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CD2关联蛋白通过PI3K/Akt信号通路调节神经瘤细胞N2A的神经突触生长
1
作者 张润民 郑峥 刘德山 《福建医药杂志》 2025年第4期77-80,共4页
目的探讨CD2关联蛋白(CD2-associated protein,CD2AP)调节神经瘤细胞N2A(Neuro2a,N2A)的神经突触生长可能的作用机制。方法应用shRNA CD2AP和过表达CD2AP的慢病毒感染N2A细胞,有效下调和上调CD2AP后,通过免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitat... 目的探讨CD2关联蛋白(CD2-associated protein,CD2AP)调节神经瘤细胞N2A(Neuro2a,N2A)的神经突触生长可能的作用机制。方法应用shRNA CD2AP和过表达CD2AP的慢病毒感染N2A细胞,有效下调和上调CD2AP后,通过免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,Co-IP)等方法研究CD2AP、PI3K和TrkA等蛋白的相互作用关系,探讨CD2AP是否通过PI3K/Akt信号通路调节N2A细胞的神经突触的生长。结果在全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)刺激N2A细胞后,CD2AP支架蛋白可以与TrkA受体发生相互作用,继续激活PI3K/Akt信号通路相关蛋白的表达。在ATRA干预N2A细胞中,TrkA与CD2AP之间存在共定位,并形成TrkA-CD2AP复合物,进一步证实CD2AP是在神经突起结构可塑性中Akt通路的一个正调控的因子。结论CD2AP通过PI3K/Akt信号通路调节N2A细胞的神经突触生长。 展开更多
关键词 阿尔茨海默病 cd2关联蛋白 突触可塑性 认知损害
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CD2AP介导的液-液相分离调控小胶质细胞的吞噬和迁移
2
作者 陆炯彤 陆星宇 +3 位作者 李胜男 曾凯星 张佳昊 崔理立 《广东医科大学学报》 2025年第4期379-388,共10页
目的观察CD2AP在小鼠大脑中的表达情况,探究其是否会发生相分离,以及对小胶质细胞吞噬和迁移功能的影响。方法使用免疫荧光染色法研究CD2AP蛋白在WT小鼠和AD模型小鼠大脑中的表达和定位情况;在转染CD2AP的293T细胞中检测液滴的液态动力... 目的观察CD2AP在小鼠大脑中的表达情况,探究其是否会发生相分离,以及对小胶质细胞吞噬和迁移功能的影响。方法使用免疫荧光染色法研究CD2AP蛋白在WT小鼠和AD模型小鼠大脑中的表达和定位情况;在转染CD2AP的293T细胞中检测液滴的液态动力学;使用CD2AP重组蛋白观察液滴的形成;体外培养HMC3细胞并转染,通过划痕实验和细胞吞噬实验,检测对照组和CD2AP组细胞迁移率和吞噬的差异。结果CD2AP在小胶质细胞中呈高表达,呈液滴状分布。胞内过表达CD2AP后出现了具有流动性的液滴。CD2AP体外重组蛋白在不同拥挤剂的作用下不同时间点均能形成液滴。CD2AP过表达组细胞迁移率明显增高(P<0.05),但吞噬能力下降(P<0.05)。结论CD2AP具有液-液相分离的能力,并且影响小胶质细胞的吞噬和迁移能力。 展开更多
关键词 cd2AP 阿尔茨海默病 液-液相分离 细胞的吞噬 细胞迁移 小胶质细胞
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非洲猪瘟病毒CD2v阻断ELISA检测方法的初步建立与应用 被引量：2
3
作者 王彩霞 于浩洋 +7 位作者 吴佳俊 杨振 贾红 仇松寅 刘晓飞 吴绍强 冯春燕 林祥梅 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期1050-1055,共6页
为了建立特异性检测CD2v抗体的非洲猪瘟病毒(ASFV)阻断ELISA方法,以杆状病毒表达的CD2v蛋白作为包被抗原,以抗ASFV CD2v蛋白的特异性阻断单克隆抗体为检测抗体,经过条件优化以及敏感性和特异性检测,建立了特异性检测CD2v抗体的ASFV阻断E... 为了建立特异性检测CD2v抗体的非洲猪瘟病毒(ASFV)阻断ELISA方法,以杆状病毒表达的CD2v蛋白作为包被抗原,以抗ASFV CD2v蛋白的特异性阻断单克隆抗体为检测抗体,经过条件优化以及敏感性和特异性检测,建立了特异性检测CD2v抗体的ASFV阻断ELISA方法。结果显示,建立的阻断ELISA的最佳抗原包被量为20 ng/孔,待检血清样本最佳稀释度为1∶1,酶标抗体最佳稀释度为1∶10000。当血清样品的PI≥41.23%时,判定结果为CD2v抗体阳性,当血清样品的PI<41.23%时,判定结果为CD2v抗体阴性。特异性试验结果显示,该方法仅能与ASFV阳性血清反应,与伪狂犬病病毒、猪圆环病毒2型、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪细小病毒和猪瘟病毒等猪病病毒疫苗毒阳性血清无交叉反应;敏感性试验结果显示,该方法最低能检测出128倍稀释的阳性血清;批内和批间重复性试验的变异系数均小于10%;对64份猪血清样品盘样品进行检测,结果显示符合率为96.88%。上述结果表明,本研究中建立的基于CD2v蛋白的ASFV阻断ELISA方法,联合p30等ASFV抗原血清学诊断方法可以用于CD2v缺失毒株的鉴别检测,为我国出现的ASFV CD2v缺失毒株的流行病学调查及疫情监测提供有效的检测技术。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 cd2v蛋白 阻断ELISA 敏感性 特异性
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非洲猪瘟病毒CD2v蛋白胞内域与胞外域的原核表达及其抗原性分析 被引量：1
4
