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我国禽流感流行趋势和疫苗研究现状 被引量：3
1
作者 张涛 张家豪 +1 位作者 廖明 亓文宝 《中国家禽》 北大核心 2025年第5期141-151,共11页
禽流感病毒(AIV)作为一种传染性强、突变率高的人兽共患病病原体,给我国养禽业造成巨大的隐患和损失,更对人类健康造成了严重威胁。多年来,尽管我国已经实施了诸如扑杀、强制免疫、封锁疫区等一系列传统和新型的策略来防止AIV在家禽中传... 禽流感病毒(AIV)作为一种传染性强、突变率高的人兽共患病病原体,给我国养禽业造成巨大的隐患和损失,更对人类健康造成了严重威胁。多年来,尽管我国已经实施了诸如扑杀、强制免疫、封锁疫区等一系列传统和新型的策略来防止AIV在家禽中传播,但是AIV在国内仍然散发流行。目前,疫苗接种仍然是防控禽流感的最有效方法,禽流感灭活疫苗已获准在养禽业中大规模生产使用,而其他新型疫苗也正在研发中。文章阐述了禽流感灭活疫苗、弱毒疫苗、亚单位疫苗、病毒载体疫苗、核酸疫苗和通用疫苗的研发策略及研究现状,并分析了不同类型疫苗的优缺点,为禽流感疫苗的研发提供参考。 展开更多
关键词 禽流感病毒 家禽 免疫 防控 疫苗
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耐药基因blaNDM、mcr-1和cfr三重TaqMan qPCR检测方法的建立及应用 被引量：1
2
作者 杨威 于海航 +7 位作者 王芸萌 王珏 韩昱 胡晓悦 谌志伟 卢军霞 高英 张宁 《中国兽医学报》 北大核心 2025年第2期243-248,273,共7页
为实现同时检测blaNDM、mcr-1和cfr 3种耐药基因的方法。通过构建质粒标准品、对引物及探针设计和优化反应体系及条件,成功建立blaNDM、mcr-1和cfr三重荧光定量PCR检测方法。该方法能特异性地检出blaNDM、mcr-1和cfr,而对其他耐药基因... 为实现同时检测blaNDM、mcr-1和cfr 3种耐药基因的方法。通过构建质粒标准品、对引物及探针设计和优化反应体系及条件,成功建立blaNDM、mcr-1和cfr三重荧光定量PCR检测方法。该方法能特异性地检出blaNDM、mcr-1和cfr,而对其他耐药基因均不能检出;3个耐药基因标准曲线的相关系数(R2)均大于0.999,变异系数(Cv)均低于1%;质粒标准品最低检出限值均为10^(2) copies/μL。使用建立的方法对800份细菌样本进行检测,结果显示,含耐药基因mcr-1样本32份、只含耐药基因blaNDM样本40份、只含耐药基因cfr样本2份;同时含有耐药基因mcr-1和blaNDM的样本8份,未检出同时携带3种耐药基因的细菌样本。以上结果证实,本研究建立的三重荧光定量PCR方法具有灵敏性高、特异性强及稳定性好的优点,适用于临床上快速检测blaNDM、mcr-1和cfr 3种耐药基因,为细菌多重耐药基因的检测和控制提供技术支持。 展开更多
关键词 blaNDM mcr-1 CFR 耐药基因 多重荧光定量PCR
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非洲猪瘟病毒五基因缺失株的发现与分离鉴定 被引量：1
3
作者 戈胜强 左媛媛 +7 位作者 路皓东 初薛霏 吕艳 徐天刚 于家荣 李金明 蔡玉梅 王志亮 《中国动物检疫》 2025年第4期78-83,共6页
非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)引起的高度致死性传染病,从1921年首次被发现至今,一直在全球范围内传播。研究表明,ASFV强毒株在传代细胞上连续传代会使其毒力降低,这为研发ASFV... 非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)引起的高度致死性传染病,从1921年首次被发现至今,一直在全球范围内传播。研究表明,ASFV强毒株在传代细胞上连续传代会使其毒力降低,这为研发ASFV弱毒疫苗提供了重要思路。但在原代细胞上多次传代发生基因丢失的相关研究未见报道。本研究将ASFV强毒株在原代猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophage,PAM)上连续传代,发现一株ASFV多基因家族(MGFs)基因缺失毒株,并对其进行了分离纯化。全基因组测序结果显示,该分离株在MGF360和MGF505处有5个基因的缺失,且缺失区域位于ASFV MGFs基因研究的热点区域。体外验证表明,该基因缺失株与母本毒株复制能力相似,会在与母本野毒的混合增殖扩繁中稳定存在。提示ASFV在种子批毒制备过程中应保持较低的传代次数,以防基因缺失毒株出现。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 基因缺失 稳定增殖 病毒纯化
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水禽细小病毒LAMP及其可视化通用检测方法的建立
4
