甘蓝型油菜隐性细胞核雄性不育系9012AB遗传模式新释 被引量：20

1

作者 董发明 洪登峰 +3 位作者 刘平武 谢彦周 何庆彪 杨光圣 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期262-267,共6页

通过对甘蓝型油菜隐性细胞核雄性不育系9012AB及其临保系T45与来源不同的几个自交系和常规品种杂交和测交后代的遗传分析,提出了隐性细胞核雄性不育系9012AB的新遗传模式,即育性受2对育性基因Ms3和Rf控制。其中Ms3有2个等位基因,Ms3为... 通过对甘蓝型油菜隐性细胞核雄性不育系9012AB及其临保系T45与来源不同的几个自交系和常规品种杂交和测交后代的遗传分析,提出了隐性细胞核雄性不育系9012AB的新遗传模式,即育性受2对育性基因Ms3和Rf控制。其中Ms3有2个等位基因,Ms3为野生型显性可育基因,ms3为隐性不育基因;Rf位点存在3个复等位基因,Rfc为野生型可育基因,Rfa为突变恢复型可育基因,而Rfb为突变不育基因,三者的显隐性关系为Rfa>Rfb>Rfc。按照这一遗传模式,9012AB可育株基因型为Ms3ms3RfbRfb,不育株基因型为ms3ms3RfbRfb;临保系基因型为ms3ms3RfcRfc;恢复系基因型为Ms3Ms3__或__RfaRfa。 展开更多

关键词 甘蓝型油菜 细胞核雄性不育 遗传模式 复等位基因

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油菜种子高质量总RNA提取的一种有效方法 被引量：18

2

作者 丁勇 刘英 +1 位作者 杨鸯鸯 甘莉 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期465-468,共4页

设计了1种从油菜种子中分离高质量总RNA的方法，有效的排除了种子中富含的多酚、多糖和蛋白质等杂质的污染。分离的总RNA经甲醛变性凝胶电泳和紫外光检测，可见28S和18SrRNA的2条清晰的带型，完整无降解，其A260／A280在1．8～2．0之间... 设计了1种从油菜种子中分离高质量总RNA的方法，有效的排除了种子中富含的多酚、多糖和蛋白质等杂质的污染。分离的总RNA经甲醛变性凝胶电泳和紫外光检测，可见28S和18SrRNA的2条清晰的带型，完整无降解，其A260／A280在1．8～2．0之间。研究结果证明，利用本方法提取的油菜种子总RNA具有很高的质量和纯度，且得率高，完全能满足后续的RT-PCR、全长基因的克隆和Northern blotting分析等分子生物学研究。 展开更多

关键词 油菜种子 RNA提取 多酚 多糖 方法

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杂交棉苏杂118的SSR指纹图谱构建 被引量：17

3

作者 殷剑美 陈旭升 +4 位作者 狄佳春 许乃银 肖松华 刘剑光 吴巧娟 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2007年第4期29-31,共3页

筛选了217对SSR引物,共有12对引物在两个亲本间具有多态性,其中有7对引物在两亲本间扩增出大小不同的带,且这些标记位点在F1中均表现为杂合带,为共显性标记;另外5个引物的F1带型与母本或父本一致,为显性标记。构建杂交棉苏杂118的SSR指... 筛选了217对SSR引物,共有12对引物在两个亲本间具有多态性,其中有7对引物在两亲本间扩增出大小不同的带,且这些标记位点在F1中均表现为杂合带,为共显性标记;另外5个引物的F1带型与母本或父本一致,为显性标记。构建杂交棉苏杂118的SSR指纹图谱,为该品种的真伪鉴定和纯度检测提供了分子依据。 展开更多

关键词 杂交棉 SSR标记 指纹图谱

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现代生物技术在油菜遗传改良上的应用和进展 被引量：9

4

作者 刘志文 单连民 +1 位作者 韩旭 毛玮 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期900-906,共7页