作者 李艳蕊 任静 +6 位作者 崔锦蔷 袁晨 王云霄 马亚娟 刘志昌 李永社 宋勤叶 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期1660-1670,共11页
【目的】应用大肠杆菌表达系统表达非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)CD2v蛋白胞外域(N-端,CD2v-N)与胞内域(C-端,CD2v-C)并分析两者的抗原性,为ASFV检测方法的研发提供试验依据和指导。【方法】构建CD2v-N和CD2v-C的重组... 【目的】应用大肠杆菌表达系统表达非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)CD2v蛋白胞外域(N-端,CD2v-N)与胞内域(C-端,CD2v-C)并分析两者的抗原性,为ASFV检测方法的研发提供试验依据和指导。【方法】构建CD2v-N和CD2v-C的重组原核表达质粒,在体外表达并纯化CD2v-N和CD2v-C蛋白,通过Western blotting对表达蛋白进行鉴定;用表达的CD2v-N和CD2v-C蛋白分别肌内接种免疫新西兰大白兔,共免疫3次,每次间隔2周;每次免疫后14 d,应用ELISA方法测定CD2v-N或CD2v-C的特异性抗体水平;用纯化后的CD2V-N和CD2v-C蛋白作为包被抗原,通过ELISA方法检测95份ASFV感染猪的血清CD2v-N或CD2v-C特异性抗体,比较CD2v-N和CD2v-C在猪体内诱导的免疫反应水平。【结果】重组蛋白CD2v-N和CD2v-C分别以包涵体和可溶性形式表达,分子质量分别为22.9和34.0 ku,均能与猪抗ASFV血清特异性结合;用CD2v-N蛋白首免家兔后14 d,血清中未检测到特异性抗体,而在CD2v-C首免的家兔血清中检测到了高滴度的特异性抗体;三免后14 d,CD2v-N和CD2v-C蛋白免疫家兔的血清特异性抗体效价分别为1∶125000和1∶107;ELISA检测结果显示,ASFV感染猪的血清中CD2v-C特异性抗体水平显著高于CD2v-N(P<0.05)。【结论】本研究表达了ASFV CD2v蛋白胞内域和胞外域,前者的抗原性比后者高,CD2v胞内域作为ASFV免疫学检测技术研究与开发的靶标更具优势。该研究结果对ASFV检测方法的研究与开发具有重要指导意义。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒(ASFV) cd2v蛋白 胞外域 胞内域 蛋白表达 抗原性
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非洲猪瘟病毒CD2v蛋白单克隆抗体的制备与鉴定 被引量：4
5
作者 陈艳 祝贺 +5 位作者 童明龙 陆冠亚 茹小桐 姜焱 周斌 龙云凤 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2024年第3期86-93,共8页
本研究以原核系统表达的非洲猪瘟病毒CD2v膜内区重组蛋白为免疫原接种BALB/c小鼠,经过细胞融合、间接ELISA筛选和多次亚克隆获得了8株能够稳定分泌CD2v蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞系,分别命名为RH1、RH3、RH4、RH5、RH6、RH8、RH9和RH10... 本研究以原核系统表达的非洲猪瘟病毒CD2v膜内区重组蛋白为免疫原接种BALB/c小鼠,经过细胞融合、间接ELISA筛选和多次亚克隆获得了8株能够稳定分泌CD2v蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞系,分别命名为RH1、RH3、RH4、RH5、RH6、RH8、RH9和RH10。8株单克隆抗体的轻链类型均为Kappa型,其中RH1、RH5、RH9这3株单克隆抗体的重链亚型为IgG2b,其余5株单克隆抗体的重链亚型为IgG1。Western blot和免疫荧光试验证明获得的单克隆抗体具有良好的反应性,能特异地识别昆虫杆状病毒表达系统重组表达的CD2v蛋白,可为非洲猪瘟病毒结构蛋白的功能解析以及血清学诊断方法的开发提供重要的生物学材料。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 cd2v蛋白 单克隆抗体
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非洲猪瘟病毒CD2v蛋白单链抗体的制备及鉴定
6
作者 杜晨暄 邹亚文 +8 位作者 张颜 王智勇 李丹彤 喻蓓蕾 蒋一凡 王瑀琦 何庆 杨毅 王乃东 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期1465-1472,共8页
为了获得特异性针对非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)CD2v蛋白单链抗体(scFv),本研究以CD2v阳性单克隆抗体杂交瘤细胞为模板,通过PCR扩增得到抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因,利用Overlap-PCR在VH和VL基因间引入短... 为了获得特异性针对非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)CD2v蛋白单链抗体(scFv),本研究以CD2v阳性单克隆抗体杂交瘤细胞为模板,通过PCR扩增得到抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因,利用Overlap-PCR在VH和VL基因间引入短肽(Gly4Ser)2连接形成scFv。将其插入原核表达载体p ET28a(+)中,并转化至大肠杆菌BL21(DE3),经1 mmol/L IPTG于25℃条件下诱导表达,通过ELISA对复性scFv蛋白进行反应活性评价。结果显示,通过CD2v蛋白的阻断ELISA筛选出分泌阻断效果良好的单抗杂交瘤细胞株4B8,并成功扩增获得单克隆抗体4B8的重链可变区(VH,399 bp)、轻链可变区(VL,369 bp)及由GS Linker连接而成的4B8-scFv基因(744 bp);SDS-PAGE结果显示,4B8-scFv在大肠杆菌BL21(DE3)中以包涵体形式表达,通过尿素变性及透析复性,得到纯度较高的4B8-scFv(相对分子质量约为34 ku);间接ELISA结果表明,4B8-scFv与CD2v蛋白具有良好的反应活性。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 单克隆抗体 单链抗体 cd2v蛋白
