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鸭短喙矮小综合征病毒单克隆抗体制备及竞争ELISA检测方法的建立
1
作者 朱小丽 王劭 +5 位作者 董慧 程晓霞 江丹丹 肖世峰 陈少莺 陈仕龙 《中国畜牧兽医》 北大核心 2026年第2期948-958,共11页
【目的】建立一种快速检测鸭短喙矮小综合征病毒(Short beak and dwarfism syndrome virus,SBDSV)抗体的血清学方法,为SBDSV抗体检测及诊断试剂盒研发提供技术支撑。【方法】本研究用纯化的SBDSV M15株灭活毒免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠... 【目的】建立一种快速检测鸭短喙矮小综合征病毒(Short beak and dwarfism syndrome virus,SBDSV)抗体的血清学方法,为SBDSV抗体检测及诊断试剂盒研发提供技术支撑。【方法】本研究用纯化的SBDSV M15株灭活毒免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞(SP2/0)进行融合,利用间接ELISA筛选可分泌SBDSV单克隆抗体的杂交瘤细胞株。用筛选出的杂交瘤细胞接种小鼠制备腹水。通过间接ELISA测定单克隆抗体效价,通过间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay,IFA)和胶乳凝集(latex particle agglutination,LPA)试验鉴定单克隆抗体特性。通过中和试验测定单克隆抗体中和活性,使用试剂盒鉴定单克隆抗体亚类。运用棋盘滴定法优化反应体系,建立基于SBDSV单克隆抗体的竞争ELISA检测方法。通过检测阴性血清确定该方法的临界值。对建立的竞争ELISA检测方法进行特异性、灵敏性和重复性测定。用该方法检测临床血清样品,并与胶乳凝集抑制(latex particle agglutination inhibition,LPAI)试验结果进行比对。【结果】经间接ELISA筛选,获得3株稳定分泌SBDSV单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为D5-3、G11-23和H2-27。间接ELISA结果显示,3株杂交瘤细胞D5-3、G11-23和H2-27培养上清的抗体效价分别为1∶2~6、1∶2~5和1∶2~6,腹水的抗体效价分别为1∶10~5、1∶10~4和1∶10~6。IFA结果显示,单克隆抗体D5-3、G11-23和H2-27均具有较好的结合活性,可用于IFA检测。LPA试验结果显示,仅单克隆抗体H2-27具有致敏胶乳的特性。中和试验结果显示,3株单克隆抗体均具有中和SBDSV的能力,其中单克隆抗体H2-27的中和活性最强。单克隆抗体亚类鉴定结果显示,单克隆抗体D5-3和G11-23均为IgG1,H2-27为IgM。以纯化的SBDSV(M15株)灭活毒作为包被抗原,单克隆抗体H2-27为竞争抗体,建立了一种检测SBDSV抗体的竞争ELISA方法,当抑制率(PI)≥23.70%时,判定为SBDSV抗体阳性;PI≤15.91%时判定为阴性。该方法特异性好,与番鸭细小病毒(Muscovy duck parvovirus,MDPV)、番鸭呼肠孤病毒(Muscovy duck reovirus,MDRV)、鸭源副黏病毒(Duck paramyxovirus,DPMV)、鸭肝炎病毒1型(Duck hepatitis virus-1,DHV-1)和鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus,DTMUV)阳性血清均无交叉反应;敏感性高,高免血清(LPAI效价1∶2~8)1∶25600稀释时仍为阳性;批间、批内重复性好,变异系数均<6%。竞争ELISA检测结果与LPAI结果具有良好的正相关性,二者的符合率为89.10%(188/211)。【结论】本研究成功制备3株SBDSV单克隆抗体,基于单克隆抗体H2-27建立的竞争ELISA方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可高通量检测SBDSV抗体,为监测SBDSV在中国的流行情况及雏鸭母源抗体水平评价提供技术支撑。 展开更多
关键词 鸭 短喙矮小综合征病毒(SBDSV) 单克隆抗体 竞争ELISA
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猪传染性胃肠炎病毒羊驼重链抗体的制备及验证
2
作者 黄娜娜 刘光亮 +3 位作者 付钰广 张勇 王雪珂 黄娟 《畜牧与兽医》 北大核心 2026年第1期85-92,共8页
