Em18.3重组蛋白的表达及其免疫诊断特性的研究 被引量：7

1

作者 林仁勇 张春桃 +7 位作者 温浩 王俊芳 王星 王俨 卢晓梅 张静萍 张琰 无 《新疆医科大学学报》 CAS 2007年第4期332-335,共4页

目的:在大肠杆菌中表达和纯化截短的泡球蚴rEm18.3抗原重组蛋白,对其免疫诊断特性进行鉴定。方法:IPTG诱导pET41a-Em18.3原核表达质粒,表达和纯化rEm18.3-GST重组蛋白,SDS-PAGE电泳及West-ern blot法对其进行初步鉴定,ELISA法确定其免... 目的:在大肠杆菌中表达和纯化截短的泡球蚴rEm18.3抗原重组蛋白,对其免疫诊断特性进行鉴定。方法:IPTG诱导pET41a-Em18.3原核表达质粒,表达和纯化rEm18.3-GST重组蛋白,SDS-PAGE电泳及West-ern blot法对其进行初步鉴定,ELISA法确定其免疫诊断特性。结果:rEm18.3-GST重组蛋白得到成功表达,SDS-PAGE电泳显示相对分子量为45kDa。Western blot结果表明,rEm18.3-GST重组蛋白能被AE病人阳性血清识别。对56例多房棘球蚴病(AE)、88例细粒棘球蚴病(CE)、24例其他寄生虫病、24例其他疾病和24例健康者共236份血清进行ELISA检测结果显示,对AE血清诊断的敏感性为10.7%,特异性为99.4%,阳性预测值85.7%,阴性预测值78.1%。结论:rEm18.3-GST免疫诊断价值较低,Em18抗原重要的表位可能位于1-40位氨基酸。 展开更多

关键词 泡球蚴 em18重组蛋白 免疫检测

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Em18重组抗原特异性抗体的制备及对循环抗原检测的初探 被引量：3

2

作者 江莉 李雄 +2 位作者 李浩 牛新玲 冯正 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期329-332,共4页

目的用Em18重组抗原ReEm18制备特异性抗体,建立双抗体夹心ELISA,检测患者血清中的循环抗原。方法ReEm18经亲和纯化,免疫BALB/c小鼠和新西兰兔,分别制备单克隆抗体(单抗)和多克隆抗体(多抗)。用获得的单抗和多抗建立双抗体夹心ELISA,检... 目的用Em18重组抗原ReEm18制备特异性抗体,建立双抗体夹心ELISA,检测患者血清中的循环抗原。方法ReEm18经亲和纯化,免疫BALB/c小鼠和新西兰兔,分别制备单克隆抗体(单抗)和多克隆抗体(多抗)。用获得的单抗和多抗建立双抗体夹心ELISA,检测患者血清中Em18循环抗原。结果免疫兔血清抗ReEm18抗体效价达1∶204800以上。经ReEm18和多房棘球蚴病(AE)患者血清及健康人血清阻断ELISA试验双重筛选融合细胞,共获得14株抑制率>50%的特异性阳性细胞克隆。将特异性单抗和多抗自由组合进行双抗体夹心ELISA,结果以9号单抗与多抗的配对检测抗原为最优,检测ReEm18的灵敏度达3ng/ml。用建立的双夹心ELISA方法检测血清,11份AE血清中6份为阳性。结论获得针对ReEm18的特异性单抗和多抗,建立了敏感的双抗体夹心ELISA方法,血清学初步检测结果表明AE血清中存在可检测的Em18循环抗原。 展开更多

关键词 多房棘球蚴病 em18重组抗原 抗体 循环抗原 夹心ELISA

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泡球蚴Em18重组蛋白的表达及其抗原性检测的研究 被引量：15

3

作者 王俨 林仁勇 +7 位作者 丁剑冰 卢晓梅 张静萍 王星 梁晓慧 张亚楼 张琰 温浩 《中国寄生虫病防治杂志》 CSCD 2005年第1期33-36,共4页

