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Cav3.2通道对背根节慢性压迫痛大鼠脊髓CaMKⅡ表达的影响 被引量:3
1
作者 文先杰 刘洪珍 +5 位作者 梁桦 徐世元 张庆国 赖小红 王汉兵 杨承祥 《中国疼痛医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期134-138,共5页
目的:观察Cav3.2通道对背根节慢性压迫痛大鼠脊髓CaMKⅡ表达的影响,探讨Cav3.2-CaMKⅡ通路在神经病理性疼痛中的作用。方法:雄性SD大鼠60只,体重250±20 g,随机分为5组,每组12只(其中行为学实验8只,免疫印迹实验4只)。分别是正常对... 目的:观察Cav3.2通道对背根节慢性压迫痛大鼠脊髓CaMKⅡ表达的影响,探讨Cav3.2-CaMKⅡ通路在神经病理性疼痛中的作用。方法:雄性SD大鼠60只,体重250±20 g,随机分为5组,每组12只(其中行为学实验8只,免疫印迹实验4只)。分别是正常对照组(C组);模型组(CCD组);生理盐水组(NS组);错义寡聚核苷酸组(MS-Cav3.2组);反义寡聚核苷酸组(AS-Cav3.2组)。分别于鞘内置管前(T1),鞘内置管后3 d(T2),鞘内给药后1 d(T3)、4 d(T4),CCD模型制备后5d(T5)、10 d(T6)、15 d(T7)检测大鼠机械缩腿阈值(mechanical withdrawal threshold,MWT)和热缩足潜伏期(thermal withdrawal latency,TWL)。并于CCD模型制备后5 d,各组取4只大鼠处死,取脊髓腰膨大,采用免疫印迹法检测Cav3.2及CaMKⅡ的表达。结果:与C组比较,CCD组大鼠在模型制备后第5 d、10 d、15 d时MWT及TWL均显著降低。鞘内注射NS和Cav3.2错义寡聚核苷酸对CCD大鼠MWT及TWL无影响,鞘内注射Cav3.2反义寡聚核苷酸可增加CCD大鼠MWT和TWL,减轻大鼠机械痛敏和热痛敏。C组大鼠脊髓Cav3.2和CaMKⅡ蛋白均有表达。大鼠在制备CCD模型后5 d Cav3.2及CaMKⅡ蛋白表达均显著增加。鞘内注射NS及Cav3.2错义寡聚核苷酸对Cav3.2及CaMKⅡ蛋白表达无影响,鞘内注射Cav3.2反义寡聚核苷酸则可显著抑制Cav3.2及CaMKⅡ蛋白的表达。结论:抑制脊髓Cav3.2通道的表达可降低慢性背根节压迫痛大鼠脊髓CaMKⅡ的表达。 展开更多
关键词 cav3-2 CaMKⅡ 脊髓 背根节 神经病理性疼痛
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中国汉族人群CAV1/CAV2基因多态性与2型糖尿病的关系 被引量:1
2
作者 邹丽媛 林硕 +2 位作者 林可意 谢莉萍 曾龙驿 《中山大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期197-206,257,共11页
【目的】研究中国汉族人群微囊蛋白-1/-2(caveolin-1/-2)的编码基因CAV1/CAV2单核苷酸多态性(SNP)与2型糖尿病(T2DM)的相关性。【方法】应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)方法对559例汉族人(T2DM组272例、对照组287例... 【目的】研究中国汉族人群微囊蛋白-1/-2(caveolin-1/-2)的编码基因CAV1/CAV2单核苷酸多态性(SNP)与2型糖尿病(T2DM)的相关性。【方法】应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)方法对559例汉族人(T2DM组272例、对照组287例)CAV1/CAV2基因座的14个SNPs位点进行基因分型;同时进行人体测量学及代谢指标的检测,并用稳态模型评估胰岛素抵抗(HOMA-IR)和胰岛β细胞功能(HOMA-β)。【结果】CAV1基因rs926198、CAV2基因rs2270188、rs1052990位点的低频等位基因频率(MAF)在T2DM组和对照组存在统计学差异(P=0.008、0.021、0.045)。Logistic回归分析校正年龄、性别、BMI因素,CAV1 rs926198位点CC/CT基因型个体T2DM患病风险比TT型显著增加(OR=2.240,95%CI=1.415-3.544,P=0.001);CAV1 rs3807986位点GG/GA基因型比AA型患T2DM风险降低(OR=0.640,95%CI=0.449-0.913,P=0.014);CAV2 rs2270188位点GG/GT基因型携带者较之TT基因型T2DM患病风险明显降低(OR=0.616,95%CI=0.432-0.878,P=0.007);CAV2 rs1052990位点GG/GT基因型比TT型患T2DM风险亦降低(OR=0.658,95%CI=0.453-0.956,P=0.028)。