作者 戴银 周慧琴 +9 位作者 谷思琴 胡晓苗 王洁茹 殷冬冬 尹磊 沈学怀 潘孝成 赵瑞宏 周学利 侯宏艳 《中国兽医杂志》 北大核心 2025年第7期63-68,共6页
为了建立鹅细小病毒(GPV)和番鸭细小病毒(MDPV)通用的检测方法,本试验以GPV和MDPV两种水禽细小病毒的NS基因保守序列作为靶标,设计了1组特异性引物,优化建立了水禽细小病毒的环介导等温扩增(LAMP)和LAMP-羟基萘酚蓝(HNB)可视化通用检测... 为了建立鹅细小病毒(GPV)和番鸭细小病毒(MDPV)通用的检测方法,本试验以GPV和MDPV两种水禽细小病毒的NS基因保守序列作为靶标,设计了1组特异性引物,优化建立了水禽细小病毒的环介导等温扩增(LAMP)和LAMP-羟基萘酚蓝(HNB)可视化通用检测方法,并对2种方法的特异性和灵敏性进行检测。采用常规PCR、LAMP和LAMP-HNB对10份水禽临床样品进行检测,以评估2种方法的实用性。结果显示,LAMP方法的最佳反应温度为65℃、反应时间为60 min。2种方法仅能扩增GPV和MDPV,而对其他5种常见水禽病毒的检测结果均为阴性,最低检出浓度均为1×10-5ng/μL。2种方法与常规PCR的检测结果一致,符合率达100%。结果表明,建立的LAMP方法和LAMP-HNB可视化方法具有灵敏性好、特异性高、仪器要求低和可视化等优点,可为水禽细小病毒的现场快速检测提供技术支撑。 展开更多
关键词 鹅细小病毒(GPV) 番鸭细小病毒(MDPV) NS基因 环介导等温扩增(LAMP) 可视化
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信阳地区散养土鸡禽白血病病毒和马立克病病毒混合感染的分子生物学诊断
5
作者 李迎晓 尹磊 +4 位作者 赵瑜 董建国 何书海 曲哲会 焦凤超 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第2期844-854,共11页
[目的]了解信阳地区散养土鸡群中禽白血病病毒(Avian leukosis virus, ALV)与马立克病病毒(Marek’s disease virus, MDV)混合感染及其遗传进化情况。[方法]对送检的疑似ALV与MDV混合感染的病鸡进行病理解剖,使用特异性引物进行PCR扩增... [目的]了解信阳地区散养土鸡群中禽白血病病毒(Avian leukosis virus, ALV)与马立克病病毒(Marek’s disease virus, MDV)混合感染及其遗传进化情况。[方法]对送检的疑似ALV与MDV混合感染的病鸡进行病理解剖,使用特异性引物进行PCR扩增,并对J亚群ALV(ALV-J)gp85基因与MDV meq基因进行扩增测序,使用MegAlign软件进行核苷酸、氨基酸序列相似性比对以及氨基酸变异位点分析。利用Mega 11.0软件构建gp85、meq氨基酸序列系统进化树。[结果]送检发病鸡腺胃、脾脏肿大,肝脏出现弥漫性肿大并伴有灰白色结节。ALV-J gp85与MDV 132-bpr基因PCR扩增结果均为阳性,分别获得545、317 bp目的条带。测序比对结果显示,扩增序列分别与ALV-J分离株GX12NN04 gp85基因(登录号:KT598488)和MDV-1型分离株YLO40920 meq基因(登录号:DQ174459)高度相似,相似性分别为94.6%和99.9%,初步确定分离株为ALV-J和MDV,并分别命名为HN23XY01-ALV、HN23XY01-MDV。核苷酸序列分析结果显示,HN23XY01-ALV gp85基因与13株ALV-J参考毒株核苷酸序列相似性为92.1%~94.6%;HN23XY01-MDV meq基因与14株MDV参考毒株的核苷酸序列相似性为99.3%~99.9%。氨基酸序列分析结果显示,HN23XY01-ALV gp85与13株ALV-J参考毒株氨基酸序列相似性为87.4%~91.4%,HN23XY01-MDV与14株MDV参考毒株的氨基酸序列相似性为97.9%~99.7%。系统进化树结果显示,HN23XY01-ALV与ALV-J亲缘关系较近,处于同一进化分支;HN23XY01-MDV与广西分离株GXY2、YLO40920、GX20NN2和河南分离株HNSC105处于同一个分支,与疫苗株CVI988、814和CU-2亲缘关系较远。氨基酸变异位点分析结果显示,HN23XY01-ALV存在D(E)65Y、Q(K/R)75L、A(T)76S、R(T)119K、T(M/A)219K氨基酸位点突变;HN23XY01-MDV存在K77E、D80Y、T139A、P176R和P217A氨基酸位点突变,且含有疫苗株所缺失的第193位脯氨酸,与MDV-1型强毒株的特征相符合。[结论]本研究从信阳地区散养土鸡群中检测到ALV-J与MDV混合感染,结果为当地土鸡ALV-J与MDV协同致病机制研究以及混合感染的疫情防控提供重要参考。 展开更多
关键词 禽白血病病毒(ALV) 马立克病病毒(MDV) GP85基因 MEQ基因 混合感染
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GM-CSF和IL-6的免疫佐剂活性及对小鼠生长性能、血液指标的影响