　目的　构建泡球蚴18(Em18)基因的原核表达质粒,获得高效表达、有生物活性的Em18重组蛋白,为包虫病诊断试剂的研制奠定基础。　方法　用DNAman软件设计引物,分别在引物5′端和3′端添加EcoRⅠ和 XhoⅠ酶切位点,以pMD18 T/Em18原核表达... 　目的　构建泡球蚴18(Em18)基因的原核表达质粒,获得高效表达、有生物活性的Em18重组蛋白,为包虫病诊断试剂的研制奠定基础。　方法　用DNAman软件设计引物,分别在引物5′端和3′端添加EcoRⅠ和 XhoⅠ酶切位点,以pMD18 T/Em18原核表达质粒为模板,PCR扩增Em18基因片断,经酶切,克隆入原核表达载体 pET 41a(+),构建原核表达质粒 pET41a Em18;转化大肠埃希菌BL21(DE3),酶切、PCR及测序鉴定其插入序列的正确性。经 IPTG诱导表达 rEm18 GST重组蛋白和GST重组蛋白,用谷光甘肽 Sepharose 4B亲合层析柱分别进行纯化,通过 SDS PAGE和Western blot试验分析鉴定。　结果　测序表明构建的 pET41a Em18 原核表达质粒均为正确连接,插入 Em18 基因片断为486 bp。SDS PAGE检测表明Em18基因以 rEm18 GST重组蛋白的方式得到成功表达,在相对分子质量单位 50ku处有表达条带;Western blot分析显示,rEm18 GST重组蛋白能被泡型棘球蚴病人阳性血清识别,具有良好的抗原性。　结论　成功构建了 pET41a Em18原核表达质粒,获得的 rEm18 GST重组蛋白具有生物活性和抗原性,有望应用于泡型包虫病诊断试剂的研制。 展开更多

关键词 泡球蚴 em18基因 原核表达 鉴定

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EM18-GST原核表达载体的构建及空间结构的生物信息学分析 被引量：5

4

作者 周晓涛 周文涛 +6 位作者 杨晨晨 张蓓 刘献飞 王俨 张传山 吕国栋 林仁勇 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2013年第10期899-902,共4页

目的构建GST-EM18原核表达质粒,优化EM18-GST重组蛋白诱导表达条件,通过生物信息学预测EM18蛋白的空间结构。方法以pMD18-T/Em18为模板,扩增EM18基因的CDS区,构建pGEX-3X-EM18,设计不同诱导表达条件表达EM18-GST蛋白。通过各种在线网站... 目的构建GST-EM18原核表达质粒,优化EM18-GST重组蛋白诱导表达条件,通过生物信息学预测EM18蛋白的空间结构。方法以pMD18-T/Em18为模板,扩增EM18基因的CDS区,构建pGEX-3X-EM18,设计不同诱导表达条件表达EM18-GST蛋白。通过各种在线网站对EM18蛋白空间结构进行生物信息学预测。结果成功构建GST-EM18原核表达质粒,以1mmol/LIPTG于37℃诱导4h,蛋白表达较好;生物信息学预测EM18蛋白N端为无规卷曲,之后紧连两个α螺旋,C末端为无规卷曲和较短的片层结构。结论成功构建了GST-EM18原核表达质粒,表达的EM18蛋白含有无规则卷曲,可能是抗原表位所在位置。 展开更多

关键词 em18 蛋白质空间结构 生物信息学预测

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截短的泡球蚴Em18基因原核表达质粒的构建、表达及鉴定 被引量：4

5

作者 张春桃 林仁勇 +7 位作者 王俊芳 王星 王俨 卢晓梅 张静萍 张琰 张彤 温浩 《新疆医科大学学报》 CAS 2006年第4期283-285,288,共4页

