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非洲猪瘟病毒pB602L蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立
1
作者 张向阳 矫健 +8 位作者 黄培 焦翠翠 张梦瑶 黄静波 龚志远 李海伦 李媛媛 张海丽 王化磊 《病毒学报》 北大核心 2026年第1期126-134,共9页
目的为了建立非洲猪瘟病毒(African Swine fever virus,ASFV)pB602L蛋白抗体间接ELISA检测方法。方法本研究利用大肠杆菌表达系统表达了His-pB602L重组蛋白,并以纯化的His-pB602L重组蛋白为包被抗原,以表达pB602L的重组狂犬病病毒免疫... 目的为了建立非洲猪瘟病毒(African Swine fever virus,ASFV)pB602L蛋白抗体间接ELISA检测方法。方法本研究利用大肠杆菌表达系统表达了His-pB602L重组蛋白,并以纯化的His-pB602L重组蛋白为包被抗原,以表达pB602L的重组狂犬病病毒免疫后的小鼠阳性血清和ASFV猪阳性血清为一抗,辣根过氧化物酶(HRP)标记的葡萄球菌A蛋白(SPA)作为广谱二抗,采用棋盘滴定法优化各反应条件,建立针对pB602L蛋白的间接ELISA抗体检测方法,并对其特异性、敏感性和重复性进行评价。结果ASFV pB602L蛋白间接ELISA抗体检测方法的最优反应条件为:抗原包被浓度为4μg/mL,4℃包被16 h~18 h,5%脱脂奶粉37℃封闭0.5 h,待检血清孵育0.5 h,SPA-HRP 1:10000倍稀释后37℃孵育0.5 h。该方法仅对ASFV阳性血清检测结果为阳性,与猪瘟病毒、猪蓝耳病毒、猪细小病毒、猪伪狂犬病毒、猪乙型脑炎病毒和猪圆环病毒2型阳性血清均无交叉反应,具有良好的特异性;该方法检测稀释度为1∶6400的猪ASFV临床阳性血清时仍呈现阳性,检测分别稀释3200倍和1600倍的ASFVⅠ型和Ⅱ型阳性血清均为阳性;批内重复和批间重复变异系数均小于10%。结论本研究建立的ASFV pB602L蛋白间接ELISA抗体检测方法不仅可用于ASF的临床诊断和流行病学调查,亦能够为ASF疫苗研发过程中免疫动物的特异性抗体评价提供技术支持。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 pB602L蛋白 pB602L抗体 间接ELISA
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鸭短喙矮小综合征病毒单克隆抗体制备及竞争ELISA检测方法的建立
2
作者 朱小丽 王劭 +5 位作者 董慧 程晓霞 江丹丹 肖世峰 陈少莺 陈仕龙 《中国畜牧兽医》 北大核心 2026年第2期948-958,共11页
【目的】建立一种快速检测鸭短喙矮小综合征病毒(Short beak and dwarfism syndrome virus,SBDSV)抗体的血清学方法,为SBDSV抗体检测及诊断试剂盒研发提供技术支撑。【方法】本研究用纯化的SBDSV M15株灭活毒免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠... 【目的】建立一种快速检测鸭短喙矮小综合征病毒(Short beak and dwarfism syndrome virus,SBDSV)抗体的血清学方法,为SBDSV抗体检测及诊断试剂盒研发提供技术支撑。【方法】本研究用纯化的SBDSV M15株灭活毒免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞(SP2/0)进行融合,利用间接ELISA筛选可分泌SBDSV单克隆抗体的杂交瘤细胞株。用筛选出的杂交瘤细胞接种小鼠制备腹水。通过间接ELISA测定单克隆抗体效价,通过间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay,IFA)和胶乳凝集(latex particle agglutination,LPA)试验鉴定单克隆抗体特性。通过中和试验测定单克隆抗体中和活性,使用试剂盒鉴定单克隆抗体亚类。运用棋盘滴定法优化反应体系,建立基于SBDSV单克隆抗体的竞争ELISA检测方法。通过检测阴性血清确定该方法的临界值。对建立的竞争ELISA检测方法进行特异性、灵敏性和重复性测定。用该方法检测临床血清样品,并与胶乳凝集抑制(latex particle agglutination inhibition,LPAI)试验结果进行比对。【结果】经间接ELISA筛选,获得3株稳定分泌SBDSV单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为D5-3、G11-23和H2-27。间接ELISA结果显示,3株杂交瘤细胞D5-3、G11-23和H2-27培养上清的抗体效价分别为1∶2~6、1∶2~5和1∶2~6,腹水的抗体效价分别为1∶10~5、1∶10~4和1∶10~6。IFA结果显示,单克隆抗体D5-3、G11-23和H2-27均具有较好的结合活性,可用于IFA检测。LPA试验结果显示,仅单克隆抗体H2-27具有致敏胶乳的特性。中和试验结果显示,3株单克隆抗体均具有中和SBDSV的能力,其中单克隆抗体H2-27的中和活性最强。单克隆抗体亚类鉴定结果显示,单克隆抗体D5-3和G11-23均为IgG1,H2-27为IgM。