胞减少综合症病毒(FPV)VP2蛋白的重组减毒鼠伤寒沙门菌SL1344ΔcrpΔasd口服疫苗的免疫原性。将重组菌按照10^(6)CFU/只的剂量口服免疫6周龄雌性KM小鼠,在免疫后第7、14、21、28、35和42天进行称重,检测VP2特异性Ig G抗体、中和抗体、IL-4和IFN-γ水平的变化。同时口服免疫8周龄健康田园猫,检测疫苗的攻毒保护效果。结果显示,与对照组相比,重组菌免疫后对小鼠体重无明显影响(P>0.05);重组菌免疫小鼠后能够显著诱导血清中针对VP2特异性抗体和中和抗体水平(P<0.05);IL-4和IFN-γ细胞因子水平显著升高(P<0.05),且在免疫后第28天达到峰值;重组菌免疫猫后对FPV感染具有一定程度的免疫保护效果,可明显降低实验猫致死率并且延缓发病时间和发病程度。以上结果表明,构建的FPV VP2重组减毒鼠伤寒沙门菌口服疫苗能够有效刺激机体产生免疫应答且具有较好的免疫保护效力,为进一步研发FPV新型疫苗奠定了良好基础。 展开更多
关键词 泛猫白细胞减少综合症病毒 vp2 SL1344ΔcrpΔasd 口服疫苗 免疫原性
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犬细小病毒VP2蛋白单克隆抗体的制备与鉴定
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作者 龚婷 马辉 郑鸣 《家畜生态学报》 北大核心 2025年第7期81-84,118,共5页
为获得犬细小病毒(canine parvovirus disease,CPV)VP2蛋白单克隆抗体,该研究利用原核表达技术对VP2蛋白进行截短表达,制备单克隆抗体。结果显示:获得了3株稳定的单克隆抗体(C6F7、D2E4、E3F6),其抗体效价分别为1∶1024000、1∶1024000... 为获得犬细小病毒(canine parvovirus disease,CPV)VP2蛋白单克隆抗体,该研究利用原核表达技术对VP2蛋白进行截短表达,制备单克隆抗体。结果显示:获得了3株稳定的单克隆抗体(C6F7、D2E4、E3F6),其抗体效价分别为1∶1024000、1∶1024000、1∶2048000,染色体数目分别为106、105、103,重链分别为IgG1、IgG2b和IgG1,轻链均为κ链,均能与VP2蛋白和CPV感染的F81细胞发生特异性反应,均与4种常见病毒不发生交叉反应。该研究获得了3株抗体效价高、特异性强、免疫学活性好的VP2蛋白单克隆抗体,可为CPV基础性研究和免疫学诊断试剂盒开发奠定基础。 展开更多
关键词 犬细小病毒 vp2蛋白 单克隆抗体 制备与鉴定
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“S别VP呢罢”的形成及同义糅合句式的兴替
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作者 叶建军 《古汉语研究》 北大核心 2025年第3期64-78,127,128,共17页
清代中叶始见的特殊测度句式“S别VP呢罢”的生成机制是糅合,而糅合的动因是言者对事件“SVP”的真实性存在矛盾心理。糅合句式“S别VP呢罢”后来消亡了,但是在清代中叶以后出现了若干与之同义的糅合句式,并在历史发展过程中发生了兴替... 清代中叶始见的特殊测度句式“S别VP呢罢”的生成机制是糅合,而糅合的动因是言者对事件“SVP”的真实性存在矛盾心理。糅合句式“S别VP呢罢”后来消亡了,但是在清代中叶以后出现了若干与之同义的糅合句式,并在历史发展过程中发生了兴替。陈述句式或感叹句式与测度句式发生糅合是汉语中一种常见的句式糅合模式。 展开更多
关键词 测度句式 “S别vp呢罢” 句式糅合 同义糅合句式
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Vps16通过调控心肌细胞自噬流减轻心肌I/R损伤的机制研究
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作者 李媛彬 欧阳翌国 +3 位作者 陈歆 邱爱珠 张海琴 陈壮 《医师在线》 2025年第11期3-8,共6页
