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鸭短喙矮小综合征病毒单克隆抗体制备及竞争ELISA检测方法的建立
1
作者 朱小丽 王劭 +5 位作者 董慧 程晓霞 江丹丹 肖世峰 陈少莺 陈仕龙 《中国畜牧兽医》 北大核心 2026年第2期948-958,共11页
【目的】建立一种快速检测鸭短喙矮小综合征病毒(Short beak and dwarfism syndrome virus,SBDSV)抗体的血清学方法,为SBDSV抗体检测及诊断试剂盒研发提供技术支撑。【方法】本研究用纯化的SBDSV M15株灭活毒免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠... 【目的】建立一种快速检测鸭短喙矮小综合征病毒(Short beak and dwarfism syndrome virus,SBDSV)抗体的血清学方法,为SBDSV抗体检测及诊断试剂盒研发提供技术支撑。【方法】本研究用纯化的SBDSV M15株灭活毒免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞(SP2/0)进行融合,利用间接ELISA筛选可分泌SBDSV单克隆抗体的杂交瘤细胞株。用筛选出的杂交瘤细胞接种小鼠制备腹水。通过间接ELISA测定单克隆抗体效价,通过间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay,IFA)和胶乳凝集(latex particle agglutination,LPA)试验鉴定单克隆抗体特性。通过中和试验测定单克隆抗体中和活性,使用试剂盒鉴定单克隆抗体亚类。运用棋盘滴定法优化反应体系,建立基于SBDSV单克隆抗体的竞争ELISA检测方法。通过检测阴性血清确定该方法的临界值。对建立的竞争ELISA检测方法进行特异性、灵敏性和重复性测定。用该方法检测临床血清样品,并与胶乳凝集抑制(latex particle agglutination inhibition,LPAI)试验结果进行比对。【结果】经间接ELISA筛选,获得3株稳定分泌SBDSV单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为D5-3、G11-23和H2-27。间接ELISA结果显示,3株杂交瘤细胞D5-3、G11-23和H2-27培养上清的抗体效价分别为1∶2~6、1∶2~5和1∶2~6,腹水的抗体效价分别为1∶10~5、1∶10~4和1∶10~6。IFA结果显示,单克隆抗体D5-3、G11-23和H2-27均具有较好的结合活性,可用于IFA检测。LPA试验结果显示,仅单克隆抗体H2-27具有致敏胶乳的特性。中和试验结果显示,3株单克隆抗体均具有中和SBDSV的能力,其中单克隆抗体H2-27的中和活性最强。单克隆抗体亚类鉴定结果显示,单克隆抗体D5-3和G11-23均为IgG1,H2-27为IgM。以纯化的SBDSV(M15株)灭活毒作为包被抗原,单克隆抗体H2-27为竞争抗体,建立了一种检测SBDSV抗体的竞争ELISA方法,当抑制率(PI)≥23.70%时,判定为SBDSV抗体阳性;PI≤15.91%时判定为阴性。该方法特异性好,与番鸭细小病毒(Muscovy duck parvovirus,MDPV)、番鸭呼肠孤病毒(Muscovy duck reovirus,MDRV)、鸭源副黏病毒(Duck paramyxovirus,DPMV)、鸭肝炎病毒1型(Duck hepatitis virus-1,DHV-1)和鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus,DTMUV)阳性血清均无交叉反应;敏感性高,高免血清(LPAI效价1∶2~8)1∶25600稀释时仍为阳性;批间、批内重复性好,变异系数均<6%。竞争ELISA检测结果与LPAI结果具有良好的正相关性,二者的符合率为89.10%(188/211)。【结论】本研究成功制备3株SBDSV单克隆抗体,基于单克隆抗体H2-27建立的竞争ELISA方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可高通量检测SBDSV抗体,为监测SBDSV在中国的流行情况及雏鸭母源抗体水平评价提供技术支撑。 展开更多
关键词 鸭 短喙矮小综合征病毒(SBDSV) 单克隆抗体 竞争ELISA
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雷公藤甲素对妊娠期大鼠生殖参数的影响
2
作者 张晓敏 康玉军 +2 位作者 荆嘉慧 徐坤 党静 《动物医学进展》 北大核心 2026年第1期46-54,共9页