以纯化的SBDSV(M15株)灭活毒作为包被抗原,单克隆抗体H2-27为竞争抗体,建立了一种检测SBDSV抗体的竞争ELISA方法,当抑制率(PI)≥23.70%时,判定为SBDSV抗体阳性;PI≤15.91%时判定为阴性。该方法特异性好,与番鸭细小病毒(Muscovy duck parvovirus,MDPV)、番鸭呼肠孤病毒(Muscovy duck reovirus,MDRV)、鸭源副黏病毒(Duck paramyxovirus,DPMV)、鸭肝炎病毒1型(Duck hepatitis virus-1,DHV-1)和鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus,DTMUV)阳性血清均无交叉反应;敏感性高,高免血清(LPAI效价1∶2~8)1∶25600稀释时仍为阳性;批间、批内重复性好,变异系数均<6%。竞争ELISA检测结果与LPAI结果具有良好的正相关性,二者的符合率为89.10%(188/211)。【结论】本研究成功制备3株SBDSV单克隆抗体,基于单克隆抗体H2-27建立的竞争ELISA方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可高通量检测SBDSV抗体,为监测SBDSV在中国的流行情况及雏鸭母源抗体水平评价提供技术支撑。 展开更多
关键词 鸭 短喙矮小综合征病毒(SBDSV) 单克隆抗体 竞争ELISA
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雷公藤甲素对妊娠期大鼠生殖参数的影响
3
作者 张晓敏 康玉军 +2 位作者 荆嘉慧 徐坤 党静 《动物医学进展》 北大核心 2026年第1期46-54,共9页
为评估雌性大鼠妊娠期使用雷公藤甲素(TP)对其生殖参数的影响,将6月龄SD雌雄大鼠合笼,受孕后随机分为对照组和4个TP组,TP组分别接受200、400、600、800μg/kg的TP溶液灌胃平均21 d直至分娩,分娩后处死所有雌性大鼠,记录产仔量,计算生殖... 为评估雌性大鼠妊娠期使用雷公藤甲素(TP)对其生殖参数的影响,将6月龄SD雌雄大鼠合笼,受孕后随机分为对照组和4个TP组,TP组分别接受200、400、600、800μg/kg的TP溶液灌胃平均21 d直至分娩,分娩后处死所有雌性大鼠,记录产仔量,计算生殖腺指数和流产率,检测血清性激素水平及氧化应激指标,测定生殖器官中凋亡蛋白表达情况,检测雌性大鼠子宫和胎盘中3β-羟类固醇脱氢酶(3β-HSD)、雌激素受体基因-1(Esr1)mRNA表达情况。结果显示,与对照组比较,TP组所有雌性大鼠均出现产仔量减少,流产率增加,胎鼠体重降低(P<0.01),血清雌二醇(E2)降低,黄体生成素(LH)和卵泡刺激素(FSH)升高(P<0.05);同时,血清丙二醛(MDA)升高,而超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)降低(P<0.05);与对照组比较,高剂量TP(600~800μg/(kg·d))引起雌性大鼠卵巢和子宫形态异常、生殖腺指数降低、凋亡蛋白与抗凋亡蛋白表达失衡,子宫和胎盘组织3β-HSD表达上调、Esr1表达下调(P<0.05)。结果表明,妊娠期使用TP引起雌性大鼠生殖器官形态异常,妊娠不良结局风险增加,胚胎生长发育异常,这可能与TP干扰下丘脑-垂体-性腺轴(HPG)功能、降低雌激素水平、增强氧化应激、诱导生殖器官细胞凋亡及影响3β-HSD和Esr1基因表达有关。 展开更多
关键词 雷公藤甲素 妊娠期 雌激素 氧化应激 凋亡
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新疆地区奶牛乳腺炎肺炎克雷伯菌的分离鉴定与耐药性分析
4
作者 蔡扩军 徐敏 +2 位作者 孙鹏亮 夏利宁 赵红琼 《畜牧兽医学报》 北大核心 2026年第1期464-475,共12页
旨在了解新疆地区奶牛乳腺炎肺炎克雷伯菌的流行情况与耐药特性。本研究从新疆奶牛集约化养殖集中的9个地区采集15个规模奶牛养殖场奶牛2083份临床乳腺炎和隐性乳腺炎奶样,对样品中的肺炎克雷伯菌进行分离培养、革兰染色,并采用PCR及16S... 旨在了解新疆地区奶牛乳腺炎肺炎克雷伯菌的流行情况与耐药特性。本研究从新疆奶牛集约化养殖集中的9个地区采集15个规模奶牛养殖场奶牛2083份临床乳腺炎和隐性乳腺炎奶样,对样品中的肺炎克雷伯菌进行分离培养、革兰染色,并采用PCR及16S rRNA测序进行鉴定,对分离菌株采用微量肉汤稀释法检测耐药情况。结果表明,从奶样中分离出266株肺炎克雷伯菌,分离率为12.8%(266/2083),临床乳腺炎和隐性乳腺炎奶样肺炎克雷伯菌分离率无显著差异(P>0.05)。采用微量肉汤稀释法测定266个分离株对16种抗菌药物的敏感性及产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)情况,结果显示分离株对四环素、头孢噻呋、头孢吡肟、头孢噻肟和头孢唑林的耐药率较高(23.7%~41.0%)。16.9%(45/266)的分离株为多重耐药菌,6.4%(17/266)的分离株产ESBLs。结果提示,新疆15家规模化奶牛场乳腺炎肺炎克雷伯菌平均分离率在全国处于相对较低水平。分离株对四环素和头孢类抗菌药物具有较强的耐药性,本研究为掌握奶牛乳腺炎肺炎克雷伯菌的流行特征及指导临床用药提供了依据。 展开更多
关键词 奶牛乳腺炎 肺炎克雷伯菌 分离鉴定 耐药特性