多元线性回归显示CAV1 SNP rs926198低频等位基因C与HOMA-IR增高相关(beta=1.010,P<0.001);CAV2 SNP rs2270188低频等位基因G与HOMA-IR降低相关(beta=-0.379,P=0.023);未发现SNP位点与HOMA-β存在统计学相关性(P>0.05)。CAV1 rs3807986和CAV2 rs2270188位点低频等位基因G与血清LDL-C水平降低相关(rs3807996:P=0.033,beta=-0.271;rs2270188:P=0.030,beta=-0.299)。【结论】CAV1/CAV2基因可能是中国汉族人2型糖尿病的易感基因,其SNP rs926198、rs3807986、rs2270188、rs1052990与T2DM患病风险相关,可能通过胰岛素抵抗影响T2DM易感性。 展开更多
关键词 单核苷酸多态性 cav1基因 cav2基因 2型糖尿病
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胃癌细胞中Caveolin-1对表皮生长因子受体2活化的影响 被引量:2
3
作者 郭艳丽 朱铁年 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期1125-1130,共6页
目的:检测Caveolin-1蛋白(Cav-1)对胃癌(gastric cancer,GC)细胞株NCI-N87恶性生物学行为的影响及其可能的作用机制。方法:构建Cav-1过表达稳转染细胞系N87/Cav-1,应用MTT、克隆形成、划痕修复实验检测Cav-1对胃癌细胞株NCI-N87恶性生... 目的:检测Caveolin-1蛋白(Cav-1)对胃癌(gastric cancer,GC)细胞株NCI-N87恶性生物学行为的影响及其可能的作用机制。方法:构建Cav-1过表达稳转染细胞系N87/Cav-1,应用MTT、克隆形成、划痕修复实验检测Cav-1对胃癌细胞株NCI-N87恶性生物学行为的影响,应用Western blotting检测在EGF配体诱导下Cav-1蛋白对Her-2活化及ERK、Akt信号通路的影响。结果:Cav-1过表达可明显抑制胃癌细胞NCI-N87的增殖及迁移能力;在配体EGF刺激下,Cav-1过表达明显抑制了Her-2酪氨酸磷酸化水平以及P-ERK/ERK、P-AKT/AKT的比率(P<0.01)。结论:Cav-1过表达可明显抑制EGF诱导的Her-2酪氨酸磷酸化水平,并可能通过下游MAPK及PI3K/Akt信号通路的作用抑制了胃癌细胞株NCI-N87的增殖及迁移能力。 展开更多
关键词 胃癌 NCI-N87细胞 cavEOLIN-1蛋白 增殖 迁移 HER-2 信号通路
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CAV1和CAV2在头颈部鳞状细胞癌组织中的表达及其对生存、免疫的影响
4
作者 曹欣然 樊建春 +2 位作者 王霞 刘训涛 张斌 《神经药理学报》 2024年第4期9-17,共9页
目的:基于生物信息学方法筛选出头颈部鳞状细胞癌(head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC)的关键生物标记物CAV1和CAV2,并探究其在HNSCC中的表达情况以及临床预后价值。方法:本研究中,我们首先基于GEPIA数据库比较了caveolins及c... 目的:基于生物信息学方法筛选出头颈部鳞状细胞癌(head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC)的关键生物标记物CAV1和CAV2,并探究其在HNSCC中的表达情况以及临床预后价值。方法:本研究中,我们首先基于GEPIA数据库比较了caveolins及cavins在HNSCC的差异表达情况,随后同时在Ualcan平台分析了caveolins及cavins家族中差异基因与临床表型的关系;比较与临床表型相关的差异基因与HNSCC生存的关系;此外还进行了CAV1与CAV2的富集分析及免疫浸润分析。结果:GEPIA数据库分析显示CAV1、CAV2、CAVIN2、CAVIN3等存在显著相关性,其中CAV1、CAV2与临床表型显著相关且能显著影响HNSCC患者生存预后。GSEA富集分析显示CAV1主要上调IL-17 signaling pathway、PI3K-Akt signaling pathway、NOD-like receptor signaling pathway;CAV2主要上调NOD-like receptor signaling pathway、PI3K-Akt signaling pathway。免疫浸润分析表明CAV1及CAV2能显著改变HNSCC肿瘤免疫微环境,与多种免疫细胞浸润存在相关性。结论:CAV1与CAV2在HNSCC中高表达,是与免疫侵袭相关的独立预后因素,可作为确定HNSCC患者的免疫侵袭相关预后的候选预后标志物。 展开更多
关键词 cav1 cav2 头颈部鳞状细胞癌 免疫