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CD2AP在胰腺癌中的预后价值及对细胞增殖、侵袭的影响 被引量：1
7
作者 董毅 马丹丹 +2 位作者 李中虎 付航玮 金炜东 《中国现代医学杂志》 CAS 2024年第24期21-28,共8页
目的探讨CD2相关蛋白(CD2AP)在胰腺癌中的预后价值及对细胞增殖、侵袭的影响。方法通过肿瘤基因组图谱(TCGA)、组织-基因型表达数据库及基因表达数据库中的GSE62452、GSE183795数据集分析CD2AP在胰腺癌中的表达及预后意义;基于TCGA中胰... 目的探讨CD2相关蛋白(CD2AP)在胰腺癌中的预后价值及对细胞增殖、侵袭的影响。方法通过肿瘤基因组图谱(TCGA)、组织-基因型表达数据库及基因表达数据库中的GSE62452、GSE183795数据集分析CD2AP在胰腺癌中的表达及预后意义;基于TCGA中胰腺癌表达谱数据结合基因富集分析算法分析CD2AP与代谢通路的相关性,使用TIMER 2.0软件分析CD2AP与胰腺癌突变基因、免疫细胞浸润丰度的关系。采用EdU免疫荧光染色、Transwell实验及划痕实验研究CD2AP对胰腺癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。结果TCGA、GSE62452、GSE183795数据集肿瘤组织中CD2AP表达量高于癌旁组织(P<0.05)。CD2AP高表达组预后均较CD2AP低表达组差(P<0.05)。在CD2AP高表达组中,显著上调的有皮质激素合成、卟啉代谢及亮氨酸和异亮氨酸合成信号通路,而钙离子、神经活性配体-受体相互作用信号通路则显著下调。突变型TP53、KRAS、CDKN2A基因的CD2AP表达量均高于野生型(P<0.05)。突变型与野生型SMAD4基因的CD2AP表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。Spearman相关性分析结果显示,CD2AP的表达与CD8+T细胞、树突状细胞、B细胞和中性粒细胞浸润丰度呈正相关(r_(s)=0.363、0.280、0.363和0.237,均P<0.05),而与CD4+T细胞、巨噬细胞浸润丰度无相关性(r_(s)=-0.117和0.101,均P>0.05)。CD2AP-OE组CD2AP相对表达量高于Control组(P<0.05),CD2AP-siRNA组CD2AP相对表达量低于NC-siRNA组(P<0.05)。CD2AP-OE组细胞增殖率较Control组高(P<0.05),CD2AP-siRNA组细胞增值率较NC-siRNA组低(P<0.05)。CD2AP-OE组细胞侵袭数较Control组多(P<0.05),CD2AP-siRNA组细胞侵袭数较NC-siRNA组少(P<0.05)。CD2AP-OE组细胞迁移率较Control组高(P<0.05),CD2AP-siRNA组较NC-siRNA组低(P<0.05)。结论CD2AP表达水平可作为评估胰腺癌预后的肿瘤标志物,是胰腺癌治疗的潜在靶点。 展开更多
关键词 胰腺癌 cd2AP 功能 临床意义 预后
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升阳益胃汤合补阳还五汤对特发性膜性肾病大鼠肾脏的保护作用及对Nephrin、CD2AP表达的影响 被引量：1
8
作者 安恒通 张学琴 +4 位作者 吴媛 马赟 王帅杰 王开爽 陈志强 《现代中西医结合杂志》 CAS 2024年第4期469-474,484,共7页
目的观察升阳益胃汤合补阳还五汤对特发性膜性肾病大鼠肾脏的保护作用及对肾组织中肾病蛋白(Nephrin)、CD2相关蛋白(CD2AP)表达的影响。方法取40只雄性SD大鼠,随机选择10只大鼠作为正常组,余30只大鼠尾静脉一次性注射羊抗大鼠F×1A... 目的观察升阳益胃汤合补阳还五汤对特发性膜性肾病大鼠肾脏的保护作用及对肾组织中肾病蛋白(Nephrin)、CD2相关蛋白(CD2AP)表达的影响。方法取40只雄性SD大鼠,随机选择10只大鼠作为正常组,余30只大鼠尾静脉一次性注射羊抗大鼠F×1A血清0.4 mL/100 g制备特发性膜性肾病模型。将造模成功后大鼠随机分为模型组、升阳合补阳组、贝那普利组,每组10只。升阳合补阳组给予升阳益胃汤合补阳还五汤全方颗粒剂溶液9.2 g/(kg·d)灌胃,贝那普利组给予盐酸贝那普利溶液0.00088 g/(kg·d)灌胃,正常组和模型组给予等量蒸馏水灌胃,均1次/d,连续灌胃6周。于灌胃6周末收集各组大鼠24 h尿液,用以检测24 h尿蛋白水平;腹主动脉取血,检测血白蛋白(ALB)、总胆固醇(TC)、肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)水平;取肾组织,HE染色和Masson染色观察肾脏病理形态,免疫组化法和Western blot法检测肾脏组织中Nephrin、CD2AP表达情况。结果与正常组比较,模型组大鼠24 h尿蛋白及血清TC水平均明显升高(P均<0.05),血清ALB水平明显降低(P<0.05);与模型组比较,升阳合补阳组、贝那普利组大鼠24 h尿蛋白及血清TC水平均明显降低(P均<0.05),血清ALB水平均明显升高(P均<0.05);各组间血清Cr、BUN水平比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。HE染色和Masson染色显示,模型组大鼠肾小球体积增大,肾小球基底膜明显增厚,大量嗜复红蛋白沉积;与模型组相比,升阳合补阳组和贝那普利组大鼠肾小球体积明显减小,肾小球内嗜复红蛋白沉积较模型组明显减少。模型组大鼠肾脏组织中Nephrin、CD2AP阳性表达平均光密度值和蛋白相对表达量均明显低于正常组(P均<0.05),升阳合补阳组和贝那普利组大鼠肾脏组织中Nephrin、CD2AP阳性表达平均光密度值和蛋白相对表达量均明显高于模型组(P均<0.05)。结论升阳益胃汤合补阳还五汤具有保护特发性膜性肾病大鼠肾脏的作用,作用机制可能与上调Nephrin、CD2AP蛋白表达有关。 展开更多