6
作者 成伟伟 容维中 +5 位作者 杨明 李元新 赵子惠 陈伯祥 王佳 周瑶 《饲料工业》 北大核心 2025年第1期95-102,共8页
为验证粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素6(IL-6)的免疫佐剂活性以及研究其对小鼠生长性能、血液指标的影响,试验扩增了GM-CSF基因和IL-6基因,并将GMCSF基因和IL-6基因分别克隆至载体p CDNA3.1-His-C和p ET-32a(+),且诱... 为验证粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素6(IL-6)的免疫佐剂活性以及研究其对小鼠生长性能、血液指标的影响,试验扩增了GM-CSF基因和IL-6基因,并将GMCSF基因和IL-6基因分别克隆至载体p CDNA3.1-His-C和p ET-32a(+),且诱导表达了IL-6蛋白。将构建的GM-CSF基因的重组载体、诱导表达的IL-6重组蛋白联合畜禽疫病防控技术研发课题组前期构建的TGEV DNA疫苗载体p-N-His分组免疫小鼠(设置p-N-His为对照),运用间接ELISA检测了特异性抗体水平。将构建的重组载体、诱导表达的重组蛋白和PBS分组免疫小鼠,测定了小鼠的生长性能、血清指标和免疫器官指数。结果显示,克隆的GM-CSF和IL-6基因大小分别为579 bp和576 bp,成功构建了真核表达载体p-GM-CSF和原表达载体p ET-IL-6,诱导表达的IL-6重组蛋白大小为38 ku。载体p-GM-CSF、IL-6蛋白联合p-N-His免疫小鼠后,p-N-His+p-GM-CSF、p-N-His+IL-6蛋白和p-N-His均刺激机体产生了特异性抗体,且p-N-His+IL-6蛋白抗体水平高于p-N-His+p-GM-CSF(P<0.05)。IL-6蛋白、p-GM-CSF和PBS分组免疫小鼠后,p-GM-CSF和IL-6蛋白组小鼠的生长性能指标均高于PBS组,且末重、平均日增重、料重比差异显著(P<0.05)。p-GM-CSF、IL-6蛋白、PBS组小鼠的生化指标总蛋白、白蛋白、球蛋白、尿素氮的含量差异均不显著(P>0.05),但IL-6蛋白组小鼠的葡萄糖显著升高(P<0.05),p-GM-CSF、IL-6蛋白、PBS组小鼠的免疫器官指数差异均不显著(P>0.05)。文章以p-N-His为靶载体验证出GM-CSF和IL-6具有较强免疫佐剂活性,且IL-6蛋白的效果强于GM-CSF。p-GM-CSF和IL-6蛋白能够提升小鼠的生长性能指标,对血液指标和免疫器官指数影响不大。 展开更多
关键词 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 白细胞介素6 免疫佐剂活性 生长性能 血液指标
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九三某牛场奶牛临床型乳腺炎金黄色葡萄球菌的分离鉴定及药物敏感性分析 被引量：1
7
作者 李鹤 潘顺圆 +2 位作者 宋军 王超 韩齐 《黑龙江八一农垦大学学报》 2025年第3期31-36,52,共7页
为了对患有乳房炎的病牛进行病原菌的分离与鉴定、分析其致病性、评估药物敏感性以及提供临床用药指导,研究从黑龙江省嫩江市九三管理局某牧场的3头乳房炎病牛的奶样中分离纯化病原菌。采用PCR法、细菌生化反应试验、细菌鉴定仪鉴定、... 为了对患有乳房炎的病牛进行病原菌的分离与鉴定、分析其致病性、评估药物敏感性以及提供临床用药指导,研究从黑龙江省嫩江市九三管理局某牧场的3头乳房炎病牛的奶样中分离纯化病原菌。采用PCR法、细菌生化反应试验、细菌鉴定仪鉴定、小鼠致病性试验、病理组织学鉴定及药敏试验等多种方法,对病原菌进行了菌株分离鉴定、致病性分析及药物敏感性研究。实验结果显示,成功分离的9株金黄色葡萄球菌经鉴定对小鼠表现出明确致病性。此外,这些病原菌对临床常用药物如阿莫西林、氨苄西林和青霉素显示出高度的敏感性。同时,苯唑西林、头孢西丁和利福平等药物也能够有效地抑制这些分离出的金黄色葡萄球菌的生长。将药敏实验的结果反馈给相关牛场后,采用阿莫西林和青霉素对患病奶牛进行治疗,观察到乳房炎症状有显著改善。这些实验结果为临床上治疗奶牛乳房炎提供了有价值的参考依据。 展开更多
关键词 奶牛乳房炎 金黄色葡萄球菌 分离鉴定 药敏试验
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猪伪狂犬病病原学检测诊断技术及应用 被引量：1
8
作者 郭广君 吕素芳 +2 位作者 贾仰波 魏凤 杨新忠 《现代畜牧科技》 2025年第5期120-122,共3页
该文就猪伪狂犬病研究发展历史、近年新发变异毒株流行情况、临床特征、分子诊断技术、防控措施等研究进行重点论述,以期为推动PRV净化,促进产业持续健康发展提供理论支持。
关键词 猪伪狂犬病 分子诊断技术 重组酶聚合酶方法
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pAPN过表达Vero细胞系构建及其对PEDV复制的影响
9