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Isoprenylated Flavonoids as Cav3.1 Low Voltage-Gated Ca^(2+)Channel Inhibitors from Salvia digitaloides
5
作者 Jian-Jun Zhao Song-Yu Li +3 位作者 Fan Xia Ya-Li Hu Yin Nian Gang Xu 《Natural Products and Bioprospecting》 CAS 2021年第6期671-678,共8页
Saldigones A-C(1,3,4),three new isoprenylated flavonoids with diverse flavanone,pterocarpan,and isoflavanone architec-tures,were characterized from the roots of Salvia digitaloides,together with a known isoprenylated ... Saldigones A-C(1,3,4),three new isoprenylated flavonoids with diverse flavanone,pterocarpan,and isoflavanone architec-tures,were characterized from the roots of Salvia digitaloides,together with a known isoprenylated flavanone(2).Notably,it’s the first report of isoprenylated flavonoids from Salvia species.The structures of these isolates were elucidated by extensive spectroscopic analysis.All of the compounds were evaluated for their activities on Cav3.1 low voltage-gated Ca^(2+)channel(LVGCC),of which 2 strongly and dose-dependently inhibited Cav3.1 peak current. 展开更多
关键词 Salvia digitaloides Isoprenylated flavonoid cav3.1 low voltage-gated Ca^(2+)channel(LVGCC)
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L型Ca^(2+)通道CaV1.3在培养的小鼠Cajal间质细胞的表达
6
作者 苏兰娣 《中外妇儿健康》 2011年第8X期70-70,共1页
目的:建立稳定的ICC分离培养方法,明确L-Ca^(2+)通道CaV1.3在ICC的表达。方法:取出生1—2天正常的BALB/c小鼠小肠,Ⅱ型胶原酶消化,过筛网、梯度离心后接种至铺有鼠尾胶原的培养瓶中培养。RT-PCR技术检测ICC特异性标志c-kit mRNA的表达情... 目的:建立稳定的ICC分离培养方法,明确L-Ca^(2+)通道CaV1.3在ICC的表达。方法:取出生1—2天正常的BALB/c小鼠小肠,Ⅱ型胶原酶消化,过筛网、梯度离心后接种至铺有鼠尾胶原的培养瓶中培养。RT-PCR技术检测ICC特异性标志c-kit mRNA的表达情况;免疫荧光检冽c-kit蛋白的表达和定位;流式细胞术检测ICC纯度。RT-PCR技术检测CaV1.3 mRNA的表;免疫荧光双染检测c-kit蛋白和CaV1.3蛋白在ICC的定位。结果;培养的ICC贴壁细胞多角形,核大,细胞突起形成网状连接。RT-PCR和免疫荧光技术检测到ICC特异性标志c-kit mRNA和c-kit蛋白的表达。流式细胞术所得ICC纯度为81.97%。结论:运用Ⅱ型胶原酶消化-密度梯度离心法,我们建立了稳定的ICC培养方法,获得了相对较纯的单一细胞,为ICC进一步的基础研究奠定了坚实的基础。L-Ca^(2+)通道CaV1.3在ICC细胞膜大量表达,与ICC起搏功能存在相关性。 展开更多
关键词 CAJAL间质细胞 L-Ca2+通道cav1.3 起搏 发育
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表达犬瘟热病毒H基因的重组犬2型腺病毒的构建与鉴定 被引量:7
7
作者 闫芳 夏咸柱 +3 位作者 扈荣良 谢之景 赵忠鹏 黄耕 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期425-428,共4页