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噬菌体调控宿主菌抗生素耐药性与耐受性的机制及其应用前景
5
作者 刘文婷 李晓婷 +5 位作者 陈乐乐 陈柳洁 杨江萍 曹胜亮 李玉保 司振书 《动物医学进展》 北大核心 2026年第4期116-121,共6页
噬菌体是地球上最丰富的生物实体,对微生物群落的结构、全球生态系统的生物地球化学循环以及细菌的进化有着深远影响。作为一种感染并在细菌内复制的病毒,噬菌体可用于治疗细菌感染。相比抗生素,噬菌体具有高度特异性、高效裂解且不干... 噬菌体是地球上最丰富的生物实体,对微生物群落的结构、全球生态系统的生物地球化学循环以及细菌的进化有着深远影响。作为一种感染并在细菌内复制的病毒,噬菌体可用于治疗细菌感染。相比抗生素,噬菌体具有高度特异性、高效裂解且不干扰宿主免疫系统的优势,因此成为了抗击细菌感染的研究热点及减抗替代物的候选者。研究表明,裂解性噬菌体能够增强细菌对抗生素的敏感性,噬菌体与抗生素联合可能产生协同作用。然而,噬菌体的溶原性也可能通过转导或其他机制促使抗生素耐药基因(ARGs)的水平转移,进而推动细菌耐药性的传播。此外,噬菌体也可通过促进生物膜形成增强细菌对抗生素的耐受性。论文综述了噬菌体对抗生素敏感性、耐药性及耐受性的影响及相关机制,探讨了其对细菌适应性的影响,分析了其与抗生素的协同杀菌治疗作用。 展开更多
关键词 噬菌体 抗生素 耐药基因 耐受性 协同作用
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肉用绵羊妊娠毒血症检测与防治试验
6
作者 王辉 郭晓凡 +5 位作者 李嘉琪 李国智 王鹏涛 郭芳 潘梦浩 马保华 《动物医学进展》 北大核心 2026年第4期136-144,共9页
本研究旨在通过监测规模化养殖场多胎与单胎妊娠肉用绵羊在妊娠后期不同时间点的血酮(β-羟基丁酸,BHBA)水平,确定妊娠毒血症的适宜预警时机,并评估不同预防与治疗措施的效果,为制定肉绵羊多胎妊娠后期妊娠毒血症预警与防治方案提供科... 本研究旨在通过监测规模化养殖场多胎与单胎妊娠肉用绵羊在妊娠后期不同时间点的血酮(β-羟基丁酸,BHBA)水平,确定妊娠毒血症的适宜预警时机,并评估不同预防与治疗措施的效果,为制定肉绵羊多胎妊娠后期妊娠毒血症预警与防治方案提供科学依据。试验根据母羊品种和B超妊娠胎儿数检查结果,将妊娠母羊分为多胎妊娠群240只(分为20个小圈,每圈12只)和单胎妊娠群90只(8个小圈,每圈11-12只)。每个小圈随机选取1只母羊,分别于产前60 d、50 d、35 d、20 d、10 d和5 d监测血酮。产前20 d发现有3圈单胎妊娠母羊(37.50%,3/8)和9圈多胎妊娠母羊(45.00%,9/20)的监测个体血酮值进入亚临床妊娠毒血症预警范围,另有2圈(10.00%,2/20)多胎群个体血酮值达到临床型妊娠毒血症水平。对亚临床型羊群分别实施三种预防方案(改善饲养水平、添加过瘤胃胆碱、改善饲养水平+添加过瘤胃胆碱)并与未处理组对比;10 d后(产前10 d)再次监测血酮,评估预防效果。对临床型病例采用丙二醇灌服联合硼葡萄糖酸钙注射及饲养改善进行治疗,疗程结束后复检血酮、评估疗效。对血酮值未达到亚临床型妊娠毒血症范围的羊群,采取改善饲养水平措施。结果显示,三种预防措施均能有效降低血酮水平,其中"改善饲养水平+添加过瘤胃胆碱"组效果最佳;未预防组中有7只(19.44%,7/36)在产前20 d至分娩期间发展为临床型病例,经治疗后有4只母羊临床症状得到缓解,3只母羊死亡。对达到临床型妊娠毒血症范围的羊群,经治疗及饲养改善后,血酮整体下降;其中4只(16.70%,4/24)在产前发展为临床型并继续治疗,最终2只死亡。血酮正常的母羊在产前改善饲养水平后,血酮水平呈现先升高后回落的趋势,且始终未突破亚临床阈值。试验工作为制定妊娠肉绵羊妊娠毒血症的预警与防治方案提供了理论依据和技术支撑。 展开更多
关键词 妊娠毒血症 批次化高效繁殖 妊娠母羊 绵羊
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盐胁迫对药用蒲公英生长及菊苣酸含量的影响 被引量：1
7
作者 杨阳 濮春娟 +3 位作者 韦明慧 周桂生 邹立思 严辉 《北方园艺》 北大核心 2026年第1期70-78,共9页
以药用蒲公英为试材,采用种子萌发试验及水培法,研究了盐胁迫对蒲公英种子萌发、幼苗生长及菊苣酸含量的影响,并对盐胁迫条件下促进蒲公英种子发芽方法进行初探,以期为药用蒲公英在盐碱地的规模化栽培提供参考依据。结果表明:浓度为0.3%... 以药用蒲公英为试材,采用种子萌发试验及水培法,研究了盐胁迫对蒲公英种子萌发、幼苗生长及菊苣酸含量的影响,并对盐胁迫条件下促进蒲公英种子发芽方法进行初探,以期为药用蒲公英在盐碱地的规模化栽培提供参考依据。结果表明:浓度为0.3%、0.5%、0.7%的盐溶液对蒲公英种子萌发与幼苗生长有显著的抑制作用;在不同程度的盐胁迫条件下,赤霉素对蒲公英种子萌发的促进作用均最好;蒲公英中菊苣酸含量随盐浓度的升高而升高,表明适度盐胁迫对蒲公英中菊苣酸的积累有促进作用。 展开更多
关键词 蒲公英 盐胁迫 种子萌发 菊苣酸
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国外兽医器械行业监管概况 被引量：1
8
作者 于遵波 胡剑武 +1 位作者 屠迪 郭辉 《中国兽医杂志》 北大核心 2026年第2期138-140,F0003,共4页
