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鸡肉中利巴韦林间接竞争ELISA检测方法的建立
1
作者 胡骁飞 邢云瑞 +3 位作者 邢广旭 孙亚宁 王琳 张改平 《中国免疫学杂志》 北大核心 2025年第10期2495-2498,2504,共5页
目的:建立高灵敏度的鸡肉中利巴韦林间接竞争ELISA(icELISA)检测方法。方法:基于已获得的利巴韦林单克隆抗体,采用棋盘试验确定抗原抗体最佳工作浓度,从而建立icELISA方法,并对该方法的性能进行鉴定。结果:建立的icELISA方法线性范围为0... 目的:建立高灵敏度的鸡肉中利巴韦林间接竞争ELISA(icELISA)检测方法。方法:基于已获得的利巴韦林单克隆抗体,采用棋盘试验确定抗原抗体最佳工作浓度,从而建立icELISA方法,并对该方法的性能进行鉴定。结果:建立的icELISA方法线性范围为0.44~32.71 ng/ml,IC50为3.78 ng/ml,最低检测限(LOD)为0.20 ng/ml;除了与利巴韦林特异反应外,与其他抗病毒药物均无交叉反应;样品加标回收率为91.60%~100.76%,变异系数7.29%~10.63%。结论:本研究建立了灵敏度高、特异性强的利巴韦林icELISA检测方法,可用于检测鸡肉中利巴韦林残留。 展开更多
关键词 利巴韦林 抗病毒药物 鸡肉 检测 间接竞争ELISA
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纳米硒对育肥猪生长性能、肉品质及抗氧化能力的影响
2
作者 潘越博 郑亚东 +4 位作者 王玺年 安小娅 黄龙艳 郭宪 黄龙梅 《国外畜牧学(猪与禽)》 2025年第1期37-40,共4页
为探究纳米硒对育肥猪生长性能、肉品质及血液抗氧化能力的影响,本试验挑选128头体重70~75kg的“杜×长×大”三元杂交育肥猪,公母各半,随机分为4组,每组4个重复,每个重复8头,对照组育肥猪饲喂基础日粮,试验1、2、3组育肥猪分... 为探究纳米硒对育肥猪生长性能、肉品质及血液抗氧化能力的影响,本试验挑选128头体重70~75kg的“杜×长×大”三元杂交育肥猪,公母各半,随机分为4组,每组4个重复,每个重复8头,对照组育肥猪饲喂基础日粮,试验1、2、3组育肥猪分别饲喂在基础日粮中添加0.3、0.5、0.7mg/kg纳米硒后配制而成的试验日粮。结果显示:日粮中添加0.5、0.7mg/kg纳米硒可显著降低育肥猪的料肉比和胴体24h失水率(P <0.05),纳米硒还可显著改善血液抗氧化能力相关指标(P <0.05)。研究表明,添加纳米硒对育肥猪的生长性能、肉品质和血液抗氧化能力有积极的影响,适宜添加量为0.5 mg/kg。 展开更多
关键词 纳米硒 生长性能 肉品质 血液抗氧化能力 育肥猪
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猪免疫球蛋白J链表达及抗血清的制备
3
作者 颜露玲 付钰广 +3 位作者 唐雨童 李文杰 刘光亮 王衡 《畜牧与兽医》 北大核心 2025年第10期45-52,共8页
旨在制备猪免疫球蛋白J链抗血清,为研究J链的免疫学功能提供材料。运用PCR扩增J链开放阅读框,并将其克隆至原核表达载体pET30a,选择测序成功的pET30a-J重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行蛋白表达验证;将J链与弗氏完全佐... 旨在制备猪免疫球蛋白J链抗血清,为研究J链的免疫学功能提供材料。运用PCR扩增J链开放阅读框,并将其克隆至原核表达载体pET30a,选择测序成功的pET30a-J重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行蛋白表达验证;将J链与弗氏完全佐剂混合后经背部皮下免疫新西兰大白兔制备抗血清;采用ELISA、Western blot和间接免疫荧光试验(IFA)对获得的抗血清进行功能验证。结果:猪免疫球蛋白J链在大肠杆菌中以包涵体形式表达,经变性复性后通过NI-NTA亲和层析的方法纯化出纯净的目的蛋白;ELISA检测结果显示,四免后兔血清中抗体效价可达1∶6400;Western blot结果显示,获得的抗血清能与原核表达的J链特异性结合;为进一步验证抗血清的反应性,构建了pcDNA3.1-J重组载体,将其转染293T细胞,IFA与Western blot检测结果显示,本研究制备的抗血清能与真核表达的猪免疫球蛋白J链特异性结合,通过ELISA和Western blot检测抗血清与猪乳中J链的反应性,结果显示能与猪乳中的J链反应。综上表明,本研究成功制备出猪免疫球蛋白J链抗血清。 展开更多
