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基于RPA-CRISPR/Cas12a的沙氏弧菌可视化检测方法的建立
1
作者 葛辉 巫旗生 +8 位作者 宁岳 冯君雅 陈昊翔 李慧耀 叶军 吴丽云 温凭 徐春燕 任磊 《水产学报》 北大核心 2025年第11期203-215,共13页
【目的】建立基于RPA-CRISPR/Cas12a的沙氏弧菌实时荧光检测法和试纸条检测法,满足牡蛎新发病原沙氏弧菌的快速检测需求。【方法】实验针对沙氏弧菌toxR基因设计特异性片段,优选RPA引物和crRNA序列,确保基因标志物的准确扩增与识别;当CR... 【目的】建立基于RPA-CRISPR/Cas12a的沙氏弧菌实时荧光检测法和试纸条检测法,满足牡蛎新发病原沙氏弧菌的快速检测需求。【方法】实验针对沙氏弧菌toxR基因设计特异性片段,优选RPA引物和crRNA序列,确保基因标志物的准确扩增与识别;当CRISPR/Cas12a系统识别到RPA扩增的病原靶标基因并激活其反式切割活性后,生物素修饰的单链DNA荧光探针作为报告分子被切割,分别依据蓝光下的荧光强度和试纸条的显色情况判定检测结果;实验采用多种弧菌验证检测方法的特异性,并通过不同浓度沙氏弧菌菌液评估2种检测方法的灵敏度;最终将2种检测方法与PCR方法进行真实样本检测对比。【结果】本研究成功建立了RPA-CRISPR/Cas12a荧光检测法和试纸检测法,且均表现出优异的特异性,可准确识别沙氏弧菌,整个检测流程可在1 h内完成;2种方法的检测限均达到100 CFU/mL,检测结果与PCR高度一致(符合率100%)。【结论】本研究开发的基于RPA-CRISPR/Cas12a的荧光检测法和试纸检测法,突破了传统方法的局限,显著缩短检测时间,且无需复杂仪器,操作简便,为沙氏弧菌的现场快速检测提供了可靠的技术支持。本研究为沙氏弧菌的快速检测提供了高效、便捷的新方法,对水产养殖病害防控和食品安全保障具有重要意义。 展开更多
关键词 沙氏弧菌 重组酶聚合酶扩增(RPA) CRISPR/Cas12a 荧光检测 试纸检测
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4种消毒剂对仿刺参幼参的急性毒性试验 被引量：2
2
作者 李慧耀 梁一帆 +3 位作者 杨求华 李昭杰 葛辉 吴建绍 《渔业研究》 2025年第1期56-63,共8页
【背景】仿刺参(Apostichopus japonicus)作为重要的海水经济养殖品种,其育苗过程中的水质管理及病害防控尤为重要。预防和控制其疾病的关键手段之一是使用消毒剂对水质和底质进行消毒。消毒剂的选择需兼顾有效性与安全性,以避免对幼参... 【背景】仿刺参(Apostichopus japonicus)作为重要的海水经济养殖品种,其育苗过程中的水质管理及病害防控尤为重要。预防和控制其疾病的关键手段之一是使用消毒剂对水质和底质进行消毒。消毒剂的选择需兼顾有效性与安全性,以避免对幼参造成不可逆的损害。【目的】研究4种常用消毒剂对仿刺参幼参的急性毒性,为仿刺参育苗过程中合理地选择消毒剂提供理论依据。【方法】选取健康、规格一致的仿刺参幼参作为试验对象,采用静水试验法开展4种常用水产消毒剂的急性毒性试验,计算各消毒剂在不同暴露时间下的半致死浓度(LC_(50))及安全浓度,以评估其毒性效应。【结果】当采用二氧化氯处理24、48、72和96 h时,仿刺参的半致死浓度(LC_(50))分别为2.97、2.06、1.56和0.96 mg/L,安全浓度为0.43 mg/L;当采用过硫酸氢钾处理24、48、72和96 h时,仿刺参的半致死浓度(LC_(50))分别为9.66、6.53、5.50和5.07 mg/L,安全浓度为1.32 mg/L;当采用二溴海因处理24、48、72和96 h时,仿刺参的半致死浓度(LC_(50))分别为12.80、7.84、7.01和6.02 mg/L,安全浓度为1.44 mg/L;当采用聚维酮碘处理24、48、72和96 h时,仿刺参的半致死浓度(LC_(50))分别为11.95、9.30、8.51和8.13 mg/L,安全浓度为2.17 mg/L。研究结果表明,二氧化氯表现出最强的急性毒性,其LC_(50)值随时间的延长而显著下降,表明其对仿刺参幼参的毒性作用迅速且强烈。相比之下,过硫酸氢钾、二溴海因及聚维酮碘的毒性依次减弱。【结论】4种消毒剂对仿刺参幼苗的毒性依次为二氧化氯>过硫酸氢钾>二溴海因>聚维酮碘,结合不同消毒剂的抑菌能力,可优先选用过硫酸氢钾作为消毒剂。 展开更多