旨在制备针对猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的重链抗体(HcAb),为制备TGEV特异性纳米抗体(Nb)奠定基础。将TGEV感染ST细胞,扩繁TGEV粒子,使用蔗糖密度梯度离心法纯化TGEV抗原,将纯化的TGEV抗原与ISA206佐剂1∶1混合乳化后,免疫1只8周龄雌性羊... 旨在制备针对猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的重链抗体(HcAb),为制备TGEV特异性纳米抗体(Nb)奠定基础。将TGEV感染ST细胞,扩繁TGEV粒子,使用蔗糖密度梯度离心法纯化TGEV抗原,将纯化的TGEV抗原与ISA206佐剂1∶1混合乳化后,免疫1只8周龄雌性羊驼,制备抗TGEV的羊驼HcAb,利用ELISA、Western blot、间接免疫荧光试验(IFA)验证制备的HcAb。ELISA结果显示,随着免疫次数的增加,针对TGEV的HcAb水平呈上升趋势,当抗血清稀释至1∶6400时仍具有反应性;Western blot结果显示,制备的HcAb能特异性地和TGEV S1蛋白及N蛋白反应;为进一步验证HcAb的反应性,将TGEV感染ST细胞并制备蛋白和细胞样品,Western blot检测结果显示本研究制备的HcAb能与TGEV编码的4种结构蛋白(S/E/M/N)特异性结合,IFA结果显示制备的HcAb可与TGEV发生特异性结合反应。综上,本研究成功制备了抗TGEV的HcAb,为后续研究奠定基础。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 结构蛋白 羊驼 重链抗体
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鸡DDX21蛋白表达、多克隆抗体制备与应用
3
作者 王梦迪 张淼湘 +3 位作者 曾玉冰 梁燕娇 黄腾 黄鉴妮 《中国畜牧兽医》 北大核心 2026年第2期973-983,共11页
【目的】研究鸡DDX21 RNA解旋酶的结构与功能,探索其是否参与H9N2亚型禽流感病毒(AIV)诱导的天然免疫反应。【方法】本研究扩增并克隆了鸡DDX21基因,通过生物信息学方法分析其基因序列;利用大肠杆菌表达系统通过IPTG诱导表达鸡DDX21重... 【目的】研究鸡DDX21 RNA解旋酶的结构与功能,探索其是否参与H9N2亚型禽流感病毒(AIV)诱导的天然免疫反应。【方法】本研究扩增并克隆了鸡DDX21基因,通过生物信息学方法分析其基因序列;利用大肠杆菌表达系统通过IPTG诱导表达鸡DDX21重组蛋白;以纯化的重组蛋白为免疫原,制备鸡DDX21多克隆抗体,采用间接ELISA检测抗体的血清效价;应用Western blotting方法检测多克隆抗体与内源性鸡DDX21蛋白的反应情况。【结果】PCR扩增的鸡DDX21基因编码区序列为2 145 bp,编码714个氨基酸;克隆至pMD18-T载体的鸡DDX21基因经测序后的核酸序列与GenBank数据库公布的预测序列(登录号:XM_040675361.2)一致;鸡DDX21与鸟类进化关系较近,氨基酸序列相似性为68.8%~89.7%,属于禽类分支;鸡DDX21蛋白包含高度保守的DEXDc、HELICc和GUCT结构域,其蛋白三级结构与人DDX21蛋白结构模型相似性为82.71%。纯化后的鸡DDX21重组蛋白大小为101 ku,与预期相符;制备的兔抗鸡DDX21抗体血清效价达到1∶320 000,且该多克隆抗体能识别内源性鸡DDX21蛋白。鸡DDX21蛋白在H9N2亚型AIV感染鸡的多个组织中表达量上调,表明病毒感染增强鸡DDX21蛋白的表达。【结论】本研究成功克隆并分析了鸡DDX21的基因序列,制备的兔抗鸡DDX21多克隆抗体能识别内源性蛋白,为后续深入研究鸡DDX21蛋白调控Ⅰ型干扰素信号通路的分子机制奠定了基础。 展开更多
关键词 鸡 DDX21基因 序列分析 多克隆抗体
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纳米硒对育肥猪生长性能、肉品质及抗氧化能力的影响 被引量：2
4
作者 潘越博 郑亚东 +4 位作者 王玺年 安小娅 黄龙艳 郭宪 黄龙梅 《国外畜牧学(猪与禽)》 2025年第1期37-40,共4页
为探究纳米硒对育肥猪生长性能、肉品质及血液抗氧化能力的影响,本试验挑选128头体重70~75kg的“杜×长×大”三元杂交育肥猪,公母各半,随机分为4组,每组4个重复,每个重复8头,对照组育肥猪饲喂基础日粮,试验1、2、3组育肥猪分... 为探究纳米硒对育肥猪生长性能、肉品质及血液抗氧化能力的影响,本试验挑选128头体重70~75kg的“杜×长×大”三元杂交育肥猪,公母各半,随机分为4组,每组4个重复,每个重复8头,对照组育肥猪饲喂基础日粮,试验1、2、3组育肥猪分别饲喂在基础日粮中添加0.3、0.5、0.7mg/kg纳米硒后配制而成的试验日粮。结果显示:日粮中添加0.5、0.7mg/kg纳米硒可显著降低育肥猪的料肉比和胴体24h失水率(P <0.05),纳米硒还可显著改善血液抗氧化能力相关指标(P <0.05)。研究表明,添加纳米硒对育肥猪的生长性能、肉品质和血液抗氧化能力有积极的影响,适宜添加量为0.5 mg/kg。 展开更多
