为了研究桑椹低聚半乳糖(mulberry galacto-oligosaccharide,MGO)对鼠李糖乳酪杆菌EN-08胞内蛋白质表达的影响,采用串联质量标签(tandem mass tags,TMT)定量蛋白质组学技术进行分析。将鼠李糖乳酪杆菌EN-08分别接种到含MGO、桑椹多糖(mu...为了研究桑椹低聚半乳糖(mulberry galacto-oligosaccharide,MGO)对鼠李糖乳酪杆菌EN-08胞内蛋白质表达的影响,采用串联质量标签(tandem mass tags,TMT)定量蛋白质组学技术进行分析。将鼠李糖乳酪杆菌EN-08分别接种到含MGO、桑椹多糖(mulberry polysaccharide,MPS)和低聚半乳糖(galactooligosaccharides,GOS)的MRS培养基中发酵培养。培养18 h后提取所有样品的蛋白质进行TMT技术鉴定,采用相关性热图和主成分分析观察各组相关性,发现添加MGO和MPS后,鼠李糖乳酪杆菌EN-08全蛋白组成发生变化。在MGO组中鉴定出192个差异蛋白,其中上调蛋白有110个,下调蛋白有82个。KEGG功能注释显示,上调差异蛋白的功能主要集中在碳水化合物代谢和膜运输方面,分别有17个和16个上调蛋白参与。KEGG富集分析显示,上调差异蛋白质显著富集于果糖和甘露糖代谢以及磷酸转移酶系统通路,富集因子分别为0.2195和0.2286。分析结果表明,MGO主要从碳水化合物代谢以及环境信息处理这两方面影响菌株的生命活动。说明MGO可作为有潜力的碳源,促进菌体代谢调控,为鼠李糖乳酪杆菌EN-08的高密度工业化生产提供参考。展开更多
两歧双歧杆菌作为重要益生菌,其工业化培养过程中存在氮源利用率低、生长密度低等问题。前期研究发现,两歧双歧杆菌可利用含脯氨酸的肽。该研究旨在根据两歧双歧杆菌的氮源利用特征靶向制备脯氨酸肽,以提升氮源利用效率和生长水平。研...两歧双歧杆菌作为重要益生菌,其工业化培养过程中存在氮源利用率低、生长密度低等问题。前期研究发现,两歧双歧杆菌可利用含脯氨酸的肽。该研究旨在根据两歧双歧杆菌的氮源利用特征靶向制备脯氨酸肽,以提升氮源利用效率和生长水平。研究优选5种富脯氨酸蛋白和5种蛋白酶制备短肽,结合菌株培养从中筛选出了2种高含脯氨酸且对生长有益的底物蛋白(酪蛋白、谷蛋白)。结合菌株氮源利用特性与肽酶特征制定多步酶解策略,利用计算机工具预测了酶解肽,并使用分子对接模拟肽段与肽转运的关键蛋白寡肽结合蛋白OppA(oligopeptide binding protein A,OppA)的结合,发现77.5%以上的肽都能与OppA有效结合。经酶解制备得到了6种脯氨酸肽,分子质量为180~2000 Da的肽占到72.49%以上(180~500 Da的短肽>50%),且脯氨酸大多以肽的形式存在(极少量游离)。将制备的脯氨酸肽与1种乳清蛋白肽都用作培养,发现乳清蛋白肽WA(whey protein peptides hydrolyzed by alkaline protease,WA)与酪蛋白肽CAF(casein peptides hydrolyzed by alkaline protease and flavourzyme,CAF)按质量比2∶1复配,添加量8 g/L时活菌数达到(2.04±0.1)×10^(9)CFU/mL,单位氮源产生(1.38±0.18)×10^(12)CFU的活菌,相较于传统MRS培养基分别提升35%和198.5%。该研究为两歧双歧杆菌的高效培养及工业化应用提供了创新策略。展开更多
文摘两歧双歧杆菌作为重要益生菌,其工业化培养过程中存在氮源利用率低、生长密度低等问题。前期研究发现,两歧双歧杆菌可利用含脯氨酸的肽。该研究旨在根据两歧双歧杆菌的氮源利用特征靶向制备脯氨酸肽,以提升氮源利用效率和生长水平。研究优选5种富脯氨酸蛋白和5种蛋白酶制备短肽,结合菌株培养从中筛选出了2种高含脯氨酸且对生长有益的底物蛋白(酪蛋白、谷蛋白)。结合菌株氮源利用特性与肽酶特征制定多步酶解策略,利用计算机工具预测了酶解肽,并使用分子对接模拟肽段与肽转运的关键蛋白寡肽结合蛋白OppA(oligopeptide binding protein A,OppA)的结合,发现77.5%以上的肽都能与OppA有效结合。经酶解制备得到了6种脯氨酸肽,分子质量为180~2000 Da的肽占到72.49%以上(180~500 Da的短肽>50%),且脯氨酸大多以肽的形式存在(极少量游离)。将制备的脯氨酸肽与1种乳清蛋白肽都用作培养,发现乳清蛋白肽WA(whey protein peptides hydrolyzed by alkaline protease,WA)与酪蛋白肽CAF(casein peptides hydrolyzed by alkaline protease and flavourzyme,CAF)按质量比2∶1复配,添加量8 g/L时活菌数达到(2.04±0.1)×10^(9)CFU/mL,单位氮源产生(1.38±0.18)×10^(12)CFU的活菌,相较于传统MRS培养基分别提升35%和198.5%。该研究为两歧双歧杆菌的高效培养及工业化应用提供了创新策略。