为评估雌性大鼠妊娠期使用雷公藤甲素(TP)对其生殖参数的影响,将6月龄SD雌雄大鼠合笼,受孕后随机分为对照组和4个TP组,TP组分别接受200、400、600、800μg/kg的TP溶液灌胃平均21 d直至分娩,分娩后处死所有雌性大鼠,记录产仔量,计算生殖... 为评估雌性大鼠妊娠期使用雷公藤甲素(TP)对其生殖参数的影响,将6月龄SD雌雄大鼠合笼,受孕后随机分为对照组和4个TP组,TP组分别接受200、400、600、800μg/kg的TP溶液灌胃平均21 d直至分娩,分娩后处死所有雌性大鼠,记录产仔量,计算生殖腺指数和流产率,检测血清性激素水平及氧化应激指标,测定生殖器官中凋亡蛋白表达情况,检测雌性大鼠子宫和胎盘中3β-羟类固醇脱氢酶(3β-HSD)、雌激素受体基因-1(Esr1)mRNA表达情况。结果显示,与对照组比较,TP组所有雌性大鼠均出现产仔量减少,流产率增加,胎鼠体重降低(P<0.01),血清雌二醇(E2)降低,黄体生成素(LH)和卵泡刺激素(FSH)升高(P<0.05);同时,血清丙二醛(MDA)升高,而超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)降低(P<0.05);与对照组比较,高剂量TP(600~800μg/(kg·d))引起雌性大鼠卵巢和子宫形态异常、生殖腺指数降低、凋亡蛋白与抗凋亡蛋白表达失衡,子宫和胎盘组织3β-HSD表达上调、Esr1表达下调(P<0.05)。结果表明,妊娠期使用TP引起雌性大鼠生殖器官形态异常,妊娠不良结局风险增加,胚胎生长发育异常,这可能与TP干扰下丘脑-垂体-性腺轴(HPG)功能、降低雌激素水平、增强氧化应激、诱导生殖器官细胞凋亡及影响3β-HSD和Esr1基因表达有关。 展开更多
关键词 雷公藤甲素 妊娠期 雌激素 氧化应激 凋亡
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新疆地区奶牛乳腺炎肺炎克雷伯菌的分离鉴定与耐药性分析
3
作者 蔡扩军 徐敏 +2 位作者 孙鹏亮 夏利宁 赵红琼 《畜牧兽医学报》 北大核心 2026年第1期464-475,共12页
旨在了解新疆地区奶牛乳腺炎肺炎克雷伯菌的流行情况与耐药特性。本研究从新疆奶牛集约化养殖集中的9个地区采集15个规模奶牛养殖场奶牛2083份临床乳腺炎和隐性乳腺炎奶样,对样品中的肺炎克雷伯菌进行分离培养、革兰染色,并采用PCR及16S... 旨在了解新疆地区奶牛乳腺炎肺炎克雷伯菌的流行情况与耐药特性。本研究从新疆奶牛集约化养殖集中的9个地区采集15个规模奶牛养殖场奶牛2083份临床乳腺炎和隐性乳腺炎奶样,对样品中的肺炎克雷伯菌进行分离培养、革兰染色,并采用PCR及16S rRNA测序进行鉴定,对分离菌株采用微量肉汤稀释法检测耐药情况。结果表明,从奶样中分离出266株肺炎克雷伯菌,分离率为12.8%(266/2083),临床乳腺炎和隐性乳腺炎奶样肺炎克雷伯菌分离率无显著差异(P>0.05)。采用微量肉汤稀释法测定266个分离株对16种抗菌药物的敏感性及产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)情况,结果显示分离株对四环素、头孢噻呋、头孢吡肟、头孢噻肟和头孢唑林的耐药率较高(23.7%~41.0%)。16.9%(45/266)的分离株为多重耐药菌,6.4%(17/266)的分离株产ESBLs。结果提示,新疆15家规模化奶牛场乳腺炎肺炎克雷伯菌平均分离率在全国处于相对较低水平。分离株对四环素和头孢类抗菌药物具有较强的耐药性,本研究为掌握奶牛乳腺炎肺炎克雷伯菌的流行特征及指导临床用药提供了依据。 展开更多
关键词 奶牛乳腺炎 肺炎克雷伯菌 分离鉴定 耐药特性
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口蹄疫病毒3D蛋白与宿主互作蛋白的筛选及鉴定
4
作者 刘永杰 兰喜 +4 位作者 李玉星 张勇 何继军 尚佑军 郑海学 《中国兽医科学》 北大核心 2026年第1期13-19,共7页
口蹄疫是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的猪、牛、羊等偶蹄类动物急性、热性,高度接触性传染病。FMDV 3D蛋白是病毒编码RNA的RNA依赖性聚合酶(3D^(pol)),是病毒RNA复制的重要蛋白,有关3D蛋白与宿主蛋白相互作用的报道较少。本研究应用PK-15细... 口蹄疫是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的猪、牛、羊等偶蹄类动物急性、热性,高度接触性传染病。FMDV 3D蛋白是病毒编码RNA的RNA依赖性聚合酶(3D^(pol)),是病毒RNA复制的重要蛋白,有关3D蛋白与宿主蛋白相互作用的报道较少。本研究应用PK-15细胞cDNA酵母表达文库,利用酵母双杂交技术,最终获得与3D有潜在相互作用的15个宿主潜在蛋白,通过免疫共沉淀和共聚焦试验进一步验证,鉴定出宿主ataxin-3和voltage-dependent anion channel 1(VDAC1)与3D具有相互作用,研究结果为宿主蛋白与3D蛋白相互作用在病毒复制中的功能提供了数据支撑。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 3D蛋白 酵母双杂交技术 蛋白质相互作用
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猫杯状病毒感染性克隆的构建及拯救病毒的鉴定
5
作者 朱雪敏 李鑫基 +7 位作者 华炯钢 陈柳 叶伟成 张传亮 朱寅初 付媛 张存 云涛 《中国兽医科学》 北大核心 2026年第1期20-26,共7页