将犬瘟热病毒 ( canine distemper virus,CDV ) H基因表达盒克隆入转移质粒 p VAXΔE3,构建含 CDV H基因表达盒的转移质粒 p VAXΔ E3L PH,用 Nru 和 Sal 分别酶切转移质粒 p VAXΔ E3L PH和犬 2型腺病毒全基因组质粒p Poly2 - CAV- 2 ,... 将犬瘟热病毒 ( canine distemper virus,CDV ) H基因表达盒克隆入转移质粒 p VAXΔE3,构建含 CDV H基因表达盒的转移质粒 p VAXΔ E3L PH,用 Nru 和 Sal 分别酶切转移质粒 p VAXΔ E3L PH和犬 2型腺病毒全基因组质粒p Poly2 - CAV- 2 ,将 CDV H基因表达盒定向克隆入 p Poly2 - CAV- 2质粒中 ,构建 E3区部分缺失的包含 CDV H基因表达盒的犬 2型腺病毒重组质粒 p CAV- 2 / CDVL PH。 Asc 和 Cla 对 p CAV- 2 / CDVL PH进行双酶切 ,释放 CAV- 2 /CDVL PH重组基因组 ,利用脂质体将 CAV- 2 / CDVL PH重组基因组与去除 Sal 和 Nru 片段的 CAV- 2基因组两端片段共转染 DK细胞 ,盲传和重复转染 3次 ,4 d后出现典型 CAV- 2病变 ,获得重组病毒 CAV- 2 / CDVL PH。用 CDV H基因特异性引物经 RT- PCR扩增重组病毒 DK细胞培养物 ,能够扩增出相应的核酸片段 ,表明 CAV- 2 / CDVL PH在DK细胞繁殖的过程中能够转录 CDVL P H的 m RNA,重组病毒免疫犬 ,可以诱导犬产生特异的抗 CAV- 2 HI抗体和抗 展开更多
关键词 犬瘟热病毒 H基因 重组 2型腺病毒 表达
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表达犬瘟热病毒H基因的重组犬2型腺病毒免疫原性测定 被引量:4
8
作者 闫芳 夏咸柱 +4 位作者 扈荣良 谢之景 赵忠鹏 高玉伟 黄耕 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期258-262,共5页
为测定表达犬瘟热病毒(CDV)H基因的重组犬2型腺病毒(CAV-2/CDVLPH)免疫原性,25只45-50日龄犬(抗CDV中和抗体小于1∶2,CAV-2 HI抗体效价小于1∶2)随机分为5组进行免疫犬试验,第1组为CAV-2/CDVLPH免疫组,第2组为pVAXLPH免疫组,第3组为pVAX... 为测定表达犬瘟热病毒(CDV)H基因的重组犬2型腺病毒(CAV-2/CDVLPH)免疫原性,25只45-50日龄犬(抗CDV中和抗体小于1∶2,CAV-2 HI抗体效价小于1∶2)随机分为5组进行免疫犬试验,第1组为CAV-2/CDVLPH免疫组,第2组为pVAXLPH免疫组,第3组为pVAXLPH和CAV-2/CDVLPH联合免疫组,CDV弱毒疫苗组和pVAX1空载体组分别作为阳性和阴性对照组。利用间接ELISA和CDV中和试验检测免疫犬的抗CDV体液免疫水平、CAV-2 HI试验检测免疫犬的抗CAV体液免疫水平、淋巴细胞转化试验检测免疫犬的抗CDV和抗CAV-2细胞免疫水平,分析CAV-2/CDVLPH的免疫性。结果,能够在各试验组免疫犬血清中检测到抗CDV ELISA抗体和抗CDV中和抗体,同时在第1组和第3组免疫犬的血清中检测到抗CAV-2的HI抗体,免疫犬的外周淋巴细胞对特异性和非特异性抗原刺激均有明显增殖,第2组的免疫应答水平低于第3组,第1组又高于第3组,但低于CDV弱毒疫苗免疫组,试验表明CAV-2/CDVLPH可同时诱导免疫犬产生抗CDV和CAV特异性免疫,CAV-2/CDVLPH与pVAXLPH相比能诱导犬产生较高的特异性免疫应答,然而低于CDV弱毒疫苗。 展开更多
关键词 犬瘟热 CDV H基因 cav-2
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表达狂犬病毒糖蛋白抗原的重组犬2型腺病毒的构建及鉴定 被引量:8
9
作者 赵忠鹏 夏咸柱 +4 位作者 扈荣良 谢之景 闫芳 黄耕 杨松涛 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期335-339,共5页
为研制一种预防犬科动物狂犬病的新型疫苗,将含有狂犬病毒ERA株糖蛋白基因(Rabies glycoprotein,Rgp)表达盒的穿梭质粒pVAXΔE3Rgp中的Rgp表达盒克隆入犬2型腺病毒(Canine adenovirus type2,CAV2)骨架质粒pPoly2-CAV2中,获得重组质粒pPo... 为研制一种预防犬科动物狂犬病的新型疫苗,将含有狂犬病毒ERA株糖蛋白基因(Rabies glycoprotein,Rgp)表达盒的穿梭质粒pVAXΔE3Rgp中的Rgp表达盒克隆入犬2型腺病毒(Canine adenovirus type2,CAV2)骨架质粒pPoly2-CAV2中,获得重组质粒pPoly2-CAV2-ΔE3-Rgp,释放其基因组,转染MDCK细胞系,获得E3缺失区(Deletion of early protein3,ΔE3)含有Rgp表达盒的重组病毒CAV2-ΔE3-Rgp。该重组病毒能在MDCK细胞上产生典型的腺病毒细胞病变。通过酶切、PCR、基因测序,表明该重组病毒含有完整的Rgp表达盒。通过RT-PCR、Western blot等检测,表明该重组病毒能够表达Rgp抗原。用该重组病毒免疫犬,3次免疫后,可以诱导犬产生特异的抗CAV2HI抗体,其效价超过1∶256和抗狂犬病病毒(Rabies virus,RV)中和抗体,其效价超过0.50IU/mL。试验结果表明,获得的重组病毒免疫犬后,能够产生抗狂犬病毒和腺病毒的高效价保护性抗体,是一种有潜力的犬科动物狂犬病毒腺病毒二联疫苗候选株。 展开更多
