目的:探究多聚胞嘧啶结合蛋白2[poly(C)-binding protein 2,PCBP2]如何通过调节铁死亡参与大别班达病毒(Dabie Banda virus,DBV)感染后的致病过程及其作用机制。方法:以人单核细胞系THP-1为模型,采用qRT-PCR和Western blot技术检测DBV...目的:探究多聚胞嘧啶结合蛋白2[poly(C)-binding protein 2,PCBP2]如何通过调节铁死亡参与大别班达病毒(Dabie Banda virus,DBV)感染后的致病过程及其作用机制。方法:以人单核细胞系THP-1为模型,采用qRT-PCR和Western blot技术检测DBV感染的THP-1细胞中PCBP2的mRNA及蛋白表达水平。通过透射电镜观察病毒感染下的线粒体结构变化,在THP-1细胞中构建了慢病毒介导的PCBP2过表达和敲低稳转细胞系。FerroOrange荧光探针检测Fe^(2+)水平,2,7-二氯荧光素二乙酸酯(2,7-dichlorofluorescein diacetate,DCFH-DA)探针测定活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,Western blot检测铁死亡相关溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 member 11,SLC7A11)和谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)蛋白表达,以评估PCBP2调控对铁死亡的影响。使用铁死亡诱导剂(RSL3、erastin)和抑制剂(Fer-1、Lip-1)处理细胞,qRT-PCR和免疫荧光检测病毒复制水平变化,探索PCBP2是否可以通过调控铁死亡影响DBV复制。结果:在DBV感染的细胞模型中,PCBP2的mRNA和蛋白表达水平显著下调,DBV感染诱导典型铁死亡特征(线粒体嵴减少、肿胀)。通过qRT-PCR和Western blot验证,PCBP2敲低和过表达的THP-1细胞系构建成功,PCBP2敲低下调了铁死亡相关基因SLC7A11和GPX4的表达,导致ROS和Fe^(2+)水平升高;相反,PCBP2过表达使得SLC7A11和GPX4的表达水平升高,ROS和Fe^(2+)的水平降低。半数组织培养感染剂量与蛋白水平的检测进一步证实:铁死亡诱导剂可部分抵消PCBP2过表达促病毒复制的效应,铁死亡抑制剂可部分逆转PCBP2敲低抑制病毒复制的效应。结论:研究发现PCBP2可以通过维持SLC7A11/GPX4系统功能抑制铁死亡,从而限制DBV复制。这不仅阐明了PCBP2在DBV感染中的调控作用,为发热伴血小板减少综合征(severe fever with thrombocytope-nia syndrome,SFTS)的发病机制提供了新见解,同时靶向PCBP2-铁死亡通路可能成为SFTS治疗的潜在策略,为抗病毒药物的研发提供新思路。展开更多
Lassa fever(LF)is an acute viral hemorrhagic illness caused by the Lassa virus(LASV),an enveloped,spherical virus belonging to the Arenaviridae family.LASV possess a single-stranded RNA genome of negative polarity and...Lassa fever(LF)is an acute viral hemorrhagic illness caused by the Lassa virus(LASV),an enveloped,spherical virus belonging to the Arenaviridae family.LASV possess a single-stranded RNA genome of negative polarity and exhibits high genetic diversity,corresponding to the geographical distribution of its seven principal distinct clades across West Africa[1].LASV was first isolated in 1969 from an American missionary nurse stationed in the rural town of Lassa,Borno State,Nigeria,following her return from a brief vacation in the United States[2].展开更多