目的:构建截短的泡球蚴18(Em18)基因的原核表达质粒,获得高效表达、有生物活性的重组蛋白,并对其进行初步鉴定。方法:DNAman软件设计引物,PCR法扩增并构建截短的pET41a-Em18．1原核表达质粒,测序鉴定插入序列正确性。异丙基硫代-β-D-... 目的:构建截短的泡球蚴18(Em18)基因的原核表达质粒,获得高效表达、有生物活性的重组蛋白,并对其进行初步鉴定。方法:DNAman软件设计引物,PCR法扩增并构建截短的pET41a-Em18．1原核表达质粒,测序鉴定插入序列正确性。异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导、表达和纯化rEm18．1-GST重组蛋白,采用SDS-PAGE 电泳及Western免疫印迹法对其进行初步鉴定。结果:成功构建出截短的pET41a-Em18．1,SDS-PAGE检测表明rEm18．1-GST重组蛋白得到成功表达,在相对分子量为41 kDa处有表达条带。Western blot结果显示 rEm18．1-GST重组蛋白能被AE病人阳性血清识别。结论:截短的pET41a-Em18．1原核表达质粒表达的 rEm18．1-GST重组蛋白具有良好的抗原性,为Em18抗原表位的分析奠定基础。 展开更多

关键词 泡球蚴 em18基因 重组蛋白

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泡球蚴Em18多克隆抗血清的制备和鉴定 被引量：3

6

作者 王俊芳 林仁勇 +6 位作者 张春桃 王星 王俨 卢晓梅 张琰 张建龙 温浩 《新疆医科大学学报》 CAS 2007年第4期336-338,共3页

目的:制备和鉴定泡球蚴Em18抗原的多克隆抗血清。方法:利用大肠杆菌BL21(DE3)表达重组质粒pET41a-Em18,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导、表达和纯化rEm18-GST蛋白,免疫BALB/c小鼠,制备鼠源抗Em18多克隆抗体,采用ELISA和Western b... 目的:制备和鉴定泡球蚴Em18抗原的多克隆抗血清。方法:利用大肠杆菌BL21(DE3)表达重组质粒pET41a-Em18,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导、表达和纯化rEm18-GST蛋白,免疫BALB/c小鼠,制备鼠源抗Em18多克隆抗体,采用ELISA和Western blot法鉴定其特异性。结果:(1)SDS-PAGE检测表明,rEm18-GST蛋白得到成功表达,在相对分子量为50kDa处有表达条带。(2)纯化后获得高纯度的rEm18-GST蛋白。(3)ELISA结果表明,抗Em18抗血清的抗体滴度为1∶25600;Western blot结果表明抗Em18抗血清能与rEm18-GST蛋白发生特异性结合。结论:获得了特异性识别rEm18-GST蛋白的多克隆抗体,为进一步筛选Em18模拟抗原表位奠定基础。 展开更多

关键词 泡球蚴 em18抗原 多克隆抗血清 制备

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泡球蚴Em18重组蛋白在大肠杆菌中的表达和纯化方法的优化 被引量：3