目的 探讨液泡分选蛋白16(Vps16)在心肌缺血/再灌注(I/R)损伤中的作用及其机制。方法 分别构建大鼠心肌I/R模型[分组:对照空载体(AdVector)+假手术(Sham)组、Vps16过表达腺病毒载体(AdVps16)+Sham组、AdVector+I/R组、AdVps16+I/R组]和H... 目的 探讨液泡分选蛋白16(Vps16)在心肌缺血/再灌注(I/R)损伤中的作用及其机制。方法 分别构建大鼠心肌I/R模型[分组:对照空载体(AdVector)+假手术(Sham)组、Vps16过表达腺病毒载体(AdVps16)+Sham组、AdVector+I/R组、AdVps16+I/R组]和H9c2细胞低氧/复氧(H/R)模型(分组:siCtrl+AdVector组、siCtrl+AdVps16组、siUVRAG+AdVector组、siUVRAG+AdVps16组)。采用免疫印迹试验(Western blot)检测心肌I/R后Vps相关蛋白的表达;通过心内注射腺病毒Vps16过表达载体(AdVps16)干预,超声心动图评估心功能,生化法检测肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平;苏木精-伊红(HE)染色观察心肌组织形态学变化;在H9c2细胞中进一步检测Vps16-紫外线抗性相关基因(UVRAG)-RAS相关蛋白7(Rab7)信号轴对自噬流的影响;细胞免疫荧光技术观察自噬小体与Rab7的定位情况;并利用乳酸脱氢酶(LDH)释放实验评估细胞损伤情况。结果 与Sham组大鼠比较,I/R组大鼠心肌组织中UVRAG、Rab7、Vps16和Vps33b蛋白表达水平显著降低,Vps26蛋白表达水平升高(P <0.01);与AdVector+I/R组比较,AdVps16+I/R组在再灌注24 h后的左室收缩末期内径(LVIDs)减少,左室短轴缩短率(LVFS)和左室射血分数(LVEF)增加,CK-MB水平降低(P <0.05),心肌组织病理损伤减轻;进一步研究发现,在H9c2细胞中,Vps16过表达联合UVRAG或Rab7可显著提高微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ/Ⅰ比值并降低p62表达,促进自噬体与Rab7共定位,增强自噬流;而敲低UVRAG则部分抑制Vps16介导的自噬体成熟及细胞保护作用,表现为LDH释放水平增加。结论 Vps16通过调控UVRAG/Rab7信号轴促进心肌细胞自噬流,从而减轻心肌I/R损伤。 展开更多
关键词 vps16 UVRAG Rab7 缺血/再灌注 自噬流
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历时构式语法视角下的图式性构式“且VP吧”研究
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作者 朱献珑 王雪乔 《外语教学》 北大核心 2025年第5期14-20,共7页
“且VP吧”是北方方言中司空见惯的表达形式,但迄今尚未见到针对该构式的系统性研究。本研究以历时构式语法为理论框架,基于BCC语料库历时语料,探讨图式性构式“且VP吧”建构特征,并考察该构式演变历程和演变动因。研究发现:在形式方面... “且VP吧”是北方方言中司空见惯的表达形式,但迄今尚未见到针对该构式的系统性研究。本研究以历时构式语法为理论框架,基于BCC语料库历时语料,探讨图式性构式“且VP吧”建构特征,并考察该构式演变历程和演变动因。研究发现:在形式方面,准入该构式的构件为时间副词“且”、语气助词“吧”及表长时义的延续性VP;在意义方面,该构式在实际应用过程中发生变异性扩展,新生出强烈的现场协同移情语义。该构式的变异性扩展历经变异萌芽期、扩展形成期与语义稳定期三个阶段。在此过程中,形式_旧—意义_新配对逐渐占据优势并最终主导构式的使用。扩展的主要动因源于认知经济性、言语信据性及高频率使用等。 展开更多
关键词 “且vp吧”构式 历时构式语法 变异性扩展
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长链非编码RNA VPS9D1-AS1调控miR-532-3p/WEE1轴对卵巢癌细胞增殖、凋亡及上皮间质转化的影响
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作者 刘宏伟 王雅红 +2 位作者 周齐 闫亚男 王颖欣 《中国优生与遗传杂志》 2025年第5期1025-1032,共8页
