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Piwil2重编程人成纤维细胞形成肿瘤干细胞的初步研究 被引量:9
1
作者 吴鑫 何大维 +2 位作者 张永波 蔡春红 魏光辉 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期394-399,共6页
目的初步观察精原干细胞自我更新基因Piwil2重编程人成纤维细胞的细胞形态及功能特征变化,建立Piwil2调控肿瘤干细胞发生过程的细胞实验模型。方法将携带Piwil2-GFP标记和空载目的基因GFP标记的慢病毒载体分别感染原代培养的小儿包皮成... 目的初步观察精原干细胞自我更新基因Piwil2重编程人成纤维细胞的细胞形态及功能特征变化,建立Piwil2调控肿瘤干细胞发生过程的细胞实验模型。方法将携带Piwil2-GFP标记和空载目的基因GFP标记的慢病毒载体分别感染原代培养的小儿包皮成纤维细胞,筛选建立稳定表达Piwil2-GFP和GFP成纤维细胞系,观察细胞形态变化及肿瘤球形成过程,分析细胞染色体核型,进行裸鼠体内成瘤实验,RT-PCR、免疫组织化学进一步鉴定重编程后细胞的干细胞特征及三胚层分化的相关标志物。结果转染后第5天,Piwil2-GFP成纤维细胞开始由长梭形逐渐转变为圆形,第14天出现集落样生长状态,挑选集落重悬后培养形成类似"肿瘤球"样克隆,其细胞染色体核型呈超二倍体的异质性改变。"肿瘤球"样克隆裸鼠体内移植2周时100%形成肿瘤,肿瘤组织学及免疫组化鉴定为表达多种外胚层、中胚层及内胚层肿瘤标志物的恶性肿瘤,RT-PCR显示细胞及裸鼠肿瘤表达干细胞多能基因Oct-4、Nanog、Sox2,以及三胚层特征标志物。结论Piwil2重编程人成纤维细胞后的细胞具有干细胞及多潜能分化特性,以及显著的肿瘤细胞异质特性。 展开更多
关键词 piwil2 成纤维细胞 肿瘤干细胞
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沉默 Piwil2表达对子宫颈癌细胞增殖和衰老的影响 被引量:7
2
作者 张红丽 冯定庆 +4 位作者 凌斌 尤青叶 李兵 伍娇娇 赵婷婷 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2015年第5期589-593,共5页
目的采用shRNA沉默Piwil2基因的表达,探讨其对宫颈癌细胞株增殖和衰老特性的影响。方法通过脂质体Lipofectamine2000转染技术和嘌呤霉素筛选,建立稳转Sh-piwil2宫颈癌细胞株,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blo... 目的采用shRNA沉默Piwil2基因的表达,探讨其对宫颈癌细胞株增殖和衰老特性的影响。方法通过脂质体Lipofectamine2000转染技术和嘌呤霉素筛选,建立稳转Sh-piwil2宫颈癌细胞株,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blot法验证沉默效果。采用细胞增殖实验、集落形成实验、细胞周期和细胞衰老等实验观察沉默Piwil2表达对宫颈癌细胞生物学特性的影响。结果建立稳定转染Sh-piwil2宫颈癌细胞株,与对照组相比,沉默Piwil2表达后细胞的增殖和集落形成能力均显著降低(P<0.05);细胞G0/G1期比例增加、S期比例明显下降(P<0.05),同时沉默Piwil2后细胞衰老数量明显增多(P<0.05)。结论沉默Piwil2基因可发挥抗宫颈癌作用,推测Piwil2基因可作为宫颈癌临床治疗的一个潜在靶点。 展开更多
关键词 宫颈癌 SHRNA piwil2 细胞增殖 细胞衰老
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肿瘤抗原PIWIL2的HLA-A2限制性CTL表位鉴定 被引量:7
3
作者 时冉冉 李伯和 +3 位作者 袁磊 付陈增 陈娇 王建国 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期1315-1319,共5页
目的:鉴定肿瘤抗原PIWIL2的人类白细胞抗原A2(HLA-A2)限制性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位。方法:首先运用RT-PCR、Western blot方法检测PIWIL2在肿瘤细胞系MCF-7、SW480和HT-29中的表达情况,然后通过BIMAS、Rank Pep、Net MHC、Net CTL1.... 目的:鉴定肿瘤抗原PIWIL2的人类白细胞抗原A2(HLA-A2)限制性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位。方法:首先运用RT-PCR、Western blot方法检测PIWIL2在肿瘤细胞系MCF-7、SW480和HT-29中的表达情况,然后通过BIMAS、Rank Pep、Net MHC、Net CTL1.2及IEDB软件预测打分来选取PIWIL2的HLA-A2限制性的表位。