关键词 纳米硒 生长性能 肉品质 血液抗氧化能力 育肥猪
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鸡肉中利巴韦林间接竞争ELISA检测方法的建立
5
作者 胡骁飞 邢云瑞 +3 位作者 邢广旭 孙亚宁 王琳 张改平 《中国免疫学杂志》 北大核心 2025年第10期2495-2498,2504,共5页
目的:建立高灵敏度的鸡肉中利巴韦林间接竞争ELISA(icELISA)检测方法。方法:基于已获得的利巴韦林单克隆抗体,采用棋盘试验确定抗原抗体最佳工作浓度,从而建立icELISA方法,并对该方法的性能进行鉴定。结果:建立的icELISA方法线性范围为0... 目的:建立高灵敏度的鸡肉中利巴韦林间接竞争ELISA(icELISA)检测方法。方法:基于已获得的利巴韦林单克隆抗体,采用棋盘试验确定抗原抗体最佳工作浓度,从而建立icELISA方法,并对该方法的性能进行鉴定。结果:建立的icELISA方法线性范围为0.44~32.71 ng/ml,IC50为3.78 ng/ml,最低检测限(LOD)为0.20 ng/ml;除了与利巴韦林特异反应外,与其他抗病毒药物均无交叉反应;样品加标回收率为91.60%~100.76%,变异系数7.29%~10.63%。结论:本研究建立了灵敏度高、特异性强的利巴韦林icELISA检测方法,可用于检测鸡肉中利巴韦林残留。 展开更多
关键词 利巴韦林 抗病毒药物 鸡肉 检测 间接竞争ELISA
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靶向Tim-3哺乳动物细胞抗体库的构建、筛选及抗体功能研究
6
作者 杜琳 李国贤 +5 位作者 杜春晓 陈隽睿 李宇翔 王智鼎 李葛 韩根成 《细胞与分子免疫学杂志》 北大核心 2026年第1期52-59,共8页
目的T细胞免疫球蛋白黏蛋白3(Tim-3)在天然免疫应答及适应性免疫应答调控中起关键作用,被视为新的免疫治疗靶点。本研究旨在实验室原有靶向人Tim-3的鼠源抗体基础上,借助计算机辅助分子设计,构建靶向人Tim-3的哺乳动物细胞抗体库,并筛... 目的T细胞免疫球蛋白黏蛋白3(Tim-3)在天然免疫应答及适应性免疫应答调控中起关键作用,被视为新的免疫治疗靶点。本研究旨在实验室原有靶向人Tim-3的鼠源抗体基础上,借助计算机辅助分子设计,构建靶向人Tim-3的哺乳动物细胞抗体库,并筛选出功能改进的抗体。方法整合计算机辅助分子模型构建平台与哺乳动物细胞抗体库技术,对Tim-3母本序列进行设计优化;通过Overlap PCR、载体的酶切、酶连与转化等分子生物学技术,得到靶向Tim-3哺乳动物抗体库的质粒库;通过测序比对获得全新序列抗体,利用ELISA技术进行筛选,获得表达量高、亲和力高的抗体;进一步通过体外功能实验(实时定量PCR、CCK-8)验证优化抗体的功能。结果以实验室前期制备的抗人Tim-3鼠源抗体为母本,利用计算机辅助设计平台,在Tim-3轻链与重链分别设计引入5个关键氨基酸替换;通过Overlap PCR分别获得3个含有突变碱基的轻链(L-1、L-2、L-3)和重链(H-1、H-2、H-3),连接载体后转化入TOP10电转感受态细胞,成功构建富含序列多样性的抗体分子质粒库。对新抗体进行序列的分析比对,筛选并纯化得到亲和力高于母本的抗体,命名为1号抗体。实时定量PCR检测表明,1号抗体阻断巨噬细胞系RAW264.7细胞和小胶质细胞系BV2细胞后,β干扰素(IFN-β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6的基因转录水平明显上调;阻断Jurkat^(Tim-3-high)细胞后,IL-2、IFN-γ的基因转录水平明显上调,且1号抗体的阻断作用大于母本Tim-3抗体。CCK-8法检测证明了1号抗体促进Jurkat^(Tim-3-high)细胞的增殖,且1号抗体的促进作用大于母本Tim-3抗体。结论通过计算机辅助分子设计平台和哺乳动物抗体库技术,得到亲和力高于母本抗体、且能够提高人和小鼠细胞系多种细胞因子表达的全新序列的Tim-3人源抗体。 展开更多
关键词 T细胞免疫球蛋白黏蛋白3(Tim-3) 哺乳动物细胞抗体库 计算机辅助分子设计
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鸡补体受体Ⅱ蛋白兔多克隆抗体制备及鉴定 被引量：1
7
作者 孟昭英 靳换 +2 位作者 涂敏 胡格 章振华 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第6期2772-2780,共9页