兽医器械在动物疫病防治中起着至关重要的作用,国际上对兽医器械的监管主要有美国模式和欧盟模式,本文以典型国家为例剖析了其法律设定和运行机制,介绍了国际医疗器械监管机构论坛(IMDRF)的工作机制,以及其指南文件对各国兽医器械规则... 兽医器械在动物疫病防治中起着至关重要的作用,国际上对兽医器械的监管主要有美国模式和欧盟模式,本文以典型国家为例剖析了其法律设定和运行机制,介绍了国际医疗器械监管机构论坛(IMDRF)的工作机制,以及其指南文件对各国兽医器械规则的指导作用。 展开更多
关键词 国外 兽医器械 监管 国际医疗器械监管机构论坛(IMDRF)
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格拉瑟菌血清5型cpxAR双组分基因缺失株的生物学特性研究
9
作者 徐引弟 王治方 +8 位作者 蔡旭旺 徐晓娟 张立宪 焦文强 朱文豪 李海利 游一 张家庆 雷亚楠 《河南农业科学》 北大核心 2026年第2期126-135,共10页
为研究cpxAR双组分基因在格拉瑟菌中的致病机制,同时筛选格拉瑟菌血清5型缺失弱毒株,构建格拉瑟菌血清5型临床分离株(GPS5)的cpxAR双基因缺失株(ΔcpxAR),并对缺失株的生长特性、生物膜形成能力、环境胁迫抗性及豚鼠致病力等生物学特性... 为研究cpxAR双组分基因在格拉瑟菌中的致病机制,同时筛选格拉瑟菌血清5型缺失弱毒株,构建格拉瑟菌血清5型临床分离株(GPS5)的cpxAR双基因缺失株(ΔcpxAR),并对缺失株的生长特性、生物膜形成能力、环境胁迫抗性及豚鼠致病力等生物学特性进行系统研究。结果表明,cpxAR基因缺失后,ΔcpxAR与亲本株GPS5相比,菌落形态和生长速率无明显差异,但生物膜形成能力明显减弱,对渗透压、热休克、氧化应激及碱性胁迫的抗性显著降低,对豚鼠的毒力也显著减弱。综上,cpxAR基因对GPS5的生长无明显调控作用,但对其生物膜形成、环境胁迫抗性及毒力均具有重要调控作用,为深入探究cpxAR双组分系统在格拉瑟菌中的生物学功能,以及筛选格拉瑟菌血清5型弱毒株奠定了基础。 展开更多
关键词 格拉瑟菌血清5型 cpxAR基因缺失株 生长 生物膜 抗性 毒力
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非洲鸵鸟胸腺内生长抑素的分布特点
10
作者 何敏 刘志伟 +5 位作者 陈敏 张康雷 焦凤超 何书海 李建柱 彭克美 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2026年第4期150-154,共5页
为探究非洲鸵鸟胸腺内生长抑素(somatostatin,SST)的分布特点,试验选择1日龄、45日龄、90日龄健康育雏期非洲鸵鸟和334日龄健康成年非洲鸵鸟各6羽,麻醉后摘取胸腺组织并制作石蜡切片,采用免疫组织化学技术检测胸腺内的STT阳性细胞,统计... 为探究非洲鸵鸟胸腺内生长抑素(somatostatin,SST)的分布特点,试验选择1日龄、45日龄、90日龄健康育雏期非洲鸵鸟和334日龄健康成年非洲鸵鸟各6羽,麻醉后摘取胸腺组织并制作石蜡切片,采用免疫组织化学技术检测胸腺内的STT阳性细胞,统计单位面积SST阳性细胞数量,并观察90日龄非洲鸵鸟胸腺内STT阳性细胞的分布与形态学特征。结果表明:不同日龄非洲鸵鸟胸腺内均存在SST阳性细胞。随着日龄的增加,胸腺内单位面积SST阳性细胞数量呈升高趋势。与1日龄相比,45日龄、90日龄、334日龄非洲鸵鸟胸腺内单位面积SST阳性细胞数量显著升高(P<0.05);90日龄和334日龄非洲鸵鸟胸腺内单位面积SST阳性细胞数量较45日龄虽有小幅升高趋势,但差异不显著(P>0.05)。90日龄非洲鸵鸟胸腺内SST阳性细胞呈散在分布,主要集中在胸腺皮质和髓质交界区域,多数SST阳性细胞呈圆形或锥状,少数SST阳性细胞呈梭形或梨形并伴有细长胞质突起。说明非洲鸵鸟胸腺内SST表达在育雏期早期阶段迅速增加,随后趋于稳定;SST阳性细胞主要分布于胸腺皮质和髓质交界区域。 展开更多
关键词 非洲鸵鸟 胸腺 生长抑素 增龄性变化 免疫组织化学
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鸡传染性喉气管炎弱毒株FJ19株的关键基因遗传演化分析及作为候选疫苗株的安全性、有效性评价
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作者 王晨燕 张巍嘉 +4 位作者 柳珊 李亚杰 赵丽霞 刘云涛 侯博 《畜牧兽医学报》 北大核心 2026年第2期994-1007,共14页
本研究旨在分析鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)弱毒株FJ19株的部分关键抗原基因及毒力基因的遗传演化特点,评估FJ19株对SPF鸡的安全性和免疫原性,为ILTV FJ19株弱毒活疫苗的开发提供参考依据。通过将FJ19株进行多次尿囊腔途径接种适应后,... 本研究旨在分析鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)弱毒株FJ19株的部分关键抗原基因及毒力基因的遗传演化特点,评估FJ19株对SPF鸡的安全性和免疫原性,为ILTV FJ19株弱毒活疫苗的开发提供参考依据。通过将FJ19株进行多次尿囊腔途径接种适应后,对其关键抗原和毒力基因进行测序分析,点眼或口服接种14日龄SPF鸡观察其安全性,并且通过点眼或口服途径免疫14日龄SPF鸡21 d后用ILTV强毒株攻毒评价保护效果,测定免疫持续期等验证FJ19株作为弱毒活疫苗的潜力。