关键词 狂犬病毒 2型腺病毒
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小窝蛋白-1、基质金属蛋白酶-2在膀胱癌的表达及其关系 被引量:6
10
作者 李恒平 陈一戎 +2 位作者 颜东文 史葆光 郭应芳 《现代泌尿外科杂志》 CAS 2007年第2期94-96,共3页
目的探讨小窝蛋白-1(CAV-1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)在膀胱癌表达及其两者关系。方法应用免疫组化SP法检测77例膀胱癌和15例正常膀胱组织CAV-1、MMP-2的表达。结果CAV-1、MMP-2在膀胱移行细胞癌(TCCB)、膀胱腺癌表达明显高于正常膀胱... 目的探讨小窝蛋白-1(CAV-1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)在膀胱癌表达及其两者关系。方法应用免疫组化SP法检测77例膀胱癌和15例正常膀胱组织CAV-1、MMP-2的表达。结果CAV-1、MMP-2在膀胱移行细胞癌(TCCB)、膀胱腺癌表达明显高于正常膀胱黏膜,有显著性差异(P<0.01),CAV-1在G1、G2、G3膀胱移行细胞癌阳性率分别15%、40%、68%,临床分期浸润型表达明显高于表浅型,有显著性差异(P<0.01);MMP-2在G1、G2、G3阳性率分别20%、40%、72%,临床分期浸润型表达明显高于表浅型,有显著性差异(P<0.01)。CAV-1和MMP-2在膀胱癌表达有明显正相关(P<0.01),在正常膀胱黏膜无相关性(P>0.05)。结论CAV-1,MMP-2与膀胱癌病理分级、临床分期有关,提示CAV-1可能促进MMP-2分泌。 展开更多
关键词 小窝蛋白-1 基质金属蛋白酶-2 膀胱癌 免疫组织化学 腺癌
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犬2型腺病毒SY株的致弱驯化 被引量:2
11
作者 范泉水 夏咸柱 +6 位作者 邱薇 黄耕 何洪彬 余春 乔军 武银莲 殷震 《中国兽药杂志》 2001年第6期7-9,共3页
作者对分离和系统鉴定的一株犬传染性喉气管炎病毒 (犬 2型腺病毒 ) SY(沈阳 )株 ,用犬肾传代细胞 MDCK进行了致弱驯化 ,每驯化 1 5代做一次初步的犬的安全性试验 ,用大剂量不同代次病毒对易感犬进行人工感染试验 ,每天观察犬的临床症... 作者对分离和系统鉴定的一株犬传染性喉气管炎病毒 (犬 2型腺病毒 ) SY(沈阳 )株 ,用犬肾传代细胞 MDCK进行了致弱驯化 ,每驯化 1 5代做一次初步的犬的安全性试验 ,用大剂量不同代次病毒对易感犬进行人工感染试验 ,每天观察犬的临床症状及白细胞总数 ,并于接毒后的第 5 d安乐死 ,作病理解剖学和病理组织学检查。易感犬的感染试验结果表明 ,SY株在犬肾细胞上传 1 5代时对犬的致病力已降低 ,3 0代时对犬已不引起发烧、精神沉郁和厌食等症状 ,仅引起轻度的鼻炎、中度的咽炎 ,剖检肺表现正常 ,仅见支气管淋巴结肿大 ,45代时无临床症状 ,剖检除扁桃体肿大外没有见到其它症状 ,6 0代毒已完全失去致病力 ,未见任何临床症状及病理变化。 展开更多
关键词 2型腺病毒 传染性喉气管炎病毒 传代驯化 免疫原性 安全性 噬斑克隆
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犬2型腺病毒E3区表达载体的构建 被引量:1
12
作者 邱薇 夏咸柱 +6 位作者 范泉水 扈荣良 王雷 高玉伟 张守峰 孙阳 尹惠琼 《生物技术通讯》 CAS 2003年第1期8-11,15,共5页
利用构建的犬2型腺病毒E3区缺失质粒pBE3L分别构建了含有和不含外源性启动子的绿色荧光蛋白(GFP)基因和狂犬病病毒糖蛋白(Rgp)基因的重组表达质粒pBE3LGFP、pBE3LCGFP、pBE3LRgp和pBE3LCRgp,并分别对DK细胞进行了转染实验,以检测其表达... 利用构建的犬2型腺病毒E3区缺失质粒pBE3L分别构建了含有和不含外源性启动子的绿色荧光蛋白(GFP)基因和狂犬病病毒糖蛋白(Rgp)基因的重组表达质粒pBE3LGFP、pBE3LCGFP、pBE3LRgp和pBE3LCRgp,并分别对DK细胞进行了转染实验,以检测其表达,结果显示,pBE3LCGFP质粒在转染DK细胞后,于36h即可观察到荧光,72~96h无明显差别,传3代后仍可见表达荧光的细胞,pBE3LCRgp质粒转染DK细胞后,于48~96h用间接免疫荧光染色可检测到糖蛋白的表达,而pBE3LGFP和pBE3Rgp质粒转染DK细胞后经检测均无表达,表明构建的E3区缺失性载体不能利用E3区自身的启动子进行目的基因的表达,但利用外源性启动子可使外源基因获得良好表达。 展开更多