关键词 仿刺参 消毒剂 急性毒性 半致死浓度 安全浓度
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基于RPA和CRISPR/Cas12a技术构建的VHSV快速检测方法
3
作者 王洪升 唐小千 +3 位作者 绳秀珍 邢婧 迟恒 战文斌 《中国海洋大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第7期19-27,共9页
病毒性出血性败血症病毒(Viral hemorrhagic septicemia virus,VHSV)是一种对冷水鱼类具有高致死率的弹状病毒,在世界范围内广泛流行,严重危害水产养殖业安全和水生生物多样性。为了实现该病的便捷、快速、灵敏诊断,本文基于RPA和CRISPR... 病毒性出血性败血症病毒(Viral hemorrhagic septicemia virus,VHSV)是一种对冷水鱼类具有高致死率的弹状病毒,在世界范围内广泛流行,严重危害水产养殖业安全和水生生物多样性。为了实现该病的便捷、快速、灵敏诊断,本文基于RPA和CRISPR/Cas技术,通过RPA引物和crRNA筛选及检测体系优化,结合侧向流层析技术与荧光显色法,构建了VHSV的快速检测体系。研究表明,RT-RPA在39℃下反应30 min可获得最佳扩增效果,通过CRISPR/Cas12a与侧向流层析技术的结合使用可在50 min内完成病毒样本的检测,检测结果可通过肉眼直接判断。该检测方法的检测限为9 copies/μL,与同属的传染性造血器官坏死病毒(IHNV)和牙鲆弹状病毒(HIRRV)之间无交叉反应,表现出较高的灵敏度与特异性。临床样本检测结果显示,本方法与RT-PCR检测结果一致,均表现出较高的准确性与稳定性。本研究构建了一种VHSV的RPA-CRISPR/Cas12a检测方法,为VHSV的便捷、快速诊断提供了重要的技术支撑。 展开更多
关键词 病毒性出血性败血症病毒 重组酶聚合酶扩增 CRISPR/Cas12a 便捷诊断 快速检测 牙鲆
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夏季池塘管理及鱼病预防要点
4
作者 苏渔 《农家致富》 2025年第8期35-35,共1页
一、水质监测,高温可能导致池塘水体溶解氧降低,藻类生长迅速,需及时换水。定期检测水体p H值、溶解氧、亚硝酸盐、氨氮等指标,出现异常情况及时处理。二、饲料投喂投喂时尽量避开鱼群较为密集区域,以免摄食区溶氧量大幅降低,引起鱼群... 一、水质监测,高温可能导致池塘水体溶解氧降低,藻类生长迅速,需及时换水。定期检测水体p H值、溶解氧、亚硝酸盐、氨氮等指标,出现异常情况及时处理。二、饲料投喂投喂时尽量避开鱼群较为密集区域,以免摄食区溶氧量大幅降低,引起鱼群应激。饲料投喂应遵循“八成饱”原则,并根据鱼类生长阶段合理配制饵料;定期投喂维生素C、矿物质和抗氧化剂等免疫调节物质,保护鱼肠道和肝脏健康。 展开更多
关键词 池塘管理 PH值 水质监测 饲料投喂 溶解氧 氨氮
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如何肉眼辨別鱼类中毒
5
作者 李翠英 《湖南农业》 2025年第7期25-25,共1页
1.重金属污染中毒铅、锰、锌等重金属离子进入水体后,如果在池塘中浓度超标,就会使鱼儿出现中毒症状。主要表现为鱼类腮部呈灰白色,并分泌大量黏液,形成絮状沉淀物,使鱼鳃阻塞,引起呼吸障碍。中毒鱼类常会在池水表层浮游。发生铅中毒的... 1.重金属污染中毒铅、锰、锌等重金属离子进入水体后,如果在池塘中浓度超标,就会使鱼儿出现中毒症状。主要表现为鱼类腮部呈灰白色,并分泌大量黏液,形成絮状沉淀物,使鱼鳃阻塞,引起呼吸障碍。中毒鱼类常会在池水表层浮游。发生铅中毒的鱼类,体色明显呈黑色。鱼类铜中毒,体色呈灰白色,腮丝呈浅绿色。 展开更多
关键词 鱼类 黏液 中毒 腮部 重金属污染 絮状沉淀物