关键词 猪免疫球蛋白J链 原核表达 抗血清
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牛白细胞介素-8单克隆抗体制备及应用
4
作者 杨蕊 靳家鑫 +4 位作者 张泽 时文健 张广智 丁家波 鑫婷 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第8期3830-3837,共8页
【目的】白细胞介素-8(IL-8)是重要的趋化因子,参与机体免疫反应,其水平升高与多种感染性疾病、自身免疫疾病等密切相关,也被鉴定为活动性肺结核病、结核性脑膜炎、牛结核病的检测靶标。本研究旨在制备针对牛IL-8的单克隆抗体,开发牛IL-... 【目的】白细胞介素-8(IL-8)是重要的趋化因子,参与机体免疫反应,其水平升高与多种感染性疾病、自身免疫疾病等密切相关,也被鉴定为活动性肺结核病、结核性脑膜炎、牛结核病的检测靶标。本研究旨在制备针对牛IL-8的单克隆抗体,开发牛IL-8夹心ELISA检测试剂盒,用于牛血清或血浆中IL-8的定量检测,为牛结核(bovine tuberculosis,b TB)及其他炎症相关疾病的诊断及免疫学指标检测提供工具。【方法】将牛IL-8基因分别连接至p GEX-6P-1和pc DNA3.1载体,并利用大肠杆菌与293F细胞进行表达,以GST亲和柱和镍柱纯化重组蛋白;采用真核表达的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术制备并筛选针对牛IL-8的单克隆抗体;通过棋盘法筛选最佳抗体对并建立夹心ELISA检测方法;定量检测排菌期结核病牛、非排菌期结核病牛和健康牛血浆中IL-8水平,评价单克隆抗体对天然牛IL-8的识别能力及其对结核病牛的检测效果。【结果】SDS-PAGE结果显示,原核和真核表达系统制备的IL-8均以可溶形式表达,且纯化的蛋白纯度高于90%;经3轮亚克隆筛选共获得2B8、2F5等5株稳定分泌牛IL-8抗体的单克隆细胞株,亚型鉴定均为Ig G1型;棋盘法筛选结果显示,4G10和3D5-HRP为最佳配对抗体;以4G10和3D5-HRP建立的ELISA方法对不同感染状态的结核病牛血浆进行定量检测,结果显示,结核病牛血浆中IL-8含量极显著高于健康牛(P<0.01)。【结论】成功制备抗牛IL-8的单克隆抗体并建立牛IL-8夹心ELISA检测方法,可实现对天然牛IL-8的定量检测,有潜力用于结核病牛的筛查和牛免疫学指标检测。 展开更多
关键词 牛 白细胞介素-8 单克隆抗体 ELISA 牛结核病
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结构疫苗学的研究进展
5
作者 宁小雨 邵军军 常惠芸 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第5期655-661,共7页
疫苗作为有效防控传染病的重要手段,在预防人和畜禽传染病方面发挥了十分重要的作用。尤其是近年来,新发传染性疫病不断出现,造成了巨大的经济损失和恶劣的社会影响。因此,利用新技术快速设计研发针对新发传染病的疫苗显得尤为重要。结... 疫苗作为有效防控传染病的重要手段,在预防人和畜禽传染病方面发挥了十分重要的作用。尤其是近年来,新发传染性疫病不断出现,造成了巨大的经济损失和恶劣的社会影响。因此,利用新技术快速设计研发针对新发传染病的疫苗显得尤为重要。结构疫苗学作为近年来发展的一种新型疫苗研究方法,可以快速设计抗原结构完整且具有保护效果的疫苗,及时用于疫病防控。本文就结构疫苗学进展做一综述。 展开更多
关键词 结构疫苗学 免疫原 表位 疫苗
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东方泰勒虫P33蛋白单克隆抗体的制备与鉴定
6
作者 王贤炅 金钰 +4 位作者 夏莹 张丙寅 董思言 金春梅 于龙政 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第8期3800-3809,共10页