关键词 2型腺病毒 E3区 表达载体
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小窝蛋白2在口腔癌中的表达及其临床意义 被引量:1
13
作者 覃丽婷 崔万猛 +2 位作者 梁丽彬 石东宸 李萍 《广西医科大学学报》 CAS 2018年第6期817-821,共5页
目的:探讨小窝蛋白2(CAV2)在口腔癌患者中的表达及其临床意义。方法:首先用GCBI数据平台下载口腔癌mRNA芯片数据(GSE25099、GSE42743、GSE9844和GSE30784),再利用Stata软件实现诊断准确性试验Meta分析来评估CAV2在口腔癌中的表达情况;利... 目的:探讨小窝蛋白2(CAV2)在口腔癌患者中的表达及其临床意义。方法:首先用GCBI数据平台下载口腔癌mRNA芯片数据(GSE25099、GSE42743、GSE9844和GSE30784),再利用Stata软件实现诊断准确性试验Meta分析来评估CAV2在口腔癌中的表达情况;利用Oncomine数据库验证CAV2在口腔癌中的表达情况;采用免疫组织化学染色方法验证CAV2在口腔癌组织中的表达;利用TCGA数据库下载口腔癌和口腔正常组织的临床资料和CAV2 mRNA表达水平数据,再次验证CAV2的表达并分析其与患者临床参数的关系,分析CAV2在肿瘤中的诊断价值和患者的生存情况。结果:与正常对照组织相比,生物信息学分析以及免疫组织化学染色结果均提示CAV2在口腔癌中表达上调,差异具有统计学意义(P<0.05)。CAV2的表达与患者的年龄、性别、肿瘤原发灶、组织分级和TNM临床分期无相关性(P>0.05)。CAV2诊断口腔癌的ROC曲线下面积为0.855(95%CI:0.806~0.905,P<0.0001),灵敏度为71.3%,特异度为93.8%(最佳临界值为13.63)。高表达CAV2的患者生存时间较低表达患者短(χ2=6.457,P=0.011)。结论:CAV2表达水平可作为口腔癌诊断和预后评估的指标。 展开更多
关键词 口腔癌 cav2 诊断效能 生存分析
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犬腺病毒2型抗原的制备及间接ELISA的建立 被引量:1
14
作者 葛艳华 姜骞 +4 位作者 刘家森 司昌德 郭东春 林欢 曲连东 《实验动物科学》 2010年第5期40-44,共5页
用MDCK细胞增殖犬腺病毒2型弱毒疫苗株,病毒培养上清液经差速离心和酒石酸钾密度梯度离心浓缩、纯化后作为诊断抗原,建立了犬腺病毒2型抗体检测的间接ELISA。确定最佳抗原包被量为0.168μg/孔,待检血清最佳稀释倍数为1:100,作用时间为60... 用MDCK细胞增殖犬腺病毒2型弱毒疫苗株,病毒培养上清液经差速离心和酒石酸钾密度梯度离心浓缩、纯化后作为诊断抗原,建立了犬腺病毒2型抗体检测的间接ELISA。确定最佳抗原包被量为0.168μg/孔,待检血清最佳稀释倍数为1:100,作用时间为60 min,羊抗犬酶标抗体稀释倍数为1:2000,作用时间为60 min,底物作用时间为37℃,10 min。判定标准为S/P值≥0.351者判为阳性,S/P值≤0.318者判为阴性。该抗原不与犬瘟热病毒、犬细小病毒、犬波特氏杆菌等3种犬常见传染病的阳性血清反应,具有良好的特异性;批内、批间重复试验,变异系数小于15%,显示具有较好的重复性;检测血清样品56份,与病毒中和试验结果比对的符合率为93.75%。本研究结果为实现犬腺病毒感染监测,进行犬腺病毒流行病学调查提供了一种简便的血清学诊断方法。 展开更多
关键词 2型腺病毒 间接ELISA
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犬2型腺病毒E1转化细胞的建立
15
作者 邱薇 夏咸柱 +6 位作者 范泉水 扈荣良 王雷 高玉伟 张守峰 孙阳 杨美峰 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 2003年第4期65-70,共6页
为建立能表达犬 2型腺病毒 (CAV 2 )E1基因的辅助细胞 ,本研究用含CAV 2E1基因的重组质粒pc E1t对DK细胞进行转染 ,经G41 8的筛选 ,得到 2 6个细胞克隆。用CAV 2E1A特异引物对各细胞克隆进行PCR和RT PCR检测 ,PCR结果表明转染后的细胞... 为建立能表达犬 2型腺病毒 (CAV 2 )E1基因的辅助细胞 ,本研究用含CAV 2E1基因的重组质粒pc E1t对DK细胞进行转染 ,经G41 8的筛选 ,得到 2 6个细胞克隆。用CAV 2E1A特异引物对各细胞克隆进行PCR和RT PCR检测 ,PCR结果表明转染后的细胞克隆都能扩增出 5 3 6bp的特异性片段 ,但仅有 6株为RT PCR强阳性 ,能扩增出 6 5 2bp的特异带。再对RT PCR强阳性的细胞克隆进行Westernblot分析 ,最终挑选到一个既能转录E1A基因 ,又能表达E1B 1 9kD蛋白的克隆细胞株 (DK E1 )。 展开更多