目的了解北京市2021—2023年发热伴血小板减少综合征(severe fever with thrombocytopenia syndrome,SFTS)的流行病学特征,为北京市防控该疾病提供依据。方法收集分析SFTS病例的个案资料,对阳性样本进行全基因测序,并进行遗传进化分析...目的了解北京市2021—2023年发热伴血小板减少综合征(severe fever with thrombocytopenia syndrome,SFTS)的流行病学特征,为北京市防控该疾病提供依据。方法收集分析SFTS病例的个案资料,对阳性样本进行全基因测序,并进行遗传进化分析。结果2021—2023年,北京市共报告9例本地感染病例,发病时间均在5—10月。男性6例,女性3例,年龄分布在40~<70岁,职业以农民为主。病例分布在5个区,平谷区发病数最多,有5例,存在一定的地域聚集性,平谷区还发生1起动物传人的聚集性疫情。测序及遗传进化分析结果显示,北京市的病例分属于A基因型和B基因型,未发现重配毒株。结论北京市SFTS病例为散发病例,有一定的地域聚集性,流行毒株为A基因型和B基因型。展开更多
文摘目的:探究多聚胞嘧啶结合蛋白2[poly(C)-binding protein 2,PCBP2]如何通过调节铁死亡参与大别班达病毒(Dabie Banda virus,DBV)感染后的致病过程及其作用机制。方法:以人单核细胞系THP-1为模型,采用qRT-PCR和Western blot技术检测DBV感染的THP-1细胞中PCBP2的mRNA及蛋白表达水平。通过透射电镜观察病毒感染下的线粒体结构变化,在THP-1细胞中构建了慢病毒介导的PCBP2过表达和敲低稳转细胞系。FerroOrange荧光探针检测Fe^(2+)水平,2,7-二氯荧光素二乙酸酯(2,7-dichlorofluorescein diacetate,DCFH-DA)探针测定活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,Western blot检测铁死亡相关溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 member 11,SLC7A11)和谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)蛋白表达,以评估PCBP2调控对铁死亡的影响。使用铁死亡诱导剂(RSL3、erastin)和抑制剂(Fer-1、Lip-1)处理细胞,qRT-PCR和免疫荧光检测病毒复制水平变化,探索PCBP2是否可以通过调控铁死亡影响DBV复制。结果:在DBV感染的细胞模型中,PCBP2的mRNA和蛋白表达水平显著下调,DBV感染诱导典型铁死亡特征(线粒体嵴减少、肿胀)。通过qRT-PCR和Western blot验证,PCBP2敲低和过表达的THP-1细胞系构建成功,PCBP2敲低下调了铁死亡相关基因SLC7A11和GPX4的表达,导致ROS和Fe^(2+)水平升高;相反,PCBP2过表达使得SLC7A11和GPX4的表达水平升高,ROS和Fe^(2+)的水平降低。半数组织培养感染剂量与蛋白水平的检测进一步证实:铁死亡诱导剂可部分抵消PCBP2过表达促病毒复制的效应,铁死亡抑制剂可部分逆转PCBP2敲低抑制病毒复制的效应。结论:研究发现PCBP2可以通过维持SLC7A11/GPX4系统功能抑制铁死亡,从而限制DBV复制。这不仅阐明了PCBP2在DBV感染中的调控作用,为发热伴血小板减少综合征(severe fever with thrombocytope-nia syndrome,SFTS)的发病机制提供了新见解,同时靶向PCBP2-铁死亡通路可能成为SFTS治疗的潜在策略,为抗病毒药物的研发提供新思路。
文摘Lassa fever(LF)is an acute viral hemorrhagic illness caused by the Lassa virus(LASV),an enveloped,spherical virus belonging to the Arenaviridae family.LASV possess a single-stranded RNA genome of negative polarity and exhibits high genetic diversity,corresponding to the geographical distribution of its seven principal distinct clades across West Africa[1].LASV was first isolated in 1969 from an American missionary nurse stationed in the rural town of Lassa,Borno State,Nigeria,following her return from a brief vacation in the United States[2].
文摘目的了解北京市2021—2023年发热伴血小板减少综合征(severe fever with thrombocytopenia syndrome,SFTS)的流行病学特征,为北京市防控该疾病提供依据。方法收集分析SFTS病例的个案资料,对阳性样本进行全基因测序,并进行遗传进化分析。结果2021—2023年,北京市共报告9例本地感染病例,发病时间均在5—10月。男性6例,女性3例,年龄分布在40~<70岁,职业以农民为主。病例分布在5个区,平谷区发病数最多,有5例,存在一定的地域聚集性,平谷区还发生1起动物传人的聚集性疫情。测序及遗传进化分析结果显示,北京市的病例分属于A基因型和B基因型,未发现重配毒株。结论北京市SFTS病例为散发病例,有一定的地域聚集性,流行毒株为A基因型和B基因型。