旨在建立猫杯状病毒(FCV)反向遗传系统,以探究FCV的致病机制,为后续疫苗研发提供科学依据。以FCV HZ2024株为对象,构建DNA-launched感染性克隆系统。FCV全基因组的4个片段被依次插入pAY-CHS重组质粒后转染F81细胞并传代鉴定。结果显示,F... 旨在建立猫杯状病毒(FCV)反向遗传系统,以探究FCV的致病机制,为后续疫苗研发提供科学依据。以FCV HZ2024株为对象,构建DNA-launched感染性克隆系统。FCV全基因组的4个片段被依次插入pAY-CHS重组质粒后转染F81细胞并传代鉴定。结果显示,FCV HZ2024基因片段扩增后插入DNA-launched系统质粒,成功构建DNA-launched系统拯救病毒rFCV HZ2024-RE,转染细胞24 h后出现细胞病变效应,病毒滴度稳定在10^(7)~10^(8T)CID_(50)/m L。间接免疫荧光检测证实VP1蛋白抗原表位完全保留,重组病毒的衣壳蛋白成功表达。且重组病毒与亲本毒株的复制动力学高度相似,蚀斑形态无显著差异。Eco R V酶切及测序验证表明,突变位点(C7183T、A7186C)被精准引入且稳定遗传。总之,构建的DNA-launched系统实现了FCV高效拯救与精准遗传。 展开更多
关键词 猫杯状病毒 感染性克隆 反向遗传学 病毒拯救
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奶山羊源反刍链球菌的分离鉴定
6
作者 刘萍 李美文 +5 位作者 德珍 王敏 曹小安 刘志杰 何继军 尚佑军 《中国兽医科学》 北大核心 2026年第2期235-240,共6页
为明确陕西省某奶山羊养殖场羔羊关节炎的病因,取发病羔羊关节积液和主要脏器组织进行了病原菌检测和细菌分离培养、生化试验、药敏试验及小鼠致病性试验。结果显示,羔羊关节液和脾组织中链球菌属细菌核酸呈阳性,从关节积液中成功分离出... 为明确陕西省某奶山羊养殖场羔羊关节炎的病因,取发病羔羊关节积液和主要脏器组织进行了病原菌检测和细菌分离培养、生化试验、药敏试验及小鼠致病性试验。结果显示,羔羊关节液和脾组织中链球菌属细菌核酸呈阳性,从关节积液中成功分离出1株链球菌,经形态学观察、生化试验和16S rRNA基因序列比对,鉴定为反刍链球菌。药敏试验表明,该分离株对链霉素、阿米卡星、妥布霉素、多黏菌素B、万古霉素和诺氟沙星高度敏感,对红霉素中度敏感,但对青霉素G、头孢类、四环素和复方新诺明等多种常用抗生素存在耐药性。致病性试验证实该分离株对小鼠具有较强致病性,可致感染小鼠死亡。本研究为反刍链球菌的实验室诊断、抗菌药物合理选用以及后续研究其耐药机制和防控技术奠定了基础。 展开更多
关键词 反刍链球菌 关节炎 耐药性 奶山羊
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鸭星状病毒1型信阳株全基因组扩增及遗传进化分析
7
作者 张敏 李迎晓 +5 位作者 张璐璐 何书海 曲哲会 秦东升 刘纪成 焦凤超 《中国畜牧兽医》 北大核心 2026年第2期959-972,共14页
【目的】了解信阳地区鸭星状病毒1型(Duck astrovirus type 1,DAstV1)流行株基因组的演化特征,为进一步研究信阳地区DAstV1的流行、遗传进化及致病特性提供参考依据。【方法】对某养殖场送检的病鸭进行禽腺病毒、禽星状病毒和鸭甲型肝... 【目的】了解信阳地区鸭星状病毒1型(Duck astrovirus type 1,DAstV1)流行株基因组的演化特征,为进一步研究信阳地区DAstV1的流行、遗传进化及致病特性提供参考依据。【方法】对某养殖场送检的病鸭进行禽腺病毒、禽星状病毒和鸭甲型肝炎病毒等12种常见病毒的PCR/RT-PCR筛查。采集病鸭肝脏组织,无菌处理后经卵黄囊途径接种10日龄SPF鸭胚,连续传代4次,并逐代收集尿囊液进行DAstV RT-PCR鉴定。对分离到的病毒进行全基因组测序,并对ORF1a、ORF1b和ORF2基因序列及其编码蛋白的氨基酸变异位点进行比对分析。【结果】送检病料筛查结果显示,禽星状病毒呈阳性。第1~4代鸭胚尿囊液中均呈DAstV1阳性,将该病毒命名为HN24XY06。第4代接种鸭胚全部死亡,死亡胚体发育不良且体表出血。HN24XY06基因组全长7 755 nt,包含ORF1a、ORF1b和ORF2 3个开放阅读框。序列比对和系统发育分析表明,HN24XY06属于DAstV1毒株,与山东分离株DAstV-SDZZ和DAstV-SDWF亲缘关系较近。ORF1a、ORF1b和ORF2蛋白的氨基酸序列分析显示,存在不同程度的突变,多发生在ORF1a编码的氨基酸序列中。【结论】本研究分离到了1株DAstV1,丰富了信阳地区DAstV1的分子流行病学资料,并为进一步研究DAstV1的致病机制奠定了基础。 展开更多
关键词 鸭星状病毒1型(DAstV1) 病毒分离与鉴定 全基因组扩增 遗传进化分析
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茶树菇酸性多糖的结构特征及其对免疫抑制小鼠肠道微环境稳态的调控作用
8
作者 武彩红 蔡高峰 +5 位作者 丁爱云 刘朋 邱树磊 陈晓兰 张斌 陆辉 《中国兽医科学》 北大核心 2026年第2期273-281,共9页