关键词 2型腺病毒 E1基因 细胞克隆 表达载体 DK细胞系
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犬2型腺病毒E1转化细胞系的特性研究
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作者 邱薇 夏咸柱 +6 位作者 范泉水 扈荣良 王雷 高玉伟 孙阳 尹惠琼 李刚山 《细胞生物学杂志》 CSCD 北大核心 2003年第2期108-112,共5页
对筛选到的一株CAV-2 E1转化细胞(DK/E1)进行了初步的特性研究。以DK细胞为对照,观察到转化细胞的形态与DK细胞有明显区别,细胞变长,易聚集生长。通过测定DK及DK/E1细胞分别在2%、5%和10%牛血清培养基中的生长曲线,结果发现DK/E1细... 对筛选到的一株CAV-2 E1转化细胞(DK/E1)进行了初步的特性研究。以DK细胞为对照,观察到转化细胞的形态与DK细胞有明显区别,细胞变长,易聚集生长。通过测定DK及DK/E1细胞分别在2%、5%和10%牛血清培养基中的生长曲线,结果发现DK/E1细胞的生长速度比DK细胞快。用蚀斑和TCID50测定了病毒在DK和DK/E1细胞上的病毒滴度,结果表明DK/E1细胞产生的病毒蚀斑比DK细胞的大,TCID50测得的病毒滴度比DK细胞产生的病毒滴度高。CAV-2全基因组DNA对DK/E1细胞和DK细胞的转染试验结果表明,5μg和10μg的CAV-2DNA转染的DK/E1细胞,分别在转染后第14天和第11天均出现了典型的腺病毒细胞病变,而相同量CAV-2 DNA转染的DK细胞未出现病变,说明DK/E1细胞有助于CAV-2 DNA的复制和病毒粒子的包装。在DK/E1细胞内的重组试验表明,DK/E1细胞也有利于重组病毒的产生。以上转化特性在DK/E1细胞传至80代时仍保持不变,说明本试验获得了一株CAV-2 E1基因的转化细胞系。 展开更多
关键词 2型腺病毒 E1转化细胞系 形态 生长曲线 病毒载体 遗传稳定性 转染 重组
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表达虎源H_5N_1亚型禽流感病毒NP蛋白重组犬2型腺病毒的构建及鉴定
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作者 彭广能 耿长国 +5 位作者 何春燕 汪开毓 夏咸柱 高玉伟 杨松涛 刘益新 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期1623-1628,共6页
将A/Tiger/Harbin/132/2007(H5N1)的NP基因克隆入pVAX1载体中,然后将含有NP基因的表达盒(CMV+NP+PolyA)克隆入pVAXE3的SspⅠ酶切缺失处,获得含有NP基因表达盒的穿梭载体pVAXΔE3-NP。用SalⅠ+NruⅠ分别对pVAXΔE3-NP和pPoly-2-CAV-2进... 将A/Tiger/Harbin/132/2007(H5N1)的NP基因克隆入pVAX1载体中,然后将含有NP基因的表达盒(CMV+NP+PolyA)克隆入pVAXE3的SspⅠ酶切缺失处,获得含有NP基因表达盒的穿梭载体pVAXΔE3-NP。用SalⅠ+NruⅠ分别对pVAXΔE3-NP和pPoly-2-CAV-2进行双酶切,将含有NP基因表达盒的片段定向克隆入pPoly-2-CAV-2,获得在E3区缺失处插入NP基因表达盒的重组质粒pCAV-2-NP。释放CAV-2-NP重组基因组,脂质体介导转染DK细胞,获得了能使DK细胞产生典型腺病毒样细胞病变的CAV-2-NP重组病毒。从形态学、基因组水平、NP基因的转录、NP蛋白的表达以及重组病毒的生长特征等方面进行鉴定。结果表明,CAV-2-NP具有典型的CAV-2形态特征,在繁殖过程中没有对H5N1NP表达盒片段进行缺失或重排,并且能够转录H5N1NP基因的mRNA,ELISA和免疫荧光分析表明重组表达产物可被流感病毒NP基因单克隆抗体1G6G4所识别。 展开更多
关键词 虎源H5N1亚型禽流感病毒 NP基因 2型腺病毒
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犬2型腺病毒SY株E1区、E3区的克隆与序列分析
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作者 邱薇 夏咸柱 +4 位作者 范泉水 扈荣良 王雷 高玉伟 张守峰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期339-342,共4页