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网箱养殖鱼体表寄生虫病用药探讨
6
作者 程罗妹 姚杰辉 《科学养鱼》 2025年第8期59-60,共2页
在江河湾区近岸进行网箱养鱼,由于水质清新,水体日夜缓慢流淌,非常适合高密度养殖,但是高密度养殖往往容易带来病害的侵袭。如果养殖鱼类感染的是细菌性疾病,可以通过投喂药饵的方法去治疗,操作方便。如果感染的是体表寄生虫病,治疗就... 在江河湾区近岸进行网箱养鱼,由于水质清新,水体日夜缓慢流淌,非常适合高密度养殖,但是高密度养殖往往容易带来病害的侵袭。如果养殖鱼类感染的是细菌性疾病,可以通过投喂药饵的方法去治疗,操作方便。如果感染的是体表寄生虫病,治疗就比较困难。笔者将近年来在贺江网箱养鱼治疗体表寄生虫病的几个案例进行总结,以供参考。 展开更多
关键词 用药 网箱养殖 江河湾区 鱼体表寄生虫病
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鲑鳟鱼病毒性疫病现场快速检测发展现状与展望 被引量：1
7
作者 仇松寅 刘晓飞 +2 位作者 景宏丽 梅琳 吴绍强 《水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期1020-1026,共7页
鲑鳟鱼是鲑科家族所有鱼类的总称,是典型的冷水性鱼类,具有很高的营养价值和经济价值[1]。联合国粮食及农业组织在2022年水产养殖的报告中指出,近几十年来,鲑科鱼特别是养殖的大西洋鲑(Salmo salar)一直是全球渔业和水产养殖产品贸易增... 鲑鳟鱼是鲑科家族所有鱼类的总称,是典型的冷水性鱼类,具有很高的营养价值和经济价值[1]。联合国粮食及农业组织在2022年水产养殖的报告中指出,近几十年来,鲑科鱼特别是养殖的大西洋鲑(Salmo salar)一直是全球渔业和水产养殖产品贸易增长的主要贡献者之一[2]。中国养殖鲑鳟鱼类已有50余年的历史,有大西洋鲑、白点鲑(Salvelinus leucomaenis)、虹鳟(Oncorhynchus mykiss)、哲罗鲑(Hucho taimen)等10余个养殖品种[1]。据统计,2022年我国鲑鳟鱼养殖总产量约4.03万t[3]。随着我国水产养殖规模的逐渐扩大和相关产业及贸易的发展,水生动物疫病带来的风险和负面影响也愈发显著。2021年,我国水产养殖因病害造成的经济损失约为539亿元[4]。水产养殖病害也成为现阶段威胁我国鲑鳟鱼产业发展的重要因素。 展开更多
关键词 鲑鳟鱼 现场 快速检测 病毒
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2种抗生素对大黄鱼肠道组织及紧密连接蛋白基因表达的影响 被引量：2
8
作者 成好学 王庚申 +8 位作者 许叶祥 王莹 刘慧玲 徐伟 施慧 谢建军 汪玮 张东旭 许文军 《水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期531-540,共10页
为探究盐酸多西环素和恩诺沙星对大黄鱼肠道结构及肠道紧密连接蛋白相关基因表达的影响,在水温16.80~22.50℃下,将体质量(41.57±1.63)g的大黄鱼饲养在直径1 m、水深1.25 m的圆形塑料水槽中,投喂剂量0、0.2、1.0、2.0 g/kg的药饵5~7... 为探究盐酸多西环素和恩诺沙星对大黄鱼肠道结构及肠道紧密连接蛋白相关基因表达的影响,在水温16.80~22.50℃下,将体质量(41.57±1.63)g的大黄鱼饲养在直径1 m、水深1.25 m的圆形塑料水槽中,投喂剂量0、0.2、1.0、2.0 g/kg的药饵5~7 d,停药后1、5、15 d,观察肠道组织形态变化,测定紧密连接蛋白基因Claudin-7、ZO-1和Occludin的相对表达量。试验结果显示:大黄鱼摄食2种药物后,肠道均出现肠绒毛萎缩,组织空泡化等病变,随着给药剂量的增加和给药时间的延长,肠道组织损伤程度逐渐加深,紧密连接蛋白基因表达量持续降低;肠黏膜损伤在停药15 d后仍未恢复至对照组水平,药物剂量越高恢复程度越低;与对照组相比,2种药物高剂量组紧密连接蛋白基因表达量在停药15 d后仍显著低于对照组(P<0.05),其余组无显著差异(P>0.05)。试验结果表明,盐酸多西环素和恩诺沙星以剂量时间依赖方式损伤大黄鱼肠道组织,降低肠道通透性,药物剂量越高,恢复周期越长,在15 d后仍未完全恢复。 展开更多