目的探究长链非编码RNA VPS9D1反义RNA1(lncRNA VPS9D1-AS1)靶向调控微小RNA-532-3p/丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(miR-532-3p/WEE1)信号轴对卵巢癌细胞增殖、凋亡及上皮间质转化(EMT)的影响。方法将SKOV3细胞分为Control组、si-NC组、si-VPS... 目的探究长链非编码RNA VPS9D1反义RNA1(lncRNA VPS9D1-AS1)靶向调控微小RNA-532-3p/丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(miR-532-3p/WEE1)信号轴对卵巢癌细胞增殖、凋亡及上皮间质转化(EMT)的影响。方法将SKOV3细胞分为Control组、si-NC组、si-VPS9D1-AS1组、si-VPS9D1-AS1+anti-NC组、si-VPS9D1-AS1+anti-miR-532-3p组;以qRT-PCR法检测组织与细胞中lncRNA VPS9D1-AS1、miR-532-3p水平;以双荧光素酶实验检测lncRNA VPS9D1-AS1、WEE1分别与miR-532-3p靶向关系;以Edu、流式细胞术分别检测细胞增殖、凋亡;以Western blot法检测细胞增殖、凋亡、EMT相关蛋白及WEE1表达情况;以裸鼠移植瘤验证lncRNA VPS9D1-AS1对卵巢癌移植瘤生长及miR-532-3p/WEE1轴的影响。结果在卵巢癌组织及SKOV3细胞中lncRNA VPS9D1-AS1高表达,miR-532-3p低表达。lncRNA VPS9D1-AS1、WEE1与miR-532-3p之间存在靶向结合位点。si-VPS9D1-AS1组较si-NC组Edu阳性率和lncRNA VPS9D1-AS1水平及WEE1、Ki67、Bcl-2、N-cadherin、Vimentin表达降低,细胞凋亡率和miR-532-3p水平及p21、Bax、E-cadherin表达升高(P<0.05);以沉默miR-532-3p可部分逆转沉默VPS9D1-AS1对SKOV3细胞恶性表型的改善作用;裸鼠移植瘤实验显示,si-VPS9D1-AS1组较si-NC组裸鼠移植瘤生长缓慢,lncRNA VPS9D1-AS1水平及WEE1表达降低,miR-532-3p水平升高(P<0.05)。结论lncRNA VPS9D1-AS1可通过调控miR-532-3p/WEE1轴参与卵巢癌细胞增殖、凋亡、EMT过程。 展开更多
关键词 长链非编码RNA vpS9D1反义RNA1 微小RNA-532-3p 蛋白激酶WEE1 卵巢癌 上皮间质转化
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“看VP”句式的否定羡余现象
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作者 史金生 郑淑清 《辞书研究》 2025年第5期1-12,125,共13页
文章讨论了“看VP”句式不同语用推论意义下两类否定羡余句式的发展路径和形成机制。“提醒、警告、威胁”用法的“看VP”句式经过脱落、否定弱化等手段形成强语气表达“看不VP”和“看不把NPVP”结构;“提醒、警告、担心”用法的“看V... 文章讨论了“看VP”句式不同语用推论意义下两类否定羡余句式的发展路径和形成机制。“提醒、警告、威胁”用法的“看VP”句式经过脱落、否定弱化等手段形成强语气表达“看不VP”和“看不把NPVP”结构;“提醒、警告、担心”用法的“看VP”句式经过否定溢出和否定移位形成委婉表达“不看VP”。经过句式内部和外部的共存与竞争后,“看VP”句式的“威胁”用法持续活跃发展,“担心”用法萎缩、衰退。对“看不VP”和北京话“不看VP”的讨论,为羡余否定研究增添了新的类型和视角。 展开更多
关键词 vp 羡余 否定弱化 否定溢出
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元语用视角下“顺便+VP”构式的选择与表达
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作者 肖薇 王悦群 《齐齐哈尔大学学报(哲学社会科学版)》 2025年第9期105-110,共6页