根据犬2型腺病毒Toronto A26/61株的全基因序列物理图谱,确定E1、E3区位置,从CAV-2SY株的细胞培养物中提取了CAV-2全基因组DNA,经电泳检测其完整性并用多个限制性内切酶鉴定后,用EcoRⅠ和Kpn Ⅰ分别进行酶切,回收含E1区和E3区的相应片段... 根据犬2型腺病毒Toronto A26/61株的全基因序列物理图谱,确定E1、E3区位置,从CAV-2SY株的细胞培养物中提取了CAV-2全基因组DNA,经电泳检测其完整性并用多个限制性内切酶鉴定后,用EcoRⅠ和Kpn Ⅰ分别进行酶切,回收含E1区和E3区的相应片段,分别克隆到质粒pGEM-3zf和pBluescriptⅡKs(+)中,得到含E1区的重组质粒pGE1和含E3区的重组质粒pBE3-2。对获得的两个片段进行了序列测定和分析,结果表明,犬2型腺病毒SY株E1、E3基因的核苷酸序列与Toronto株的相应序列完全相同,其同源性均为100%。 展开更多
关键词 2型腺病毒 E1、E3 克隆 序列分析
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狂犬病病毒和犬2型腺病毒双重荧光定量PCR检测方法的建立及应用
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作者 刘健 桂亚萍 +8 位作者 白艺兰 夏炉明 朱晓英 杨显超 陶田谷晟 唐聪圣 张玉杰 王建 赵洪进 《公共卫生与预防医学》 2023年第3期33-37,共5页
目的为了解CAV2-ΔE3-CGS口服疫苗免疫后排毒情况和掌握犬腺病毒(CAV)感染本底情况,研究建立狂犬病病毒和犬2型腺病毒双重荧光定量PCR检测方法。方法针对CAV2-ΔE3-CGS中犬2型腺病毒E1基因和狂犬病病毒G基因设计特异性引物和探针,建立检... 目的为了解CAV2-ΔE3-CGS口服疫苗免疫后排毒情况和掌握犬腺病毒(CAV)感染本底情况,研究建立狂犬病病毒和犬2型腺病毒双重荧光定量PCR检测方法。方法针对CAV2-ΔE3-CGS中犬2型腺病毒E1基因和狂犬病病毒G基因设计特异性引物和探针,建立检测CAV2-ΔE3-CGS的双重荧光定量PCR检测方法,并对实验动物场和犬类留验场流浪犬口鼻拭子和环境样本进行了检测。结果该方法生成的标准曲线分别为Y=-3.351×logX+44.895,R^(2)为0.999和Y=-3.413×logX+45.192,R^(2)为0.996,线性关系良好,最低检测线都为102拷贝/μL。在实验动物场流浪犬和环境中未检测到CAV2-ΔE3-CGS;在犬类留验场流浪犬中检测到CAV感染,其中口鼻拭子阳性率为5.88%(5/85),肛拭子阳性率为8.24%(7/85),环境样本阳性率为4.00%(1/25)。结论研究建立的双重荧光定量PCR检测方法适用于CAV2-ΔE3-CGS排毒情况排查和CAV感染调查。研究表明CAV2-ΔE3-CGS免疫后未检测到排毒,上海市流浪犬CAV感染率较低,因此符合CAV2-ΔE3-CGS的口服免疫要求。 展开更多
关键词 狂犬病病毒 2型腺病毒 双重荧光定量PCR cav2-ΔE3-CGS
原文传递
亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒VP1基因重组犬2型腺病毒的构建
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作者 张秀芹 夏咸柱 +2 位作者 卫广森 常惠芸 高玉伟 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期118-121,共4页
应用PCR方法扩增出亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒的VP1基因,继而构建出真核表达载体pVAX-VP1。再将含有巨细胞启动子CMV的目的基因表达盒连接到穿梭载体pVAX△E3上,筛选出VP1表达盒方向与E3区转录方向一致的重组子,获得转移载体。再经酶切,连接等... 应用PCR方法扩增出亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒的VP1基因,继而构建出真核表达载体pVAX-VP1。再将含有巨细胞启动子CMV的目的基因表达盒连接到穿梭载体pVAX△E3上,筛选出VP1表达盒方向与E3区转录方向一致的重组子,获得转移载体。再经酶切,连接等方法获得重组腺病毒质粒。利用脂质体介导将重组质粒转染DK细胞,转染3次后,细胞出现明显的腺病毒病变。经PCR扩增、测序检测及基因组酶切鉴定,证明该病毒即为重组犬2型腺病毒。命名为CAV2/FMDV。经验证,该重组毒可稳定遗传,其毒价为103.5TCID50/mL。 展开更多
关键词 亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒 2型腺病毒 重组 VP1基因
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