为解析茶树菇酸性多糖(AAP)的结构特征,并探究其对环磷酰胺(CY)诱导的免疫抑制小鼠肠道微环境稳态的调控作用,采用DEAE离子交换层析从茶树菇粗多糖中分离纯化酸性多糖组分,并通过高效凝胶渗透色谱、高效液相色谱、傅里叶变换红外光谱和... 为解析茶树菇酸性多糖(AAP)的结构特征,并探究其对环磷酰胺(CY)诱导的免疫抑制小鼠肠道微环境稳态的调控作用,采用DEAE离子交换层析从茶树菇粗多糖中分离纯化酸性多糖组分,并通过高效凝胶渗透色谱、高效液相色谱、傅里叶变换红外光谱和甲基化分析对其分子质量、单糖组成和结构特征进行解析。将36只6周龄雌性小鼠随机分成6组,每组6只,设空白对照组(CON)、模型组(CY)、阳性药物组(左旋咪唑,LH)及AAP低、中、高剂量组,灌胃干预7 d后,测定小鼠体重、血清二胺氧化酶(DAO)活性及肠道β-防御素、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-17(IL-17)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量。结构分析表明,AAP是一种分子质量为6.248 kDa的酸性多糖,主要由葡萄糖、半乳糖、岩藻糖和葡萄糖醛酸构成,主链以1→6糖苷键连接,并具有高度分支化结构。动物试验结果表明,AAP能显著缓解CY引起的小鼠体重下降,降低血清DAO活性,促进肠道β-防御素分泌并调节IL-4、IL-10、IL-17和TNF-α水平,同时提高SOD活性并降低MDA含量。表明,AAP具有明确的结构特征,可通过多途径协同调节免疫抑制小鼠的肠道微环境稳态,可为AAP开发为一种新型的畜禽免疫调节剂提供试验依据。 展开更多
关键词 茶树菇酸性多糖 结构表征 小鼠 免疫抑制 肠道稳态
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盐胁迫对药用蒲公英生长及菊苣酸含量的影响
9
作者 杨阳 濮春娟 +3 位作者 韦明慧 周桂生 邹立思 严辉 《北方园艺》 北大核心 2026年第1期70-78,共9页
以药用蒲公英为试材,采用种子萌发试验及水培法,研究了盐胁迫对蒲公英种子萌发、幼苗生长及菊苣酸含量的影响,并对盐胁迫条件下促进蒲公英种子发芽方法进行初探,以期为药用蒲公英在盐碱地的规模化栽培提供参考依据。结果表明:浓度为0.3%... 以药用蒲公英为试材,采用种子萌发试验及水培法,研究了盐胁迫对蒲公英种子萌发、幼苗生长及菊苣酸含量的影响,并对盐胁迫条件下促进蒲公英种子发芽方法进行初探,以期为药用蒲公英在盐碱地的规模化栽培提供参考依据。结果表明:浓度为0.3%、0.5%、0.7%的盐溶液对蒲公英种子萌发与幼苗生长有显著的抑制作用;在不同程度的盐胁迫条件下,赤霉素对蒲公英种子萌发的促进作用均最好;蒲公英中菊苣酸含量随盐浓度的升高而升高,表明适度盐胁迫对蒲公英中菊苣酸的积累有促进作用。 展开更多
关键词 蒲公英 盐胁迫 种子萌发 菊苣酸
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四川肉牛源疣状毛癣菌的分离鉴定、系统发育分析与药敏试验
10
作者 王娅 李志国 +3 位作者 罗荣艳 刘瑞国 左之才 马晓平 《中国畜牧兽医》 北大核心 2026年第1期459-468,共10页
【目的】探究四川肉牛真菌性皮肤病的病原,为该病的防治提供参考。【方法】采集四川各地疑似皮肤癣病的患畜皮屑,用三点接种法将采集的样本接种于皮肤癣菌鉴别培养基,将分离得到的菌株经内部转录间隔区(ITS)序列扩增后通过NCBI数据库BL... 【目的】探究四川肉牛真菌性皮肤病的病原,为该病的防治提供参考。【方法】采集四川各地疑似皮肤癣病的患畜皮屑,用三点接种法将采集的样本接种于皮肤癣菌鉴别培养基,将分离得到的菌株经内部转录间隔区(ITS)序列扩增后通过NCBI数据库BLAST分析基因相似性并构建系统发育树,以10^(7) CFU/mL分离菌孢子悬液感染免疫抑制小鼠,观察临床症状和病理学特征,微量二倍稀释法探究分离菌耐药表型。【结果】从24个样本中分离到10株真菌(rntv01~rntv10)。PCR扩增结果显示,分离株均得到大小为681 bp的扩增片段;BLAST比对结果显示,分离株与疣状毛癣菌相似性为97%~100%;动物试验结果显示,免疫抑制小鼠感染该菌后皮肤出现被毛脱落、结痂、皮屑增多等症状,HE染色后观察到表皮角质层角化不全、炎性细胞增生,PAS染色后观察到大量菌丝侵染;药敏试验结果显示,除rntv10外,其余菌株对两性霉素B中介;分离菌对伊曲康唑敏感性不同,rntv09、rntv10敏感,rntv01、rntv04~rntv08中介,rntv02、rntv03耐药;rntv10对酮康唑敏感、对5-氟胞嘧啶中介,其余菌株均为耐药株;所有菌株对环吡酮胺中介,对氟康唑和特比萘芬耐药。【结论】四川肉牛真菌性皮肤病主要病原是疣状毛癣菌,该菌可引起小鼠皮肤的侵袭性感染,患病牛可用两性霉素B、伊曲康唑或环吡酮胺进行治疗。 展开更多
关键词 肉牛 疣状毛癣菌 分离鉴定 ITS序列 系统发育分析 药敏试验
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猪血浆中替米考星高效液相色谱检测方法的建立
11
作者 赵莎莎 程星星 +7 位作者 龚佳豪 汪宇涵 赵源 司星星 张梦醒 魏经阁 高修歌 郭大伟 《畜牧与兽医》 北大核心 2026年第2期56-60,共5页