关键词 升阳益胃汤 补阳还五汤 特发性膜性肾病 足细胞 NEPHRIN cd2AP
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高碳酸因素对大鼠活化T淋巴细胞CD28/B7和CD2/CD48(LFA-3)信号转导通路的影响 被引量：1
9
作者 张丽娟 车玉香 +1 位作者 高伟 崔晓光 《哈尔滨医科大学学报》 CAS 北大核心 2014年第6期460-463,共4页
目的：探讨高碳酸因素对大鼠活化T淋巴细胞CD28／B7和CD2／CD48（LFA－3）信号转导通路的影响。方法采集体重200～250 g的健康Wistar大鼠外周静脉血样，分离T淋巴细胞，培养于含有植物血凝素（ PHA）的无菌16孔培养板中。采用随机数字... 目的：探讨高碳酸因素对大鼠活化T淋巴细胞CD28／B7和CD2／CD48（LFA－3）信号转导通路的影响。方法采集体重200～250 g的健康Wistar大鼠外周静脉血样，分离T淋巴细胞，培养于含有植物血凝素（ PHA）的无菌16孔培养板中。采用随机数字表法，将其分为3组：对照组常规培养；高碳酸组和缓冲液组于O2－N2－CO2混合气体培养箱中培养，维持培养液PaCO280～100 mmHg；缓冲液组用NaH－CO3缓冲液调节，维持培养液pH值7．2～7．4。分别于给予植物血凝素前和给予植物血凝素细胞培养1、2、4 h（ T0～3）时，随机取4孔，收集细胞和培养液，采用流式细胞仪测定T淋巴细胞坏死率、凋亡率、CD28和CD2阳性率；采用ELISA法测定培养液IL－2、IFN－γ、IL－4和IL－10的浓度。结果3组T细胞T0～3时坏死率和凋亡率比较差异无统计学意义（P＞0．05）。与对照组比较，高碳酸组和缓冲液组T1～3时培养液IL－2和FN－γ的浓度降低，IL－4和IL－10的浓度升高，T2，3时T淋巴细胞CD28和CD2阳性率降低（P＜0．05或P＜0．01）；与高碳酸组比较，缓冲液组T1～3时培养液IL－2和IFN－γ的浓度升高，IL－4和IL－10的浓度降低（ P＜0．05或P＜0．01），各时点T淋巴细胞CD28和CD2阳性率差异无统计学意义（ P＞0．05）。结论高碳酸因素可能通过抑制CD28／B7和CD2／CD48（LFA－3）信号转导通路，减少T淋巴细胞的活化，这是CO2直接作用和其酸性环境共同完成的。 展开更多
关键词 高碳酸血 T淋巴细胞 抗原 cd28 抗原 cd2
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绿脓杆菌菌毛制剂对人PBMC表达CD2、CD25、CD69抗原的促进作用 被引量：13
10
作者 廖伟娇 朱彤 +1 位作者 郑曲波 贡玉川 《广州医学院学报》 2003年第1期46-48,共3页
目的 :探讨含Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ型菌毛的绿脓杆菌制剂 ,在体外对正常人外周血单个核细胞 (PBMC)的活化作用。方法 :以绿脓杆菌菌毛制剂 ,作用于体外培养的人PBMC ,采用生物素 -链霉亲和素 (BSA)免疫细胞化学法 ,检测人PBMC表面CD2、CD2 5、CD6 ... 目的 :探讨含Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ型菌毛的绿脓杆菌制剂 ,在体外对正常人外周血单个核细胞 (PBMC)的活化作用。方法 :以绿脓杆菌菌毛制剂 ,作用于体外培养的人PBMC ,采用生物素 -链霉亲和素 (BSA)免疫细胞化学法 ,检测人PBMC表面CD2、CD2 5、CD6 9的表达。结果 :该制剂在实验最适条件下 ,可使PBMC上CD2表达率增加15 2 % ,CD6 9表达率增加 2 9.1% ,CD2 5的表达率增加 18.7% ,这与对照组比较差异非常显著 (P <0 .0 1)。结论 :绿脓杆菌菌毛制剂在体外能有效地促进单个核细胞的活化 ,提示该制剂可增强机体的细胞免疫功能。 展开更多
关键词 绿脓杆菌菌毛制剂 cd2 cd25 CD69
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基于B7-1/2/CD28/CTLA-4通路探讨扶正祛毒汤干预急性髓系白血病完全缓解患者CD34~+细胞诱导成树突细胞激发T细胞的影响
11
作者 彭名行 黄礼明 +4 位作者 朱国庆 张常芬 尹尚瑾 左乐 陈孟豪 《时珍国医国药》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期669-673,共5页
目的探讨扶正祛毒汤治疗急性髓系白血病完全缓解的可能作用机制。方法12只新西兰大白兔随机分为正常组以及扶正祛毒汤低、中、高剂量组,每组3只。扶正祛毒汤低、中、高剂量组兔分别给予扶正祛毒汤浓缩煎剂5、10、20g/(kg·d)灌胃3d... 目的探讨扶正祛毒汤治疗急性髓系白血病完全缓解的可能作用机制。方法12只新西兰大白兔随机分为正常组以及扶正祛毒汤低、中、高剂量组,每组3只。扶正祛毒汤低、中、高剂量组兔分别给予扶正祛毒汤浓缩煎剂5、10、20g/(kg·d)灌胃3d,正常组兔给予等体积蒸馏水灌胃,末次灌胃后心脏取血获得正常血清和扶正祛毒汤低、中、高剂量血清。将急性髓系白血病完全缓解患者骨髓稀释后分离提纯CD34~+细胞,将扩增后的CD34^(+)细胞分为空白组、细胞因子组、正常血清组和扶正祛毒汤低、中、高剂量血清组。除空白组外,其余各组均添加细胞因子诱导9d成为树突细胞。流式细胞术(FCM)检测各组树突细胞表面抗原分子CD83、CD1a、HLA-DR的表达,以及共刺激分子B7-1、B7-2的表达。诱导成熟后的树突细胞分别激发自体和异体T细胞,免疫印迹试验(WB)和RT-qPCR法检测T细胞中特异性表面糖蛋白CD28(CD28)和细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA-4)蛋白和mRNA的表达。