【目的】补体受体Ⅱ(complement receptor 2,CR2)与其生理学配体C3d相互作用能桥连先天性免疫反应和适应性免疫反应,放大下游信号的转导现象,显著降低抗原刺激B细胞活化的阈值,可将B细胞对抗原的敏感性提高1 000~10 000倍,对于激活B细... 【目的】补体受体Ⅱ(complement receptor 2,CR2)与其生理学配体C3d相互作用能桥连先天性免疫反应和适应性免疫反应,放大下游信号的转导现象,显著降低抗原刺激B细胞活化的阈值,可将B细胞对抗原的敏感性提高1 000~10 000倍,对于激活B细胞及启动免疫反应至关重要。本研究旨在制备兔源鸡CR2(chCR2)多克隆抗体,为检测chCR2蛋白的表达情况提供工具,也为深入探究chCR2蛋白的功能和作用奠定基础。【方法】将pTT5-His-chCR2-ΔTM重组质粒转染至HEK293F细胞中,在真核表达系统HEK293F细胞中表达重组chCR2蛋白(His-chCR2-ΔTM),经Western blotting对蛋白表达进行分析,利用镍柱亲和层析纯化系统纯化chCR2蛋白并进行SDS-PAGE鉴定。用纯化出的chCR2蛋白免疫新西兰大白兔制备抗chCR2血清多克隆抗体;利用ELISA方法检测chCR2兔血清的效价;利用Western blotting和间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay,IFA)检测chCR2血清多克隆抗体的特异性和灵敏度。【结果】重组His-chCR2-ΔTM蛋白可在HEK293F细胞系表达,利用镍柱亲和层析法纯化得到的重组His-chCR2-ΔTM蛋白浓度为4.439 mg/mL,分子质量为45 ku。ELISA检测结果显示,chCR2血清多克隆抗体效价最高为1∶32 768 000;Western blotting和IFA结果表明,chCR2蛋白可被chCR2血清多抗体特异性识别;Western blotting检测时,chCR2血清多克隆抗体的稀释度为1∶5 000时特异性最好;IFA检测时,chCR2血清多克隆抗体最大稀释度为1∶1 600。【结论】本研究成功制备了chCR2蛋白兔多克隆抗体,该抗体效价较高且特异性较好,为后续检测chCR2蛋白及研究chCR2蛋白的功能提供了试验基础。 展开更多
关键词 鸡补体受体Ⅱ 表达纯化 多克隆抗体
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猪免疫球蛋白J链表达及抗血清的制备
8
作者 颜露玲 付钰广 +3 位作者 唐雨童 李文杰 刘光亮 王衡 《畜牧与兽医》 北大核心 2025年第10期45-52,共8页
旨在制备猪免疫球蛋白J链抗血清,为研究J链的免疫学功能提供材料。运用PCR扩增J链开放阅读框,并将其克隆至原核表达载体pET30a,选择测序成功的pET30a-J重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行蛋白表达验证;将J链与弗氏完全佐... 旨在制备猪免疫球蛋白J链抗血清,为研究J链的免疫学功能提供材料。运用PCR扩增J链开放阅读框,并将其克隆至原核表达载体pET30a,选择测序成功的pET30a-J重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行蛋白表达验证;将J链与弗氏完全佐剂混合后经背部皮下免疫新西兰大白兔制备抗血清;采用ELISA、Western blot和间接免疫荧光试验(IFA)对获得的抗血清进行功能验证。结果:猪免疫球蛋白J链在大肠杆菌中以包涵体形式表达,经变性复性后通过NI-NTA亲和层析的方法纯化出纯净的目的蛋白;ELISA检测结果显示,四免后兔血清中抗体效价可达1∶6400;Western blot结果显示,获得的抗血清能与原核表达的J链特异性结合;为进一步验证抗血清的反应性,构建了pcDNA3.1-J重组载体,将其转染293T细胞,IFA与Western blot检测结果显示,本研究制备的抗血清能与真核表达的猪免疫球蛋白J链特异性结合,通过ELISA和Western blot检测抗血清与猪乳中J链的反应性,结果显示能与猪乳中的J链反应。综上表明,本研究成功制备出猪免疫球蛋白J链抗血清。 展开更多
关键词 猪免疫球蛋白J链 原核表达 抗血清
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牛白细胞介素-8单克隆抗体制备及应用
9
作者 杨蕊 靳家鑫 +4 位作者 张泽 时文健 张广智 丁家波 鑫婷 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第8期3830-3837,共8页