【目的】P33蛋白是东方泰勒虫(Theileria orientalis)虫体重要的表面蛋白,具有较好的反应原性和免疫原性。本试验旨在通过杂交瘤技术研制针对P33蛋白的特异性单克隆抗体,系统评估其免疫学特性并筛选出能稳定分泌该抗体的单克隆细胞株,... 【目的】P33蛋白是东方泰勒虫(Theileria orientalis)虫体重要的表面蛋白,具有较好的反应原性和免疫原性。本试验旨在通过杂交瘤技术研制针对P33蛋白的特异性单克隆抗体,系统评估其免疫学特性并筛选出能稳定分泌该抗体的单克隆细胞株,为后续建立基于P33抗原的东方泰勒虫血清学诊断方法奠定物质基础。【方法】通过在线软件分析预测P33蛋白信号肽位置和B细胞抗原决定簇,选择其无信号肽及有抗原优势决定簇的基因克隆至原核表达载体pET-30a(+)和p GEX-4T-1中,构建重组表达载体pET-30a-P33和pGEX-4T-1-P33,将重组质粒分别导入大肠杆菌BL21(DE3)和BL21感受态细胞进行诱导表达。使用SDS-PAGE和Western blotting分析表达产物,将过柱纯化后的pET-30a-P33重组蛋白免疫BALB/c小鼠,用pGEX-4T-1-P33重组蛋白筛选特异性单克隆抗体。利用ELISA方法进行抗体亚类鉴定和抗体效价检测;应用Western blotting和间接免疫荧光试验(IFA)检测单克隆抗体的反应原性和特异性。【结果】PCR及双酶切鉴定结果显示,成功构建pET-30a-P33和pGEX-4T-1-P332种表达载体。SDS-PAGE和Western blotting结果显示,成功制备了大小约43和57ku的pET-30a-P33和pGEX-4T-1-P33重组蛋白,并有良好的反应原性。用pGEX-4T-1-P33重组蛋白筛选,获得1株能稳定分泌P33蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株(2H10A6)。单克隆抗体亚类鉴定结果表明,2H10A6株分泌的抗体为Ig G1亚类,抗体效价为1∶6553600。Western blotting和IFA结果显示,2H10A6杂交瘤细胞株分泌产生的抗体可与东方泰勒虫P33蛋白特异性结合。【结论】本试验经原核表达系统成功获得了东方泰勒虫的P33重组蛋白,并成功制备了其单克隆抗体,该抗体可特异性识别P33蛋白。 展开更多
关键词 东方泰勒虫 P33蛋白 原核表达 单克隆抗体
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鸡补体受体Ⅱ蛋白兔多克隆抗体制备及鉴定
7
作者 孟昭英 靳换 +2 位作者 涂敏 胡格 章振华 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第6期2772-2780,共9页
【目的】补体受体Ⅱ(complement receptor 2,CR2)与其生理学配体C3d相互作用能桥连先天性免疫反应和适应性免疫反应,放大下游信号的转导现象,显著降低抗原刺激B细胞活化的阈值,可将B细胞对抗原的敏感性提高1 000~10 000倍,对于激活B细... 【目的】补体受体Ⅱ(complement receptor 2,CR2)与其生理学配体C3d相互作用能桥连先天性免疫反应和适应性免疫反应,放大下游信号的转导现象,显著降低抗原刺激B细胞活化的阈值,可将B细胞对抗原的敏感性提高1 000~10 000倍,对于激活B细胞及启动免疫反应至关重要。本研究旨在制备兔源鸡CR2(chCR2)多克隆抗体,为检测chCR2蛋白的表达情况提供工具,也为深入探究chCR2蛋白的功能和作用奠定基础。【方法】将pTT5-His-chCR2-ΔTM重组质粒转染至HEK293F细胞中,在真核表达系统HEK293F细胞中表达重组chCR2蛋白(His-chCR2-ΔTM),经Western blotting对蛋白表达进行分析,利用镍柱亲和层析纯化系统纯化chCR2蛋白并进行SDS-PAGE鉴定。用纯化出的chCR2蛋白免疫新西兰大白兔制备抗chCR2血清多克隆抗体;利用ELISA方法检测chCR2兔血清的效价;利用Western blotting和间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay,IFA)检测chCR2血清多克隆抗体的特异性和灵敏度。【结果】重组His-chCR2-ΔTM蛋白可在HEK293F细胞系表达,利用镍柱亲和层析法纯化得到的重组His-chCR2-ΔTM蛋白浓度为4.439 mg/mL,分子质量为45 ku。ELISA检测结果显示,chCR2血清多克隆抗体效价最高为1∶32 768 000;Western blotting和IFA结果表明,chCR2蛋白可被chCR2血清多抗体特异性识别;Western blotting检测时,chCR2血清多克隆抗体的稀释度为1∶5 000时特异性最好;IFA检测时,chCR2血清多克隆抗体最大稀释度为1∶1 600。【结论】本研究成功制备了chCR2蛋白兔多克隆抗体,该抗体效价较高且特异性较好,为后续检测chCR2蛋白及研究chCR2蛋白的功能提供了试验基础。 展开更多
关键词 鸡补体受体Ⅱ 表达纯化 多克隆抗体
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Ⅰ群4型禽腺病毒卵黄抗体中和效价与防治效果相关性试验