7

作者 王俊芳 王星 +6 位作者 张春桃 王俨 林仁勇 卢晓梅 张琰 张建龙 温浩 《新疆医科大学学报》 CAS 2007年第4期346-348,共3页

目的:筛选和优化泡球蚴Em18重组蛋白在大肠杆菌中表达和纯化的方法,为进一步筛选Em18抗原表位奠定基础。方法:原核表达pET41a-Em18重组质粒,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导、表达,获得rEm18-GST蛋白,采用不同的超声程序破碎大肠... 目的:筛选和优化泡球蚴Em18重组蛋白在大肠杆菌中表达和纯化的方法,为进一步筛选Em18抗原表位奠定基础。方法:原核表达pET41a-Em18重组质粒,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导、表达,获得rEm18-GST蛋白,采用不同的超声程序破碎大肠杆菌细胞,分别采用GST柱、His柱及两者结合方法,改变不同的平衡、洗涤和洗脱缓冲液浓度,纯化rEm18-GST蛋白。结果:(1)rEm18-GST蛋白在相对分子质量为50kDa处有表达条带,蛋白表达量随诱导时间的延长而增加;(2)超声程序为工作1s,间歇3s,每个循环时程10min,加入蛋白酶抑制剂,可降低目的蛋白的降解;(3)采用单纯His柱可获得回收量高、纯度高的rEm18-GST蛋白。结论:(1)对含有GST-tag和His-tag双重标签重组蛋白的纯化,应用His柱更有效,更经济;(2)建立和优化一套从大肠杆菌细胞中分离纯化重组Em18蛋白的有效方法。 展开更多

关键词 em18重组蛋白 表达和纯化 优化

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应用噬菌体7肽库筛选泡球蚴Em18抗原模拟表位的初步研究 被引量：2

8

作者 张蓓 杨晨晨 +8 位作者 林仁勇 王俊芳 张春桃 王俨 卢晓梅 张静萍 张琰 许晏 温浩 《新疆医科大学学报》 CAS 2007年第4期343-345,共3页

目的:从噬菌体7肽库中筛选泡球蚴Em18抗原模拟表位,为研究和开发新的包虫病诊断抗原提供实验依据。方法:用纯化后的rEm18-GST免疫新西兰白兔,获得抗rEm18-GST的多克隆抗体,进一步纯化,获得抗Em18多克隆抗体IgG,以之作为靶分子,免疫筛选... 目的:从噬菌体7肽库中筛选泡球蚴Em18抗原模拟表位,为研究和开发新的包虫病诊断抗原提供实验依据。方法:用纯化后的rEm18-GST免疫新西兰白兔,获得抗rEm18-GST的多克隆抗体,进一步纯化,获得抗Em18多克隆抗体IgG,以之作为靶分子,免疫筛选噬菌体随机7肽库。经过5轮的淘筛过程,随机挑取9个蓝色噬菌斑扩增,核苷酸序列测定分析并与Em18进行同源性比较。结果:经5轮筛选后,阳性克隆得到富集,9个噬菌体克隆的氨基酸序列与Em18无同源性。结论:所得肽段可能是Em18抗原模拟表位。 展开更多

关键词 噬菌体肽库 em18 模拟表位

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Em18抗原ELISA法对泡球蚴病诊断价值的系统评价 被引量：2

9

作者 孟存仁 张琼 张朝霞 《中国循证医学杂志》 CSCD 2009年第7期783-787,共5页

目的评价Em18抗原ELISA法对泡球蚴病的诊断价值。方法计算机检索MEDLINE、EMbase、PubMed、The Cochrane Library等数据库,手工检索相关期刊,全面收集Em18抗原ELISA法诊断泡球蚴病的相关研究文献,按照QUADAS标准评价纳入文献的质量,采用... 目的评价Em18抗原ELISA法对泡球蚴病的诊断价值。方法计算机检索MEDLINE、EMbase、PubMed、The Cochrane Library等数据库,手工检索相关期刊,全面收集Em18抗原ELISA法诊断泡球蚴病的相关研究文献,按照QUADAS标准评价纳入文献的质量,采用RevMan 4.2.10进行异质性分析和Meta分析,并用Meta-disc软件绘制SROC曲线。结果最终纳入8篇文献,包括409例经金标准确认的泡球蚴病患者、1105例非泡球蚴病患者和216例正常人。Meta分析结果显示:3个使用纯化Em18抗原的研究间未见统计学异质性(P=0.17,I2=44.5%),合并的灵敏度、特异度、阳性似然比、阴性似然比及SROC曲线下面积分别为91.5%、91.7%、11.889、0.096和0.9666;4个使用人工重组Em18抗原的研究间未见统计学异质性(P=0.39,I2=0.4%),合并的灵敏度、特异度、阳性似然比、阴性似然比及SROC曲线下面积分别为92.2%、95.7%、22.807、0.094和0.9789;使用Em18粗抗原、人工重组Em18-1抗原、人工重组Em18-2抗原的研究各一项,均显示出较好的灵敏度和特异度;1个使用人工重组Em18-3抗原的研究显示特异度较高(99.4%),而灵敏度较低(10.7%)。结论本系统评价显示,用纯化天然Em18抗原ELISA法和人工重组Em18抗原ELISA法检测泡球蚴病具有较大临床应用价值。 展开更多

