为提高环形泰勒虫转化细胞的转染效率,本研究以环形泰勒虫转化细胞TaNM1为研究对象,通过体外转录(IVT)技术将编码增强绿色荧光蛋白(eGFP)的RNA,经加帽后获得eGFP m RNA,利用脂质体转染至TaNM1细胞,同时分别设置空白组作为阴性对照,脂质...为提高环形泰勒虫转化细胞的转染效率,本研究以环形泰勒虫转化细胞TaNM1为研究对象,通过体外转录(IVT)技术将编码增强绿色荧光蛋白(eGFP)的RNA,经加帽后获得eGFP m RNA,利用脂质体转染至TaNM1细胞,同时分别设置空白组作为阴性对照,脂质体和电转染p-eGFP质粒组作为阳性对照,采用Western-blot、荧光显微镜观察以及流式细胞术检测eGFP蛋白在TaNM1细胞中的表达情况。结果显示,利用脂质体转染eGFP m RNA至TaNM1细胞中,可观察到eGFP绿色荧光,Western-blot同时检测到eGFP蛋白的表达(27 k Da),流式细胞术检测其转染效率可以达到66.22%;利用脂质体转染p-eGFP质粒和电转染p-eGFP质粒均不能在TaNM1细胞诱导表达eGFP,且电转染会引起细胞大量死亡。本研究成功建立了高效的体外转录系统,为深入研究环形泰勒虫感染与致病机制提供了技术支撑。展开更多
为建立一种快速准确的藏羊巨型住肉孢子虫(Sarcocystis gigantea)的临床检测方法,本研究基于巨型住肉孢子虫SPFH-SG基因,通过缓殖子荧光定量标准曲线的建立,敏感性、重复性、特异性试验验证,成功建立了SYBR Green Ⅰ的荧光定量PCR(qPCR...为建立一种快速准确的藏羊巨型住肉孢子虫(Sarcocystis gigantea)的临床检测方法,本研究基于巨型住肉孢子虫SPFH-SG基因,通过缓殖子荧光定量标准曲线的建立,敏感性、重复性、特异性试验验证,成功建立了SYBR Green Ⅰ的荧光定量PCR(qPCR)检测方法并检测了423份藏羊样本。结果表明,该诊断方法特异性较强、灵敏度较高且重复性好,血液与食道肌样品的检测结果符合率达98.9%,能够准确地进行藏羊巨型住肉孢子虫的生前快速检测和诊断。展开更多
文摘为提高环形泰勒虫转化细胞的转染效率,本研究以环形泰勒虫转化细胞TaNM1为研究对象,通过体外转录(IVT)技术将编码增强绿色荧光蛋白(eGFP)的RNA,经加帽后获得eGFP m RNA,利用脂质体转染至TaNM1细胞,同时分别设置空白组作为阴性对照,脂质体和电转染p-eGFP质粒组作为阳性对照,采用Western-blot、荧光显微镜观察以及流式细胞术检测eGFP蛋白在TaNM1细胞中的表达情况。结果显示,利用脂质体转染eGFP m RNA至TaNM1细胞中,可观察到eGFP绿色荧光,Western-blot同时检测到eGFP蛋白的表达(27 k Da),流式细胞术检测其转染效率可以达到66.22%;利用脂质体转染p-eGFP质粒和电转染p-eGFP质粒均不能在TaNM1细胞诱导表达eGFP,且电转染会引起细胞大量死亡。本研究成功建立了高效的体外转录系统,为深入研究环形泰勒虫感染与致病机制提供了技术支撑。
文摘为建立一种快速准确的藏羊巨型住肉孢子虫(Sarcocystis gigantea)的临床检测方法,本研究基于巨型住肉孢子虫SPFH-SG基因,通过缓殖子荧光定量标准曲线的建立,敏感性、重复性、特异性试验验证,成功建立了SYBR Green Ⅰ的荧光定量PCR(qPCR)检测方法并检测了423份藏羊样本。结果表明,该诊断方法特异性较强、灵敏度较高且重复性好,血液与食道肌样品的检测结果符合率达98.9%,能够准确地进行藏羊巨型住肉孢子虫的生前快速检测和诊断。