8
作者 蔡青秀 孙亚磊 +4 位作者 于春梅 丛雁方 董照洋 李宸辉 戴建君 《中国动物检疫》 2025年第4期106-111,共6页
为探究Ⅰ群4型禽腺病毒(FAdV-4)卵黄抗体中和效价与预防效果、治疗效果的相关性,对制备的卵黄抗体进行2^(-1)~2^(-4)梯度稀释(中和效价分别为1:282、1:142、1:79、1:36)后,分别进行预防和治疗效果试验。结果显示,在FAdV-4卵黄抗体中和... 为探究Ⅰ群4型禽腺病毒(FAdV-4)卵黄抗体中和效价与预防效果、治疗效果的相关性,对制备的卵黄抗体进行2^(-1)~2^(-4)梯度稀释(中和效价分别为1:282、1:142、1:79、1:36)后,分别进行预防和治疗效果试验。结果显示,在FAdV-4卵黄抗体中和效价不低于1:142时,分别进行预防后攻毒和攻毒后治疗试验,发现试验鸡健活率均不低于80%。结果表明,预防和治疗效果与卵黄抗体效价呈正相关。为保证卵黄抗体的临床使用效果,建议将抗体成品效力检验的中和效价标准定为不低于1:256。本研究为FAdV-4卵黄抗体的临床应用剂量选择提供了数据支持,为卵黄抗体质量标准的制定奠定了理论基础。 展开更多
关键词 Ⅰ群4型禽腺病毒卵黄抗体 预防效果 治疗效果 相关性
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SARS-CoV-2 Omicron突变株N蛋白的原核表达、纯化及免疫原性研究
9
作者 屠泽文 王全胜 +9 位作者 刘仕国 刘浩森 曾春燕 谢娟娟 李名志 李精彩 王敏 翁诗琦 康路妹 孔令保 《细胞与分子免疫学杂志》 北大核心 2025年第8期735-743,共9页
目的旨在研究新型冠状病毒Omicron(BA.1、BA.2)N蛋白的免疫学功能,并评估不同新冠病毒突变株N蛋白的免疫原性差异。方法运用序列比对确定Omicron(BA.1、BA.2)N蛋白相对新冠病毒原型株(Wuhan-Hu-1)的突变位点,以pET-28a-N-Wuhan-Hu-1质... 目的旨在研究新型冠状病毒Omicron(BA.1、BA.2)N蛋白的免疫学功能,并评估不同新冠病毒突变株N蛋白的免疫原性差异。方法运用序列比对确定Omicron(BA.1、BA.2)N蛋白相对新冠病毒原型株(Wuhan-Hu-1)的突变位点,以pET-28a-N-Wuhan-Hu-1质粒为模板经单点突变或同源重组构建pET-28a-BA.1/BA.2-N。利用原核系统分别表达上述三种N蛋白,经Ni-NTA亲和层析柱纯化后免疫小鼠。运用间接ELISA和Western blot法检测多克隆抗体的效价和反应性以及免疫小鼠脾脏细胞中白细胞介素1β(IL-1β)和γ干扰素(IFN-γ)的表达水平。结果成功利用构建的原核表达质粒在E.coli BL21(DE3)中表达了Wuhan-Hu-1 N、BA.1 N和BA.2 N蛋白,表达条件为37℃,4 h。间接ELISA试验测得三种N蛋白制备的多克隆抗体效价均为1∶51200。三种N蛋白均可使IFN-γ和IL-1β两种细胞因子表达升高,但是Omicron N蛋白较Wuhan-Hu-1 N蛋白激活两种细胞因子的效果更为明显。结论研究获得了三种新冠病毒N蛋白及多克隆抗体,并证实了N蛋白发生氨基酸位点的突变会对其免疫原性产生影响。这为开发针对不同新冠变异株N蛋白的快速诊断方法提供了依据。 展开更多
关键词 多克隆抗体 Omicron 核衣壳蛋白 γ干扰素(IFN-γ) 白细胞介素1β(IL-1β)
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人源性抗SARS-CoV-2单链抗体文库的构建及广谱中和抗体的筛选与鉴定
10
作者 尹慧敏 吕海 +3 位作者 迟莹 刘静娴 焦永军 卫平民 《细胞与分子免疫学杂志》 北大核心 2025年第2期154-160,共7页
目的构建人源性抗严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)单链可变片段(scFv)抗体文库,并筛选具有广谱中和活性的抗体,为诊断和治疗制剂的开发提供候选分子。方法从新型冠状病毒感染康复者外周血中分离单个核淋巴细胞(PBMC),提取总RNA... 目的构建人源性抗严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)单链可变片段(scFv)抗体文库,并筛选具有广谱中和活性的抗体,为诊断和治疗制剂的开发提供候选分子。方法从新型冠状病毒感染康复者外周血中分离单个核淋巴细胞(PBMC),提取总RNA,逆转录成cDNA,以此为模板构建人源性抗SARS-CoV-2 scFv抗体文库;利用噬菌体展示技术筛选对SARS-CoV-2 S蛋白具有特异性的scFv抗体。