旨在建立一种用于猪血浆中替米考星含量的高效液相色谱(high-performance liquid chromatography,HPLC)检测方法。制备含替米考星标准品的健康仔猪血浆样品,用甲醇提取和氯仿萃取,使用Agilent ZOR BAX Eclipse XDB-C_(18)色谱柱(4.6 mm&... 旨在建立一种用于猪血浆中替米考星含量的高效液相色谱(high-performance liquid chromatography,HPLC)检测方法。制备含替米考星标准品的健康仔猪血浆样品,用甲醇提取和氯仿萃取,使用Agilent ZOR BAX Eclipse XDB-C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm)洗脱,外标法定量分析。结果:方法学验证显示,替米考星在0.15~50μg/m L的浓度范围内,呈线性(y=9 956.3x-798.18,R^(2)=0.999),日内与日间精密度分别为0.30%~2.46%、1.25%~4.78%,回收率为85.37%~118.45%。结论:该方法特异性强、灵敏度高、重复性好,适用于猪血浆中替米考星的含量测定。 展开更多
关键词 替米考星 高效液相色谱 血浆 猪 外标法
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国外兽医器械行业监管概况
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作者 于遵波 胡剑武 +1 位作者 屠迪 郭辉 《中国兽医杂志》 北大核心 2026年第2期138-140,F0003,共4页
兽医器械在动物疫病防治中起着至关重要的作用,国际上对兽医器械的监管主要有美国模式和欧盟模式,本文以典型国家为例剖析了其法律设定和运行机制,介绍了国际医疗器械监管机构论坛(IMDRF)的工作机制,以及其指南文件对各国兽医器械规则... 兽医器械在动物疫病防治中起着至关重要的作用,国际上对兽医器械的监管主要有美国模式和欧盟模式,本文以典型国家为例剖析了其法律设定和运行机制,介绍了国际医疗器械监管机构论坛(IMDRF)的工作机制,以及其指南文件对各国兽医器械规则的指导作用。 展开更多
关键词 国外 兽医器械 监管 国际医疗器械监管机构论坛(IMDRF)
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基于EVM009基因的鼠痘病毒荧光定量检测方法建立
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作者 赵立磊 任善会 +11 位作者 王会宝 高小龙 姚威 杨雪 张红强 王小龙 张强蓉 喇萍 叶国荣 陈豪泰 孙跃峰 樊江峰 《动物医学进展》 北大核心 2026年第1期9-14,共6页
为建立一种快速测定鼠痘病毒(ECTV)含量的检测方法,针对鼠痘病毒的基因序列,建立了靶向ECTV EVM009基因的荧光定量PCR检测方法。根据ECTV全基因序列,设计出4对qPCR引物并评价其特异性及敏感性。最终通过筛选得到靶向于ECTV EVM009基因... 为建立一种快速测定鼠痘病毒(ECTV)含量的检测方法,针对鼠痘病毒的基因序列,建立了靶向ECTV EVM009基因的荧光定量PCR检测方法。根据ECTV全基因序列,设计出4对qPCR引物并评价其特异性及敏感性。最终通过筛选得到靶向于ECTV EVM009基因的一对特异性高、灵敏度强的荧光定量PCR引物。利用构建的pCAGGS-EVM009真核表达质粒绘制标准曲线获得标准曲线y=-3.5099 x+41.30,线性相关系数R^(2)=0.9992。扩增效率达到92.7%;对重组质粒标准品的最低检测限为4.91×10^(0)拷贝/μL;组内与组间的重复试验变异系数均小于2%;仅能有效检测ECTV,与VACV、GPTV、SPPV、ORFV和LSDV均无交叉反应。结果表明,建立的荧光定量检测方法特异性强、敏感性高及重复性好,可以用于ECTV感染小鼠模型中病理组织中病毒载量的测定。 展开更多
关键词 鼠痘病毒 EVM009基因 荧光定量PCR 小鼠模型
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广深地区3种常见猫病毒的分离鉴定及遗传进化分析
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作者 孙媛 梁爽爽 +2 位作者 罗志莹 王婷 马静云 《华南农业大学学报》 北大核心 2026年第1期11-20,共10页
【目的】猫杯状病毒(Feline calicivirus,FCV)、猫细小病毒(Feline parvovirus,FPV)和猫疱疹病毒1型(Feline herpesvirus-1,FHV-1)是常见的高传染性、高致病性病原体,本文针对广深地区的这3种病毒开展研究,以期明确本地FCV、FPV和FHV-1... 【目的】猫杯状病毒(Feline calicivirus,FCV)、猫细小病毒(Feline parvovirus,FPV)和猫疱疹病毒1型(Feline herpesvirus-1,FHV-1)是常见的高传染性、高致病性病原体,本文针对广深地区的这3种病毒开展研究,以期明确本地FCV、FPV和FHV-1的流行情况、遗传变异和演化方向。【方法】本研究于2021年10月至2022年6月收集了广州、深圳地区的动物医院、动物收容所和华南农业大学病猫的眼鼻口拭子、肛拭子样本,通过提取临床样本核酸、one step RT-PCR、常规PCR技术检测FCV、FPV及FHV-1;对阳性样品进行基因扩增及测序,利用DNAStar分析核苷酸序列相似性,使用MEGA 7.0构建系统发育树;使用克兰德尔−里斯猫肾(Crandell-Reese feline kidney,CRFK)细胞接种FCV、FHV-1阳性样品进行病毒分离,连续盲传至出现细胞病变,利用PCR、电子显微镜等技术鉴定分离毒株。