关键词 盐酸多西环素 恩诺沙星 大黄鱼 肠道 组织病理 紧密连接蛋白基因
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三种植物精油对美人鱼发光杆菌美人鱼亚种的抑菌效果及其毒力基因表达的影响 被引量：1
9
作者 杨新月 王春元 +4 位作者 于永翔 王印庚 李京泽 刘定远 张正 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期191-201,共11页
为研究百里香精油、牛至精油和肉桂精油对海水养殖经济鱼类主要致病菌美人鱼发光杆菌美人鱼亚种(PDD)的抑菌作用,实验采用二倍稀释法分别测定3种植物精油对6株不同致病力PDD菌株的最小抑菌质量浓度(MIC)和最小杀菌质量浓度(MBC)。采用... 为研究百里香精油、牛至精油和肉桂精油对海水养殖经济鱼类主要致病菌美人鱼发光杆菌美人鱼亚种(PDD)的抑菌作用,实验采用二倍稀释法分别测定3种植物精油对6株不同致病力PDD菌株的最小抑菌质量浓度(MIC)和最小杀菌质量浓度(MBC)。采用分光光度计法检测添加精油后6株PDD生长曲线的变化;以2株高致病性PDD菌株为研究对象,分析不同浓度精油对PDD毒力基因表达量及胞外产物(ECP)活性的影响;分析了3种精油存储不同时间后以及在金属离子影响下的药效稳定性。结果显示,3种精油对6株PDD菌株均具有较好的抑菌和杀菌作用,MIC为32~128μg/mL,MBC为64~192μg/mL;3种精油对2株高致病性PDD菌株的毒力基因表达及ECP的磷脂酶活性和溶血活性均有抑制作用,其中低浓度精油对PDD主要毒力基因的抑制作用最明显。3种精油于室温下避光存储35 d,对实验菌株的杀菌率均大于99%,显示其良好的药物稳定性;水环境中不同浓度Na^(+)、Mg^(2+)、Ca^(2+)、K^(+)等对3种精油的杀菌效果无显著影响。研究表明,3种精油均适宜开发为防治水产动物细菌性疾病的新型渔药或饲料添加剂。本研究可为拓展芳香类植物精油在水产疾病防控上的应用提供借鉴与参考。 展开更多
关键词 海水养殖 美人鱼发光杆菌美人鱼亚种 植物精油 抑菌作用 药效稳定性
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二氧化氯对水产动物致病菌的杀菌效果及安全性评价 被引量：24
10
作者 艾晓辉 杨先乐 +1 位作者 毛爱民 周剑光 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期367-370,共4页
为了评价二氧化氯在水产养殖中应用的安全性 ,达到合理用药的目的 ,对二氧化氯的杀菌效果、急性毒性等方面进行了一系列的试验。结果表明二氧化氯对鱼类致病菌具有很好的杀菌效果 ,对鲢、草鱼、鲤、鲫、大口鲶及中华鳖等水产养殖动物安全。
关键词 二氧化氯 水产动物致病菌 杀菌效果 安全性评价
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敌百虫对虾池生物的毒性 被引量：18
11
作者 黄国强 李德尚 董双林 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2003年第10期6-9,共4页
研究了敌百虫对青岛大扁藻、三角褐指藻、球等鞭金藻和海洋原甲藻等4种海洋微藻及天津厚蟹、脊尾白虾和克氏纺锤水蚤等3种野生甲壳类 ,以及中国对虾、缢蛏和台湾红罗非鱼等3种养殖生物的毒性。研究结果表明 :敌百虫在低浓度下对海洋微... 研究了敌百虫对青岛大扁藻、三角褐指藻、球等鞭金藻和海洋原甲藻等4种海洋微藻及天津厚蟹、脊尾白虾和克氏纺锤水蚤等3种野生甲壳类 ,以及中国对虾、缢蛏和台湾红罗非鱼等3种养殖生物的毒性。研究结果表明 :敌百虫在低浓度下对海洋微藻的生长没有明显影响 ,在一定浓度范围内甚至有促进作用 ,但超过一定浓度范围能完全抑制海洋微藻的生长。各种海洋微藻对敌百虫的敏感性不同。对3种野生甲壳类的半致死浓度分别为 :天津厚蟹LTD50(96h)为1.25×10-6;脊尾白虾LTD50(12h)为0.05×10-6;克氏纺锤水蚤LTD50 (48h)为0.063×10-6。敌百虫对3种养殖生物的半致死浓度分别为 :中国对虾LTD50(48h)为0.060×10-6;缢蛏LTD50(72h)为18.79×10-6;台湾红罗非鱼LTD50(72h)为36.35×10-6。文中还对敌百虫作为对虾病毒病预防药物的价值进行了探讨。 展开更多