通过序列分析和人源IgG抗体表达,合成IgG全抗体,并评估其对SARS-CoV-2的结合能力及中和活性。结果成功构建了库容量为1.56×10^(7)CFU的SARS-CoV-2人源性scFv抗体文库,筛选出两种特异性scFv抗体;并将scFv抗体表达成IgG形式的全抗体(IgG-A10和IgG-G6),其中IgG-A10对SARS-CoV-2原始株(WT)和奥密克戎亚型变异毒株XBB(XBB)毒株均具有较好中和活性,对奥密克戎BA.2.86变异株的第二代亚分支JN.1(JN.1)毒株中和效果一般。结论本研究从康复者外周血中成功构建了人源性抗SARS-CoV-2 scFv抗体文库,并筛选表达出具有中和活性的抗SARS-CoV-2 IgG抗体,为SARS-CoV-2感染的预防、诊断和治疗奠定了基础。 展开更多
关键词 SARS-CoV-2 单链可变片段(scFv) 噬菌体展示技术 中和抗体
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猪三联灭活疫苗与单苗的安全性和有效性比较评估
11
作者 伏显华 程璐璇 +6 位作者 何天慈 刘婕 孙梦诗 王岩磊 齐欢 何秀伟 李晓亮 《浙江畜牧兽医》 2025年第1期1-3,共3页
为评估猪肺炎支原体、猪圆环病毒2型、猪瘟病毒三联灭活疫苗的免疫效果,选取14日龄健康仔猪对市售猪支原体肺炎灭活疫苗、猪圆环病毒2型灭活疫苗和猪瘟病毒E2蛋白重组杆状病毒疫苗单苗与三联灭活苗进行安全性、效力检验比较试验。结果表... 为评估猪肺炎支原体、猪圆环病毒2型、猪瘟病毒三联灭活疫苗的免疫效果,选取14日龄健康仔猪对市售猪支原体肺炎灭活疫苗、猪圆环病毒2型灭活疫苗和猪瘟病毒E2蛋白重组杆状病毒疫苗单苗与三联灭活苗进行安全性、效力检验比较试验。结果表明,三联苗免疫组在安全性和效力方面与市售单苗免疫组相当,免疫30天内未见副反应和影响14日龄仔猪生长性能。对肺炎保护率,三联苗为79.8%,单苗为69.7%,均在60.0%以上,对圆环病毒,三联苗和单苗B攻毒保护率均为5/5保护,血清中检测不出病毒,而攻毒对照组发病率为5/5,对猪瘟病毒三联疫苗与两种市售猪瘟疫苗对免疫仔猪均获得5/5攻毒保护。本试验将三种抗原与新型的605水佐剂按一定比例混合后制备的三联疫苗,具有黏度低、易注射、吸收好、一针多防等优点。 展开更多
关键词 三联苗 猪支原体肺炎灭活疫苗 猪圆环病毒2型灭活疫苗 猪瘟病毒E2蛋白重组杆状病毒疫苗 安全性检验
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全基因组测序分析山东省胶东地区禽源弯曲菌基因组特征和耐药性 被引量：1
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作者 王娟 宋时萍 +10 位作者 黄秀梅 刘俊辉 王琳 苗帅 刘娜 赵建梅 高玉斌 赵格 张喜悦 王君玮 曲志娜 《中国动物检疫》 CAS 2024年第7期22-28,共7页
为了解山东省胶东地区禽源弯曲菌的耐药特征、毒力特征及分型遗传进化关系,对2021-2022年来自胶东地区26个养禽场的31株弯曲菌,采用肉汤稀释法进行抗生素敏感性检测,然后基于全基因组测序结果分析其耐药基因、毒力基因、多位点序列分型... 为了解山东省胶东地区禽源弯曲菌的耐药特征、毒力特征及分型遗传进化关系,对2021-2022年来自胶东地区26个养禽场的31株弯曲菌,采用肉汤稀释法进行抗生素敏感性检测,然后基于全基因组测序结果分析其耐药基因、毒力基因、多位点序列分型,并进行全基因组单核苷酸多态性(wgSNPs)遗传进化分析。结果显示:31株弯曲菌对四环素的耐药率为96.77%,对环丙沙星、萘啶酸的耐药率均为93.55%;31株菌呈现出6种耐药谱,15株菌耐3类及以上药物。基于全基因组测序结果,31株弯曲菌分为20个序列型(ST),其中结肠弯曲菌优势克隆群为CC828,空肠弯曲菌呈现多样性分布;携带喹诺酮类、四环素类、氨基糖苷类、β-内酰胺类等多种类型耐药基因,携带已知功能的6类42种毒力基因。经wgSNPs遗传进化分析,结肠弯曲菌优势克隆群CC828分布在3个小分支中,空肠弯曲菌分布在7个小分支中,分布分散。结果表明:胶东地区禽源弯曲菌耐药严重,耐药谱较广,携带的耐药基因与耐药表型有一定关系;携带毒力基因数量较多,结肠弯曲菌有优势克隆群,空肠弯曲菌ST型呈多样性,分离菌株具有较高的遗传多样性。本研究为降低禽源弯曲菌向人类传播的概率,实现“同一健康”提供了技术支撑。 展开更多
关键词 禽源弯曲菌 全基因组测序 耐药性 毒力特征