候选表位肽通过标准的Fmoc化学合成法合成,结合力实验用于检测候选表位与T2A2细胞表面HLA-A2分子的结合能力,ELISPOT实验检测候选表位肽诱导CTL分泌IFN-γ的能力,体外细胞毒性实验检测候选肽诱导CTL的能力。结果:PIWIL2在肿瘤细胞系MCF-7、SW480和HT-29中均有表达。候选肽P485、P493、P965具有中等结合力。ELISPOT实验结果显示表位肽P485和P965诱导的CTL具有分泌IFN-γ的能力。细胞毒性实验结果显示表位肽P485和P965对MCF-7细胞均有一定的杀伤作用。结论:表位肽P485和P965是优秀的PIWIL2抗原HLAA2限制性CTL候选表位,可能成为新的抗肿瘤多肽免疫治疗疫苗的候选表位。 展开更多
关键词 piwil2 人类白细胞抗原A2 细胞毒性T淋巴细胞
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抗PIWIL2蛋白多克隆抗体的制备、鉴定及初步应用 被引量:5
4
作者 朱风尚 黄志刚 +4 位作者 胡莺 张小燕 陈锡美 孟逊 郜恒骏 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期1034-1037,共4页
目的:制备兔抗人PIWIL2(P-element-induced wimpy testislike 2,或称HIWI2)的多克隆抗体,并鉴定其特异性,初步探讨其在人正常及肿瘤组织中的分布。方法:人工合成特异性PIWIL2多肽,以马来酰胺活化匙孔血蓝蛋白(Keyhole limpet hemocyanin... 目的:制备兔抗人PIWIL2(P-element-induced wimpy testislike 2,或称HIWI2)的多克隆抗体,并鉴定其特异性,初步探讨其在人正常及肿瘤组织中的分布。方法:人工合成特异性PIWIL2多肽,以马来酰胺活化匙孔血蓝蛋白(Keyhole limpet hemocyanin,KLH)为载体构建多肽免疫原,致敏大白兔,制备兔抗人PIWIL2多克隆抗体。亲和层析法纯化抗体,ELISA和Western印迹鉴定特异性,人组织芯片行PIWIL2的免疫组化研究。结果:通过构建PIWIL2多肽-KLH载体复合物致敏大白兔,制备出兔抗人PIWIL2蛋白多克隆抗体。ELISA及Western印迹证实兔抗人PIWIL2抗体可特异性识别PIWIL2多肽。人组织芯片免疫组化染色显示,PIWIL2在肿瘤细胞的表达具有组织特异性,大多数正常和癌组织的平滑肌细胞胞质中呈阳性染色。结论:成功制备出兔抗人PIWIL2多克隆抗体,为后续研究奠定了基础。 展开更多
关键词 piwil2蛋白 多克隆抗体 组织芯片
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胶乳素、Piwil2和piR-932在白血病干细胞中的表达 被引量:4
5
作者 王瑾 陈玉 张丽君 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2014年第12期1407-1410,共4页
目的探究piwil2、乳胶素和piR-932在白血病干细胞中的表达情况,为对成人急性髓性白血病的管理打下基础。方法应用流式细胞术挑选CD34+/CD38-白血病细胞。通过PCR分析技术检测piwil2和胶乳素在CD34+/CD38-白血病细胞中的表达。用piRNA微... 目的探究piwil2、乳胶素和piR-932在白血病干细胞中的表达情况,为对成人急性髓性白血病的管理打下基础。方法应用流式细胞术挑选CD34+/CD38-白血病细胞。通过PCR分析技术检测piwil2和胶乳素在CD34+/CD38-白血病细胞中的表达。用piRNA微阵列芯片试验检测piR932在CD34+/CD38-白血病细胞中的表达。结果 piwil2蛋白的表达高于对照组,一种叫作piR932的piRNAs在白血病干细胞中表达显著升高,通过与piwil2发生免疫反应而形成免疫复合物;胶乳素的表达由于其启动子区的Cp G岛的甲基化而大大降低。结论 piR932和piwil2的结合是通过促进胶乳素的甲基化在CD34+/CD38-白血病细胞的过程中起到正性调节的作用,而且它们都能成为白血病的潜在靶点。 展开更多
关键词 白血病干细胞 胶乳素 piwil2 PIRNA
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Piwil2调控宫颈癌细胞恶性生物学行为的机制探讨 被引量:4
6
作者 冯定庆 闫克芹 +2 位作者 张筱 邓琳 凌斌 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期921-927,共7页