关键词 敌百虫 虾池生物 毒性 青岛大扁藻 三角褐指藻 球等鞭金藻 海洋原甲藻 甲壳类 养殖生物
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噬菌体PZL-Ah1的生物学特性及其治疗嗜水气单胞菌感染的效果评价 被引量：14
12
作者 张洋 贾凯翔 +8 位作者 张秀文 高娜 刘哲群 刘长宇 单晓枫 钱爱东 张旭 徐凤宇 张蕾 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期602-608,共7页
噬菌体利用细菌作为天然宿主,可以特异性杀死宿主菌,尤其是治疗耐药菌株的感染有着巨大潜力。为了研究嗜水气单胞菌(A.hydrophila)噬菌体PZL-Ah1的生物学特性,评价其治疗A.hydrophila感染的效果,本研究以耐药性A.hydrophila(A-L138)作... 噬菌体利用细菌作为天然宿主,可以特异性杀死宿主菌,尤其是治疗耐药菌株的感染有着巨大潜力。为了研究嗜水气单胞菌(A.hydrophila)噬菌体PZL-Ah1的生物学特性,评价其治疗A.hydrophila感染的效果,本研究以耐药性A.hydrophila(A-L138)作为宿主菌,从污水中分离获得了噬菌体PZL-Ah1,并重点研究了PZLAh1的生物学特性和PZL-Ah1治疗A.hydrophila感染的效果。电镜观察可见该噬菌体属于有尾病毒目(Caudovirales)短尾噬菌体科(Podoviridae)。将噬菌体和宿主菌以不同比例混合时,得出PZL-Ah1的最佳感染复数(MOI)为0.1,平板点滴法试验表明PZL-Ah1可以裂解7株气单胞菌,其中包括4株A.hydrophila和3株维氏气单胞菌(A.veronii)。结晶紫染色结果显示,PZL-Ah1对A.hydrophila已经形成的生物被膜(BF)有较强的破坏作用。该噬菌体潜伏期和爆发期均为20 min,PZL-Ah1在温度为20℃~40℃均有较好的活性,在pH4~pH10范围内非常稳定,对鲫鱼腹腔注射治疗剂量噬菌体PZL-Ah1的安全性试验显示,7 d观察期内,实验组鲫鱼均未出现游动缓慢、食欲减退、体质量下降等临床症状及死亡。治疗试验结果显示,宿主菌(A-L138)对鲫鱼最佳感染剂量为106cfu/尾,感染鲫鱼经PZL-Ah1治疗后存活率为100%,对照组全部死亡。结果表明PZL-Ah1有严格的宿主特异性,裂解能力强,能够显著提高感染A.hydrophila鲫鱼的存活率。本研究分离的噬菌体PZL-Ah1具有较高的裂解效率,能够有效清除宿主菌形成的BF;为噬菌体制剂治疗A.hydrophila感染提供了重要实验依据,也为噬菌体疗法的临床应用奠定了基础。 展开更多
关键词 嗜水气单胞菌 噬菌体 生物学特性 治疗效果
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日本医蛭水肿病病原分离鉴定及敏感性试验 被引量：10
13
作者 董靖 刘永涛 +5 位作者 胥宁 宋怿 鄢志红 杨秋红 杨移斌 艾晓辉 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2018年第6期46-52,共7页
为了明确日本医蛭(Hirudo nipponia)发病的病因并筛选有效的治疗药物为新渔药研究提供新思路,采用生理生化特性分析、16S rRNA基因测序和构建系统发育树对细菌进行了鉴定;并通过药敏试验、最小抑菌浓度测定和棋盘式微量稀释试验测定了... 为了明确日本医蛭(Hirudo nipponia)发病的病因并筛选有效的治疗药物为新渔药研究提供新思路,采用生理生化特性分析、16S rRNA基因测序和构建系统发育树对细菌进行了鉴定;并通过药敏试验、最小抑菌浓度测定和棋盘式微量稀释试验测定了该病原菌对药物的敏感性和抗菌药物与天然化合物的联合抑菌作用。结果显示:该病原菌为维氏气单胞菌(Aeromonas veronii),对妥布霉素、氟苯尼考等药物敏感,对头孢拉定、阿莫西林、恩诺沙星等药物耐药。联合药敏试验发现恩诺沙星与异土木香内酯联合使用具有协同抑菌作用(FICI <0. 5)。结果表明,分离株JZ15062301是对日本医蛭具有致病性的多重耐药维氏气单胞菌,异土木香内酯和恩诺沙星联合用药为耐药性维氏气单胞菌的控制提供了新的思路。 展开更多