【结果】379例具有临床症状的病猫中,FPV、FCV、FHV-1感染率分别为22.16%、19.00%和3.17%;病毒阳性率与猫只性别无关,6月龄及以下患猫中FCV、FPV检出率最高,分别为63.89%、58.33%,FHV-1在12月龄及以上患猫中阳性占比最高,为66.67%。已免疫“妙三多”疫苗的患猫中FCV、FHV-1、FPV均有检出,阳性率分别为75.00%、75.00%、20.24%。成功分离到7株FCV、1株FHV-1和2株FPV。7株FCV分离株全基因组与参考株的核苷酸相似性为75.0%~87.5%,7株FCV分离株形成了两大分支,GZ-1-249和GZ-1-184属于GI分支,而其他5株分离株均属于GII分支。14条FPV VP2基因序列与参考株的核苷酸相似性为97.4%~100.0%,14条序列与“妙三多”疫苗株M38246.1(FPV USA Cu4)等序列共同归属于一大分支。【结论】研究结果丰富了FCV、FPV和FHV-1相关流行病学数据,增强了对本地流行毒株的认识,为未来本土疫苗的研发和优化提供了重要支持。 展开更多
关键词 猫杯状病毒 猫细小病毒 猫疱疹病毒1型 分离 鉴定 遗传进化
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云南地区血清7型猪胸膜肺炎放线杆菌的分离鉴定及生物学特性分析
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作者 李富祥 宋建领 李占鸿 《中国畜牧兽医》 北大核心 2026年第1期499-508,共10页
【目的】研究云南地区猪源胸膜肺炎放线杆菌的生物学特性。【方法】从云南红河州某猪场患呼吸道疾病猪肺脏中分离细菌,采用生化试验、16S rDNA序列分析和PCR扩增鉴定分离菌,并分析分离菌的血清型、致病性、药物敏感性和耐药基因等生物... 【目的】研究云南地区猪源胸膜肺炎放线杆菌的生物学特性。【方法】从云南红河州某猪场患呼吸道疾病猪肺脏中分离细菌,采用生化试验、16S rDNA序列分析和PCR扩增鉴定分离菌,并分析分离菌的血清型、致病性、药物敏感性和耐药基因等生物学特性。【结果】从病猪肺脏样品中分离到1株革兰阴性小球杆菌,将其编号为YN240724。生化鉴定结果显示,分离菌分解葡萄糖、果糖、蔗糖、木糖和甘露醇产酸,氧化酶、尿素酶及硝酸盐还原试验呈阳性,其生化特性与胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae)参考株相同。16S rDNA基因序列分析结果显示,分离菌与胸膜肺炎放线杆菌模式菌株ATCC 27088T和其他胸膜肺炎放线杆菌参考株间的16S rDNA序列相似性分别为100%和99.6%~100%;分离菌株与全部胸膜肺炎放线杆菌参考株形成同一个进化分支;基于上述特征分离菌YN24074被鉴定为胸膜肺炎放线杆菌。血清型鉴定结果显示,该分离菌为胸膜肺炎放线杆菌血清7型。耐药基因检测结果显示,分离菌携带β-内酰胺内耐药基因blaCIT和blaTEM以及四环素类耐药基因tetM。药敏试验结果显示,分离菌对氨基糖苷类(庆大霉素和阿米卡星)、喹诺酮类(氧氟沙星)、酰胺醇类(氟苯尼考)、四环素类(四环素)、磺胺类(磺胺甲噁唑)以及头孢类(头孢噻肟和头孢呋辛)敏感,对青霉素类(青霉素、氨苄西林和哌拉西林)以及糖肽类(万古霉素)耐药。致病性试验结果显示,分离菌对小鼠的半数致死量(LD_(50))为7.5×10^(4)CFU,致病性较强。【结论】本研究从云南地区分离获得1株猪源血清7型胸膜肺炎放线杆菌,其携带耐药基因blaCIT、blaTEM及tetM,对多种抗菌药物表现耐药,致病性较强。试验结果可为云南地区猪场猪传染性胸膜肺炎的治疗和免疫防控提供重要参考。 展开更多
关键词 猪 胸膜肺炎放线杆菌 分离鉴定 血清型 致病性
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NLRP3在奶牛子宫内膜肌成纤维细胞和M2型巨噬细胞互作中的调控作用机制
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作者 包文慧 赵佳敏 +5 位作者 巩志国 白云洁 董妍沁 毛伟 张双翼 刘博 《动物医学进展》 北大核心 2026年第1期75-83,共9页
组织修复是一个由复杂的分子信号传导和不同类型细胞间的动态相互作用驱动的高度协调的过程。巨噬细胞和成纤维细胞通过紧密的协作在组织修复的各个阶段发挥着不可或缺的作用,是推动组织修复的关键要素。Nod样受体热蛋白结构域蛋白3(NLR... 组织修复是一个由复杂的分子信号传导和不同类型细胞间的动态相互作用驱动的高度协调的过程。巨噬细胞和成纤维细胞通过紧密的协作在组织修复的各个阶段发挥着不可或缺的作用,是推动组织修复的关键要素。Nod样受体热蛋白结构域蛋白3(NLRP3)参与炎症和组织修复的调节。然而,NLRP3在成纤维细胞和巨噬细胞互作中的确切作用尚未得到充分阐释。为探究NLRP3在奶牛子宫内膜肌成纤维细胞和M2型巨噬细胞相互作用中具体调控作用机制。体外培养奶牛肌成纤维细胞及M2型巨噬细胞,检测肌成纤维细胞培养上清液(MFbCM)处理的M2型巨噬细胞IL-10的分泌量及精氨酸酶(Arginase)的表达情况;检测M2型巨噬细胞培养上清液(M2ΦCM)处理的肌成纤维细胞血管内皮生长因子(VEGF)、成纤维细胞生长因子(FGF-2)及基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达情况。