背景与目的:Piwil2在肿瘤干细胞及癌前干细胞中高表达,通过转录和转录后调控机制调控多种基因表达,与肿瘤发生、发展密切相关。该研究探讨Piwil2与宫颈癌细胞恶性生物学行为之间的关系及可能的调控机制。方法:构建慢病毒载体p Lenti-CMV... 背景与目的:Piwil2在肿瘤干细胞及癌前干细胞中高表达,通过转录和转录后调控机制调控多种基因表达,与肿瘤发生、发展密切相关。该研究探讨Piwil2与宫颈癌细胞恶性生物学行为之间的关系及可能的调控机制。方法:构建慢病毒载体p Lenti-CMV-Piwil2-SV40-EGFP和sh Piwil2质粒,分别转染He La和Si Ha细胞,建立过表达/沉默Piwil2表达稳转细胞株,反转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)及蛋白[质]印迹法(Western blot)鉴定转染效果;采用CCK-8法检测细胞增殖能力;PI染色后,流式细胞术(fluorescence-activated cell sorting,FACS)检测细胞周期;Western blot检测细胞增殖及周期相关调控蛋白表达;采用维拉帕米(verapamil)处理细胞,Hoechst 33342染色,FACS检测侧群(side polulation,SP)细胞比例;CCK-8法检测顺铂对细胞的杀伤活性。结果:过表达Piwil2上调He La和Si Ha细胞S期及G2/M期细胞比例,进而促进细胞增殖,与对照组比较差异均有统计学意义(P均<0.05);沉默Piwil2表达则细胞发生G0/G1期阻滞,抑制细胞增殖(P<0.05);Piwil2上调cyclin D1表达,提高Stat3磷酸化水平,下调p53表达;Piwil2显著上调He La和Si Ha细胞中SP细胞比例(P<0.01),提高宫颈癌细胞对顺铂的耐药性(P<0.01);沉默Piwil2则相反,显著提高对顺铂的敏感性。结论:Piwil2上调SP细胞比例,促进宫颈癌进展;Piwil2可作为宫颈癌的潜在治疗靶点。 展开更多
关键词 piwil2 子宫颈癌 侧群细胞 耐药
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人膀胱癌组织中肿瘤干细胞样细胞的分离培养及PIWIL2表达 被引量:4
7
作者 曹正国 田超 +3 位作者 蒋茂林 董晓程 黎建欣 肖恒军 《现代泌尿外科杂志》 CAS 2012年第4期342-346,共5页
目的从人膀胱移行细胞癌(BTCC)组织中分离培养肿瘤干细胞样细胞(CSLC),鉴定其生物学特性,并研究PIWIL2在CSLC中的表达和意义。方法收集12例不同临床分期BTCC患者组织标本,通过酶消化和原代培养相结合等方法处理,采用无血清悬浮培养法分... 目的从人膀胱移行细胞癌(BTCC)组织中分离培养肿瘤干细胞样细胞(CSLC),鉴定其生物学特性,并研究PIWIL2在CSLC中的表达和意义。方法收集12例不同临床分期BTCC患者组织标本,通过酶消化和原代培养相结合等方法处理,采用无血清悬浮培养法分离培养获得含CSLC的悬浮细胞球,流式细胞仪检测细胞表面分子标志CD133和CD44的表达,免疫磁珠分选系统分离CD133+CD44+细胞;采用半定量逆转录聚合酶链反应检测PIWIL2mRNA在CSLC中的表达;裸鼠皮下接种CS-LC,观察其成瘤能力。结果成功地从人膀胱癌组织分离培养获得可悬浮生长、稳定传代的CSLC,CSLC高表达CD133和CD44,裸鼠皮下接种1×104、1×105个CSLC均可全部成瘤,PIWIL2mRNA在CSLC的表达显著高于正常膀胱组织细胞。结论采用无血清悬浮培养法成功从人膀胱癌组织中分离获得CSLC,具有肿瘤干细胞特性,能高度表达PIWIL2,为靶向肿瘤干细胞的治疗提供了实验依据。 展开更多
关键词 肿瘤干细胞 piwil2 膀胱肿瘤 肿瘤干细胞样细胞
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黄芩提取物下调Piwil2增强他莫昔芬对乳腺癌细胞敏感性的分析 被引量:2
8
作者 刘欢 陈晓燕 刘燕玲 《时珍国医国药》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期2591-2593,共3页
目的探讨黄芩提取物能否通过调节Piwil2的表达来增强他莫替芬对乳腺癌MDA-MB-231、MCF-7细胞的敏感性。方法通过MTT检测他莫昔芬以及黄芩提取物与他莫昔芬联合作用于MDA-MB-231、MCF-7细胞后,24~96h各组细胞的增殖抑制率;通过RT-PCR检... 目的探讨黄芩提取物能否通过调节Piwil2的表达来增强他莫替芬对乳腺癌MDA-MB-231、MCF-7细胞的敏感性。方法通过MTT检测他莫昔芬以及黄芩提取物与他莫昔芬联合作用于MDA-MB-231、MCF-7细胞后,24~96h各组细胞的增殖抑制率;通过RT-PCR检测黄芩提取物、他莫昔芬、黄芩提取物与他莫昔芬联合作用MDA-MB-231、MCF-7细胞72h,各组细胞Piwil2 mRNA的表达情况。结果他莫昔芬作用于MDA-MB-231、MCF-7细胞24~96h后增殖抑制率显著低于黄芩提取物与他莫昔芬联合作用MDA-MB-231、MCF-7细胞。黄芩提取物与他莫昔芬联合作用MDA-MB-231细胞72h,细胞Piwil2 mRNA的表达水平明显低于他莫昔芬组,与黄芩提取物组比较差异不明显。结论黄芩提取物可能通过下调Piwil2的表达来增强他莫替芬对乳腺癌细胞的敏感性。 展开更多