MTT比色法检测激发后的T细胞在不同效靶比时对人髓系白血病细胞株K562的杀伤作用。结果与空白组相比较,细胞因子组、正常血清组和扶正祛毒汤低、中、高剂量血清组树突细胞表面抗原分子CD83、CD1a、HLA-DR的表达明显升高(P<0.05),共刺激分子B7-1、B7-2的表达明显升高(P<0.05);与细胞因子组和正常血清组相比较,扶正祛毒汤低、中、高剂量血清组树突细胞表面抗原分子CD83、CD1a、HLA-DR的表达明显升高(P<0.05),共刺激分子B7-1、B7-2的表达明显升高(P<0.05)。与空白组、细胞因子组和正常血清组相比较,扶正祛毒汤低、中、高剂量血清组CD28蛋白及mRNA表达均明显增加(P<0.05),CTLA-4蛋白及mRNA表达均明显降低(P<0.05),T细胞对K562细胞的杀伤率明显增加(P<0.05),且杀伤作用随效靶比的增加而增强,但正常人T细胞与患者T细胞对K562细胞的杀伤作用无明显差异(P>0.05)。结论扶正祛毒汤治疗急性髓系白血病完全缓解的机制可能与该方能够有效促进急性髓系白血病完全缓解患者骨髓CD34^(+)细胞源树突细胞的成熟,从而抑制共刺激分子B7-1、B7-2与CTLA-4结合,且促进B7-1、B7-2与CD28结合,调控B7-1/2/CD28/CTLA-4信号通路有关。 展开更多
关键词 急性髓系白血病完全缓解 扶正祛毒汤 B7-1/2/cd28/CTLA-4信号通路 树突细胞 T细胞 K562细胞
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霉酚酸酯对大鼠糖尿病肾病及CD2相关蛋白表达的影响
12
作者 吴晓蓉 邢昌嬴 +3 位作者 赵秀芬 钱军 刘佳 俞香宝 《江苏医药》 CAS CSCD 北大核心 2005年第10期773-775,i0003,共4页
目的研究霉酚酸酯(MMF)对大鼠糖尿病肾病(DN)及CD2相关蛋白(CD2AP)表达的影响。方法纯种雄性SD大鼠24只,分正常对照(A)组、DN模型(B)组和MMF干预DN(C)组。饲养8周后行有关血尿生化指标和光镜组织学、透射电镜、逆转录聚合酶链反应(RT-PC... 目的研究霉酚酸酯(MMF)对大鼠糖尿病肾病(DN)及CD2相关蛋白(CD2AP)表达的影响。方法纯种雄性SD大鼠24只,分正常对照(A)组、DN模型(B)组和MMF干预DN(C)组。饲养8周后行有关血尿生化指标和光镜组织学、透射电镜、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)CD2APmRNA表达检测。结果MMF明显减少DN大鼠24 h尿蛋白的排泄,预防血肌酐的升高。组织学显示C组大鼠肾小球面积明显减少,系膜增宽及细胞外基质积聚明显改善。电镜下B组大鼠足细胞足突增宽,部分融合,肾小球毛细血管袢基膜增厚,系膜区增宽,系膜基质增多,C组大鼠以上病变都明显减轻。CD2AP mRNA表达在B组显著高于A组和C组。结论MMF具有治疗SD大鼠DN的作用,并且在转录水平逆转肾皮质CD2AP表达上调。 展开更多
关键词 霉酚酸酯 糖尿病肾病 cd2相关蛋白 cd2AP SD大鼠 蛋白表达 逆转录聚合酶链反应 肾病(DN) mRNA表达 细胞外基质积聚
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非洲猪瘟CD2v截短蛋白的原核表达及间接ELISA方法的建立 被引量：3
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作者 胡巧云 黄小久 +7 位作者 唐小明 何世成 林源 彭志 石建 王卫国 刘道新 王昌建 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期1103-1108,共6页
为建立非洲猪瘟(ASF)抗体检测方法,本研究根据ASFV HLJ18株基因组序列合成CD2v蛋白的胞外区段基因序列,连接至原核表达载体pET28a,构建表达质粒pET28a-CD2v。经测序鉴定正确后转化至大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)pLysS,构建表达菌株p ET28a... 为建立非洲猪瘟(ASF)抗体检测方法,本研究根据ASFV HLJ18株基因组序列合成CD2v蛋白的胞外区段基因序列,连接至原核表达载体pET28a,构建表达质粒pET28a-CD2v。经测序鉴定正确后转化至大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)pLysS,构建表达菌株p ET28a-CD2v/BL21(DE3)PLysS。经IPTG诱导和镍柱纯化后,获得纯化的CD2v蛋白并经SDS-PAGE和Westernblot鉴定。以纯化的CD2v蛋白作为包被抗原,通过优化反应条件建立检测CD2v抗体的间接ELISA方法,并评价该方法的特异性、敏感性和重复性及在临床血清中的应用。结果显示,经测序构建的表达质粒序列正确,CD2v蛋白表达经SDS-PAGE可见略小于25k Da的条带,Westernblot显示能与ASFV感染血清发生特异性反应。建立了ASFCD2v蛋白抗体检测方法CD2v-ELISA,抗原包被质量浓度为50μg/L,血清稀释倍数为1∶100,羊抗猪HRP-IgG稀释倍数为1∶100000,阴阳性临界值为0.26;与PRRSV、CSFV、PRV(g I)、PRV(gb)、FMDV血清不发生反应,具有良好的特异性;ASF阳性血清稀释至128000倍后仍检测为阳性,具有较高的敏感性;重复性结果显示,批间和批内变异系数均小于10%。使用CD2v-ELISA检测154份临床血清,阳性结果74份,阳性率为48.05%。与2个国产、2个进口商品化ASFV抗体试剂盒的检测结果比较,CD2v-ELISA方法跟其他方法的符合率较高,分别为95.45%,94.16%,88.31%,93.51%。因此,本研究成功建立了基于CD2v胞外区段抗原的ELISA方法,可用于ASF临床抗体的检测。 展开更多
关键词 非洲猪瘟 cd2v截短蛋白 间接cd2v-ELISA