结果显示:将FJ19株在10日龄SPF鸡胚以尿囊腔途径接种连续传代适应后,收获P0、P1、P2、P3代病毒液的EID50分别为10^(5.0)、10^(6.5)、10^(6.9)、10^(6.5)·mL^(-1)。核酸序列分析结果表明:FJ19株主要免疫原性基因gB-gC-gD-UL32和毒力相关基因gE-gI-TK-ICP4-gG-gH-gK-gL-gM-gN与弱毒株K317、Nobilis Laringovac®、LT Blen、Poulvac ILT®、Laryngo Vac和我国2009年分离株LJS09株、2012年分离株ck/CH/LHLJ/120305株、2019年分离强毒株WF03的亲缘关系较近。安全性试验显示,FJ19株以104.0EID50·羽-1的剂量(10羽份)点眼接种14日龄SPF鸡后有40%出现轻度眼炎症状,而口服接种SPF鸡未表现出明显的临床症状;当以104.0EID50·羽-1的剂量气管途径接种21日龄SPF鸡时有30%鸡出现一过性的呼吸道反应,未发生严重的ILTV感染典型症状。免疫后强毒攻毒结果显示,FJ19株以0.2羽份或1羽份的剂量点眼或口服途径免疫14日龄SPF鸡21d后,采用ILTV强毒株以104.0EID50·只-1的剂量气管攻毒后,所有免疫组的鸡均获得了至少90%的保护,未观察到明显的临床症状,而未免疫攻毒组至少有90%的鸡出现了严重的ILTV感染典型症状,FJ19株免疫后的免疫持续期至少可达6个月。ILTV FJ19株采用尿囊腔途径接种可获得高滴度病毒含量,其主要抗原基因和毒力基因与我国早期分离株和疫苗株相比未发生明显变异,通过动物试验证实点眼或口服该弱毒株对14日龄SPF鸡具有良好的安全性和免疫有效性,且免疫持续期可达6个月,通过口服接种不影响其安全性和免疫有效性。因此,ILTV弱毒株FJ19株不仅适应尿囊腔接种途径收获病毒,且具备良好的安全性和免疫有效性,还可适应口服接种途径进行免疫,是一株理想的具有潜力的弱毒疫苗候选毒株。 展开更多
关键词 传染性喉气管炎 弱毒株 遗传进化 安全性 有效性
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非鸡胚源禽流感疫苗技术研究进展
12
作者 程旭 陈祥 +4 位作者 高明燕 张笛 龚建森 俞燕 姜逸 《中国家禽》 北大核心 2026年第4期148-154,共7页
禽流感病毒不断变异给家禽养殖业及公共卫生安全带来巨大威胁,研发有效的禽流感疫苗至关重要。鸡胚生产禽流感疫苗对控制流感发挥了重要作用,但也存在局限性。鸡胚消耗量大,生产流程繁琐,人工成本偏高,同时鸡胚可能携带外源病原污染风... 禽流感病毒不断变异给家禽养殖业及公共卫生安全带来巨大威胁,研发有效的禽流感疫苗至关重要。鸡胚生产禽流感疫苗对控制流感发挥了重要作用,但也存在局限性。鸡胚消耗量大,生产流程繁琐,人工成本偏高,同时鸡胚可能携带外源病原污染风险。随着分子生物学和细胞培养技术的发展,基因工程疫苗和哺乳动物细胞苗在禽流感疫苗的生产中引起重视。文章综述了DNA疫苗、病毒性颗粒疫苗、mRNA疫苗、植物表达疫苗、哺乳动物细胞疫苗等技术在禽流感疫苗中的应用进展,以期为禽流感非鸡胚源疫苗的研发提供参考。 展开更多
关键词 禽流感 DNA疫苗 病毒性颗粒疫苗 mRNA疫苗 植物表达疫苗 哺乳动物细胞疫苗
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猪繁殖与呼吸综合征病毒激活mTORC1/HIF-1α通路诱导炎症的作用机制
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作者 李晓冰 段滇宁 +5 位作者 黄敏 江潜城 杜以梦 刘建奎 邱龙新 陈洪博 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 北大核心 2026年第4期1-9,共9页
【目的】探究缺氧诱导因子1α(HIF-1α)在猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)诱导的猪肺泡巨噬细胞炎症中的作用机制。【方法】采用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)和实时荧光定量PCR(Real-time PCR,RTqPCR),检测感染PRRSV的猪肺脏、肺泡... 【目的】探究缺氧诱导因子1α(HIF-1α)在猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)诱导的猪肺泡巨噬细胞炎症中的作用机制。【方法】采用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)和实时荧光定量PCR(Real-time PCR,RTqPCR),检测感染PRRSV的猪肺脏、肺泡巨噬细胞HIF-1αmRNA和蛋白表达水平。使用BAY87-2243或CoCl2处理PRRSV感染的猪肺泡巨噬细胞,检测PRRSV M蛋白和mRNA表达水平,ELISA检测白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平。将猪肺泡巨噬细胞转染TSC2 siRNA后,用mTORC1抑制剂Rapa和mTOR抑制剂KU0063794处理,用Western Blot检测猪肺泡巨噬细胞mTOR对HIF-1α的调控机制。将猪肺泡巨噬细胞过表达mTORC1后,检测PRRSV对HIF-1α和炎症因子水平的影响。