关键词 黄芩提取物 piwil2 他莫替芬 乳腺癌
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Piwil2蛋白在乳腺恶性叶状肿瘤组织中的表达及临床预后分析 被引量:1
9
作者 李伟 李双霞 +5 位作者 孟元华 李凤玉 张奇芳 高灵娟 李宏伟 田玉旺 《蚌埠医学院学报》 CAS 2022年第6期756-758,763,共4页
目的:探讨Piwil2蛋白在乳腺恶性叶状肿瘤组织中的表达,分析Piwil2蛋白的表达与乳腺恶性叶状肿瘤相关临床病理因素之间的关系及对病人10年生存预后的影响。方法:收集乳腺恶性叶状肿瘤女性病人资料50例,同时选取因乳腺炎切除的乳腺正常组... 目的:探讨Piwil2蛋白在乳腺恶性叶状肿瘤组织中的表达,分析Piwil2蛋白的表达与乳腺恶性叶状肿瘤相关临床病理因素之间的关系及对病人10年生存预后的影响。方法:收集乳腺恶性叶状肿瘤女性病人资料50例,同时选取因乳腺炎切除的乳腺正常组织70例作为对照组。采用免疫组织化学法分别检测Piwil2蛋白在乳腺恶性叶状肿瘤、正常乳腺组织中的表达。结果:Piwil2蛋白在乳腺恶性叶状肿瘤组织中的阳性表达率为86.00%,明显高于正常乳腺组织的0.00%,差异有统计学意义(χ^(2)=93.82,P<0.01)。Piwil2蛋白的阳性表达率与病人肿瘤直径≥10 cm、Ki-67≥25%、瘤细胞异型性、CyclinD1蛋白阳性表达及核分裂≥15个/10HPF有关(P<0.05~P<0.01),而与病人年龄及术后是否复发无关(P>0.05)。乳腺恶性叶状肿瘤Piwil2蛋白阳性表达的病人10年生存率(65.12%)低于Piwil2蛋白阴性表达病人(100.00%),差异有统计学意义(χ^(2)=3.95,P<0.05)。结论:Piwil2蛋白的异常表达参与了乳腺恶性叶状肿瘤的演变、发展,也可作为临床预测病人生存预后的参考指标。 展开更多
关键词 乳腺恶性叶状肿瘤 piwil2蛋白 临床病理因素 10年生存率
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Piwil2在三阴性乳腺癌中的表达及与临床分期、肿瘤直径及淋巴结转移的关系 被引量:1
10
作者 刘起胜 徐妮为 +3 位作者 邹艳 黄旭 徐筱红 曹寅生 《大医生》 2019年第10期14-15,共2页
目的探讨Piwil2在三阴性乳腺癌(TNBC)中的表达及与临床分期、肿瘤直径及淋巴结转移的关系。方法从选取2016年3月至2018年3月在湖南中医药大学第一附属医院治疗的40例患者为研究对象,对其进行Piwil2检测,观察不同临床分期、肿瘤直径及淋... 目的探讨Piwil2在三阴性乳腺癌(TNBC)中的表达及与临床分期、肿瘤直径及淋巴结转移的关系。方法从选取2016年3月至2018年3月在湖南中医药大学第一附属医院治疗的40例患者为研究对象,对其进行Piwil2检测,观察不同临床分期、肿瘤直径及淋巴结转移患者的Piwil2表达情况。结果40例中Piwil2阳性率为70.00%。不同临床分期的TNBC患者Piwil2表达有明显差异(P<0.05);肿瘤直径越大、淋巴结转移患者的Piwil2阳性表达率明显较高(P<0.05)。结论TNBC的Piwil2阳性表达率较高,且随着临床分期越高、肿瘤直径越大、淋巴结转移,其阳性率表达率越高。 展开更多
关键词 piwil2 三阴性乳腺癌 肿瘤 淋巴转移 阳性率
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piwil2在口腔鳞状细胞癌患者中的表达及手术治疗对美观的影响研究 被引量:1
11
作者 李芳 杨松 +5 位作者 常虹 侯静莹 周森 刘瑜 杨蕾 李大鹏 《中国医疗美容》 2020年第2期60-63,共4页
目的探讨piwil2在口腔鳞状细胞癌患者中的表达及手术治疗对整形美容的影响。方法选择2010年1月-2017年1月口腔鳞状细胞癌患者56例作为对象,所有患者均拟行手术治疗,术中取病灶组织及癌旁组织(距离病灶≥3cm),术后对患者进行3年随访。采... 目的探讨piwil2在口腔鳞状细胞癌患者中的表达及手术治疗对整形美容的影响。方法选择2010年1月-2017年1月口腔鳞状细胞癌患者56例作为对象,所有患者均拟行手术治疗,术中取病灶组织及癌旁组织(距离病灶≥3cm),术后对患者进行3年随访。采用免疫组织化学法测定不同组织中piwil2蛋白表达水平;查阅病理资料,记录不同性别、年龄、肿瘤直径、分化程度及肿瘤分期状态下piwil2阳性率。所有患者术后均常规进行口腔整形美容,并借助同意问卷对患者美容前、后整体美观、口腔形态、面部外貌、口腔咀嚼功能及吞咽功能进行调查,记录患者生存期,比较两组piwil2表达水平、美观、生存期。结果所有患者均顺利完成手术,术后1例患者发生感染,患者球愈合良好,未见明显愈合不良,获得良好的美观。口腔鳞状细胞癌患者病灶组织中piwil2蛋白阳性率高于癌旁组织中(P<0.05);免疫组化结果表明:piwil2蛋白在口腔鳞状细胞癌患者病灶组织中阳性率较高以深、棕黄色为主,而在癌旁组织中黄色面积相对较小;口腔鳞状细胞癌患者中piwil2蛋白阳性率与性别、年龄、肿瘤部位无统计学意义(P>0.05);与肿瘤直径、TNM分期及分化类型具有统计学意义(P<0.05);口腔鳞状细胞癌患者手术后整体美观、口腔形态、面部外貌、口腔咀嚼功能及吞咽功能评分均高于手术前(P<0.05)。结论piwil2在口腔鳞状细胞癌患者中呈高表达,其阳性率能反映患者疾病严重程度,患者手术后加强其整形美容可获得良好的口腔美观,值得推广应用。 展开更多