基于构件描写分析,将“顺便+VP”界定为构式,探析说话人视角下该构式的话语整体表现和元语用意识动因。该构式可分化为“顺便V*”“顺便VV*”等典型类别,具有“顺便V下”“顺便一V”“顺便V了V”等含多种补语、状语成分的句法形式,常见... 基于构件描写分析,将“顺便+VP”界定为构式,探析说话人视角下该构式的话语整体表现和元语用意识动因。该构式可分化为“顺便V*”“顺便VV*”等典型类别,具有“顺便V下”“顺便一V”“顺便V了V”等含多种补语、状语成分的句法形式,常见于话轮开端或话轮之间。说话人对构式的选择往往受到语境、说话人、受话人、信息、语篇等元语用意识的影响,且某一表达可同时反应多项元语用意识,尤以语境、语篇和信息最为凸显。构式义亦可随之转变,由“顺便之举”转为“有意为之”,进而影响交际意图功能的浮现。 展开更多
关键词 “顺便+vp 话语表现 元语用意识 构式义
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转运必需内体分选复合物螺旋纤丝Vps24⁃Vps2的冷冻电镜结构研究
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作者 刘德生 李耀旺 孙珊 《电子显微学报》 北大核心 2025年第1期28-35,共8页
转运必需内体分选复合物-Ⅲ(endosomal sorting complex required for transport-Ⅲ,ESCRT-Ⅲ)介导了一系列细胞膜重塑事件,包括多囊体的形成、细胞分裂和病毒释放等。这些过程的关键步骤之一是将ESCRT-Ⅲ蛋白亚基组装成纤丝状结构。在... 转运必需内体分选复合物-Ⅲ(endosomal sorting complex required for transport-Ⅲ,ESCRT-Ⅲ)介导了一系列细胞膜重塑事件,包括多囊体的形成、细胞分裂和病毒释放等。这些过程的关键步骤之一是将ESCRT-Ⅲ蛋白亚基组装成纤丝状结构。在本研究中,作者利用冷冻电镜技术解析了由Vps24和Vps2融合蛋白(Vps24-Vps2)形成的双链螺旋纤丝的结构,分辨率为4.07A。在该结构中,呈伸展构象的Vps24-Vps2单体首先形成反向结合的二聚体,二聚体之间再错位结合形成一股螺旋,两股螺旋互相缠绕最终形成纤丝。该结构为理解ESCRT-Ⅲ丝状结构组装以及解聚过程提供了结构基础。 展开更多
关键词 转运必需内体分选复合物 ESCRT vps24 vps2 冷冻电镜结构
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MPLS VPN安全问题探讨 被引量:1
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作者 吴英桦 《现代电信科技》 2005年第8期14-19,共6页
首先指出MPLSVPN可能受到的安全威胁,然后分析了三层VPN、二层VPN在数据面、控制面和管理面上传送信息的安全性,提出目前在网络上可以采用的安全措施。
关键词 MPLS vpN 二层vp 三层vpN 安全 二层vpN 安全问题 安全威胁 安全措施 安全性
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猪轮状病毒VP6蛋白截短表达及间接ELISA抗体检测方法的建立 被引量:4
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作者 潘向英 曾智勇 +7 位作者 梁海英 汤德元 王彬 叶泥 田红利 边孟婷 柳佳佳 黄书 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第3期1231-1240,共10页