关键词 泡球蚴病 em18抗原 酶联免疫吸附试验 系统评价 META分析

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多房棘球蚴EM18基因片段的克隆与生物信息学预测 被引量：1

10

作者 刘献飞 王红英 +4 位作者 周晓涛 贾海英 刘晓霞 林仁勇 丁剑冰 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期23-26,共4页

目的寻找EM18抗原表位。方法用逆转录PCR方法从多房棘球蚴的RNA扩增EM18基因片段,运用各软件对EM18的二级结构和表面特性、亲水性、理化性质、可及性、免疫原性和可塑性等方面进行分析,预测其抗原表位。经3DLigandsite服务器结构预测其... 目的寻找EM18抗原表位。方法用逆转录PCR方法从多房棘球蚴的RNA扩增EM18基因片段,运用各软件对EM18的二级结构和表面特性、亲水性、理化性质、可及性、免疫原性和可塑性等方面进行分析,预测其抗原表位。经3DLigandsite服务器结构预测其编码的蛋白质的3D结构。结果 EM18存在潜在的抗原表位,B细胞表位区域:28-43、49-55、59-64、69-79、85-91、99-111、119-129、135-144。结论运用生物信息学方法确定EM18存在8个抗原表位,对进一步研究EM18的抗原性和研发优势表位疫苗具有重要的意义。 展开更多

关键词 多房棘球蚴 em18 生物信息学

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泡球蚴Em18抗原基因的分段表达及抗原表位的初步分析 被引量：1

11

作者 张蓓 杨晨晨 +3 位作者 蔡雯 孙玉萍 陈锋 林仁勇 《新疆医科大学学报》 CAS 2013年第2期187-191,共5页

目的构建截短的泡球蚴18(Em18)基因的原核表达质粒,获得高效表达、有生物活性的重组蛋白并对其进行初步鉴定。方法采用DNAman软件设计引物,聚合酶链式反应(PCR)法扩增并构建截短的pET41a-Em18.4原核表达质粒,测序鉴定插入序列正确性。... 目的构建截短的泡球蚴18(Em18)基因的原核表达质粒,获得高效表达、有生物活性的重组蛋白并对其进行初步鉴定。方法采用DNAman软件设计引物,聚合酶链式反应(PCR)法扩增并构建截短的pET41a-Em18.4原核表达质粒,测序鉴定插入序列正确性。异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导、表达和纯化rEm18.4-GST重组蛋白,采用SDS-PAGE电泳及蛋白免疫印迹法(Western blot)和酶联免疫吸附法(ELISA)检测对其进行初步鉴定。结果成功构建出截短的pET41a-Em18.4,SDS-PAGE检测表明rEm18.4-GST重组蛋白得到成功表达,在相对分子量为41KDa处有表达条带。但蛋白免疫印迹法(Western blot)和酶联免疫吸附法(ELISA)检测结果显示rEm18.4-GST重组蛋白不能与AE患者阳性血清反应。结论成功构建出截短的pET41a-Em18.4原核表达质粒并表达的rEm18.4-GST重组蛋白,但其缺乏抗原性,可能与Em18的空间构象有关。 展开更多

关键词 泡球蚴 em18重组蛋白 抗原表位

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重组泡球蚴Em18蛋白不同纯化方法的比较

12

作者 王慧 王红丽 +5 位作者 王俊华 吕国栋 卢晓梅 王星 温浩 林仁勇 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期45-48,共4页