作者 陈秋勇 孙志华 +7 位作者 陈如敬 吴学敏 吴仁杰 丘镜莉 何冰 刘玉涛 王隆柏 周伦江 《中国兽医学报》 北大核心 2025年第2期181-186,共6页
猪氨肽酶N(porcine aminopeptidase N,pAPN)是一种锌金属蛋白酶,介导病毒与宿主细胞融合,是冠状病毒的细胞受体之一。为探究pAPN对猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)复制的影响,本研究从小肠组织中扩增出pAPN基... 猪氨肽酶N(porcine aminopeptidase N,pAPN)是一种锌金属蛋白酶,介导病毒与宿主细胞融合,是冠状病毒的细胞受体之一。为探究pAPN对猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)复制的影响,本研究从小肠组织中扩增出pAPN基因全长,通过限制性内切酶同源位点克隆到慢病毒载体中,获得携带pAPN基因的慢病毒载体PLVX-pAPN-mCMV-ZsGreen1-puro,在293T细胞中包装形成表达pAPN的慢病毒,将慢病毒感染Vero细胞,用嘌呤霉素加压筛选阳性细胞,采用有限稀释法筛选出稳定表达的Vero-pAPN细胞系,并通过测定N基因mRNA转录水平、N蛋白表达水平和TCID50水平差异情况来验证该细胞系对PEDV复制的影响。结果显示,本研究构建的慢病毒能够感染Vero细胞,亚克隆筛选到的单克隆细胞株Vero-pAPN(2C5)能够稳定过表达pAPN;该细胞系能够促进PEDV复制,在12~48 h内N基因mRNA转录水平差异显著(P<0.05)、N蛋白表达水平均提高,TCID50在24和48 h差异显著(P<0.05)。本研究构建了Vero-pAPN细胞系,pAPN在Vero细胞中过表达能够促进PEDV复制,该细胞系可作为疫苗高效生产和临床样本分离的候选细胞系。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 猪氨基肽酶 病毒增殖 非洲绿猴肾细胞
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mRNA疫苗-分子设计、递呈及免疫活化的分子机制
10
作者 陈慧敏 刘飞飞 +2 位作者 尚珂 张春杰 陈松彪 《中国人兽共患病学报》 北大核心 2025年第2期186-192,共7页
疫苗免疫是防控传染病最有效且性价比最优的途径。2019年末新型冠状病毒肺炎(COVID-19,简称新冠)爆发以来,第三代颠覆性创新-mRNA核酸疫苗在阻击新冠道路上大放异彩。mRNA疫苗突破了传统疫苗的免疫激活模式,创新性地利用人体自身细胞生... 疫苗免疫是防控传染病最有效且性价比最优的途径。2019年末新型冠状病毒肺炎(COVID-19,简称新冠)爆发以来,第三代颠覆性创新-mRNA核酸疫苗在阻击新冠道路上大放异彩。mRNA疫苗突破了传统疫苗的免疫激活模式,创新性地利用人体自身细胞生产抗原,以此激活双重特异性免疫,形成免疫记忆,提供更持久的特异性免疫。相较于传统第一代(灭活疫苗)和第二代疫苗(基因工程疫苗),mRNA疫苗借助其平台化优势,在重大突发性传染病防控中发挥重要作用,成为全球首个进入临床的新冠疫苗,是疫苗研发领域风向标。本文主要针对mRNA疫苗分子设计、递呈以及其激活机体免疫应答的分子机制进行综述,旨在为后续新型mRNA疫苗在动物传染病防控中的应用提供理论依据。 展开更多
关键词 mRNA疫苗 分子设计 递呈 免疫活化 动物传染病
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2021年浙江省猪群A型塞内卡病毒流行病学调查及分析
11
作者 孙冰冰 董建斐 +5 位作者 王雅婷 陈伟良 张传亮 赵灵燕 徐辉 张红丽 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第3期202-206,共5页
为了解浙江省猪A型塞内卡病毒(SVA)流行情况,本研究采用ELISA和荧光定量RT-PCR方法对2021年全省采集的3840份血清样品和937份组织样品进行血清学与病原学检测,分析空间、群间及混合感染情况。结果显示,2021年SVA抗体个体阳性率、场群阳... 为了解浙江省猪A型塞内卡病毒(SVA)流行情况,本研究采用ELISA和荧光定量RT-PCR方法对2021年全省采集的3840份血清样品和937份组织样品进行血清学与病原学检测,分析空间、群间及混合感染情况。结果显示,2021年SVA抗体个体阳性率、场群阳性率分别为2.03%、19.35%,病原阳性率、场群阳性率分别为4.38%、11.45%。空间分布上,全省5个地区均有阳性检出,浙中、浙东地区的抗体个体阳性率显著高于其他地区,病原阳性率浙西显著高于浙东。群间分布上,屠宰场抗体个体阳性率高于养殖场,但场群阳性率低于养殖场,健康猪群的病原阳性率与非健康猪群差异明显(P<0.01)。混合感染情况,63.64%的阳性群体与PCV2混合感染,27.27%的阳性群体与PCV2、PRRSV混合感染。结果表明,SVA感染在我省分布较广,多为隐性感染,且混合感染比例较高,需加强监测,做好防控措施。 展开更多