总结了小孢子培养技术在油菜新品种选育和材料创新、群体构建、复杂性状的遗传分析和转基因等上的应用,概述了转基因技术在油菜品质改良、抗性提高、雄性不育系的选育等方面的进展,综述了DNA分子标记在油菜遗传图谱构建和基因定位、指... 总结了小孢子培养技术在油菜新品种选育和材料创新、群体构建、复杂性状的遗传分析和转基因等上的应用,概述了转基因技术在油菜品质改良、抗性提高、雄性不育系的选育等方面的进展,综述了DNA分子标记在油菜遗传图谱构建和基因定位、指纹图谱和分子标记辅助选择等各个方面的进展,并对这三大现代生物技术的应用前景进行了展望。 展开更多

关键词 油菜 小孢子培养 转基因技术 分子标记技术

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利用交错延伸剪接PCR技术扩增油菜花粉育性基因MS2 Bnap全长cDNA序列 被引量：3

5

作者 李德谋 罗小英 +3 位作者 侯磊 裴炎 方卫国 杨光伟 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期553-555,共3页

交错延伸剪接PCR是一种用于分子进化研究的DNA改组技术。本实验利用其原理 ,将已获得的油菜花粉育性基因MS2Bnap有部分序列重叠的三段PCR产物作为模板进行扩增 ,获得了花粉育性基因MS2Bnap的全长cD NA序列。

关键词 交错延伸剪接PCR 花粉育性基因MS2Bnap 全长CDNA序列 油菜 植物

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农杆菌介导法将fad2基因的ihpRNA表达框转入甘蓝型油菜 被引量：4

6

作者 陈松 浦惠明 +4 位作者 张洁夫 陈锋 陈新军 龙卫华 戚存扣 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2008年第2期130-135,共6页

为获得转基因高油酸油菜新种质,以甘蓝型油菜品种宁油12号带柄子叶为转基因受体,通过与含有油酸脱饱和酶基因(fad2)ihpRNA表达载体(pCNFIRnos)的农杆菌LBA4404共培养,将油菜fad2基因的反向重复序列表达框转入宁油12号,获得转基因植株。... 为获得转基因高油酸油菜新种质,以甘蓝型油菜品种宁油12号带柄子叶为转基因受体,通过与含有油酸脱饱和酶基因(fad2)ihpRNA表达载体(pCNFIRnos)的农杆菌LBA4404共培养,将油菜fad2基因的反向重复序列表达框转入宁油12号,获得转基因植株。结果表明:4日龄的带柄子叶在含有2,4-D 1 mg/L的共培养基中预培养48 h后,再进入不定芽诱导培养基中进行培养,能显著提高不定芽的诱导频率;在含20 mg/L卡那霉素的诱导培养基中抗性绿芽的频率达到5.04%;PCR检测卡那霉素抗性苗的基因组DNA,均扩增出NPTII基因和目的基因序列表达框的特定条带。初步证明目的基因序列已经整合到了油菜的基因组中。 展开更多

关键词 转基因油菜 农杆菌 油酸脱饱和酶基因 ihpRNA表达框

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油菜小孢子再生体系的研究进展 被引量：4

7

作者 王学军 林良斌 熊兴华 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期361-364,共4页

近20年,油菜小孢子培养已得到深入的研究,并建立了完善的油菜小孢子再生体系.现综述油菜小孢子再生体系培养操作流程、影响因素及其转化体系等,指出了油菜小孢子培养所存在的问题及解决的方法.

关键词 油菜 小孢子 再生体系 培养操作流程 影响因素 转化体系

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甘蓝型油菜与紫罗兰体细胞杂交研究 被引量：2

8

作者 林良斌 马占强 +4 位作者 张传利 刘雅婷 毛孝强 厦国银 马忠琴 《云南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 2008年第3期295-301,共7页