目的：比较不同方法纯化重组泡球蚴Em18的效果。方法：进一步对BL21-pET41a-Em18重组菌的诱导表达条件进行摸索优化,采用改良的超声程序破碎大肠杆菌细胞,分别经不同的纯化方法进行蛋白纯化,通过SDS-PAGE对纯化结果进行比较分析,Western... 目的：比较不同方法纯化重组泡球蚴Em18的效果。方法：进一步对BL21-pET41a-Em18重组菌的诱导表达条件进行摸索优化,采用改良的超声程序破碎大肠杆菌细胞,分别经不同的纯化方法进行蛋白纯化,通过SDS-PAGE对纯化结果进行比较分析,Western blot进行活性鉴定。结果：①在菌液OD600为0.8-1.0,加IPTG终浓度为1 mmol/L,37℃诱导3h,rEm18-GST重组蛋白得到成功高表达,在相对分子量为50kDa处有表达条带。②超声程序为：工作3 s,间歇4s,功率200~300W,超声体系中加入溶菌酶和蛋白酶抑制剂作用,可促进大肠杆菌细胞的破碎,降低目的蛋白的降解;加入终浓度为1%的Triton-X100作用可增加融合蛋白的可溶性。③通过比较不同方法纯化重组泡球蚴Em18的效果表明采用单纯His柱纯化可获得浓度高、纯度高的rEm18-GST重组蛋白。Western blot分析表明该蛋白能与泡型包虫病（AE）患者血清特异性反应。结论：建立了一种纯化原核表达Em18融合蛋白的较为经济和有效的方法,得到大量有生物学活性的Em18融合蛋白,为包虫病诊断试剂盒的研制奠定基础。 展开更多

关键词 泡球蚴 em18重组蛋白 表达和纯化 鉴定

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重组抗原Em18双抗原夹心酶联免疫吸附试验法检测泡球蚴抗体的建立及初步评价 被引量：1

13

作者 巩月红 李艳红 +1 位作者 段新宇 张朝霞 《国际免疫学杂志》 CAS 2015年第3期219-223,共5页

目的 建立双抗原夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）检测泡状棘球蚴抗体的方法.方法 重组抗原Em18（rEm18）作为包被抗原,以辣根过氧化物酶（HRP）标记rEm18抗原为检测抗原,建立检测人血清中泡状棘球蚴抗体的双抗原夹心ELISA方法;应用方阵... 目的 建立双抗原夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）检测泡状棘球蚴抗体的方法.方法 重组抗原Em18（rEm18）作为包被抗原,以辣根过氧化物酶（HRP）标记rEm18抗原为检测抗原,建立检测人血清中泡状棘球蚴抗体的双抗原夹心ELISA方法;应用方阵滴定法对包被抗原、酶标抗原等条件进行优化,并对该系统的灵敏性、特异性、重复性进行初步分析评价.结果 rEm18最佳包被浓度为2.5μg/mL,HRP标rEm18稀释度为1∶800.灵敏度为92％（46/50）,特异性为94％（47/50）,假阴性率为8％ （4/50）,假阳性率为6％ （3/50）,批内变异≤9.55％,批间变异≤14.79％,与Em2-ELISA试剂盒检测结果有良好的一致性.结论 本研究成功建立了快速检测泡球蚴特异性抗体的ELISA法,其可以用于人泡球蚴病的早期诊断. 展开更多

关键词 双抗原夹心酶联免疫吸附试验法 泡状棘球蚴 重组抗原em18

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快速诊断多房棘球蚴病胶体金免疫层析试条方法的建立与评价 被引量：5

14

作者 高春花 石锋 +2 位作者 汪俊云 杨玥涛 朱慧慧 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期90-94,共5页