关键词 塞内卡病毒 流行 隐性感染 混合感染
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兔出血症病毒RHDV1和RHDV2一步法双重TaqMan探针荧光定量RT-PCR体系的建立和应用
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作者 陈萌萌 王冠萱 +8 位作者 仇汝龙 范志宇 胡波 宋艳华 魏后军 徐为中 葛雷 李一鸣 王芳 《江苏农业学报》 北大核心 2025年第5期937-942,共6页
兔出血症病毒(RHDV)引起的兔出血症是一种急性、高度致死性传染病,对养兔业造成严重危害。本研究基于RHDV衣壳蛋白(VP60)基因序列设计引物和TaqMan探针,建立可同时检测RHDV1和RHDV2两种毒株的双重TaqMan荧光定量RT-PCR检测体系。反应体... 兔出血症病毒(RHDV)引起的兔出血症是一种急性、高度致死性传染病,对养兔业造成严重危害。本研究基于RHDV衣壳蛋白(VP60)基因序列设计引物和TaqMan探针,建立可同时检测RHDV1和RHDV2两种毒株的双重TaqMan荧光定量RT-PCR检测体系。反应体系:2×One Step RT-PCR BufferⅢ10.0μL,上下游引物(10μmol/L)各0.6μL,ROX Reference DyeⅡ(50×)0.4μL,两种荧光探针(10μmol/L)各0.8μL,待测样本2.0μL,ddH_(2)O 4.8μL。反应程序:42℃5 min,95℃10 s,95℃5 s,60℃30 s,40个循环。试验结果表明,该体系特异性强,与轮状病毒、兔多杀性巴氏杆菌、兔支气管败血波氏菌、绿脓杆菌、沙门氏菌无交叉反应;灵敏度高,最低检测限为1μL 100拷贝。通过组内重复和组间重复进行重复性分析,Ct值变异系数为0.2%~2.9%,表明该体系稳定性较好。使用该体系对112份临床样本(60份肝脏组织、52份鼻肛拭子)进行检测,RHDV总检出率为69%,而常规RT-PCR体系的检出率仅为51%。本研究建立的双重荧光定量RT-PCR方法具有高灵敏度、强特异性和良好的重复性,可为RHDV的临床快速诊断及定量分析提供可靠技术支持。 展开更多
关键词 兔出血症病毒 荧光定量RT-PCR TAQMAN探针
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鸭甲型肝炎活疫苗胚胎免疫试验
13
作者 刘青涛 卢凤英 +8 位作者 朱晓玮 周永银 闵兰 郝东敏 钟洪义 汪建华 杨婧 吴凤瑶 张小飞 《中国家禽》 北大核心 2025年第7期153-158,共6页
为评估鸭甲型肝炎活疫苗胚胎免疫保护效果,试验对不同品种的25胚龄鸭胚进行胚内注射免疫鸭甲型肝炎活疫苗,分别在出壳后1日龄、3日龄、5日龄采用鸭甲型肝炎病毒进行攻毒。结果显示:1型鸭甲型肝炎活疫苗胚内免疫的雏鸭对1型强毒的攻毒保... 为评估鸭甲型肝炎活疫苗胚胎免疫保护效果,试验对不同品种的25胚龄鸭胚进行胚内注射免疫鸭甲型肝炎活疫苗,分别在出壳后1日龄、3日龄、5日龄采用鸭甲型肝炎病毒进行攻毒。结果显示:1型鸭甲型肝炎活疫苗胚内免疫的雏鸭对1型强毒的攻毒保护率均在90%以上,3型鸭甲型肝炎活疫苗胚内免疫的雏鸭对3型强毒的攻毒保护率均在80%以上,1型和3型鸭甲型肝炎活疫苗胚内联合免疫的雏鸭对1型和3型强毒的攻毒保护率均在80%以上。此外,胚内免疫对出雏率无不良影响,雏鸭的采食、饮水、精神状态正常,14日龄剖检肝脏无异常。研究表明,1型和3型鸭甲型肝炎活疫苗胚胎免疫具有良好的免疫保护效果,为鸭甲型肝炎防控提供了一种新的免疫途径。 展开更多
关键词 鸭甲型肝炎活疫苗 鸭胚 胚胎免疫 保护率
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小反刍兽疫病毒RT-RPA-LFD快速检测方法的建立
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作者 康新华 韩庆彦 +3 位作者 毋艳萍 牛琼 赵雯 高军军 《中国草食动物科学》 北大核心 2025年第5期27-32,共6页
为建立适用于小反刍兽疫病毒(PPRV)的临床快速检测方法,本研究基于PPRV N基因序列设计并筛选引物与探针,通过优化逆转录-重组酶聚合酶扩增(RT-RPA)反应体系的温度和时间,联合侧向层析试纸条(LFD)构建RT-RPA-LFD检测方法,并系统评价其性... 为建立适用于小反刍兽疫病毒(PPRV)的临床快速检测方法,本研究基于PPRV N基因序列设计并筛选引物与探针,通过优化逆转录-重组酶聚合酶扩增(RT-RPA)反应体系的温度和时间,联合侧向层析试纸条(LFD)构建RT-RPA-LFD检测方法,并系统评价其性能。结果表明,该方法在42℃反应15 min即可完成扩增,并可通过LFD实现结果的可视化。其灵敏度为10拷贝/μL,与常规RT-PCR灵敏度相当。对山羊传染性胸膜肺炎、绵羊支原体和丝状支原体山羊亚种等其他病原体无交叉,批间和批内重复试验均呈现出理想的检测结果,且临床样本检测结果与荧光RT-PCR检测结果的符合率达100%。综上所述,本研究建立的RT-RPA-LFD检测方法用时短、操作便捷、兼具高灵敏度与强特异性,且重复性好,适用于小反刍兽疫病毒的现场快速检测。 展开更多