关键词 日本医蛭(Hirudo nipponia) 维氏气单胞菌(Aeromonas veronii) 恩诺沙星 天然化合物
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一株具水霉抑制特性的芽孢杆菌筛选及其分子生物学鉴定 被引量：6
14
作者 宋增福 范斌 +4 位作者 佘林荣 唐磊 赵世林 吕利群 杨先乐 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2012年第3期28-31,共4页
以水霉菌(Saprolegnia ferax)的生物防治为切入点,通过对本实验室保存的9株芽孢杆菌(Bacillus spp.)与水霉菌JL菌株进行对峙拮抗试验,筛选出具有明显抑制水霉菌JL菌株的芽孢杆菌BA1(P<0.05)。经进一步测定菌株BA1对不同来源水霉菌株... 以水霉菌(Saprolegnia ferax)的生物防治为切入点,通过对本实验室保存的9株芽孢杆菌(Bacillus spp.)与水霉菌JL菌株进行对峙拮抗试验,筛选出具有明显抑制水霉菌JL菌株的芽孢杆菌BA1(P<0.05)。经进一步测定菌株BA1对不同来源水霉菌株试验,结果显示菌株BA1对水霉菌株6#、10#、S2也有明显的抑制作用(P<0.05)。通过测定菌株BA1的16 S rDNA,利用BLAST软件进行同源性比对,发现与蜡样芽孢杆菌的同源性在99%以上。由此推测,菌株BA1为蜡样芽孢杆菌菌株,且具有明显抑制水霉菌作用,可以作为水产养殖上水霉病防治的生物制剂使用。 展开更多
关键词 水霉菌(Saprolegnia ferax) 芽孢杆菌(Bacillus sp.) 抑菌试验 分子生物学鉴定
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杂交鲶维氏气单胞菌鉴定及联合药敏试验研究 被引量：6
15
作者 董靖 丁浩 +5 位作者 胥宁 刘永涛 杨移斌 杨秋红 宋怿 艾晓辉 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期897-901,共5页
为对从四川眉山发病的杂交鲶分离的一株优势菌株(MS20150925)进行鉴定,并筛选敏感药物,本研究首先经人工感染试验显示该菌株可以导致杂交鲶的皮肤溃疡和脏器出血,与采集标本症状一致;根据该菌株的生理生化特性和16S rRNA基因测序与系统... 为对从四川眉山发病的杂交鲶分离的一株优势菌株(MS20150925)进行鉴定,并筛选敏感药物,本研究首先经人工感染试验显示该菌株可以导致杂交鲶的皮肤溃疡和脏器出血,与采集标本症状一致;根据该菌株的生理生化特性和16S rRNA基因测序与系统发育树构建对该菌株进行了鉴定;分别采用平板扩散法和二倍稀释法测定了抗生素和中药单体对该菌株的体外抑菌活性,并研究了抗生素与天然化合物的联合抑菌作用。结果显示,该菌株为维氏气单胞菌,其对氟苯尼考、恩诺沙星、磺胺异噁唑等药物较为敏感,对多西环素、新霉素、诺氟沙星、青霉素、阿奇霉素等药物耐药。联合药敏试验结果显示,新霉素、多西环素与二氢杨梅素具有协同抑菌作用(FICI<0.5)。以上研究表明,分离株MS20150925对杂交鲶具有致病性且为多重耐药菌,二氢杨梅素与新霉素或多西环素的复方制剂可以作为治疗该病的候选药物,联合用药可以降低抗生素的治疗剂量,对于降低抗生素残留和延长药物使用寿命有重要意义。 展开更多
关键词 杂交鲶 维氏气单胞菌 多西环素 新霉素
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真鲷虹彩病毒实时定量PCR检测方法的建立与应用 被引量：5
16
作者 赵玉然 谭乐义 +7 位作者 刘荭 赵巍 梁成珠 史秀杰 徐彪 朱来华 何俊强 岳志芹 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2011年第2期111-116,共6页