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碳酸盐矿化菌的筛选与其吸附和矿化Cd2+的特性 被引量：14
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作者 赵越 姚俊 +4 位作者 王天齐 原志敏 姜新舒 王飞 代云容 《中国环境科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第12期3800-3806,共7页
从贵州省毕节市妈姑镇矿区重金属污染的土壤中筛选出5株碳酸盐矿化菌,探究其吸附和矿化Cd^(2+)的特性.从代谢热角度阐明Cd^(2+)与基质(尿素)胁迫下菌活性会降低.实验结果表明,2#菌株对Cd^(2+)耐受能力可达250mg/L.菌株吸附和矿化效率随C... 从贵州省毕节市妈姑镇矿区重金属污染的土壤中筛选出5株碳酸盐矿化菌,探究其吸附和矿化Cd^(2+)的特性.从代谢热角度阐明Cd^(2+)与基质(尿素)胁迫下菌活性会降低.实验结果表明,2#菌株对Cd^(2+)耐受能力可达250mg/L.菌株吸附和矿化效率随Cd^(2+)浓度增大而降低.Cd^(2+)初始浓度为10mg/L时,菌龄为4h的菌株对Cd^(2+)矿化效果最佳(45.14%),且矿化效果稳定.该研究表明碳酸盐矿化菌通过诱导沉淀矿化去除Cd^(2+)的效果优于菌体吸附,为碳酸盐矿化菌修复重金属污染提供理论参考和实践指导. 展开更多
关键词 碳酸盐矿化菌 筛选 cd2+ 矿化 吸附
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祛风通络方对阿霉素肾病大鼠足细胞Desmin及CD2AP蛋白的影响 被引量：15
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作者 王竹 刘俊田 +2 位作者 孙万森 李睿萍 王晔 《中国中西医结合杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期203-208,共6页
目的探讨祛风通络方对阿霉素肾病大鼠足细胞结蛋白(Desmin)和CD2相关蛋白(CD2-associated protein,CD2AP)的作用。方法一次性尾静脉注射阿霉素制备肾病模型。3周后造模成功,随机分为空白对照组(A组,12只),模型对照组(B组,8只),祛风通络... 目的探讨祛风通络方对阿霉素肾病大鼠足细胞结蛋白(Desmin)和CD2相关蛋白(CD2-associated protein,CD2AP)的作用。方法一次性尾静脉注射阿霉素制备肾病模型。3周后造模成功,随机分为空白对照组(A组,12只),模型对照组(B组,8只),祛风通络方小、中、大剂量组(C组、D、E每组8只)和阳性对照组(F组,8中)。从第4周起,A组和B组给生理盐水,C^E组分别给祛风通络方1.0、2.1、4.2 g/mL,F组给泼尼松25 mg/kg。各组均灌胃给药,10 mL/kg,1次/天,连续28天。期间进行24 h尿蛋白定量、血清生化指标检测,实验结束时电镜观察超微结构、Real-time PCR法及Western blot法检测足细胞骨架蛋白Desmin mRNA、裂孔隔膜蛋白CD2AP mRNA及其蛋白表达。结果 (1)与B组比较,C、D、E、F组24 h尿蛋白定量明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)与B组比较,C、D、E组ALB均有所升高,差异有统计学意义(P<0.05);TC含量明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05);F组TG反而有明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)电镜观察发现,D、E、F组与B组比较,足细胞形态均有不同程度改善,特别是足突结构、足突数目改善明显,其D、E组改善更明显。(4)阿霉素肾病大鼠中Desmin mRNA、CD2AP mRNA及蛋白表达均升高,差异有统计学意义(P<0.05)。干预后,与B组比较,C、D、E、F组Desmin mRNA和CD2AP mRNA表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。(5)与A组比较,B组Desmin、CD2AP蛋白表达显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与B组比较,C、D、E、F组CD2AP蛋白表达明显降低,D、E、F组Desmin蛋白表达明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05);各剂量组间比较,C、D、E组Desmin及CD2AP蛋白表达逐渐降低,差异有统计学意义(P<0.05);与F组比较,C、D组CD2AP蛋白表达明显高,E组CD2AP蛋白表达明显低,差异有统计学意义(P<0.05);C、D、E组Desmin蛋白表达较高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论祛风通络方对阿霉素肾病大鼠的治疗作用伴随着改变足细胞骨架蛋白Desmin及裂孔隔膜蛋白CD2AP基因表达的改变而实现。 展开更多
关键词 祛风通络方 阿霉素肾病 结蛋白 cd2相关蛋白
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Cd2＋胁迫对竹叶眼子菜的毒理学效应分析 被引量：11
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作者 杨海燕 施国新 +3 位作者 徐勤松 计汪栋 王红霞 李阳 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期366-370,共5页