【目的】白细胞介素-8(IL-8)是重要的趋化因子,参与机体免疫反应,其水平升高与多种感染性疾病、自身免疫疾病等密切相关,也被鉴定为活动性肺结核病、结核性脑膜炎、牛结核病的检测靶标。本研究旨在制备针对牛IL-8的单克隆抗体,开发牛IL-... 【目的】白细胞介素-8(IL-8)是重要的趋化因子,参与机体免疫反应,其水平升高与多种感染性疾病、自身免疫疾病等密切相关,也被鉴定为活动性肺结核病、结核性脑膜炎、牛结核病的检测靶标。本研究旨在制备针对牛IL-8的单克隆抗体,开发牛IL-8夹心ELISA检测试剂盒,用于牛血清或血浆中IL-8的定量检测,为牛结核(bovine tuberculosis,b TB)及其他炎症相关疾病的诊断及免疫学指标检测提供工具。【方法】将牛IL-8基因分别连接至p GEX-6P-1和pc DNA3.1载体,并利用大肠杆菌与293F细胞进行表达,以GST亲和柱和镍柱纯化重组蛋白;采用真核表达的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术制备并筛选针对牛IL-8的单克隆抗体;通过棋盘法筛选最佳抗体对并建立夹心ELISA检测方法;定量检测排菌期结核病牛、非排菌期结核病牛和健康牛血浆中IL-8水平,评价单克隆抗体对天然牛IL-8的识别能力及其对结核病牛的检测效果。【结果】SDS-PAGE结果显示,原核和真核表达系统制备的IL-8均以可溶形式表达,且纯化的蛋白纯度高于90%;经3轮亚克隆筛选共获得2B8、2F5等5株稳定分泌牛IL-8抗体的单克隆细胞株,亚型鉴定均为Ig G1型;棋盘法筛选结果显示,4G10和3D5-HRP为最佳配对抗体;以4G10和3D5-HRP建立的ELISA方法对不同感染状态的结核病牛血浆进行定量检测,结果显示,结核病牛血浆中IL-8含量极显著高于健康牛(P<0.01)。【结论】成功制备抗牛IL-8的单克隆抗体并建立牛IL-8夹心ELISA检测方法,可实现对天然牛IL-8的定量检测,有潜力用于结核病牛的筛查和牛免疫学指标检测。 展开更多
关键词 牛 白细胞介素-8 单克隆抗体 ELISA 牛结核病
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结构疫苗学的研究进展
10
作者 宁小雨 邵军军 常惠芸 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第5期655-661,共7页
疫苗作为有效防控传染病的重要手段,在预防人和畜禽传染病方面发挥了十分重要的作用。尤其是近年来,新发传染性疫病不断出现,造成了巨大的经济损失和恶劣的社会影响。因此,利用新技术快速设计研发针对新发传染病的疫苗显得尤为重要。结... 疫苗作为有效防控传染病的重要手段,在预防人和畜禽传染病方面发挥了十分重要的作用。尤其是近年来,新发传染性疫病不断出现,造成了巨大的经济损失和恶劣的社会影响。因此,利用新技术快速设计研发针对新发传染病的疫苗显得尤为重要。结构疫苗学作为近年来发展的一种新型疫苗研究方法,可以快速设计抗原结构完整且具有保护效果的疫苗,及时用于疫病防控。本文就结构疫苗学进展做一综述。 展开更多
关键词 结构疫苗学 免疫原 表位 疫苗
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东方泰勒虫P33蛋白单克隆抗体的制备与鉴定
11
作者 王贤炅 金钰 +4 位作者 夏莹 张丙寅 董思言 金春梅 于龙政 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第8期3800-3809,共10页
【目的】P33蛋白是东方泰勒虫(Theileria orientalis)虫体重要的表面蛋白,具有较好的反应原性和免疫原性。本试验旨在通过杂交瘤技术研制针对P33蛋白的特异性单克隆抗体,系统评估其免疫学特性并筛选出能稳定分泌该抗体的单克隆细胞株,... 【目的】P33蛋白是东方泰勒虫(Theileria orientalis)虫体重要的表面蛋白,具有较好的反应原性和免疫原性。本试验旨在通过杂交瘤技术研制针对P33蛋白的特异性单克隆抗体,系统评估其免疫学特性并筛选出能稳定分泌该抗体的单克隆细胞株,为后续建立基于P33抗原的东方泰勒虫血清学诊断方法奠定物质基础。【方法】通过在线软件分析预测P33蛋白信号肽位置和B细胞抗原决定簇,选择其无信号肽及有抗原优势决定簇的基因克隆至原核表达载体pET-30a(+)和p GEX-4T-1中,构建重组表达载体pET-30a-P33和pGEX-4T-1-P33,将重组质粒分别导入大肠杆菌BL21(DE3)和BL21感受态细胞进行诱导表达。使用SDS-PAGE和Western blotting分析表达产物,将过柱纯化后的pET-30a-P33重组蛋白免疫BALB/c小鼠,用pGEX-4T-1-P33重组蛋白筛选特异性单克隆抗体。利用ELISA方法进行抗体亚类鉴定和抗体效价检测;应用Western blotting和间接免疫荧光试验(IFA)检测单克隆抗体的反应原性和特异性。【结果】PCR及双酶切鉴定结果显示,成功构建pET-30a-P33和pGEX-4T-1-P332种表达载体。SDS-PAGE和Western blotting结果显示,成功制备了大小约43和57ku的pET-30a-P33和pGEX-4T-1-P33重组蛋白,并有良好的反应原性。用pGEX-4T-1-P33重组蛋白筛选,获得1株能稳定分泌P33蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株(2H10A6)。单克隆抗体亚类鉴定结果表明,2H10A6株分泌的抗体为Ig G1亚类,抗体效价为1∶6553600。Western blotting和IFA结果显示,2H10A6杂交瘤细胞株分泌产生的抗体可与东方泰勒虫P33蛋白特异性结合。【结论】本试验经原核表达系统成功获得了东方泰勒虫的P33重组蛋白,并成功制备了其单克隆抗体,该抗体可特异性识别P33蛋白。 展开更多