以真鲷虹彩病毒(Red-sea breamiridovirus,RSIV)主要衣壳蛋白(Major capsid protein,MCP)的基因保守片段为靶序列,利用Pri mer Express3.0软件设计定量PCR引物,建立了RSIV的SYBR GreenⅠ实时定量PCR检测方法。将RSIV MCP基因连接pMD18-... 以真鲷虹彩病毒(Red-sea breamiridovirus,RSIV)主要衣壳蛋白(Major capsid protein,MCP)的基因保守片段为靶序列,利用Pri mer Express3.0软件设计定量PCR引物,建立了RSIV的SYBR GreenⅠ实时定量PCR检测方法。将RSIV MCP基因连接pMD18-T载体,构建重组质粒,经过梯度稀释后作为标准品,根据标准品拷贝数(X)与Ct值的关系绘制了标准曲线,为Ct=-3.1841gX+40.270,相关系数R2=0.9969。熔解曲线分析表明,定量PCR产物的Tm值为82.5℃。该方法的检测限为2.20×102拷贝/反应,对流行性造血器官坏死病毒、淋巴囊肿病毒、蛙病毒3、甲鱼虹彩病毒都没有扩增反应,具有特异性。利用该方法对84批海水鱼类(石鲽、大菱鲆、鲈鱼)进行检测,其中5批鱼样品感染RSIV,并利用标准曲线对病毒含量进行了定量分析。 展开更多
关键词 真鲷虹彩病毒 实时定量PCR 衣壳蛋白基因 SYBR GreenⅠ
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鱼用哈维氏弧菌亚单位缓释微球口服疫苗的免疫效果初探 被引量：4
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作者 任燕 石存斌 +3 位作者 李宁求 潘厚军 陶家发 吴淑勤 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第z1期48-52,共5页
通过复乳化-溶剂挥发技术,采用生物可降解性高分子材料聚-DL-乳酸-聚乙二醇共聚物(PELA)包裹哈维氏弧菌(Vibrio harveyi,Vh)重组外膜蛋白OmpK,制成缓释微球颗粒疫苗,口服免疫鲫鱼,测定其血清的凝集效价和相对免疫保护率.结果表明,制备... 通过复乳化-溶剂挥发技术,采用生物可降解性高分子材料聚-DL-乳酸-聚乙二醇共聚物(PELA)包裹哈维氏弧菌(Vibrio harveyi,Vh)重组外膜蛋白OmpK,制成缓释微球颗粒疫苗,口服免疫鲫鱼,测定其血清的凝集效价和相对免疫保护率.结果表明,制备的缓释微球疫苗直径＜10μm,且以粒径＜5μm的微球居多;微球中重组外膜蛋白OmpK包裹率达78.3%.鲫鱼口服微球疫苗2周后,血清抗体水平持续上升,第5周血清凝集抗体效价可达到与佐剂注射组相当的水平(28),抗体高峰期比注射组长1～2周,且降低较慢;免疫4周后用活菌攻击,口服组具有69.4%的相对免疫保护率,而对照组死亡率高达98%.结论为采用可生物降解的缓释微球作为鱼类亚单位口服疫苗的载体系统是可行的. 展开更多
关键词 哈维氏弧菌 重组外膜蛋白 口服疫苗 缓释微球 免疫应答
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呋喃唑酮对饲养水及草鱼体表粘液中菌群的影响 被引量：6
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作者 陈孝煊 吴志新 +2 位作者 罗宇良 高海章 陈喜群 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第1期68-71,共4页