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驼源天然噬菌体纳米抗体文库的构建及抗CD22纳米抗体的筛选 被引量：1
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作者 何婉钧 崔愷 +2 位作者 张西倩 蒋丹 徐广贤 《细胞与分子免疫学杂志》 北大核心 2025年第3期254-261,共8页
目的筛选出抗CD22特异性纳米抗体,为其作为免疫治疗制剂提供基础。方法构建天然噬菌体纳米抗体展示文库,分析其多样性。以生物素化CD22抗原为靶点,进行3轮生物素链霉亲和素液相筛选法,初步通过ELISA和基因测序鉴定抗CD22纳米抗体序列。... 目的筛选出抗CD22特异性纳米抗体,为其作为免疫治疗制剂提供基础。方法构建天然噬菌体纳米抗体展示文库,分析其多样性。以生物素化CD22抗原为靶点,进行3轮生物素链霉亲和素液相筛选法,初步通过ELISA和基因测序鉴定抗CD22纳米抗体序列。结果经测定,构建的噬菌体纳米抗体展示文库容量为3.89×10~9 CFU/mL,插入有效片段高于85%。基于此文库,初步筛选出7条抗CD22纳米抗体,其氨基酸序列比对结果显示,整体相似性为70.34%,均为亲水性蛋白。蛋白-蛋白复合物对接预测结果表明,5条纳米抗体序列的模拟蛋白都可以配对连接到CD22,主要作用力为疏水相互作用和氢键。结论本研究为靶向CD22的嵌合抗原受体T细胞的研究提供基础,成功构建天然噬菌体纳米抗体展示文库,获得5条抗CD22特异性的纳米抗体。 展开更多
关键词 CD22 纳米抗体 噬菌体展示文库
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抗单纯疱疹病毒1型的IgY制备及其生物学活性检测
14
作者 苏海涛 翟玥 +1 位作者 宋秀玲 徐坤 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期303-309,共7页
目的:制备抗单纯疱疹病毒1型(HSV-1)的卵黄抗体(IgY),探讨该抗体的生物学活性,阐明其抗HSV-1的能力。方法:制备HSV-1灭活疫苗,采用鸡胸多点注射法免疫高产蛋鸡,采用聚乙二醇-6000(PEG-6000)法提纯IgY,采用间接ELISA法、十二烷基硫酸钠-... 目的:制备抗单纯疱疹病毒1型(HSV-1)的卵黄抗体(IgY),探讨该抗体的生物学活性,阐明其抗HSV-1的能力。方法:制备HSV-1灭活疫苗,采用鸡胸多点注射法免疫高产蛋鸡,采用聚乙二醇-6000(PEG-6000)法提纯IgY,采用间接ELISA法、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)技术和蛋白浓度定量试剂盒测定IgY效价、纯度及蛋白水平,采用间接ELISA法检测IgY中和病毒的能力,测定病毒阻断率,以Vero细胞为病毒感染靶细胞,测定不同抗体浓度(0.01560、0.03125、0.06250、0.12500、0.50000、和1.00000 g·L^(-1))作用后细胞病变效应(CPE),根据CPE程度测定IgY体外抗HSV-1能力。结果:制备的IgY效价随免疫时间逐渐升高,达到1/1024000后保持稳定;IgY轻链重链条带清晰;IgY平均蛋白水平为11.544 g·L^(-1);IgY对HSV-1的阻断率可高达77.90%;HSV-1致CPE程度随抗体浓度升高而逐渐降低,当IgY浓度达到0.50000g·L^(-1)及以上时,25%以下细胞(甚至无细胞)发生病变。结论:成功制备出抗HSV-1的IgY,该抗体对HSV-1具有明显的中和阻断能力和体外抑制活性,可用于药物及诊断方法的开发。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒1型 卵黄抗体 中和病毒 体外抗病毒能力
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弯曲菌宽谱烈性噬菌体生物学特性、全基因组测序分析及初步应用
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作者 王娟 刘俊辉 +12 位作者 宋时萍 黄秀梅 李彦 刘娜 赵建梅 刘燕鑫 段笑笑 高玉斌 王琳 赵格 张喜悦 王君玮 曲志娜 《中国动物检疫》 CAS 2024年第11期111-117,128,共8页