同时,使用NLRP3抑制剂MCC950进一步探讨NLRP3在两种细胞间相互作用过程中发挥的作用。结果表明,在M2型巨噬细胞中,MFbCM能够显著上调M2型巨噬细胞NLRP3和Arginase的表达以及IL-10的分泌量(P<0.01)。NLRP3抑制剂MCC950能够部分抑制MFbCM的诱导效应(P<0.01)。在肌成纤维细胞中,M2ΦCM能够显著上调子宫内膜肌成纤维细胞NLRP3,VEGF,FGF-2以及MMP-9的表达(P<0.05)。同样,MCC950能够部分抑制M2ΦCM的诱导效应(P<0.01)。综上,NLRP3是促进肌成纤维细胞和巨噬细胞相互作用过程中的关键调节因子,即肌成纤维细胞可通过NLRP3调控M2型巨噬细胞功能标志物IL-10分泌及Arginase的表达,M2型巨噬细胞可通过NLRP3调控肌成纤维细胞功能标志物VEGF、FGF-2和MMP-9的表达。该研究可为理解奶牛子宫内膜功能及子宫相关疾病防治提供理论依据,为改善奶牛繁殖力管理和解决繁殖障碍提供见解。 展开更多
关键词 NLRP3 奶牛 子宫内膜 巨噬细胞 肌成纤维细胞
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宏基因组测序技术在蜱媒病原体检测中的应用研究进展
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作者 彭永帅 王梦迪 宋予震 《中国兽医杂志》 北大核心 2026年第1期38-44,共7页
蜱可传播多种病原体,引发一系列蜱媒疾病,对动物和人类健康构成严重威胁。传统检测方法(如聚合酶链式反应)在多病原体同步检测中存在明显局限。近年来,宏基因组测序(mNGS)技术在蜱媒病原体检测中展现出独特的优势,已成为发现和鉴定新发... 蜱可传播多种病原体,引发一系列蜱媒疾病,对动物和人类健康构成严重威胁。传统检测方法(如聚合酶链式反应)在多病原体同步检测中存在明显局限。近年来,宏基因组测序(mNGS)技术在蜱媒病原体检测中展现出独特的优势,已成为发现和鉴定新发病原体、解析复杂微生物群落的有力工具。随着mNGS的不断发展和完善,该技术有望在蜱媒疾病的早期诊断、监测预警和综合防控中发挥更加重要的作用。本文对蜱媒病原体的特点及mNGS技术在蜱媒病原体检测领域的研究进展进行综述,以期为蜱媒疾病的诊断和防控提供技术思路。 展开更多
关键词 宏基因组测序(mNGS) 蜱媒病原体 快速检测 应用
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液质联用技术联合网络药理学探讨半枝莲抗肿瘤作用机制
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作者 孟玲 王雯雯 +5 位作者 郑卫 武选民 仇浩 王婧 高珣 石芸 《中国畜牧兽医》 北大核心 2026年第2期1043-1054,共12页
【目的】结合液相色谱-质谱联用(LC-MS)技术与网络药理学方法,探讨半枝莲中发挥抗肿瘤作用的关键活性成分、潜在作用靶点及其调控机制,为阐明其药效基础提供理论支持。【方法】采用LC-MS技术对半枝莲提取物进行正负离子模式下的质谱分析... 【目的】结合液相色谱-质谱联用(LC-MS)技术与网络药理学方法,探讨半枝莲中发挥抗肿瘤作用的关键活性成分、潜在作用靶点及其调控机制,为阐明其药效基础提供理论支持。【方法】采用LC-MS技术对半枝莲提取物进行正负离子模式下的质谱分析,鉴定其主要化学成分。基于网络药理学方法,综合运用多种数据库与生物信息学工具,探索半枝莲抗肿瘤的关键活性成分及其作用机制。通过TCMSP平台筛选符合口服生物利用度(OB)≥30%与类药性(DL)≥0.18标准的候选化合物,并通过SwissTargetPrediction预测其潜在靶点。结合GeneCards与OMIM数据库收集肿瘤相关基因信息,取交集后确定关键作用靶点。进一步借助STRING软件构建蛋白互作网络(PPI)并进行拓扑分析,筛选核心靶点。利用Metascape平台对其进行GO功能注释与KEGG通路富集分析,明确其生物学功能与信号通路。通过Cytoscape软件构建“成分-靶点-疾病”与“靶点-通路”网络图,直观展示半枝莲抗肿瘤的潜在分子机制。采用分子对接技术对核心活性成分与关键靶点进行验证。【结果】通过LC-MS分析,在负离子模式下共鉴定出半枝莲中14个主要成分,包括木犀草素、黄芩素、汉黄芩素等黄酮类化合物,其中苏荠黄酮、黄芩素、汉黄芩素等靶点关联较多。共筛选出29个潜在活性成分和330个作用靶点,与肿瘤靶点交集得到95个关键靶点(如AKT1、VEGFA、EGFR、ESR1等)。PPI网络显示,AKT1、VEGFA、EGFR为核心靶点。GO功能富集分析显示,核心靶点主要涉及细胞增殖、凋亡、血管生成等;KEGG通路显著富集于PI3K-Akt、FoxO、p53等肿瘤相关信号通路。分子对接结果表明,核心活性成分黄芩素、汉黄芩素与关键靶点AKT1、EGFR、VEGFA、ESR1均具有良好的结合活性,进一步验证了网络药理学预测结果的可靠性。【结论】半枝莲主要通过黄芩素、汉黄芩素等黄酮类活性成分,协同作用于AKT1、VEGFA、EGFR等关键靶点,显著调控PI3K-Akt、p53及FoxO等信号通路,从而抑制肿瘤细胞增殖、诱导细胞凋亡并阻断血管生成。本试验结果从“成分-靶点-通路”多维角度阐明了半枝莲多途径协同抗肿瘤的分子机制,为其临床应用及新药研发提供了重要理论依据。 展开更多