关键词 小反刍兽疫病毒 重组聚合酶扩增 侧向层析试纸条 快速检测
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乌骨鸡禽白血病病毒(ALV)-J的分离鉴定及其gp85基因序列分析
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作者 徐飞 温贵兰 +2 位作者 孙芸 罗东还 赵静 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2025年第5期119-124,共6页
为了确定贵州省某乌骨鸡养殖场病鸡发生肿瘤性疾病的病原,试验首先采集病鸡的心脏、肝脏、脾脏和肾脏等组织样本,采用PCR/RT-PCR方法对禽肿瘤性疾病病原[马立克病毒(Marek’s disease virus,MDV)、禽网状内皮增生病毒(Reticuloendotheli... 为了确定贵州省某乌骨鸡养殖场病鸡发生肿瘤性疾病的病原,试验首先采集病鸡的心脏、肝脏、脾脏和肾脏等组织样本,采用PCR/RT-PCR方法对禽肿瘤性疾病病原[马立克病毒(Marek’s disease virus,MDV)、禽网状内皮增生病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)和禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)-A、ALV-J、ALV-K]核酸进行检测,然后根据核酸检测结果对病毒进行分离培养、ELISA检测和间接免疫荧光鉴定(以鼠抗ALV p27多克隆抗体为一抗、Alexa Fluor标记山羊抗小鼠IgG为二抗),最后对分离株gp85基因核苷酸序列进行分析。结果表明:组织样本仅ALV-J核酸检测结果为阳性,而MDV、REV、ALV-A、ALV-K核酸检测结果均为阴性;分离株经ELISA检测呈ALV p27抗原阳性;在间接免疫荧光试验中,接种病毒液的DF-1细胞胞浆中出现红色荧光,而细胞对照无红色荧光,将分离株命名为GZ23ZY01J。GZ23ZY01J分离株gp85基因与ALV-J参考株的核苷酸序列相似性在95.2%~99.9%之间,其中与我国广西分离株GX14YYA1的相似性最高,为99.9%;与其他亚群参考株的核苷酸序列相似性在38.3%~41.6%之间。GZ23ZY01J分离株位于系统进化树J亚群所在大分支中。说明引起该养殖场乌骨鸡肿瘤性疾病的病原是ALV-J,分离株与广西分离株GX14YYA1高度同源。 展开更多
关键词 乌骨鸡 禽白血病病毒 分离 鉴定 GP85基因 克隆 测序 遗传进化分析
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1株多毒株重组PRRSV的分离鉴定与遗传进化分析
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作者 元娜 邵明珠 +4 位作者 吕凤霞 窦丽娜 李向清 赵宝凯 董世山 《中国兽医杂志》 北大核心 2025年第3期58-65,共8页
为了分析猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)遗传变异特性,本试验对来自山西省某猪场疑似感染PRRSV的母猪血清和仔猪肺脏组织样品进行PRRSV实时荧光定量逆转录PCR(qRT-PCR)检测,阳性肺脏组织样品研磨液接种于猪肺泡巨噬细胞(PAMs),将出现细... 为了分析猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)遗传变异特性,本试验对来自山西省某猪场疑似感染PRRSV的母猪血清和仔猪肺脏组织样品进行PRRSV实时荧光定量逆转录PCR(qRT-PCR)检测,阳性肺脏组织样品研磨液接种于猪肺泡巨噬细胞(PAMs),将出现细胞病变的PAMs进行有限稀释法纯化后用间接免疫荧光(IFA)鉴定,利用逆转录PCR(RT-PCR)分段扩增分离毒株全基因组序列,并用分子生物学软件进行开放阅读框5(ORF5)基因和全基因组的同源性和遗传进化分析、非结构蛋白2(Nsp2)氨基酸特征及全基因组序列的重组分析。结果显示,qRT-PCR检测样品总阳性率为80%(16/20),从PRRSV阳性仔猪肺脏组织中分离获得1株PRRSV,命名为SXZY202301;分离毒株基因组全长15 021 bp,与NADC30毒株的核苷酸同源性达到90.4%,在遗传进化树中处于同一分支,属于Sublineage 1.8;ORF5基因与IA/2014/NADC34毒株的ORF5基因高度相似,同源性达到了95.1%,在遗传进化树中处于同一分支,属于Sublineage 1.5;分离毒株与类NADC30毒株Nsp2氨基酸序列具有相同的131个氨基酸缺失的典型特征;重组分析结果显示,SXZY202301存在6个重组位点,是以类NADC30毒株为主要亲本,以JXA1毒株和类NADC34毒株为次要亲本的多毒株重组类毒株。本试验为进一步研究PRRSV的重组和演化提供参考。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) 分离鉴定 测序分析 遗传进化 重组