为探索控制弯曲菌污染的新途径,以弯曲菌NCTC12662为宿主菌,从养殖场鸡粪便中分离纯化得到弯曲菌噬菌体,并对其进行电镜形态特征观察、生物学特性测定与基因组学分析,同时采用棋盘法,测试噬菌体与抗生素的联合应用效果。结果显示,从山... 为探索控制弯曲菌污染的新途径,以弯曲菌NCTC12662为宿主菌,从养殖场鸡粪便中分离纯化得到弯曲菌噬菌体,并对其进行电镜形态特征观察、生物学特性测定与基因组学分析,同时采用棋盘法,测试噬菌体与抗生素的联合应用效果。结果显示,从山东省胶东地区养鸡场粪便中分离到1株噬菌体P-61。透射电镜下显示该噬菌体颗粒具有1个直径约为102.6 nm的二十面体头部和1个长度约为112.9 nm的长尾部,属于有尾噬菌体目,长尾噬菌体科;裂解谱为48.48%,裂解效价为5.5×10^(11)pfu/mL,感染复数为0.01;一步生长曲线显示潜伏期为20 min,裂解期约为130 min,裂解量为240 pfu/cell;最适宜生长温度为42℃,pH耐受性较强,在pH 5~9范围内效价较稳定。噬菌体基因组全长为130425 bp,G+C含量为26.13%,共有176个开放阅读框、3个tRNA,软件预测基因组中不含毒力基因和抗生素耐药基因。利用棋盘法测得,当噬菌体为10^(6) pfu/mL时,环丙沙星最低浓度降至1/8 MIC,联合用药组具有明显的联合杀菌效果。综上可知,得到的噬菌体P-61具有效价高、裂解谱宽及对环境适应能力强等生物学特性,且基因组信息清晰,能与抗生素联合应用发挥协同作用,具有消毒、净化等临床应用可能性。本研究为噬菌体制剂的开发利用提供了生物资源。 展开更多
关键词 弯曲菌 噬菌体 生物学特性 全基因组测序 联合杀菌
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利巴韦林单克隆抗体的制备及免疫学性能鉴定
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作者 胡骁飞 魏凤仙 +2 位作者 邢云瑞 王琳 孙亚宁 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期2025-2030,共6页
为了获得敏感性高、特异性强的利巴韦林鼠源单克隆抗体。采用戊二醛法将利巴韦林载体蛋白偶联,合成人工完全抗原;紫外扫描、凝胶电泳及动物免疫对人工抗原质量进行鉴定。通过细胞融合、阳性杂交瘤筛选、体内诱生腹水制备单克隆抗体,并... 为了获得敏感性高、特异性强的利巴韦林鼠源单克隆抗体。采用戊二醛法将利巴韦林载体蛋白偶联,合成人工完全抗原;紫外扫描、凝胶电泳及动物免疫对人工抗原质量进行鉴定。通过细胞融合、阳性杂交瘤筛选、体内诱生腹水制备单克隆抗体,并对制备的单克隆抗体进行免疫学性能鉴定。结果显示,利巴韦林与载体成功结合在一起,人工抗原制备成功。得到1株可稳定分泌利巴韦林单克隆抗体的细胞株,细胞株分泌的单抗效价在1∶512000以上,对利巴韦林的IC_(50)分别为4.74μg/L,且与金刚烷胺等其他抗病毒类药物及载体蛋白均无交叉反应性。本研究成功制备出灵敏度高、特异性强的利巴韦林单克隆抗体,为利巴韦林免疫学检测方法的建立奠定了坚实的基础。 展开更多
关键词 利巴韦林 戊二醛法 人工完全抗原 细胞融合 单克隆抗体
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β-受体激动剂类药物人工抗原合成方法研究进展
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作者 孙晓亮 王晓茵 +4 位作者 方汉卿 宋翠平 赵思俊 曹旭敏 李木子 《中国动物检疫》 CAS 2024年第2期42-46,85,共6页
开展动物性食品中β-受体激动剂监测,对保障食品安全具有重要意义。免疫分析技术操作快速、灵敏度高、检测成本低,被广泛用于大批量畜禽产品的快速筛查。抗体特性是免疫检测的核心,而人工抗原合成的质量直接影响特异性抗体性能。本文主... 开展动物性食品中β-受体激动剂监测,对保障食品安全具有重要意义。免疫分析技术操作快速、灵敏度高、检测成本低,被广泛用于大批量畜禽产品的快速筛查。抗体特性是免疫检测的核心,而人工抗原合成的质量直接影响特异性抗体性能。本文主要综述了碳二亚胺法、活泼酯法、混合酸酐法、重氮化法、戊二醛法等β-受体激动剂类药物人工抗原合成方法,以及紫外光谱法、核磁共振法等人工抗原鉴定方法,以期为免疫分析等相关工作研究提供参考。 展开更多
关键词 β-受体激动剂 免疫分析 人工抗原 合成
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唾液样本CHGA夹心ELISA方法的建立及其在应激检测中的初步应用
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作者 单尼奇 刘善收 +8 位作者 王玉玲 刘辉 汪帅 武祎琳 段楚君 范瀚尹 荆杨梦杰 庄然 张春梅 《细胞与分子免疫学杂志》 北大核心 2025年第4期324-330,共7页