关键词 piwil2 口腔鳞状细胞癌 手术治疗 美观 生存期
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环磷酰胺暴露后Piwil2在人神经母细胞瘤移植瘤中的表达
12
作者 王城 何文飞 +4 位作者 张红梅 赵丹 杨金凤 廖君左 周柯均 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2014年第11期1412-1415,共4页
目的探讨环磷酰胺(cyclophosphamide,CP)暴露后Piwil2在人神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)移植瘤中的表达。方法建立免疫活性C57BL/6j系小鼠的人NB SK-N-SH细胞株荷瘤模型,选择瘤体积在100~200 mm3之间的20只荷瘤小鼠,随机分为生理... 目的探讨环磷酰胺(cyclophosphamide,CP)暴露后Piwil2在人神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)移植瘤中的表达。方法建立免疫活性C57BL/6j系小鼠的人NB SK-N-SH细胞株荷瘤模型,选择瘤体积在100~200 mm3之间的20只荷瘤小鼠,随机分为生理盐水对照组(NS组)和环磷酰胺组(CP组),每组10只,CP组每日经腹腔注射CP75 mg/kg,2次/周,连续2周;NS组每日经腹腔注射NS 2 ml。每2天测量肿瘤体积,计算相对肿瘤体积(RTV);停药后次日处死小鼠,称瘤重,计算抑瘤率(IR);并采用RT-PCR法检测各组移植瘤组织中Piwil2基因m RNA的转录水平,免疫组化法和Western blot法检测各组移植瘤组织中Piwil2蛋白的分布及表达水平。结果与NS组比较,CP组移植瘤的RTV和瘤重均显著降低(P〈0.05),CP组的平均抑瘤率为83.56%。两组移植瘤组织中Piwil2基因m RNA的转录水平差异无统计学意义(P〉0.05)。NS组移植瘤组织中Piwil2蛋白高表达于胞浆,而CP组大部分肿瘤细胞坏死,Piwil2蛋白表达下降,细胞核稀疏,核浓缩,细胞体积变小;CP组移植瘤组织中Piwil2蛋白的表达水平明显低于NS组(P〈0.05)。结论 CP干预后,移植瘤缩小,移植瘤组织中Piwil2基因m RNA的转录水平不变,但蛋白表达水平有改变,可能影响人NB抵抗性。 展开更多
关键词 piwil2 神经母细胞瘤 移植瘤 环磷酰胺
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乳酸菌培养上清液下调Piwil2基因增强三阴性乳腺癌细胞对顺铂的敏感性 被引量:4
13
作者 李涛 马小干 +2 位作者 陈彬 朱琳琳 邹娇 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期1200-1205,共6页
目的探讨乳酸菌培养上清液(lactobacilli supernatants,LS)处理乳腺癌细胞对顺铂(cisplatin,DDP)敏感性的影响及其机制。方法采用CCK-8和Western blot检测不同浓度DDP(0、1、2、3、4、5μg/m L)和LS(体积分数分别为1%、5%、10%、20%)对... 目的探讨乳酸菌培养上清液(lactobacilli supernatants,LS)处理乳腺癌细胞对顺铂(cisplatin,DDP)敏感性的影响及其机制。方法采用CCK-8和Western blot检测不同浓度DDP(0、1、2、3、4、5μg/m L)和LS(体积分数分别为1%、5%、10%、20%)对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和Piwil2基因表达的影响;瞬时转染Piwil2 siRNA沉默MDA-MB-231细胞中Piwil2基因表达,Western blot检测其沉默效果,CCK-8检测Piwil2基因沉默后对MDA-MB-231细胞增殖的影响;2μg/m L DDP联合不同浓度LS(体积分数分别为1%、5%、10%、20%)作用MDA-MB-231细胞,观察细胞增殖抑制效应和Piwil2蛋白表达的改变。结果高浓度DDP(≥3μg/m L)可抑制MDA-MB-231细胞的增殖(P<0.05),而低浓度DDP(≤2μg/m L)不能有效抑制细胞增殖;DDP以剂量依赖性方式上调Piwil2蛋白的表达;siRNA沉默Piwil2表达可恢复2μg/m L DDP对细胞增殖的抑制。与对照组(乳酸菌培养基,MRS)比较,LS以剂量依赖性方式下调Piwil2蛋白的表达,但并不影响细胞的增殖;与单用2μg/m L DDP比较,2μg/m L DDP联合20%LS处理可显著下调Piwil2蛋白的表达并抑制细胞增殖(P<0.05)。结论三阴性乳腺癌细胞中Piwil2的高表达可导致细胞对顺铂敏感性的降低,乳酸菌培养上清液可通过下调Piwil2基因的表达增强三阴性乳腺癌细胞对顺铂的敏感性。 展开更多