以甘蓝型油菜湘油15号和紫罗兰的下胚轴为材料,分离制备原生质体。采用PEG-高Ca2+-高pH法进行原生质体融合,在PEG浓度为30%,原生质体融合密度为5.0×105个/mL下融合25min,融合率可达17%。在附加1.5mg/L2,4-D,0.5mg/LNAA,0.5mL/LBA... 以甘蓝型油菜湘油15号和紫罗兰的下胚轴为材料,分离制备原生质体。采用PEG-高Ca2+-高pH法进行原生质体融合,在PEG浓度为30%,原生质体融合密度为5.0×105个/mL下融合25min,融合率可达17%。在附加1.5mg/L2,4-D,0.5mg/LNAA,0.5mL/LBA的改良的KM8p培养基中,以0.3mol/L蔗糖和0.1mol/L葡萄糖作渗透稳定剂进行液体浅层培养融合体,培养3～6d细胞发生第1次分裂,7d时统计分裂频率最高为13.8%,35d后形成大量的细胞团和肉眼可见的小愈伤组织,其植板率最高为6.5%。然后转移到含有0.1mg/L2,4-D和0.2mg/LBA的MS固体培养基上使其增殖。当愈伤组织长至5mm左右时,将其转到含有0.5mg/LBA,0.1mg/LNAA和0.2mg/LGA3的MS分化培养基上诱导芽分化。当芽长1～2cm时,将其切下插入附加0.5mg/LIBA的1/2MS生根培养基上,两周后即可获得完整植株。细胞学鉴定表明获得了杂种植株。 展开更多

关键词 甘蓝型油菜 紫罗兰 原生质体 体细胞杂交 植株再生

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转基因油菜的外源Barstar基因向近缘种的转移研究 被引量：2

9

作者 李健 官春云 +3 位作者 李栒 陈社员 郑卓 陈平平 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期591-595,共5页

在人工杂交与田间自然授粉两种条件下,研究了转Barstar基因油菜T742向非转基因油菜、其他芸薹属、十字花科植物和杂草的基因转移情况.结果表明,转基因油菜与周围非转基因油菜和新疆野生油菜杂交能产生一定数量的种子,经PPT抗性与PCR检测... 在人工杂交与田间自然授粉两种条件下,研究了转Barstar基因油菜T742向非转基因油菜、其他芸薹属、十字花科植物和杂草的基因转移情况.结果表明,转基因油菜与周围非转基因油菜和新疆野生油菜杂交能产生一定数量的种子,经PPT抗性与PCR检测,其中部分种子含有Barstar基因,而与其他十字花科植物或杂草杂交不能得到杂种;基因转移受到母本类型的影响,转基因油菜T742与3种类型油菜的杂交亲合率从高到低为甘蓝型、白菜型、芥菜型.可见转基因油菜的外源Barstar基因可向周围非转基因油菜和新疆野生油菜进行转移,而很难向其他十字花科植物或杂草转移. 展开更多

关键词 转基因油菜 基因转移 杂交 聚合酶链式反应

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生物技术在油菜种质创新中的应用 被引量：4

10

作者 王爱云 李栒 胡大有 《生命科学研究》 CAS CSCD 2006年第1期18-23,共6页

从胚拯救、体细胞杂交、体细胞无性系变异和基因工程4方面综述了现代生物技术在油菜种质创新中所取得的成绩.胚挽救技术主要用于克服远缘杂交受精后的不亲和,提高获得杂种的频率;体细胞杂交由于绕过有性杂交不亲和障碍,扩大了杂交范围;... 从胚拯救、体细胞杂交、体细胞无性系变异和基因工程4方面综述了现代生物技术在油菜种质创新中所取得的成绩.胚挽救技术主要用于克服远缘杂交受精后的不亲和,提高获得杂种的频率;体细胞杂交由于绕过有性杂交不亲和障碍,扩大了杂交范围;基因工程技术借助分子操作技术,达到定向改变目标生物遗传物质的目的,拓宽其种质资源.另外,对限制生物技术在油菜种质创新中的一些因素和其发展前景进行了讨论. 展开更多

关键词 生物技术 油菜 种质创新

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甘蓝型油菜(Brassica napus L.)耐淹性状的QTL定位分析 被引量：3