关键词 东方泰勒虫 P33蛋白 原核表达 单克隆抗体
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Ⅰ群4型禽腺病毒卵黄抗体中和效价与防治效果相关性试验
12
作者 蔡青秀 孙亚磊 +4 位作者 于春梅 丛雁方 董照洋 李宸辉 戴建君 《中国动物检疫》 2025年第4期106-111,共6页
为探究Ⅰ群4型禽腺病毒(FAdV-4)卵黄抗体中和效价与预防效果、治疗效果的相关性,对制备的卵黄抗体进行2^(-1)~2^(-4)梯度稀释(中和效价分别为1:282、1:142、1:79、1:36)后,分别进行预防和治疗效果试验。结果显示,在FAdV-4卵黄抗体中和... 为探究Ⅰ群4型禽腺病毒(FAdV-4)卵黄抗体中和效价与预防效果、治疗效果的相关性,对制备的卵黄抗体进行2^(-1)~2^(-4)梯度稀释(中和效价分别为1:282、1:142、1:79、1:36)后,分别进行预防和治疗效果试验。结果显示,在FAdV-4卵黄抗体中和效价不低于1:142时,分别进行预防后攻毒和攻毒后治疗试验,发现试验鸡健活率均不低于80%。结果表明,预防和治疗效果与卵黄抗体效价呈正相关。为保证卵黄抗体的临床使用效果,建议将抗体成品效力检验的中和效价标准定为不低于1:256。本研究为FAdV-4卵黄抗体的临床应用剂量选择提供了数据支持,为卵黄抗体质量标准的制定奠定了理论基础。 展开更多
关键词 Ⅰ群4型禽腺病毒卵黄抗体 预防效果 治疗效果 相关性
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氢氧化铝纳米颗粒对鸡新城疫抗原的免疫佐剂效应 被引量：12
13
作者 汤承 黄兴 +3 位作者 杨发龙 李明义 范根成 岳华 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1060-1064,共5页
以新城疫病毒为抗原,制备纳米氢氧化铝和常规氢氧化铝佐剂灭活疫苗,分别免疫20日龄雏鸡,比较了免疫后2～24 d的抗体效价和外周血淋巴细胞CD4、CD8分子mRNA的表达水平。结果显示,纳米氢氧化铝佐剂组抗体效价在免疫后第10 d达到峰值,为6.6... 以新城疫病毒为抗原,制备纳米氢氧化铝和常规氢氧化铝佐剂灭活疫苗,分别免疫20日龄雏鸡,比较了免疫后2～24 d的抗体效价和外周血淋巴细胞CD4、CD8分子mRNA的表达水平。结果显示,纳米氢氧化铝佐剂组抗体效价在免疫后第10 d达到峰值,为6.67±0.58,免疫保护期超过9 d,常规氢氧化铝佐剂组抗体效价在免疫后第10 d达到峰值,为4.33±0.58,免疫保护期小于7 d;与常规氢氧化铝佐剂组相比,纳米氢氧化铝佐剂组免疫后4～17 d的CD4以及10～17 d的CD8分子mRNA的表达水平显著提高,在峰值时后者的表达量为前者的2.0和1.9倍。结果表明,纳米氢氧化铝佐剂能辅佐鸡体产生比常规氢氧化铝佐剂更强烈的体液免疫和细胞免疫。 展开更多
关键词 氢氧化铝 纳米颗粒 佐剂 新城疫抗原 HI抗体 CD4 CD8 鸡
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重组鸡白细胞介素6对不同种类疫苗的免疫增强作用 被引量：11
14
作者 闫若潜 谢彩华 +4 位作者 吴志明 李桂喜 张志凌 张健 刘梅芬 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期494-500,共7页