关键词 乳酸菌培养上清液 乳腺肿瘤 顺铂 细胞增殖 piwil2
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肝细胞肝癌中Piwil2表达与临床病理特征及预后的关系 被引量:3
14
作者 王申涛 叶冬雪 +4 位作者 陈云庆 李宏 时维平 周璇 项锋钢 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期1402-1406,1411,共6页
目的探讨肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中Piwil2的表达及其与HCC的发生与演进、临床病理特征、预后的关系。方法利用组织芯片技术和免疫组化PV 6000法检测163例HCC组织及对应癌旁非瘤组织中Piwil2的表达,并进行统计学分析... 目的探讨肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中Piwil2的表达及其与HCC的发生与演进、临床病理特征、预后的关系。方法利用组织芯片技术和免疫组化PV 6000法检测163例HCC组织及对应癌旁非瘤组织中Piwil2的表达,并进行统计学分析。结果HCC组织中Piwil2的高表达率为47.85%(78/163),而癌旁非瘤组织中未发现高表达病例,两者差异有统计学意义(χ^2=102.532,P<0.001)。Piwil2表达与HCC病理分级、TNM分期、包膜侵犯、脉管侵犯均有关(P均<0.05),病理分级Ⅲ+Ⅳ级、TNM分期Ⅲ+Ⅳ期的患者高表达率高于Ⅰ+Ⅱ级、Ⅰ+Ⅱ期的患者(73.33%vs 26.14%,P<0.001;68%vs 44.2%,P=0.028)。Kaplan-Meier预后生存分析结果显示,Piwil2高表达组患者的总生存期和无瘤生存期较低表达组短(P均<0.05);有包膜侵犯、有脉管侵犯、病理分级Ⅲ+Ⅳ级、TNM分期Ⅲ+Ⅳ期的患者Piwil2高表达组总生存期和无瘤生存期比低表达组短(P均<0.05)。Cox回归分析结果发现,Piwil2表达、TNM分期是影响HCC患者术后无瘤生存期和总生存期的独立影响因素(P<0.05)。结论Piwil2可能参与HCC的发生、发展,其高表达可促使癌细胞增殖与转移,并可影响患者术后生存时间。检测Piwil2在HCC中的表达具有重要的临床价值,并有望成为HCC治疗的新靶标。 展开更多
关键词 肝肿瘤 肝细胞肝癌 piwil2 免疫组织化学 预后
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圆斑星鲽piwil2基因的克隆与表达分析 被引量:3
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作者 杨珍珍 边力 +6 位作者 张岩 常青 陈四清 刘长琳 葛建龙 胡建成 张盛农 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2020年第2期103-112,共10页
本研究采用RACE末端扩增方法,得到全长为3872 bp的圆斑星鲽(Verasper variegatus)piwil2基因序列,命名为Vvpiwil2,开放阅读框(ORF)长为3192 bp,编码1063个氨基酸,5¢-UTR和3¢-UTR的长度分别140 bp和540 bp。基于ExPASy、SMART... 本研究采用RACE末端扩增方法,得到全长为3872 bp的圆斑星鲽(Verasper variegatus)piwil2基因序列,命名为Vvpiwil2,开放阅读框(ORF)长为3192 bp,编码1063个氨基酸,5¢-UTR和3¢-UTR的长度分别140 bp和540 bp。基于ExPASy、SMART、Signal4.1和NCBI的保守结构域(CDD)数据库在线分析对蛋白序列结构进行预测,推断Vvpiwil2编码的氨基酸分子量为118.6 kDa,理论等电点为9.02,无跨膜结构及信号肽,有3个结构域:ArgoL1结构域、PAZ结构域及PIWI结构域。利用实时荧光定量PCR技术对圆斑星鲽不同发育时期的胚胎、仔稚鱼以及雌雄成鱼的不同组织表达模式进行分析。结果显示,Vvpiwil2基因从胚胎发育早期至高囊胚期均大量表达,之后呈下降趋势,直至孵化阶段。由于胚胎从卵裂至囊胚时期的发育过程主要受细胞质成分引导,直至原肠早期,mRNA开始大量转录合成,实现由母源型向合子型的过渡,推断Vvpiwil2是母源性基因。孵化后仔稚鱼68 d时,Vvpiwil2基因表达量显著高于其他时期,表明Vvpiwil2的功能可能与圆斑星鲽性腺分化过程相关;Vvpiwil2基因在雌雄成鱼性腺中的表达量显著高于其他组织,且卵巢中的表达量显著高于精巢,推测Vvpiwil2基因在卵巢功能的维持中发挥重要作用。本研究结果为解析圆斑星鲽性别决定机制提供了新的靶标基因,为建立全雌化苗种繁育技术打下坚实的理论基础。 展开更多