11

作者 金岩 吕艳艳 +1 位作者 付三雄 戚存扣 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2014年第6期1253-1258,共6页

研究甘蓝型油菜苗期耐淹性的遗传规律,对选育耐淹性强油菜新品种,提高油菜产量有重要意义。本研究应用甘蓝型油菜品系WR-4（耐淹）和WR-5（不耐淹）杂交后代衍生的F2∶3家系群体为材料,于2012年和2013年连续2年进行淹水处理：全淹6 d后... 研究甘蓝型油菜苗期耐淹性的遗传规律,对选育耐淹性强油菜新品种,提高油菜产量有重要意义。本研究应用甘蓝型油菜品系WR-4（耐淹）和WR-5（不耐淹）杂交后代衍生的F2∶3家系群体为材料,于2012年和2013年连续2年进行淹水处理：全淹6 d后解除淹水恢复生长,解除淹水后第7 d调查死苗率,并以此作为油菜苗期耐淹性的鉴定指标,对该F2：3家系群体耐淹性进行鉴定。应用QTL Ici Mapping V3.2软件的完备区间作图法对该F2：3家系群体耐淹性进行QTL定位分析。结果表明,WR-4平均死苗率为31.0%（22.3%~39.7%）,而WR-5平均死苗率为72.1%（67.0%~77.2%）,亲本间死苗率差异显著（P〈0.01）。F2：3家系群体的死苗率呈偏正态分布,家系间死苗率平均为63.77%（2.0%~100.0%）。同一群体2年试验共检测到8个与耐淹性相关的QTL位点。2012年共检测到q WR1、q WR5、q WR9-1、q WR9-2和q WR17等5个QTLs,分别位于LG1、LG5、LG9和LG17连锁群上,贡献率为2.24%~47.58%;2013年共检测到q WR1、q WR9-1和q WR9-2等3个QTLs,分别位于LG1和LG9连锁群上,贡献率为3.02%~23.57%。其中q WR1、q WR9-1和q WR9-2在2年试验中均能检测到,其平均遗传贡献率分别为3.03%、15.87%和35.57%。表明,q WR1、q WR9-1和q WR9-2 3个QTLs位点可能与油菜苗期耐淹性相关,而q WR9-1和q WR9-2可能为控制油菜苗期耐淹性遗传的主效QTL。 展开更多

关键词 甘蓝型油菜 耐淹性 QTL

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油菜转基因研究进展 被引量：9

12

作者 咸拴狮 罗晓丽 王剑 《山西农业科学》 2006年第3期85-88,共4页

对转基因油菜受体的类型进行整理,发现油菜的下胚轴、叶柄、子叶等均是良好的转化外植体。油菜转化技术涉及到农杆菌介导法、基因枪轰击法、激光微束穿刺法、显微注射法等等,这些方法均应用于油菜遗传转化,各有其优缺点。油菜转基因的... 对转基因油菜受体的类型进行整理,发现油菜的下胚轴、叶柄、子叶等均是良好的转化外植体。油菜转化技术涉及到农杆菌介导法、基因枪轰击法、激光微束穿刺法、显微注射法等等,这些方法均应用于油菜遗传转化,各有其优缺点。油菜转基因的外源靶标基因包括抗除草剂、抗虫、抗病、品质改良和工程油的表达等等,这些转基因油菜正不断地进入商业化生产,给油菜育种和应用带来广阔的前景。 展开更多

关键词 油菜 转基因 研究进展

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油菜转基因抗性育种研究进展 被引量：4

13

作者 陈光尧 王国槐 唐小彦 《作物研究》 2006年第5期442-445,452,共5页

转基因油菜是近年来转基因研究最为活跃的作物之一,遗传转化研究日趋成熟,用于转化的目的基因趋于多样化。就近几年油菜转基因在抗病、抗虫、抗除草剂三大方面进行了阐述和回顾,并对转基因油菜生产的问题作了探讨。

