目的探讨微小RNA-6321(microRNA-6321,miR-6321)对大鼠心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemia-reperfusion injury,MIRI)的作用,并进一步分析其作用机制与N6-甲基腺苷甲基化之间的关系。方法随机从36只雄性SD大鼠中取12只,分为预实验...目的探讨微小RNA-6321(microRNA-6321,miR-6321)对大鼠心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemia-reperfusion injury,MIRI)的作用,并进一步分析其作用机制与N6-甲基腺苷甲基化之间的关系。方法随机从36只雄性SD大鼠中取12只,分为预实验假手术组和预实验模型组,每组6只,用于验证MIRI模型。预实验假手术组在左前降支下方穿线而不结扎,预实验模型组结扎左前降支30 min后解开结扎线再灌注2 h。随后,本研究将剩余24只大鼠随机分为4组:假手术组、模型组(MIRI组)、腺相关病毒阴性对照组(adeno-associated virus negative control group,AAV-NC组)以及miR-6321过表达干预组(AAV-miR-6321组),每组6只。AAV-NC组和AAV-miR-6321组在模型建立前两周经尾静脉单次注射AAV-NC和AAV-miR-6321。采用冠状动脉左前降支结扎法建立大鼠MIRI模型。假手术组在左前降支下方穿线而不结扎,MIRI组、AAV-NC组和AAV-miR-6321组均进行缺血30 min、再灌注120 min处理。采用苏木精-伊红染色检测分析心肌组织损伤程度,蛋白质免疫印迹法检测心肌组织中甲基转移酶样蛋白3(methyltransferase-like protein 3,METTL3)、烷基化修复同系物5(alkylation repair homolog 5,ALKBH5)及YTH结构域家族蛋白1(YTH domain family protein 1,YTHDF1)表达水平。结果与预实验假手术组比较,预实验模型组ALKBH5的表达显著下降,METTL3、YTHDF1的表达显著上调,差异有统计学意义(P<0.05)。与假手术组比较,MIRI组心肌损伤程度显著升高,miR-6321表达显著降低,METTL3和YTHDF1表达显著升高(0.96±0.06 vs 0.52±0.08,1.04±0.04 vs 0.47±0.04,P<0.05),ALKBH5表达显著降低(0.36±0.14 vs 0.89±0.09,P<0.05);与MIRI组比较,AAV-miR-6321组心肌损伤程度显著降低,miR-6321表达显著升高,METTL3和YTHDF1表达显著降低(0.58±0.05 vs 0.96±0.06,0.55±0.04 vs 1.04±0.04,P<0.05),ALKBH5表达显著升高(0.76±0.14 vs 0.36±0.14,P<0.05)。结论miR-6321可调控N6-甲基腺苷甲基化修饰从而减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤。展开更多
文摘目的探讨微小RNA-6321(microRNA-6321,miR-6321)对大鼠心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemia-reperfusion injury,MIRI)的作用,并进一步分析其作用机制与N6-甲基腺苷甲基化之间的关系。方法随机从36只雄性SD大鼠中取12只,分为预实验假手术组和预实验模型组,每组6只,用于验证MIRI模型。预实验假手术组在左前降支下方穿线而不结扎,预实验模型组结扎左前降支30 min后解开结扎线再灌注2 h。随后,本研究将剩余24只大鼠随机分为4组:假手术组、模型组(MIRI组)、腺相关病毒阴性对照组(adeno-associated virus negative control group,AAV-NC组)以及miR-6321过表达干预组(AAV-miR-6321组),每组6只。AAV-NC组和AAV-miR-6321组在模型建立前两周经尾静脉单次注射AAV-NC和AAV-miR-6321。采用冠状动脉左前降支结扎法建立大鼠MIRI模型。假手术组在左前降支下方穿线而不结扎,MIRI组、AAV-NC组和AAV-miR-6321组均进行缺血30 min、再灌注120 min处理。采用苏木精-伊红染色检测分析心肌组织损伤程度,蛋白质免疫印迹法检测心肌组织中甲基转移酶样蛋白3(methyltransferase-like protein 3,METTL3)、烷基化修复同系物5(alkylation repair homolog 5,ALKBH5)及YTH结构域家族蛋白1(YTH domain family protein 1,YTHDF1)表达水平。结果与预实验假手术组比较,预实验模型组ALKBH5的表达显著下降,METTL3、YTHDF1的表达显著上调,差异有统计学意义(P<0.05)。与假手术组比较,MIRI组心肌损伤程度显著升高,miR-6321表达显著降低,METTL3和YTHDF1表达显著升高(0.96±0.06 vs 0.52±0.08,1.04±0.04 vs 0.47±0.04,P<0.05),ALKBH5表达显著降低(0.36±0.14 vs 0.89±0.09,P<0.05);与MIRI组比较,AAV-miR-6321组心肌损伤程度显著降低,miR-6321表达显著升高,METTL3和YTHDF1表达显著降低(0.58±0.05 vs 0.96±0.06,0.55±0.04 vs 1.04±0.04,P<0.05),ALKBH5表达显著升高(0.76±0.14 vs 0.36±0.14,P<0.05)。结论miR-6321可调控N6-甲基腺苷甲基化修饰从而减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤。