目的建立快速、简便诊断多房棘球蚴病的胶体金免疫层析试条方法。方法提取多房棘球蚴原头节总RNA,通过RT-PCR获得编码Em18基因片段并克隆入pGEX-3X表达载体,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达得到重组蛋白;采用柠檬酸三钠还原法... 目的建立快速、简便诊断多房棘球蚴病的胶体金免疫层析试条方法。方法提取多房棘球蚴原头节总RNA,通过RT-PCR获得编码Em18基因片段并克隆入pGEX-3X表达载体,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达得到重组蛋白;采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,标记抗人IgG单克隆抗体;将重组Em18抗原包被于硝酸纤维素膜适当位置,制成检测特异抗体的胶体金免疫层析试条。用该试条检测多房棘球蚴病(56份)、细粒棘球蚴病(87份)、囊尾蚴病(30份)、日本血吸虫病(10份)和弓形虫病(10份)患者血清,以及健康人(50份)血清,以评价其检测的敏感性和特异性,同时用ELISA法进行平行检测,以评价该试条的诊断性能。结果以重组蛋白Em18为抗原胶体金免疫层析试条检测多房棘球蚴病患者血清,敏感性为92.9%(52/56)。与细粒棘球蚴病和囊尾蚴病患者血清分别存在9.2%(8/87)和3.3%(1/30)的交叉反应,与健康人血清存在8.0%(4/50)的假阳性率,与日本血吸虫病和弓形虫病患者血清则无交叉反应,特异性为93.0%(174/187)。ELISA法检测的敏感性和特异性分别为94.6%(54/56)和92%(172/187),与试条法比较两者差异均无统计学意义(P>0.05)。kappa分析结果显示,试条法与ELISA法检测多房棘球蚴病患者血清的结果高度一致(κ=0.98)。结论以重组Em18抗原建立的快速诊断胶体金免疫层析试条,检测多房棘球蚴病的敏感性和特异性均较高。 展开更多

关键词 多房棘球蚴病 重组em18抗原 免疫层析试条 ELISA 诊断

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泡球蚴18基因的克隆、原核表达质粒的构建及其初步表达的研究 被引量：10

15

作者 王俨 林仁勇 +7 位作者 丁剑冰 卢晓梅 张静萍 王星 梁晓慧 张亚楼 张琰 温浩 《新疆医科大学学报》 CAS 2005年第1期18-20,共3页

目的: 克隆、分析泡球蚴 18 (Em18)抗原基因,构建 pET41a Em18 原核表达质粒,并初步诱导表达Em18重组蛋白。方法: DNAman软件设计引物,RT PCR法克隆 Em18 cDNA并构建 pMD18 T/Em18 质粒,测序确定序列,利用DNAman和BLAST软件,对其进行基... 目的: 克隆、分析泡球蚴 18 (Em18)抗原基因,构建 pET41a Em18 原核表达质粒,并初步诱导表达Em18重组蛋白。方法: DNAman软件设计引物,RT PCR法克隆 Em18 cDNA并构建 pMD18 T/Em18 质粒,测序确定序列,利用DNAman和BLAST软件,对其进行基因序列分析。构建 pET41a Em18 原核表达质粒,测序鉴定插入序列正确性。IPTG初步诱导和表达 rEm18 GST重组蛋白,SDS PAGE电泳检测。结果: 测序结果显示Em18抗原基因长度为 486 bp,编码 161 个氨基酸。BLAST 比对分析表明为一新序列并被 GenBank 收录(AY513691)。构建的 pET41a Em18原核表达质粒,经 IPTG诱导后,SDS PAGE检测表明 rEm18 GST重组蛋白得到成功表达,在相对分子量为50 KDa处有表达条带。结论: 成功克隆并构建了 pET41a Em18 原核表达质粒,初步诱导表达出 rEm18 GST重组蛋白,为新一代包虫病诊断试剂盒的研制奠定基础。 展开更多

关键词 泡球蚴 em18基因 重组蛋白

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