关键词 油菜 转基因 抗性育种

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油菜农杆菌介导遗传转化体系研究进展 被引量：5

14

作者 杨柳 刘忠松 《作物研究》 2007年第B12期650-653,共4页

综述了农杆菌介导的油菜高频再生转化体系构建的影响因素,介绍了近年来发展起来的农杆菌介导的flora l-d ip转基因方法以及其影响因素,并分析了存在的问题,提出了展望。

关键词 油菜 农杆菌介导 floral—dip 转基因

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油菜扩繁中茎段长度对腋芽生长发育的影响 被引量：3

15

作者 朱彦涛 《西北农业学报》 CAS CSCD 2001年第3期108-109,共2页

以甘蓝型油菜 97TZ1 92的单株无性系试管苗为材料 ,探讨了油菜茎段培养中腋芽生理学下端茎切段长度对腋芽生长发育的影响。结果表明 ,培养 2 4h后 ,有 80 .7%的茎段从叶腋露出幼小生长点 ;5 d后已有93 .2 %茎段出芽。但培养过程中 ,随... 以甘蓝型油菜 97TZ1 92的单株无性系试管苗为材料 ,探讨了油菜茎段培养中腋芽生理学下端茎切段长度对腋芽生长发育的影响。结果表明 ,培养 2 4h后 ,有 80 .7%的茎段从叶腋露出幼小生长点 ;5 d后已有93 .2 %茎段出芽。但培养过程中 ,随着茎切段长度的减小 ,幼芽生长发育明显减慢 ,正常率和成活率降低。培养 3 0 d后统计 ,幼苗平均苗高和生根率降低 ,平均每株幼苗的根数、根长以及叶片数也出现减少的趋势 ,其中茎段长度以 1 mm≤ x<4mm的变化较明显。因此认为 ,茎切段培养中叶腋生理学下端茎切段长度至少应大于 4～ 6mm。 展开更多

关键词 甘蓝型油菜 无性繁殖 茎段培养 腋芽发育 生理学下端 茎段长度

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甘蓝型油菜光合基因的表达及其与含油量的关系

16

作者 杨柳 冯韬 +2 位作者 张振乾 邹玉良 谭太龙 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期237-242,共6页

以双低油菜高含油品系855和低含油品系868为材料,对9个光合基因(Bna0391450、Bna0449040、Bna0104450、Bna0501620、Bna0197350、Bna0305890、Bna0087590、Bna0084310、Bna0280620)在叶片、花蕾和种子中的表达及其与油分积累的相关性进... 以双低油菜高含油品系855和低含油品系868为材料,对9个光合基因(Bna0391450、Bna0449040、Bna0104450、Bna0501620、Bna0197350、Bna0305890、Bna0087590、Bna0084310、Bna0280620)在叶片、花蕾和种子中的表达及其与油分积累的相关性进行研究。结果表明:除Bna0280620基因在高油品系855中、Bna0084310基因在低油品系868授粉后15 d的种子中基本不表达外,其他基因在叶片、花蕾和授粉后不同时期的种子中均有表达,且基因表达量均呈先上升后下降的趋势;高油品系855中的基因表达量峰值出现在授粉后20 d;低油品系868中的基因表达量峰值出现在授粉后25 d;2个品系中,光合基因表达差异集中在苗期叶片和授粉后20 d的种子中,油分积累差异主要集中在授粉后30~40 d种子中。品系855中,除Bna0197350和Bna0280620外,油分积累与光合基因表达量均呈负相关,且相关性不显著;品系868中,除Bna0501620基因外,油分积累与光合基因表达量也呈负相关,相关性不显著。说明油菜光合基因在种子中有表达,但不影响种子中的油分积累量。 展开更多