为评价重组鸡白细胞介素6(rChIL-6)在商品鸡体内对不同种类疫苗的免疫增强作用,采用不同接种方式,应用rChIL-6分别对不同种类新城疫病毒(NDV)单联疫苗和新城疫病毒-传染性支气管炎病毒-禽流感病毒H9亚型三联疫苗(NDV-IBV-H9)进行了免疫... 为评价重组鸡白细胞介素6(rChIL-6)在商品鸡体内对不同种类疫苗的免疫增强作用,采用不同接种方式,应用rChIL-6分别对不同种类新城疫病毒(NDV)单联疫苗和新城疫病毒-传染性支气管炎病毒-禽流感病毒H9亚型三联疫苗(NDV-IBV-H9)进行了免疫增强试验以及传染性法氏囊病病毒(IBDV)单联油乳剂灭活疫苗的免疫增强田间试验,并进行了将rChIL-6与NDV Ⅳ系预混合乳化制备成的灭活疫苗的免疫试验。结果表明,将rChIL-6与NDVⅣ系、Ⅰ系活疫苗预混合后分别采用滴鼻点眼、肌肉注射接种方式的免疫增强效果优于其他方式;rChIL-6与NDV抗原预混后制备成油乳剂灭活疫苗的免疫增强效果优于将相同抗原量的NDV油乳剂灭活疫苗和rChIL-6同时分点免疫接种。rChIL-6对NDV油乳剂灭活疫苗的免疫增强效果优于活疫苗,对NDV单联灭活疫苗的免疫增强效果优于NDV-IBV-H9三联灭活疫苗。田间试验表明,rChIL-6对IBDV油乳剂灭活疫苗首免和二免都具有显著的免疫增强作用,二免的免疫增强效果优于首免。这些研究结果为进一步开展新型鸡基因工程免疫增强剂研究奠定了基础。 展开更多
关键词 鸡 重组鸡白细胞介素6 疫苗 免疫增强作用 新城疫 传染性法氏囊病 禽流感H9N2亚型
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检测猪细小病毒血清抗体乳胶凝集试验方法的建立及初步应用 被引量：22
15
作者 何启盖 陈焕春 +4 位作者 吴斌 邱德新 刘恒贵 彭金美 徐引娣 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 1999年第6期457-459,共3页
将猪细小病毒在IBRS-2细胞上同步培养增殖，待出现细胞病变后，反复冻融，收获病毒液，用甲醛灭活。随后用经硫酸胺沉淀、透析后浓缩的细小病毒液进行方阵滴定，选择致敏乳胶的最佳条件，制成细小病毒乳胶凝集试验（LAT）抗原。抗原与... 将猪细小病毒在IBRS-2细胞上同步培养增殖，待出现细胞病变后，反复冻融，收获病毒液，用甲醛灭活。随后用经硫酸胺沉淀、透析后浓缩的细小病毒液进行方阵滴定，选择致敏乳胶的最佳条件，制成细小病毒乳胶凝集试验（LAT）抗原。抗原与细小病毒阳性血清反应出现肉眼可见的凝集颗粒，而与生理盐水、PBS、犊牛血清、猪瘟、衣原体、口蹄疫、伪狂犬病、弓形体及萎缩性鼻炎等阳性血清不出现凝集现象。用所建立的细小病毒乳胶凝集试验（LAT）与血凝抑制试验检测了203份猪血清，其中血凝抑制抗体阳性为161份，阴性为42份，阳性率为79.31％;乳胶凝集抗体阳性为150份，阴性为53份，阳性率为73.89％，两种方法阳性符合率为93.16％，经统计学检验P＞0.05，两者差异不显著。结果表明，乳胶凝集试验可以作为临床上大量血样进行血凝抑制试验前的初筛，具有简便、准确的优点，在检测细小病毒（PPV）抗体上具有较好的应用前景。 展开更多
关键词 猪 细小病毒 抗体检测 乳胶凝集试验
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谷氨酰胺对断奶仔猪免疫功能的影响 被引量：27
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作者 尹兆正 邹晓庭 +1 位作者 钱利纯 郑根华 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期536-538,共3页
选取21日龄杜大长断奶仔猪60头,研究日粮中添加1%谷氨酰胺对断奶仔猪免疫功能的影响。断奶10日龄,对照组血清IgG、IgM水平比断奶前有降低趋势,试验组血清IgG、IgM水平无明显下降,对照组和试验组血清IgA水平比断奶前提高20.31%(P>0.05... 选取21日龄杜大长断奶仔猪60头,研究日粮中添加1%谷氨酰胺对断奶仔猪免疫功能的影响。断奶10日龄,对照组血清IgG、IgM水平比断奶前有降低趋势,试验组血清IgG、IgM水平无明显下降,对照组和试验组血清IgA水平比断奶前提高20.31%(P>0.05)、28.13%(P<0.05),试验组血清IgG和IgM水平分别比对照组高34.67%(P<0.05)和32.58%(P<0.05)。断奶20日龄,试验组血清IgA和IgM水平分别比对照组高15.22%(P<0.05)和30.66%(P<0.05)。T淋巴细胞增殖分化率分析结果显示,对照组和试验组增殖率分别为16.52%、28.92%,差异显著(P<0.05)。试验组肠系膜淋巴结的DNA含量较对照组提高9.18%(P<0.05)。断奶10日龄和断奶20日龄的对照组与试验组间C3、C4水平差异不显著。 展开更多
关键词 谷氨酰胺 断奶仔猪 免疫功能 T淋巴细胞增殖率
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NDV La Sota、V4疫苗免疫鸡及免疫攻毒鸡的主要特异性血清抗体动态变化规律比较 被引量：12
17
作者 孙建宏 曹殿军 +4 位作者 刘培欣 闫丽辉 陈杰 曲鲁江 刘宝全 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期199-202,共4页