【结果】PRRSV感染可明显提高猪肺脏、肺泡巨噬细胞HIF-1αmRNA和蛋白表达水平。与PRRSV组相比,HIF-1α激活组(CoCl2处理)促进了PRRSV M蛋白和mRNA的表达,IL-1β、IL-6和TNF-α的含量极显著升高(P<0.01);HIF-1α抑制组(BAY87-2243处理)降低了PRRSV M蛋白和mRNA的表达,IL-1β、IL-6和TNF-α的含量显著或极显著降低(P<0.01)。PRRSV促进肺泡巨噬细胞中mTOR表达,抑制mTOR后HIF-1α的表达降低,炎症细胞因子水平显著或极显著降低;重新恢复HIF-1α的表达后,炎症细胞因子水平显著升高(P<0.05)。mTOR主要通过mTORC1上调HIF-1α表达;过表达mTORC1可提高PRRSV M和HIF-1α蛋白水平,促进炎症细胞因子表达(P<0.05)。【结论】HIF-1α可调控PRRSV诱导的肺泡巨噬细胞炎症反应,其表达受mTORC1信号通路调节。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 缺氧诱导因子1Α 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 炎症因子 肺泡巨噬细胞
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非洲猪瘟病毒P72蛋白磁微粒化学发光抗体检测技术的建立和应用
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作者 汪葆玥 任雪建 +8 位作者 胡冬梅 吕园园 马静 李秀梅 顾小雪 刘玉良 倪建强 周智 李琦 《病毒学报》 北大核心 2026年第1期135-145,共11页
目的非洲猪瘟缺乏有效的疫苗,防控有赖于及时准确的诊断和清除病原,随着低致病力毒株的出现和持续流行,检测抗体成为感染监测的重要手段。方法本研究在表达纯化非洲猪瘟病毒P72蛋白并筛选获得单克隆抗体的基础上,将羧基磁珠与重组P72蛋... 目的非洲猪瘟缺乏有效的疫苗,防控有赖于及时准确的诊断和清除病原,随着低致病力毒株的出现和持续流行,检测抗体成为感染监测的重要手段。方法本研究在表达纯化非洲猪瘟病毒P72蛋白并筛选获得单克隆抗体的基础上,将羧基磁珠与重组P72蛋白进行偶联反应形成免疫磁珠,建立了磁微粒化学发光抗体检测技术(P72-MPCLIA)。结果在对220份临床样品的检测结果分析后确定其阈值阻断率为50.00%,敏感性检测表明P72-MPCLIA检测为阳性的最大稀释倍数为1:256,特异性试验与其他生猪疫病阳性血清无交叉反应性,重复性检测批内、批间变异系数分别为1.68%~4.70%和1.90%~4.72%。在对66份临床样品的检测中,与世界动物卫生组织推荐的确诊技术间接免疫荧光抗体检测方法和商品化间接ELISA试剂盒,相符率分别为96.97%和100%。结论P72-MPCLIA特异性高、敏感性好,且检测时间缩短至30min以内,可实现自动化操作,为非洲猪瘟的抗体检测技术提供了新的技术手段。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 磁微粒化学发光检测方法 化学发光免疫分析法 间接免疫荧光试验
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四川部分地区山羊曼氏杆菌的流行病学调查及sodA基因的遗传进化分析
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作者 刘海燕 郭珏岑 +2 位作者 王振华 张焕容 杨发龙 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2026年第4期117-124,共8页
为明确四川部分地区山羊曼氏杆菌的种类分布及遗传进化特征,试验于四川省自贡市荣县、成都市金堂县、资阳市乐至县的养殖场及成都市大邑县、阿坝州汶川县三江镇的屠宰场采集山羊鼻拭子样本共231份,提取DNA后对曼氏杆菌进行PCR检测,同时... 为明确四川部分地区山羊曼氏杆菌的种类分布及遗传进化特征,试验于四川省自贡市荣县、成都市金堂县、资阳市乐至县的养殖场及成都市大邑县、阿坝州汶川县三江镇的屠宰场采集山羊鼻拭子样本共231份,提取DNA后对曼氏杆菌进行PCR检测,同时利用选择性培养基对曼氏杆菌进行分离,采用PCR方法和BLAST比对分析对分离菌株进行鉴定,并对其sodA基因进行PCR扩增与测序,剔除相同序列后进行同源性分析及系统发育树构建。结果表明:曼氏杆菌的总检出率为61.47%(142/231),其中溶血性曼氏杆菌检出率为49.35%(114/231),葡萄糖苷曼氏杆菌检出率为3.46%(8/231),未检出肉芽肿曼氏杆菌。在142份阳性样本中,有5份存在溶血性曼氏杆菌与葡萄糖苷曼氏杆菌混合感染,有25份为未定种阳性样本。各地区样本中均检出曼氏杆菌,其中自贡市荣县和资阳市乐至县曼氏杆菌检出率均在70.00%及以上;各地区样本中溶血性曼氏杆菌检出率均在40.00%及以上,5个地区中仅3个地区(自贡市荣县、成都市金堂县、阿坝州汶川县三江镇)样本中检出葡萄糖苷曼氏杆菌。共分离到89株曼氏杆菌,其中85株为溶血性曼氏杆菌,2株为葡萄糖苷曼氏杆菌,2株为反刍曼氏杆菌。