关键词 甘蓝型油菜 含油量 光合基因 基因表达

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甘蓝型油菜硫苷性状的RAPD连锁标记研究

17

作者 宋志荣 官春云 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期254-257,共4页

选择硫苷性状差异大,而其他品质性状和农艺性状相近的油菜品系967H和967L为亲本,用RAPD引物对亲本、F1、F2植株进行分子标记,寻找与硫苷性状相连锁的标记.结果表明,从482个RAPD引物筛选出6个在2个亲本之间表现多态性的引物,从这6个引物... 选择硫苷性状差异大,而其他品质性状和农艺性状相近的油菜品系967H和967L为亲本,用RAPD引物对亲本、F1、F2植株进行分子标记,寻找与硫苷性状相连锁的标记.结果表明,从482个RAPD引物筛选出6个在2个亲本之间表现多态性的引物,从这6个引物中筛选出1个在高硫苷基因池和低硫苷基因池之间有稳定差异的引物S268,用S268对F2群体单株进行检验,群体单株只显示3种带型标记,与低硫苷性状连锁的标记S268对低硫苷性状的贡献率为29.51%. 展开更多

关键词 甘蓝型油菜 硫苷性状 RAPD分子标记

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43份油菜菌核病抗性资源的SCoT、SSR与SRAP标记分析 被引量：14

18

作者 张羽 张晓娟 +2 位作者 陈进 孙晓敏 张成兵 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2017年第1期45-53,共9页

【目的】探索SCoT、SSR和SRAP 3类分子标记在油菜遗传多样性研究中的应用。【方法】用8份有代表性的油菜资源,从SRAP和SCoT标记中各筛选出40对扩增条带清晰、多态性高的引物和40对SSR核心标记,对43份抗菌核病油菜育种亲本材料的遗传多... 【目的】探索SCoT、SSR和SRAP 3类分子标记在油菜遗传多样性研究中的应用。【方法】用8份有代表性的油菜资源,从SRAP和SCoT标记中各筛选出40对扩增条带清晰、多态性高的引物和40对SSR核心标记,对43份抗菌核病油菜育种亲本材料的遗传多样性进行分析,比较这3类标记在多态性(PPB)、多态性信息含量(PIC)及标记指数(MI)等方面的差异,最后依据材料两两间遗传相似系数,对43份油菜材料进行聚类分析。【结果】在位点检测能力方面以SCoT最高,每条SCoT引物可检测的平均条带数为9.3,其次为SRAP(8.6),SSR最少(7.3)。但多态性信息含量(PIC)则相反,SSR的PIC值最高(0.76),其次为SRAP(0.69),SCoT的PIC值最低(0.65)。基于SCoT、SSR和SRAP 3种分子标记的材料间遗传相似系数分别为0.43~0.87,0.56~0.84和0.46~0.83。聚类分析表明,SRAP标记聚类结果接近于3种分子标记混合统计的聚类结果。【结论】多态性位点检测能力和标记效率之间并无直接的相关性;3类标记在43份材料间的遗传距离显著不相关,研究每类分子标记在相应物种中的核心标记更为重要。 展开更多

关键词 油菜 SSR SRAP SCoT 遗传多样性

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油菜与芸芥属间杂种离体子房和胚培养研究 被引量：6

19

作者 戴林建 李栒 +1 位作者 官春云 钟军 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期201-204,共4页

为建立芸薹属与芸芥属间杂种离体子房和胚培养的技术体系,运用4个亲和性较强的组合进行离体子房和胚培养.结果表明在子房培养中,以授粉后6～8d处理的子房生长量最大,成胚数和成苗数最多.所有不同浓度和组合的激素,包括无激素培养基处理... 为建立芸薹属与芸芥属间杂种离体子房和胚培养的技术体系,运用4个亲和性较强的组合进行离体子房和胚培养.结果表明在子房培养中,以授粉后6～8d处理的子房生长量最大,成胚数和成苗数最多.所有不同浓度和组合的激素,包括无激素培养基处理均获得了湘油15号与芸芥的杂种胚,以1.0mg/LNAA+0.5mg/L6-BA组合效果最好.在胚培养中,生长素和细胞分裂素对离体胚的发育有明显的促进作用,而附加成分(干酪素)单独使用时效果不明显,与生长素一起使用效果较好.子房培养和胚培养均能获得一定数量的苗,但通过苗期真假杂种的鉴定,24株真杂种均由子房培养所获得. 展开更多