本研究应用间接ELISA方法对新城疫LaSota和V4疫苗免疫SPF鸡及免疫后攻毒SPF鸡的血清中新城疫病毒(NDV)特异性HI抗体、IgM和IgG抗体水平的动态变化进行了检测。结果表明 ,V4较LaSota疫苗免疫鸡HI抗体提前 3天左右出现 ,但除高峰期 (1周左... 本研究应用间接ELISA方法对新城疫LaSota和V4疫苗免疫SPF鸡及免疫后攻毒SPF鸡的血清中新城疫病毒(NDV)特异性HI抗体、IgM和IgG抗体水平的动态变化进行了检测。结果表明 ,V4较LaSota疫苗免疫鸡HI抗体提前 3天左右出现 ,但除高峰期 (1周左右 )外 ,其HI抗体水平均低于LaSota免疫鸡。LaSota疫苗免疫鸡血清中NDV特异性IgM和IgG抗体水平高于V4免疫鸡 ,IgG抗体高峰较V4免疫鸡提前约 2周出现 ,攻毒后 ,LaSota免疫鸡血清中特异性IgG和IgG回忆应答显著 ,而V4免疫鸡IgM和IgG回忆应答不明显。 展开更多
关键词 新城疫 血清抗体 疫苗 免疫鸡 攻毒鸡
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抗氯霉素单克隆抗体的制备及鉴定 被引量：25
18
作者 覃雅丽 石德时 +1 位作者 王桂枝 陈焕春 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期556-558,共3页
用人工合成的氯霉素 -人血清白蛋白 (CAP- HSA)作抗原免疫 BAL B/ c小鼠 ,通过杂交瘤技术建立了 1株分泌抗CAP单克隆抗体 (Mc Ab)的杂交瘤细胞 1F9。经检测 ,其分泌的抗体亚类为 Ig G1 ,杂交瘤染色体数目 84～ 96条 ,间接EL ISA检测细... 用人工合成的氯霉素 -人血清白蛋白 (CAP- HSA)作抗原免疫 BAL B/ c小鼠 ,通过杂交瘤技术建立了 1株分泌抗CAP单克隆抗体 (Mc Ab)的杂交瘤细胞 1F9。经检测 ,其分泌的抗体亚类为 Ig G1 ,杂交瘤染色体数目 84～ 96条 ,间接EL ISA检测细胞培养上清效价为 1∶ 2 5 6 ,诱生小鼠腹水的抗体效价可达 1∶ 6× 10 5。该细胞连续培养生物学性状稳定 ,竞争间接酶联免疫吸附试验 (ci EL ISA)显示 ,其与供试抗生素交叉反应小 。 展开更多
关键词 氯霉素 单克隆抗体 制备 鉴定
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纳米蜂胶颗粒对鸡免疫功能的影响 被引量：28
19
作者 柴家前 王玲 +1 位作者 庞昕 沈志强 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期412-416,共5页
通过专有技术制备纳米蜂胶颗粒 (NPP)。在不同的 pH值条件下 ,其颜色、透明度及形态结构均有很大变化 ,但是它对温度不敏感。NPP使迪卡白雏鸡血液中的T淋巴细胞比率增加极显著 ;使雏鸡RBC C3bR花环率极显著增加 ,而使RBC IC花环率显著... 通过专有技术制备纳米蜂胶颗粒 (NPP)。在不同的 pH值条件下 ,其颜色、透明度及形态结构均有很大变化 ,但是它对温度不敏感。NPP使迪卡白雏鸡血液中的T淋巴细胞比率增加极显著 ;使雏鸡RBC C3bR花环率极显著增加 ,而使RBC IC花环率显著降低。EEP作为佐剂能促进鸡的体液免疫 ,可以提高特异性抗体的滴度。 展开更多
关键词 鸡 纳米蜂胶颗粒 免疫功能 EEP 体液免疫
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以赭曲霉毒素A单克隆抗体建立竞争酶联免疫吸附分析方法的研究 被引量：19
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作者 刘仁荣 余宙 +1 位作者 何庆华 许杨 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第11期174-177,共4页
本研究通过活性酯法合成赭曲霉毒素A人工抗原,免疫小鼠制备单克隆抗体,在此基础上建立了竞争ELISA检测方法,线性范围为200～6000pg/ml,检测下限为150pg/ml。单抗与赭曲霉毒素B的交叉反应率为35%,与桔霉素、黄曲霉毒素B1和展青霉素等毒... 本研究通过活性酯法合成赭曲霉毒素A人工抗原,免疫小鼠制备单克隆抗体,在此基础上建立了竞争ELISA检测方法,线性范围为200～6000pg/ml,检测下限为150pg/ml。单抗与赭曲霉毒素B的交叉反应率为35%,与桔霉素、黄曲霉毒素B1和展青霉素等毒素交叉反应低于0.01%。在小麦样品中的加标回收率为83%～116%,变异系数为9.4%～19.8%。测试23份样品,赭曲霉毒素A的含量在0.6～2.56μg/kg之间。 展开更多
关键词 赭曲霉毒素A 人工抗原 单克隆抗体 酶联免疫吸附分析方法
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