【目的】通过构建猪轮状病毒(Porcine rotavirus,PoRV)VP6截短蛋白(第177—382位氨基酸)的原核表达系统,建立检测PoRV抗体的间接ELISA方法,为PoRV血清学监测提供检测手段。【方法】设计1对针对截短VP 6基因的特异性引物,以pMD19-T-VP6... 【目的】通过构建猪轮状病毒(Porcine rotavirus,PoRV)VP6截短蛋白(第177—382位氨基酸)的原核表达系统,建立检测PoRV抗体的间接ELISA方法,为PoRV血清学监测提供检测手段。【方法】设计1对针对截短VP 6基因的特异性引物,以pMD19-T-VP6重组质粒为模板扩增VP 6截短基因。利用pET-32a(+)原核表达载体构建pET32a-PoRV-VP6重组质粒。以大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞为宿主菌,对重组质粒进行诱导表达,并优化表达条件。利用His标签镍柱对pET32a-PoRV-VP6重组蛋白进行纯化,以此作为包被抗原,通过单一变量法优化抗原包被浓度、血清稀释度、二抗稀释度及一抗、二抗孵育时间等工作条件。确定间接ELISA方法的阴阳性临界值,检验其特异性、敏感性、重复性及符合性,并对2021—2024年采自贵州地区不同猪场的384份临床猪血清进行检测。【结果】试验成功构建pET32a-PoRV-VP6重组表达载体,实现VP6蛋白的原核截短表达,蛋白分子质量大小约40 ku,具有良好的反应原性。对间接ELISA方法条件进行优化,确定VP6包被抗原最佳浓度为2μg/mL、阳性血清稀释度为1∶100、血清样品和二抗孵育时间均为60 min、TMB反应时间为10 min、阴阳性临界值(D 450 nm)为0.410。建立的间接ELISA方法与猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪冠状病毒(PDCoV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)等病毒标准阳性血清不发生反应,特异性强;批内和批间重复试验变异系数均<10%,重复性好;与PoRV A型ELISA抗体检测试剂盒的总体符合率为96.80%。间接ELISA方法检测临床384份猪血清样品结果显示,样品总阳性率为28.91%。【结论】本研究成功实现了PoRV VP6蛋白的截短表达,并建立了PoRV间接ELISA抗体检测方法,适用于临床PoRV抗体检测和疫苗免疫效果评价。 展开更多
关键词 猪轮状病毒(PoRV) vp6蛋白 截短表达 间接ELISA
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共表达IBDV VP2蛋白和AIV HA蛋白的重组NDV的构建 被引量:2
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作者 王晓晓 司凯新 +7 位作者 尚珂 陈松彪 余祖华 丁轲 陈建 李日顺 郁川 何雷 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第6期748-756,共9页
为构建共表达新变异型传染性法氏囊病毒(nVarIBDV)VP2蛋白和H9亚型禽流感病毒(AIV)HA蛋白的耐热型重组NDV,将nVarIBDV VP2基因和AIV HA基因经2A肽连接后插入重组质粒pNDV-Ⅶ-F中;然后,重组质粒与辅助质粒pTM-N/P/L共转染BHK-21细胞,拯... 为构建共表达新变异型传染性法氏囊病毒(nVarIBDV)VP2蛋白和H9亚型禽流感病毒(AIV)HA蛋白的耐热型重组NDV,将nVarIBDV VP2基因和AIV HA基因经2A肽连接后插入重组质粒pNDV-Ⅶ-F中;然后,重组质粒与辅助质粒pTM-N/P/L共转染BHK-21细胞,拯救出共表达VP2蛋白和HA蛋白的重组病毒r NDV-Ⅶ-F-VP2-HA和r NDV-Ⅶ-F-HA-VP2并鉴定。RT-PCR鉴定表明目的基因成功插入至重组NDV的P、M基因之间;IFA检测结果表明,重组病毒r NDV-Ⅶ-F-HA-VP2感染细胞可稳定表达VP2蛋白和HA蛋白,而重组病毒r NDV-Ⅶ-F-VP2-HA感染细胞后仅检测到VP2蛋白表达。生物学特性检测表明2株重组病毒均具有亲本毒株的高增殖效价、低毒力和良好耐热性特点。综上所述,本研究成功地构建了共表达nVarIBDV VP2蛋白和H9N2 AIV HA蛋白的重组病毒r NDV-Ⅶ-F-VP2-HA和r NDV-Ⅶ-F-HA-VP2,为n VarIBDV、H9N2 AIV及基因Ⅶ型NDV的综合防控提供了一种新的策略。 展开更多
关键词 新城疫病毒 传染性法氏囊病毒 vp2蛋白 禽流感病毒 HA蛋白
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