以不同浓度Cd2+处理5d的竹叶眼子菜为实验材料,分析了叶片的光合色素、抗氧化系统、丙二醛(MDA)、可溶性糖、可溶性蛋白等生理生化指标的应答反应,并用透射电镜观察了叶细胞超微结构的变化.随着Cd2+处理浓度的增加,叶绿素含量和超氧化... 以不同浓度Cd2+处理5d的竹叶眼子菜为实验材料,分析了叶片的光合色素、抗氧化系统、丙二醛(MDA)、可溶性糖、可溶性蛋白等生理生化指标的应答反应,并用透射电镜观察了叶细胞超微结构的变化.随着Cd2+处理浓度的增加,叶绿素含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性下降,而MDA和可溶性糖含量上升;过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)活性和抗坏血酸(ASA)、还原型谷胱甘肽(GSH)含量分别在2mgL-1和4mgL-1时达到峰值;可溶性蛋白含量下降,相对分子质量(Mr)为52.1×103、42.9×103、27.4×103和14.1×103的多肽合成量逐渐减少,但Mr为18.1×103的多肽的合成量增加;叶绿体膨大、解体;线粒体嵴突肿胀、空泡化;核仁分散、核膜断裂、核质散出.结果表明:Cd2+对竹叶眼子菜的光合结构、细胞保护系统以及细胞结构的完整性等都产生明显破坏作用,最终将导致植物死亡.其中SOD、叶绿素和蛋白生物合成各指标的反应较灵敏,可作为水体Cd2+污染的监测指标.Cd2+对竹叶眼子菜的半效应浓度为2.97mgL-1. 展开更多
关键词 竹叶眼子菜 cd2+胁迫 抗氧化系统 超微结构
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坎地沙坦对糖尿病肾病大鼠足细胞Nephrin、Podocin和CD2AP表达的影响 被引量：24
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作者 李秋月 李六生 +2 位作者 李桂霞 周静 吕金雷 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期310-314,共5页
目的探讨糖尿病肾病(DN)大鼠足细胞相关分子Nephrin、Podocin及CD2AP表达的变化,以及坎地沙坦对其的干预作用,为DN的防治提供理论依据。方法健康雄性SD大鼠36只,随机分为3组:A组为正常对照组,B组为DN组,C组为DN+坎地沙坦组。用药后第4... 目的探讨糖尿病肾病(DN)大鼠足细胞相关分子Nephrin、Podocin及CD2AP表达的变化,以及坎地沙坦对其的干预作用,为DN的防治提供理论依据。方法健康雄性SD大鼠36只,随机分为3组:A组为正常对照组,B组为DN组,C组为DN+坎地沙坦组。用药后第4周和第7周检测各组大鼠的血糖(GLU)、体重、24h尿蛋白(proteinuria)和内生肌酐清除率(Ccr),于第7周予RT-PCR法检测大鼠肾组织Nephrin、Podocin及CD2AP mRNA表达。结果 7周后,与A组比较,B组出现尿蛋白排泄增多,Ccr下降(P<0.05),肾组织Nephrin、Podocin及CD2AP mRNA水平均下调(均P<0.05);与B组比较,C组尿蛋白排泄量降低(P<0.05),Ccr升高(P<0.05),Nephrin、Podocin及CD2AP mR-NA水平均增加(均P<0.05)。采用直线相关分析后发现,尿蛋白与肾组织Nephrin、Podocin和CD2AP mRNA水平呈负相关;Ccr与肾组织Nephrin、Podocin和CD2AP mRNA水平呈正相关。结论 DN时存在足细胞分子Nephrin、Podo-cin及CD2AP表达异常,坎地沙坦对肾脏的保护作用机制可能是通过增加Nephrin、Podocin及CD2AP表达而实现。 展开更多
关键词 坎地沙坦 糖尿病肾病 足细胞 NEPHRIN PODOCIN cd2AP
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阿霉素肾病大鼠肾组织中nephrin和CD2AP的表达及意义 被引量：12
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作者 彭亚琴 莫樱 +2 位作者 蒋小云 张巧玲 陈述枚 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期15-20,25,共7页
【目的】动态观察nephrin、CD2相关蛋白(CD2AP)在阿霉素肾病大鼠肾小球中的表达变化,探讨其在蛋白尿发生发展过程中的作用。【方法】72只大鼠分为2组,模型组36只和对照组36只,模型组大鼠尾静脉一次性注射盐酸阿霉素,对照组大鼠尾静脉一... 【目的】动态观察nephrin、CD2相关蛋白(CD2AP)在阿霉素肾病大鼠肾小球中的表达变化,探讨其在蛋白尿发生发展过程中的作用。【方法】72只大鼠分为2组,模型组36只和对照组36只,模型组大鼠尾静脉一次性注射盐酸阿霉素,对照组大鼠尾静脉一次性注射等容积生理盐水,分别于注射后3、5、7、14、28、42d各杀检6只大鼠。采用实时荧光定量PCR、免疫组织化学检测大鼠肾小球中nephrin、CD2AP的表达和分布变化。【结果】①模型组大鼠7d时nephrinmRNA表达增加,14d时其蛋白表达(9.44±0.49)亦显著增加;CD2AP表达增加时间较晚,28d时其mRNA和蛋白表达(7.88±1.01)才显著增加。②与对照组相比,模型组nephrin、CD2AP出现分布异常,从沿着毛细血管袢线样分布逐渐转变为不连续性颗粒样或斑片状分布。③肾小球nephrinmRNA、CD2APmRNA表达量与24h尿蛋白量均呈正相关关系(r=0.878,P<0.01;r=0.945,P<0.01)。【结论】①nephrin早期出现表达增加及分布异常,可能是导致蛋白尿的原因及判断肾小球足细胞损伤的一个早期重要指标。②CD2AP在后期出现表达增加,可能是足细胞抵抗损伤的一种代偿反应。 展开更多
关键词 NEPHRIN cd2AP 阿霉素 蛋白尿
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CD2相关蛋白在足细胞分化中的作用 被引量：7