关键词 圆斑星鲽 piwil2 基因克隆 表达分析
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Piwil2基因表达诱导NIH3T3细胞恶性转化 被引量:4
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作者 李跃波 冯定庆 +1 位作者 凌斌 程敏 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2013年第5期467-471,共5页
目的通过建立稳定表达外源Piwil2基因的NIH3T3细胞,初步探讨Piwil2基因对NIH3T3细胞生物学特性的调控作用。方法通过脂质体介导的方法和G418的筛选,建立稳定表达Piwil2基因的NIH3T3细胞株,之后利用细胞集落形成实验、细胞增殖实验、细... 目的通过建立稳定表达外源Piwil2基因的NIH3T3细胞,初步探讨Piwil2基因对NIH3T3细胞生物学特性的调控作用。方法通过脂质体介导的方法和G418的筛选,建立稳定表达Piwil2基因的NIH3T3细胞株,之后利用细胞集落形成实验、细胞增殖实验、细胞周期分析和裸鼠成瘤实验,观察Piwil2基因表达对NIH3T3细胞的生物学特性的影响。结果建立了稳定过表达Piwil2基因的NIH3T3细胞株。与对照组空白载体细胞系相比,过表达Piwil2基因的NIH3T3细胞增殖和集落形成能力增强;细胞周期G0/G1期减少、S期明显升高;接种裸鼠后形成的肿瘤体积显著大于对照组。结论 Piwil2基因在NIH3T3细胞中稳定表达具有诱导正常NIH3T3细胞发生恶性转化的重要生物功能。 展开更多
关键词 piwil2基因 基因表达 3T3细胞
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piwil2重编程人成纤维细胞形成肿瘤样干细胞的基因差异表达 被引量:2
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作者 郭文浩 何大维 +4 位作者 李典 唐波 张丹 康青 魏光辉 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期1886-1892,共7页
利用基因芯片技术检测piwil2基因重编程人成纤维细胞(fibroblast,FB)形成肿瘤样干细胞的差异表达基因,分析主要差异表达信号通路。采用前期已构建的piwil2-gfp基因,以gfp作为空载对照的慢病毒转染人包皮来源的成纤维细胞,获得稳定转染... 利用基因芯片技术检测piwil2基因重编程人成纤维细胞(fibroblast,FB)形成肿瘤样干细胞的差异表达基因,分析主要差异表达信号通路。采用前期已构建的piwil2-gfp基因,以gfp作为空载对照的慢病毒转染人包皮来源的成纤维细胞,获得稳定转染的肿瘤样干细胞,人成纤维细胞作为正常对照,采用基因芯片技术检测其转录差异表达,进行pathway分析,挑选差异表达明显的支链氨基酸代谢信号通路,采用q-PCR进行验证。基因芯片结果显示,FB-piwil2组相较于FB,上调基因1490个,下调基因1484个,参与支链氨基酸代谢等多条信号通路;FB-piwil2组相较于FB-GFP组,上调基因3765个,下调基因1988个,参与支链氨基酸代谢等多条信号通路;FB-GFP组相较于FB组,上调基因2095个,下调基因4014个,参与破骨细胞分化等信号通路;q-PCR验证重编程形成的肿瘤样干细胞克隆的支链氨基酸代谢信号通路上调的7个基因(acad8,acadm,aldh3a2,bcat1,hibch,hmgcs1,mccc2)与基因芯片上调表达一致。由此可见,piwil2基因重编程人成纤维细胞形成的肿瘤样干细胞基因出现差异表达,与支链氨基酸代谢相关。 展开更多
关键词 piwil2 基因芯片 成纤维细胞
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Piwil2基因在肝癌组织中mRNA及蛋白的表达 被引量:4
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作者 贾慧丽 徐芸 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2012年第34期3385-3389,共5页