对饲养水中泼洒不同浓度（０．２ｍｇ／Ｌ、０．５ｍｇ／Ｌ和１．０ｍｇ／Ｌ）的呋喃唑酮后，研究了饲养水及草鱼体表粘液中好氧与兼性厌氧细菌的数量及组成变化。结果表明：用药前，饲养水及粘液中的菌群主要有Ａｅｒｏｍｏｎａｓ、Ｅ... 对饲养水中泼洒不同浓度（０．２ｍｇ／Ｌ、０．５ｍｇ／Ｌ和１．０ｍｇ／Ｌ）的呋喃唑酮后，研究了饲养水及草鱼体表粘液中好氧与兼性厌氧细菌的数量及组成变化。结果表明：用药前，饲养水及粘液中的菌群主要有Ａｅｒｏｍｏｎａｓ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ、Ｖｉｂｒｉｏ、Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｕｓ和Ｂａｃｉｌｕｓ，此外，水体中还检测到Ｍｉｃｒｏｃｏｃｕｓ和Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ。水体及粘液中的细菌数量在用药后１２ｈ或２４ｈ时降至最低，在４８ｈ或９６ｈ时恢复到原来的水平。用药后，水体及粘液中的优势菌群未发生改变，但Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ的比例显著增加，Ａｅｒｏｍｏｎａｓ、Ｖｉｂｒｉｏ和Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ明显减少，Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ和Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ则未能检测到，其他各类群的比例也有一定的变化。菌群的变化速度与用药浓度有关。 展开更多
关键词 草鱼粘液 饲养水 菌群 呋喃唑酮
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微生态制剂A对罗非鱼生长及消化酶活性的影响 被引量：13
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作者 牟洪生 劳惠燕 +1 位作者 齐振雄 李续娥 《华南师范大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2010年第2期112-115,共4页
以奥尼罗非鱼为试验对象,考察以枯草芽孢杆菌和紫色非硫光合菌为主要成分制成的微生态制剂A对罗非鱼生长及消化酶活性的影响.结果显示:与对照组相比,饲料中添加微生态制剂A能够降低罗非鱼养殖饵料系数16.91%,体质量提高9.78%;能显著或... 以奥尼罗非鱼为试验对象,考察以枯草芽孢杆菌和紫色非硫光合菌为主要成分制成的微生态制剂A对罗非鱼生长及消化酶活性的影响.结果显示:与对照组相比,饲料中添加微生态制剂A能够降低罗非鱼养殖饵料系数16.91%,体质量提高9.78%;能显著或非常显著地提高罗非鱼胃、肠道和肝脏中的淀粉酶活性(P<0.05或P<0.01)和脂肪酶活性(P<0.05或P<0.01);能够显著提高罗非鱼肠道胰蛋白酶的活性(P<0.05).可见,微生态制剂A有降低罗非鱼养殖饵料系数和促进生长的作用. 展开更多
关键词 微生态制剂 罗非鱼 消化酶
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恩诺沙星在日本鳗鲡体内残留消除规律研究 被引量：23
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作者 张德云 匡维华 郑映钦 《水产科学》 CAS 北大核心 2007年第4期210-213,共4页
采用高效液相色谱法检测日本鳗鲡肌肉、血清、肠、鳃和肝脏组织中恩诺沙星及其代谢物环丙沙星的残留。方法的日内和日间变异系数分别为1.86%和2.53%,标准添加回收率为（95±6）%;最低测量限为1.0μg/kg。用现场试验方法研究恩诺沙... 采用高效液相色谱法检测日本鳗鲡肌肉、血清、肠、鳃和肝脏组织中恩诺沙星及其代谢物环丙沙星的残留。方法的日内和日间变异系数分别为1.86%和2.53%,标准添加回收率为（95±6）%;最低测量限为1.0μg/kg。用现场试验方法研究恩诺沙星在鳗鱼体内的代谢残留规律。对约50 g鳗鱼按9 mg/kg鱼体重每天给药2次,连续投喂7 d。给药期间鳗鱼体内的药物含量呈锯齿状上升,停药60 d后鳗鱼肠、鳃和肝脏组织中药物即下降至1~5μg/kg。肌肉和血清中药物残留到90 d,分别消除至3μg/kg和4μg/kg。所测组织的药物残留至停药120 d后降到检测限以下。故鳗鱼的停药期不应低于120 d。 展开更多
关键词 恩诺沙星 日本鳗鲡 残留 高效液相色谱法
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