关键词 半枝莲 液相色谱-质谱联用 网络药理学 抗肿瘤
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基于电子鼻检测的奶牛产后子宫炎早期预警模型初步研究
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作者 王芳 刚华晟 +2 位作者 张榕 段宏伟 胡俊杰 《畜牧兽医学报》 北大核心 2026年第1期553-563,共11页
旨在评估电子鼻检测奶牛粪便建立的子宫炎预警模型准确性。本研究使用电子鼻检测50头健康和22头子宫炎奶牛发病前粪便以及血液样本挥发性有机化合物(volatile organic compounds,VOCs),正交偏最小二乘判别分析(orthogonal partial least... 旨在评估电子鼻检测奶牛粪便建立的子宫炎预警模型准确性。本研究使用电子鼻检测50头健康和22头子宫炎奶牛发病前粪便以及血液样本挥发性有机化合物(volatile organic compounds,VOCs),正交偏最小二乘判别分析(orthogonal partial least squares discriminant analysis,OPLS-DA)模型初步分析数据。按7∶3划分训练集和测试集,建立预警模型并评估电子鼻预测子宫炎的性能。结果发现,健康和子宫炎奶牛发病前的粪便以及血液明显区分并各自聚类,在本研究中粪便是建立预警模型的最佳样本来源。选择决策树(Decision Tree,DT)、随机森林(Random Forest,RF)、K-邻近算法(K-Nearest Neighbors,KNN)、梯度提升(eXtreme Gradient Boosting,XGBoost)和线性判别分析(Linear Discriminant Analysis,LDA)5种不同的机器学习算法建立模型,结合模型评估指标和受试者特征(Receiver Operating Characteristic,ROC)曲线分析预测效率。研究发现测试集准确率(Accuracy,ACC)分别达到0.88、0.96、0.88、0.91、0.98,曲线下面积(Area Under Curve,AUC)分别是0.86、0.98、0.95、0.98、1.00。因此,RF和LDA模型预测性能表现最佳,电子鼻预测子宫炎的发生具有较高的准确性。综上,电子鼻检测奶牛发病前粪便VOCs能达到预警子宫炎的目的,在奶牛疾病的预警诊断中有很大的应用前景。 展开更多
关键词 奶牛子宫炎 电子鼻 机器学习算法 早期预警
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基于转录组学探究PCV2引起宿主细胞免疫抑制的作用机制
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作者 柏晶晶 陈奇 +6 位作者 黄昌巧 袁海峰 何颖 于美玲 韦英益 杨剑 胡庭俊 《动物医学进展》 北大核心 2026年第1期55-64,共10页
旨在通过转录组学技术筛选出猪圆环病毒感染宿主细胞的差异表达基因(DEGs),为揭示猪圆环病毒2型(PCV2)引起猪宿主免疫细胞产生免疫抑制的分子机制提供理论依据。以断奶仔猪脾脏为试验材料,制成猪脾淋巴细胞悬液,PCV2体外感染细胞,通过... 旨在通过转录组学技术筛选出猪圆环病毒感染宿主细胞的差异表达基因(DEGs),为揭示猪圆环病毒2型(PCV2)引起猪宿主免疫细胞产生免疫抑制的分子机制提供理论依据。以断奶仔猪脾脏为试验材料,制成猪脾淋巴细胞悬液,PCV2体外感染细胞,通过转录组学测序技术筛选DEGs,进行基因本体论(GO)、京都基因与基因组百科全书(KEGG)功能分析,对关键通路采用基因集富集分析(GSEA)和进行通路标色,挑选差异表达的基因,通过RT-qPCR验证转录组测序结果的准确性,使用Western blot技术检测重要基因的蛋白表达水平。转录组测序结果显示,PCV2感染后共捕获到15926个差异基因,其中305个差异基因表达显著上调,163个差异基因表达显著下调;GO和KEGG富集结果显示,差异基因与免疫应答等相关,主要富集在细胞因子-细胞因子受体相互作用、IL-17信号通路、风湿性关节炎、TNF信号通路、趋化因子信号通路、JAK-STAT、Toll样受体信号通路等;GSEA富集分析发现,IL-17信号通路富集于78个基因,主要包括AMCF-II、IL17F、IL13、CXCL10、CCL17等34个显著不同的基因,整体通路发生上调,TNF信号通路富集于95个基因,主要包括LTA、CXCL10、MMP9、CXCL2、CCL2等40个显著不同的基因,整体通路发生上调;RT-qPCR结果与测序结果一致,表明测序可靠;Western blot检测结果显示,PCV2感染后IL-17、TNF-α水平显著升高(P<0.05),CXCL2、IL-6水平也有所升高。转录组测序结果及后续试验结果表明,PCV2能通过上调宿主细胞IL-17、TNF等信号通路基因和蛋白表达水平影响下游炎症通路,进而引起机体产生免疫抑制。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 免疫抑制 转录组学 差异表达基因
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