目的:检测肝癌组织中Piwil2基因mRNA和蛋白的表达,进而探讨Piwil2基因在临床诊断中的意义.方法:采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot印迹技术,检测了70例肝癌及其对应癌旁组织中PiWil2基因mRNA及其蛋白的表达并结合临床资料... 目的:检测肝癌组织中Piwil2基因mRNA和蛋白的表达,进而探讨Piwil2基因在临床诊断中的意义.方法:采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot印迹技术,检测了70例肝癌及其对应癌旁组织中PiWil2基因mRNA及其蛋白的表达并结合临床资料进行分析.结果:PiWil2 mRNA在肝癌中的表达量相对值高于癌旁的肝脏组织的表达量(0.91±0.04vs0.32±0.04,P<0.05).Piwil2基因mRNA的表达与患者的肝内转移、分化程度及癌栓等病理因素方面的差异有统计学意义(P<0.05).蛋白在肝癌中的表达均高于对应的癌旁组织.Piwil2的蛋白质表达与患者的肝内转移及癌栓等病理因素方面的差异有统计学意义(P<0.05).Piwil2基因mRNA的表达与Piwil2的蛋白质的表达有相关性(P<0.05).结论:Piwil2有可能成为肝癌的检测及治疗的一种分子标志物. 展开更多
关键词 肝癌 piwil2基因 RT—PCR 免疫印迹法
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Piwil2与肿瘤的关系及研究进展 被引量:3
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作者 肖昆 孙庭 《江西医药》 CAS 2013年第3期256-259,共4页
Piwil2属于Argonaute蛋白家族的PIWI亚家族,在人类中目前已发现,Argonaute蛋白家族的两个亚族:一类为类似植物拟南芥Argonaute1的A-GO亚族,主要为AGO1、AGO2、AGO3、AGO44个亚型:另一类为类似果蝇中Piwi的PIWI亚族,主要为Piwil1(HIWI)、... Piwil2属于Argonaute蛋白家族的PIWI亚家族,在人类中目前已发现,Argonaute蛋白家族的两个亚族:一类为类似植物拟南芥Argonaute1的A-GO亚族,主要为AGO1、AGO2、AGO3、AGO44个亚型:另一类为类似果蝇中Piwi的PIWI亚族,主要为Piwil1(HIWI)、Piwil2(HILI)、Piwil 3、Piwil 4(HIWIL2)4个亚型[1]。 展开更多
关键词 piwil2 肿瘤 癌基因 抑癌基因 细胞凋亡
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沉默PIWIL2抑制口腔鳞癌细胞CAL27增殖、侵袭、迁移和裸鼠移植瘤生长 被引量:1
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作者 郭谊 韩炎 +3 位作者 周丽芝 王俊华 马跃 鲁大鹏 《局解手术学杂志》 2022年第10期857-862,共6页
目的探究精原干细胞自我更新基因PIWIL2对口腔鳞癌细胞CAL27增殖、侵袭、迁移和裸鼠移植瘤生长的影响。方法将口腔鳞癌细胞CAL27随机分为空白组(不作处理)、阴性对照组(转染慢病毒阴性对照病毒scramble)和PIWIL2-shRNA慢病毒组(转染PIWI... 目的探究精原干细胞自我更新基因PIWIL2对口腔鳞癌细胞CAL27增殖、侵袭、迁移和裸鼠移植瘤生长的影响。方法将口腔鳞癌细胞CAL27随机分为空白组(不作处理)、阴性对照组(转染慢病毒阴性对照病毒scramble)和PIWIL2-shRNA慢病毒组(转染PIWIL2-shRNA慢病毒)。采用实时荧光定量PCR和蛋白印迹法检测细胞中PIWIL2 mRNA及蛋白表达水平,集落形成实验检测细胞增殖能力,Transwell实验和划痕实验检测细胞侵袭和迁移能力,JC-1探针检测线粒体膜电位变化,蛋白印迹法检测Ki67、血管内皮生长因子(VEGF)、E-cadherin、N-cadherin、Snail表达水平。裸鼠皮下注射慢病毒感染的CAL27细胞构建裸鼠移植瘤模型,免疫组化染色检测肿瘤组织中VEGF的表达水平,观察沉默PIWIL2对肿瘤生长的影响。结果PIWIL2-shRNA慢病毒感染后CAL27细胞中PIWIL2 mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。与阴性对照组比较,PIWIL2-shRNA慢病毒组细胞集落形成率,侵袭细胞数,划痕愈合率,细胞中Ki67、VEGF、N-cadherin、Snail蛋白表达水平,移植瘤重量、体积,移植瘤组织中VEGF阳性表达率显著降低/减少,细胞中E-cadherin蛋白表达水平显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。JC-1探针检测结果显示,PIWIL2-shRNA慢病毒感染后细胞中红色荧光减少,绿色荧光增多。结论沉默PIWIL2可明显抑制口腔鳞癌细胞CAL27增殖、侵袭、迁移及裸鼠移植瘤的生长。 展开更多
关键词 口腔鳞癌 piwil2 增殖 侵袭 迁移 移植瘤
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