目的建立定量检测唾液中嗜铬粒蛋白A(CHGA)的双抗体夹心ELISA方法,并探究其在唾液样本检测中的初步应用。方法人CHGA重组蛋白免疫BALB/c小鼠,常规杂交瘤技术制备、筛选单克隆抗体(mAb);构建双抗体夹心ELISA检测方法,优化唾液样本基质效... 目的建立定量检测唾液中嗜铬粒蛋白A(CHGA)的双抗体夹心ELISA方法,并探究其在唾液样本检测中的初步应用。方法人CHGA重组蛋白免疫BALB/c小鼠,常规杂交瘤技术制备、筛选单克隆抗体(mAb);构建双抗体夹心ELISA检测方法,优化唾液样本基质效应,并应用该方法检测应激人群唾液中的CHGA浓度。结果获得21株稳定分泌抗人CHGA的高效价杂交瘤细胞株。经方阵ELISA筛选出一对效果最佳的检测抗体,优化确定了最佳包被浓度为10μg/mL,最佳检测抗体稀释度为1∶32000。该方法的准确性及可重复性验证结果良好,批内和批间变异率均在15%以内,回收率在80%~120%之间。进一步对基质效应进行优化,使之适用于唾液样本检测;采集不同应激状态人群唾液样本,使用本研究方法检测CHGA水平,结果提示其具有反映应激强度的潜力。结论成功建立了可靠的唾液CHGA检测方法,并初步探索其作为生物标志物在应激相关研究中的应用价值。 展开更多
关键词 嗜铬粒蛋白A(CHGA) 单克隆抗体(mAb) 生物标志物 应激 唾液
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牛CD4单克隆抗体的制备及其鉴定
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作者 孔文君 朱月姝 +3 位作者 徐正中 郑成坤 陈祥 焦新安 《细胞与分子免疫学杂志》 北大核心 2025年第5期450-455,共6页
目的制备抗牛CD4的单克隆抗体,并对其进行基本生物学特性鉴定。方法通过构建牛CD4基因原核质粒,成功表达并纯化出重组牛CD4(rHis-BoCD4和rGST-BoCD4)。利用杂交瘤技术制备抗牛CD4单克隆抗体,通过ELISA对单克隆抗体亚型和效价进行鉴定和... 目的制备抗牛CD4的单克隆抗体,并对其进行基本生物学特性鉴定。方法通过构建牛CD4基因原核质粒,成功表达并纯化出重组牛CD4(rHis-BoCD4和rGST-BoCD4)。利用杂交瘤技术制备抗牛CD4单克隆抗体,通过ELISA对单克隆抗体亚型和效价进行鉴定和分析,使用间接免疫荧光实验、Western blot法分析其特异性。结果成功获得了四株稳定分泌BoCD4单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为1H4、6A10、3F9和4G10。亚类鉴定单克隆抗体亚类6A10为IgG2b,其余单克隆抗体均为IgM型。Western blot结果显示,4株牛CD4单克隆抗体均可与体外表达的牛CD4蛋白发生特异性结合。间接免疫荧光实验表明4株单克隆抗体均能够特异性识别天然牛CD4蛋白。流式细胞术检测结果显示,3F9识别牛天然CD4分子的能力最强。结论成功制备了4株特异性强且能识别天然牛CD4蛋白的单克隆抗体,为后续研究牛CD4分子的功能、牛T淋巴细胞疾病的诊断及治疗方法的建立奠定基础。 展开更多
关键词 牛CD4 单克隆抗体 原核表达
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分泌型免疫球蛋白A和肠道菌群相互作用的研究进展 被引量：6
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作者 时志琪 王玉桂 +2 位作者 李晓璐 王帅 郭爱疆 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期541-545,共5页
分泌型免疫球蛋白A(sIgA)是肠道黏膜组织中最丰富的抗体类型,与黏液和抗菌肽组成肠上皮细胞的第一道防线,保护其免受肠道病原的侵害。sIgA不仅可以阻止病原微生物的入侵,中和毒素,而且能够调节肠道菌群的组成比例,维持肠道内微生物群的... 分泌型免疫球蛋白A(sIgA)是肠道黏膜组织中最丰富的抗体类型,与黏液和抗菌肽组成肠上皮细胞的第一道防线,保护其免受肠道病原的侵害。sIgA不仅可以阻止病原微生物的入侵,中和毒素,而且能够调节肠道菌群的组成比例,维持肠道内微生物群的稳态。本综述主要介绍肠道sIgA的合成与分泌途径、sIgA与肠道菌群的相互作用。 展开更多
关键词 分泌型免疫球蛋白A 肠道菌群 相互作用
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