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河南省2023年禽流感专项调查分析
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作者 王华俊 刘光辉 +2 位作者 房大学 郭洛生 闫若潜 《上海畜牧兽医通讯》 2025年第1期39-42,共4页
为评估河南省高致病性禽流感免疫抗体水平和野毒流行情况,采用血凝和血凝抑制试验检测血清样品中禽流感免疫抗体,采用荧光反转录PCR(reverse transcription PCR, RT-PCR)方法检测拭子样品中禽流感病毒(avian influencevirus, AIV)核酸... 为评估河南省高致病性禽流感免疫抗体水平和野毒流行情况,采用血凝和血凝抑制试验检测血清样品中禽流感免疫抗体,采用荧光反转录PCR(reverse transcription PCR, RT-PCR)方法检测拭子样品中禽流感病毒(avian influencevirus, AIV)核酸。检测结果显示:河南省高致病性禽流感H5亚型免疫抗体场点合格率、个体合格率分别为92.62%和93.42%,H7N9亚型免疫抗体场点合格率、个体合格率分别为95.30%和95.73%;豫东、豫西、豫南、豫北和豫中禽流感H5亚型、H7N9亚型免疫抗体样品合格率均≥90.00%;种禽场、养殖场H5亚型、H7N9亚型免疫抗体个体合格率均>93.00%;在全部检测场点和个体样品中,均未检出高致病性H5亚型和H7N9亚型AIV核酸阳性,在养殖场、屠宰场、农贸市场的样品中检出低致病性H9亚型AIV核酸阳性,总体阳性率为1.67%。结果表明:河南省高致病性禽流感防控效果显著,低致病性禽流感防控工作有待加强。 展开更多
关键词 禽流感 H5 H7N9 H9 免疫抗体 病毒核酸 监测
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腮腺炎病毒滴度ELISA检测方法的建立及其初步验证
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作者 刘丽 李娟 +3 位作者 刘悦越 赵荣荣 李长贵 权娅茹 《中国生物制品学杂志》 2025年第7期827-832,共6页
目的 建立检测腮腺炎病毒滴度的ELISA方法,并进行验证,以缩短检定时间,为紧急出检提供技术支撑。方法 用腮腺炎疫苗病毒滴定参考品感染Vero细胞,以小鼠腹水为一抗,HRP标记的羊抗鼠IgG为二抗,对Vero细胞接种浓度、病毒接种后离心时间、... 目的 建立检测腮腺炎病毒滴度的ELISA方法,并进行验证,以缩短检定时间,为紧急出检提供技术支撑。方法 用腮腺炎疫苗病毒滴定参考品感染Vero细胞,以小鼠腹水为一抗,HRP标记的羊抗鼠IgG为二抗,对Vero细胞接种浓度、病毒接种后离心时间、病毒感染时间、抗体浓度、封闭条件、固定方法及时间等条件进行优化,建立检测腮腺炎病毒滴度的ELISA方法,并进行特异性、准确性、精密性、线性验证,同时与微量细胞病变法检测结果进行比较。结果 建立的ELISA方法步骤为:将浓度3×10^(5)个/mL的Vero细胞悬液加至96孔细胞培养板培养24 h;加入待测样本和参考品,236×g离心2 h,再继续培养48 h;用4%多聚甲醛固定10 min后,加入PBS-0.5%TritonX-100处理30 min;用5%脱脂奶粉封闭后,加入一抗(1∶1 000稀释)和二抗(1∶2 000稀释);TMB显色,硫酸终止反应,检测A450值。建立的方法对腮腺炎病毒具有良好的特异性;检测不同浓度参考品病毒滴度的相对偏倚(relative bias,RB)均小于10%;不同工作日重复6次检测参考品病毒滴度的变异系数(CV)为3.9%;方法的线性斜率为0.920 6,相关系数(r)为0.993 9。两种方法检测参考品病毒滴度结果差异无统计学意义(t=2.049,P > 0.05)。结论 建立的检测腮腺炎病毒滴度的ELISA方法特异性强,准确性和精密性好,且与微量细胞病变法检测结果具有较好的一致性,可明显缩短检定时间。 展开更多
关键词 腮腺炎病毒 ELISA 病毒滴度 紧急出检
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鸡传染性喉气管炎病毒抗原双抗夹心ELISA方法的建立
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作者 谢晶 于吉锋 +12 位作者 肖璐 吴学婧 叶勇刚 魏勇 李兴玉 曹冶 潘梦 毛从剑 杨竣雁 叶健强 曾子轩 康玮笠 康润敏 《中国动物检疫》 2025年第6期99-105,127,共8页