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作者 姜华军 常莹 +3 位作者 朱忠华 刘建社 邓安国 张春 《生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期135-142,共8页
本文旨在研究肾脏足细胞的分化特点及CD2相关蛋白(CD2-associated protein,CD2AP)在足细胞分化过程中的作用。用RPMI1640培养基在33oC许可条件下培养永生化小鼠足细胞系(未分化组),转染针对CD2AP的小分子干扰RNA(small interfering RNA,... 本文旨在研究肾脏足细胞的分化特点及CD2相关蛋白(CD2-associated protein,CD2AP)在足细胞分化过程中的作用。用RPMI1640培养基在33oC许可条件下培养永生化小鼠足细胞系(未分化组),转染针对CD2AP的小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)后置于37oC非许可条件下培养(转染组),并将非许可条件下未转染组作为对照组。用MTT法检测足细胞的生长速度;用RT-PCR方法检测CD2AP、WT1、synaptopodin和nephrin mRNA表达;用Westernblot检测CD2AP、WT1和nephrin蛋白表达;用免疫荧光结合激光共聚焦方法检测CD2AP、nephrin、F-actin和tubulin在分化及未分化足细胞中的分布及其共定位情况。结果显示,CD2AP、WT1和nephrin在分化及未分化足细胞中均可稳定表达,而synaptopodin仅表达于已分化足细胞,在未分化足细胞无表达。在足细胞分化过程中,CD2AP和nephrin的表达上调(P<0.05);CD2AP、tubulin和F-actin在细胞内的分布发生改变,CD2AP与nephrin及F-actin在未分化足细胞中存在共定位关系。转染特异性siRNA下调CD2AP表达,细胞生长速度明显减慢,synaptopodin mRNA表达下调(P<0.05),细胞分化迟滞。结果表明,足细胞分化过程中伴随细胞骨架的重新分布和细胞形态的改变;CD2AP可能作为足细胞裂孔隔膜分子与细胞骨架的连接蛋白,在足细胞分化过程中发挥重要作用。 展开更多
关键词 cd2相关蛋白 足细胞 NEPHRIN SYNAPTOPODIN WT1
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化瘀通络中药对糖尿病肾病大鼠肾脏足细胞裂孔膜蛋白podocin、CD2AP的调节作用 被引量：20
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作者 方敬 陈志强 +6 位作者 郭倩 陈春宇 王春宁 谢田 孙汝 刘利飞 张肖 《中国中西医结合杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期835-841,共7页
目的探讨化瘀通络中药对糖尿病肾病大鼠肾脏足细胞裂孔膜蛋白podocin、CD2AP的调节作用。方法 40只大鼠采用高糖高脂饲料联合1%链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)35 mg/kg腹腔注射复制糖尿病大鼠模型,将造模成功的36只大鼠按随机数字表法... 目的探讨化瘀通络中药对糖尿病肾病大鼠肾脏足细胞裂孔膜蛋白podocin、CD2AP的调节作用。方法 40只大鼠采用高糖高脂饲料联合1%链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)35 mg/kg腹腔注射复制糖尿病大鼠模型,将造模成功的36只大鼠按随机数字表法分为模型组、化瘀通络组和厄贝沙坦组,每组12只。另取10只正常大鼠作为正常组。化瘀通络组和厄贝沙坦组分别给予化瘀通络中药和厄贝沙坦灌胃,同时正常组和模型组等量蒸馏水灌胃。采用ELISA法检测不同时间点各组大鼠24 h尿蛋白定量;连续干预16周后分别检测各组大鼠体重(body weight,BW)、肾重(kidney weight,KW)、肾脏指数(kidney index,KI)、空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、血肌酐(serum creatinine,SCr)、血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)和尿酸(uric acid,UA);光镜和电镜下观察肾组织病理形态学变化;采用Western blot和Real-time PCR法检测肾脏足细胞裂孔膜蛋白podocin、CD2AP蛋白和mRNA表达。结果 (1)与正常组比较,模型组大鼠第4、8、12、16周24 h尿蛋白定量明显升高(P<0.01),造模后大鼠BW减轻,KI、FBG、SCr、BUN和UA水平均升高(P<0.01);与模型组比较,化瘀通络组和厄贝沙坦组第4、8、12、16周24 h尿蛋白定量明显降低,且化瘀通络组24 h尿蛋白定量较厄贝沙坦组减少更明显(P<0.05,P<0.01);造模后化瘀通络组和厄贝沙坦组BUN水平降低(P<0.05,P<0.01)。(2)肾脏病理显示:模型组肾脏结构紊乱,基底膜明显增厚,系膜重度增生,足突广泛融合;化瘀通络组和厄贝沙坦组肾脏病理改变均有不同程度减轻。(3)Western blot和Real-Time PCR显示:与正常组比较,模型组大鼠肾组织podocin、CD2AP蛋白和mRNA表达水平均降低(P<0.01);与模型组比较,化瘀通络组和厄贝沙坦组podocin、CD2AP蛋白和mRNA表达水平均升高(P<0.01);化瘀通络组podocin、CD2AP蛋白和CD2AP mRNA表达均明显高于厄贝沙坦组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论化瘀通络中药可以降低糖尿病肾病大鼠尿蛋白,保护肾功能,改善肾脏病理改变,其机制可能与上调裂孔膜蛋白podocin、CD2AP表达有关。 展开更多
关键词 糖尿病肾病 化瘀通络中药 PODOCIN cd2AP
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