关键词 油菜 芸芥 子房培养 胚培养

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甘蓝型油菜GPDH基因克隆、表达分析及植物过表达载体构建 被引量：5

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作者 张超 付三雄 +4 位作者 周小婴 唐容 黄莎 杨克相 戚存扣 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期1399-1407,共9页

【目的】克隆甘蓝型油菜的甘油-3-磷酸脱氢酶(GPDH)基因(BnGPDH),分析其表达特性并构建植物过表达载体,为研究该基因在油菜种子三酰甘油(TAG)合成和积累中的作用机制提供理论参考。【方法】以甘蓝型油菜H105为材料,采用同源克隆技术克隆... 【目的】克隆甘蓝型油菜的甘油-3-磷酸脱氢酶(GPDH)基因(BnGPDH),分析其表达特性并构建植物过表达载体,为研究该基因在油菜种子三酰甘油(TAG)合成和积累中的作用机制提供理论参考。【方法】以甘蓝型油菜H105为材料,采用同源克隆技术克隆与At3G07690同源的BnGPDH基因,对其进行生物信息学分析,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测BnGPDH基因在甘蓝型油菜不同组织[根、茎、叶、蕾、花及花后(DAF)7、14、21、30和40 d角果皮和种子]及高、低油含量自交系角果皮和种子中的表达情况,并将克隆获得的BnGPDH基因连接至携带napin启动子的pCAMBIA1390-NAPIN载体上构建植物过表达载体。【结果】克隆获得的BnGPDHc2-1和BnGPDHc2-2基因编码区(CDS)长度均为1338 bp,编码445个氨基酸,其编码蛋白仅有5个氨基酸差异,均具有NAD_Gly3P_dh_N和NAD_Gly3P_dh_C结构域,定位于细胞质,分别与白菜细胞质型GPDH蛋白(XP_009147040.1)和甘蓝细胞质型GPDH蛋白(XP_013585317.1)的氨基酸序列具有较高相似度,对应的相似度为100.00%和99.78%,且二者与双子叶植物GPDH蛋白亲缘关系较近,与单子叶植物GPDH蛋白亲缘关系较远。BnGPDHc2-1和BnGPDHc2-2基因在甘蓝型油菜不同组织中均有表达,且表达模式总体上相似,在21DAF和30DAF种子中的表达量显著高于其他组织部位(P<0.05,下同),表明21DAF和30DAF是油菜种子TAG合成和积累的高峰期,但在角果生长发育不同时期这2个基因的表达略有不同,且在茎、蕾、种子(7DAF、21DAF、30DAF和40DAF)和角果皮(7DAF和40DAF)中,BnGPDHc2-1基因的表达量均显著高于BnGPDHc2-2基因,而在14DAF角果皮中BnGPDHc2-2基因的表达量显著高于BnGPDHc2-1基因。21DAF种子中BnGPDHc2-1基因在3个高油含量自交系中的表达量显著高于3个低油含量自交系,BnGPDHc2-2基因在高油含量自交系IL130和IL594中的表达量显著高于3个低油含量自交系;在30DAF种子中,BnGPDHc2-1和BnGPDHc2-2在3个高油含量自交系中的表达量均显著高于3个低油含量自交系。将BnGPDHc2-1和BnGPDHc2-2基因分别连接至携带napin启动子的pCAMBIA1390-NAPIN载体上可成功构建获得植物过表达载体。【结论】BnGPDHc2-1和BnGPDHc2-2基因在甘蓝型油菜不同发育期角果中行使的功能存在一定分化,在进化过程中可能分别来源于白菜基因组和甘蓝基因组,但均在甘蓝型油菜种子TAG合成和积累发挥重要调控作用。因此,构建的植物过表达载体可用于BnGPDH基因功能分析及油菜种子油含量基因工程改良研究。 展开更多

关键词 甘蓝型油菜 甘油-3-磷酸脱氢酶(GPDH) 表达特性 生物信息学 植物过表达载体

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