剔除同一地区测序结果中的相同序列后,获得的10株溶血性曼氏杆菌分离株sodA基因间的核苷酸序列相似性为98.9%~100%,与GenBank中溶血性曼氏杆菌参考株的核苷酸序列相似性为98.7%~100%,与其他曼氏杆菌参考株和分离株的核苷酸序列相似性为84.2%~100%;2株葡萄糖苷曼氏杆菌分离株sodA基因间的核苷酸序列相似性为100%,与GenBank中法国源葡萄糖苷曼氏杆菌参考株的核苷酸序列相似性为98.9%,与中国源葡萄糖苷曼氏杆菌的核苷酸序列相似性为100%,与其他曼氏杆菌参考株和分离株的核苷酸序列相似性为85.1%~96.4%;2株反刍曼氏杆菌sodA基因间的核苷酸序列相似性为97.8%,与GenBank中反刍曼氏杆菌参考株的核苷酸序列相似性为96.4%~97.8%,与其他曼氏杆菌参考株和分离株的核苷酸序列相似性为84.6%~89.3%。从系统发育树可见,不同种曼氏杆菌菌株各自成支,葡萄糖苷曼氏杆菌与溶血性曼氏杆菌菌株汇聚为一支后与反刍曼氏杆菌菌株汇聚为一个大支,而肉芽肿曼氏杆菌、多源曼氏杆菌菌株与以上3种曼氏杆菌亲缘关系较远;不同地区溶血性曼氏杆菌表现出较高程度的遗传多样性。说明四川部分地区山羊群普遍存在曼氏杆菌感染且以溶血性曼氏杆菌最为流行,少数存在混合感染;葡萄糖苷曼氏杆菌与溶血性曼氏杆菌亲缘关系较近,溶血性曼氏杆菌遗传多样性较高。 展开更多
关键词 曼氏杆菌 山羊 流行病学调查 遗传进化分析 四川省 sodA基因
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口蹄疫病毒3D蛋白与宿主互作蛋白的筛选及鉴定
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作者 刘永杰 兰喜 +4 位作者 李玉星 张勇 何继军 尚佑军 郑海学 《中国兽医科学》 北大核心 2026年第1期13-19,共7页
口蹄疫是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的猪、牛、羊等偶蹄类动物急性、热性,高度接触性传染病。FMDV 3D蛋白是病毒编码RNA的RNA依赖性聚合酶(3D^(pol)),是病毒RNA复制的重要蛋白,有关3D蛋白与宿主蛋白相互作用的报道较少。本研究应用PK-15细... 口蹄疫是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的猪、牛、羊等偶蹄类动物急性、热性,高度接触性传染病。FMDV 3D蛋白是病毒编码RNA的RNA依赖性聚合酶(3D^(pol)),是病毒RNA复制的重要蛋白,有关3D蛋白与宿主蛋白相互作用的报道较少。本研究应用PK-15细胞cDNA酵母表达文库,利用酵母双杂交技术,最终获得与3D有潜在相互作用的15个宿主潜在蛋白,通过免疫共沉淀和共聚焦试验进一步验证,鉴定出宿主ataxin-3和voltage-dependent anion channel 1(VDAC1)与3D具有相互作用,研究结果为宿主蛋白与3D蛋白相互作用在病毒复制中的功能提供了数据支撑。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 3D蛋白 酵母双杂交技术 蛋白质相互作用
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猫杯状病毒感染性克隆的构建及拯救病毒的鉴定
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作者 朱雪敏 李鑫基 +7 位作者 华炯钢 陈柳 叶伟成 张传亮 朱寅初 付媛 张存 云涛 《中国兽医科学》 北大核心 2026年第1期20-26,共7页
旨在建立猫杯状病毒(FCV)反向遗传系统,以探究FCV的致病机制,为后续疫苗研发提供科学依据。以FCV HZ2024株为对象,构建DNA-launched感染性克隆系统。FCV全基因组的4个片段被依次插入pAY-CHS重组质粒后转染F81细胞并传代鉴定。结果显示,F... 旨在建立猫杯状病毒(FCV)反向遗传系统,以探究FCV的致病机制,为后续疫苗研发提供科学依据。以FCV HZ2024株为对象,构建DNA-launched感染性克隆系统。FCV全基因组的4个片段被依次插入pAY-CHS重组质粒后转染F81细胞并传代鉴定。结果显示,FCV HZ2024基因片段扩增后插入DNA-launched系统质粒,成功构建DNA-launched系统拯救病毒rFCV HZ2024-RE,转染细胞24 h后出现细胞病变效应,病毒滴度稳定在10^(7)~10^(8T)CID_(50)/m L。间接免疫荧光检测证实VP1蛋白抗原表位完全保留,重组病毒的衣壳蛋白成功表达。且重组病毒与亲本毒株的复制动力学高度相似,蚀斑形态无显著差异。Eco R V酶切及测序验证表明,突变位点(C7183T、A7186C)被精准引入且稳定遗传。总之,构建的DNA-launched系统实现了FCV高效拯救与精准遗传。 展开更多
关键词 猫杯状病毒 感染性克隆 反向遗传学 病毒拯救
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奶山羊源反刍链球菌的分离鉴定
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作者 刘萍 李美文 +5 位作者 德珍 王敏 曹小安 刘志杰 何继军 尚佑军 《中国兽医科学》 北大核心 2026年第2期235-240,共6页