为建立鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)抗原的检测方法,利用ILTV gJ蛋白的2株单克隆抗体,1株用作捕获抗体,另1株经辣根过氧化物酶(HRP)标记后用作检测抗体,采用棋盘法优化反应条件,建立了一种检测ILTV抗原的双抗夹心ELISA方法,并对其进行了... 为建立鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)抗原的检测方法,利用ILTV gJ蛋白的2株单克隆抗体,1株用作捕获抗体,另1株经辣根过氧化物酶(HRP)标记后用作检测抗体,采用棋盘法优化反应条件,建立了一种检测ILTV抗原的双抗夹心ELISA方法,并对其进行了性能评估。结果显示:捕获抗体的最佳包被质量浓度为2μg/m L,酶标单克隆抗体的最适稀释度为1:4 000;临界值为0.295 6,当待测样品OD_(450 nm)值大于0.295 6且P/N值大于2时,判为阳性;建立的双抗夹心ELISA方法可特异性检测ILTV抗原,而对其他禽类常见抗原的检测结果均为阴性;最低检测限为49.4 ELD_(50)/0.1 mL,批内和批间变异系数均小于10%。48份临床样品的检测结果显示,该方法与行业标准中PCR方法的符合率为93.75%。结果表明,本研究建立的ILTV双抗夹心ELISA方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可用于ILTV抗原检测。该方法的建立为该病的检测、监测以及防控提供了技术支撑。 展开更多
关键词 鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV) 单克隆抗体 双抗夹心ELISA
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湖南怀化地区犬复孔绦虫的流行情况调查、遗传进化特征分析及不同药物的驱虫效果研究
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作者 罗世民 李中波 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2025年第9期89-97,共9页
为调查湖南怀化地区犬复孔绦虫的流行情况,分析其遗传进化特征,并筛选合适的驱虫药物,试验于2022年5月份—2023年10月份采集湖南省怀化市鹤城区、芷江县、中方县、新晃县、麻阳县、洪江市、溆浦县、通道县及会同县等9个地区的新鲜犬粪便... 为调查湖南怀化地区犬复孔绦虫的流行情况,分析其遗传进化特征,并筛选合适的驱虫药物,试验于2022年5月份—2023年10月份采集湖南省怀化市鹤城区、芷江县、中方县、新晃县、麻阳县、洪江市、溆浦县、通道县及会同县等9个地区的新鲜犬粪便468份,采用形态学观察法和饱和糖水漂浮法对粪便中的犬复孔绦虫进行检测、分离,统计不同地区、不同类型犬(流浪犬和宠物犬)粪便样本中犬复孔绦虫的阳性率;从所收集的虫体中选取36条绦虫(每个地区4条)提取虫体基因组DNA后对犬复孔绦虫18S rDNA、线粒体cox1基因进行PCR扩增和测序、同源性分析与种系发育关系分析;挑选出108只粪检呈阳性的犬(每个地区12只),随机分成空白对照组(仅饲喂基础日粮)、吡喹酮处理组[饲喂基础日粮+口服吡喹酮(按体重10 mg/kg,2次/d)]、氯硝柳胺处理组[饲喂基础日粮+口服氯硝柳胺(按体重0.1 g/kg,2次/d)]、丙硫咪唑处理组[饲喂基础日粮+口服丙硫咪唑(按体重25 mg/kg,2次/d)],每组27只,比较各组药物的驱虫效果。结果表明:468份新鲜犬粪便样本中,阳性样本数量为386份,总阳性率为82.48%。怀化市样本阳性率最高的地区为新晃县(93.48%),然后依次为溆浦县(89.58%)、麻阳县(88.71%)、洪江市(83.93%)、中方县(83.33%)、通道县(82.61%)、芷江县(82.00%)、会同县(81.25%)、鹤城区(75.00%)。9个地区流浪犬样本阳性率介于93.33%~100%之间,总阳性率为97.81%,其中芷江县、中方县、新晃县、洪江市、溆浦县和通道县的阳性率最高,鹤城区的阳性率最低;9个地区宠物犬样本阳性率介于56.67%~86.36%之间,总阳性率为70.87%,其中新晃县的阳性率最高,而鹤城区的阳性率最低。36条犬复孔绦虫18S rDNA基因序列呈现GC偏好性,线粒体cox1基因序列呈现AT偏好性。获得的36条犬复孔绦虫18S rDNA基因序列间的核苷酸相似性为98.1%~100%,线粒体cox1基因序列间的核苷酸相似性为96.7%~100%;基于犬复孔绦虫18S rDNA基因和线粒体cox1基因构建的2个种系发育树具有相似的拓扑结构,36条犬复孔绦虫在2个种系发育树中均聚为一个大分支,但分支内部的亚分支结构有所不同。氯硝柳胺组的转阴率最高(96.30%),驱虫效果最好;吡喹酮组的转阴率最低(74.07%),驱虫效果较差。说明犬复孔绦虫在湖南怀化地区普遍流行,且不同地区阳性率存在差异,流浪犬阳性率高于宠物犬,不同虫株18S rDNA基因和线粒体cox1基因的亲缘关系存在差异,氯硝柳胺对犬复孔绦虫的驱虫效果优于吡喹酮和丙硫咪唑。 展开更多
关键词 犬复孔绦虫 流行状况 遗传多样性 种系发育关系 驱虫效果
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