为明确陕西省某奶山羊养殖场羔羊关节炎的病因,取发病羔羊关节积液和主要脏器组织进行了病原菌检测和细菌分离培养、生化试验、药敏试验及小鼠致病性试验。结果显示,羔羊关节液和脾组织中链球菌属细菌核酸呈阳性,从关节积液中成功分离出... 为明确陕西省某奶山羊养殖场羔羊关节炎的病因,取发病羔羊关节积液和主要脏器组织进行了病原菌检测和细菌分离培养、生化试验、药敏试验及小鼠致病性试验。结果显示,羔羊关节液和脾组织中链球菌属细菌核酸呈阳性,从关节积液中成功分离出1株链球菌,经形态学观察、生化试验和16S rRNA基因序列比对,鉴定为反刍链球菌。药敏试验表明,该分离株对链霉素、阿米卡星、妥布霉素、多黏菌素B、万古霉素和诺氟沙星高度敏感,对红霉素中度敏感,但对青霉素G、头孢类、四环素和复方新诺明等多种常用抗生素存在耐药性。致病性试验证实该分离株对小鼠具有较强致病性,可致感染小鼠死亡。本研究为反刍链球菌的实验室诊断、抗菌药物合理选用以及后续研究其耐药机制和防控技术奠定了基础。 展开更多
关键词 反刍链球菌 关节炎 耐药性 奶山羊
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鸭星状病毒1型信阳株全基因组扩增及遗传进化分析
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作者 张敏 李迎晓 +5 位作者 张璐璐 何书海 曲哲会 秦东升 刘纪成 焦凤超 《中国畜牧兽医》 北大核心 2026年第2期959-972,共14页
【目的】了解信阳地区鸭星状病毒1型(Duck astrovirus type 1,DAstV1)流行株基因组的演化特征,为进一步研究信阳地区DAstV1的流行、遗传进化及致病特性提供参考依据。【方法】对某养殖场送检的病鸭进行禽腺病毒、禽星状病毒和鸭甲型肝... 【目的】了解信阳地区鸭星状病毒1型(Duck astrovirus type 1,DAstV1)流行株基因组的演化特征,为进一步研究信阳地区DAstV1的流行、遗传进化及致病特性提供参考依据。【方法】对某养殖场送检的病鸭进行禽腺病毒、禽星状病毒和鸭甲型肝炎病毒等12种常见病毒的PCR/RT-PCR筛查。采集病鸭肝脏组织,无菌处理后经卵黄囊途径接种10日龄SPF鸭胚,连续传代4次,并逐代收集尿囊液进行DAstV RT-PCR鉴定。对分离到的病毒进行全基因组测序,并对ORF1a、ORF1b和ORF2基因序列及其编码蛋白的氨基酸变异位点进行比对分析。【结果】送检病料筛查结果显示,禽星状病毒呈阳性。第1~4代鸭胚尿囊液中均呈DAstV1阳性,将该病毒命名为HN24XY06。第4代接种鸭胚全部死亡,死亡胚体发育不良且体表出血。HN24XY06基因组全长7 755 nt,包含ORF1a、ORF1b和ORF2 3个开放阅读框。序列比对和系统发育分析表明,HN24XY06属于DAstV1毒株,与山东分离株DAstV-SDZZ和DAstV-SDWF亲缘关系较近。ORF1a、ORF1b和ORF2蛋白的氨基酸序列分析显示,存在不同程度的突变,多发生在ORF1a编码的氨基酸序列中。【结论】本研究分离到了1株DAstV1,丰富了信阳地区DAstV1的分子流行病学资料,并为进一步研究DAstV1的致病机制奠定了基础。 展开更多
关键词 鸭星状病毒1型(DAstV1) 病毒分离与鉴定 全基因组扩增 遗传进化分析
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茶树菇酸性多糖的结构特征及其对免疫抑制小鼠肠道微环境稳态的调控作用
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作者 武彩红 蔡高峰 +5 位作者 丁爱云 刘朋 邱树磊 陈晓兰 张斌 陆辉 《中国兽医科学》 北大核心 2026年第2期273-281,共9页
为解析茶树菇酸性多糖(AAP)的结构特征,并探究其对环磷酰胺(CY)诱导的免疫抑制小鼠肠道微环境稳态的调控作用,采用DEAE离子交换层析从茶树菇粗多糖中分离纯化酸性多糖组分,并通过高效凝胶渗透色谱、高效液相色谱、傅里叶变换红外光谱和... 为解析茶树菇酸性多糖(AAP)的结构特征,并探究其对环磷酰胺(CY)诱导的免疫抑制小鼠肠道微环境稳态的调控作用,采用DEAE离子交换层析从茶树菇粗多糖中分离纯化酸性多糖组分,并通过高效凝胶渗透色谱、高效液相色谱、傅里叶变换红外光谱和甲基化分析对其分子质量、单糖组成和结构特征进行解析。将36只6周龄雌性小鼠随机分成6组,每组6只,设空白对照组(CON)、模型组(CY)、阳性药物组(左旋咪唑,LH)及AAP低、中、高剂量组,灌胃干预7 d后,测定小鼠体重、血清二胺氧化酶(DAO)活性及肠道β-防御素、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-17(IL-17)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量。结构分析表明,AAP是一种分子质量为6.248 kDa的酸性多糖,主要由葡萄糖、半乳糖、岩藻糖和葡萄糖醛酸构成,主链以1→6糖苷键连接,并具有高度分支化结构。动物试验结果表明,AAP能显著缓解CY引起的小鼠体重下降,降低血清DAO活性,促进肠道β-防御素分泌并调节IL-4、IL-10、IL-17和TNF-α水平,同时提高SOD活性并降低MDA含量。表明,AAP具有明确的结构特征,可通过多途径协同调节免疫抑制小鼠的肠道微环境稳态,可为AAP开发为一种新型的畜禽免疫调节剂提供试验依据。 展开更多
关键词 茶树菇酸性多糖 结构表征 小鼠 免疫抑制 肠道稳态
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