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广州市2021-2023年鱼生虾生病原微生物污染状况及影响因素分析 被引量：1
1
作者 刘览 李海麟 +5 位作者 曾锦衡 王燕燕 张玉华 张维蔚 李燕 吴新伟 《热带医学杂志》 2025年第7期987-991,共5页
目的了解广州特色食品鱼生虾生中病原微生物的污染状况,探讨其影响因素,为鱼生虾生食品安全风险管理提供参考。方法2021-2023年在广州市餐饮环节采集市售鱼生、虾生样品674份,采用国家标准方法进行副溶血性弧菌、霍乱弧菌、创伤弧菌、... 目的了解广州特色食品鱼生虾生中病原微生物的污染状况,探讨其影响因素,为鱼生虾生食品安全风险管理提供参考。方法2021-2023年在广州市餐饮环节采集市售鱼生、虾生样品674份,采用国家标准方法进行副溶血性弧菌、霍乱弧菌、创伤弧菌、沙门菌、金黄色葡萄球菌和溶血性链球菌等致病菌和华支睾吸虫检测,分析病原微生物污染状况,并采用多因素logistic回归分析食源性致病菌污染的可能影响因素。结果广州市售鱼生虾生中华支睾吸虫检出率为0.15%(1/674);食源性致病菌检出率为41.84%(282/674),主要检出致病菌为副溶血性弧菌和创伤弧菌。多因素logistic回归分析显示,虾生较鱼生受食源性致病菌污染风险更高(OR=7.50,95%CI:4.88~11.54),海水产品更易被食源性致病菌污染(OR=1.95,95%CI:1.07~3.55),非中心城区采集鱼生虾生比中心城区采集的被食源性致病菌污染风险更高(OR=1.56,95%CI:1.05~2.31)。结论广州市鱼生虾生中华支睾吸虫检出率较低,虾生、海产品食源性致病菌污染风险高。应进一步加强对非中心城区和中小型餐厅的鱼生虾生监测与监管,保障本地特色食品安全,有效防控食源性疾病的暴发。 展开更多
关键词 鱼生虾生 华支睾吸虫 食源性致病菌 污染 影响因素
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华支睾吸虫miRNA在胆管癌发生发展中作用机制的研究进展
2
作者 武奥迅 钟籽丰 +4 位作者 徐安远 潘筱雯 易雪晴 吴银娟 李学荣 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 北大核心 2025年第2期269-273,共5页
华支睾吸虫作为一种食源性寄生虫,其成虫寄生于宿主肝胆管内,可导致宿主肝胆管病变,甚至诱发胆管癌。华支睾吸虫于2009年被世界卫生组织国际癌症研究署列为Ⅰ类致癌物。微小RNA (miRNA)作为一类内源性的非编码RNA,在细胞内具有多种重要... 华支睾吸虫作为一种食源性寄生虫,其成虫寄生于宿主肝胆管内,可导致宿主肝胆管病变,甚至诱发胆管癌。华支睾吸虫于2009年被世界卫生组织国际癌症研究署列为Ⅰ类致癌物。微小RNA (miRNA)作为一类内源性的非编码RNA,在细胞内具有多种重要的调节作用。华支睾吸虫分泌的miRNA在肝胆管癌发生发展中扮演着重要的角色。本文综述了华支睾吸虫miRNA在肝胆管癌中的作用,以期为华支睾吸虫感染诱发的胆管癌防治提供新的策略。 展开更多
关键词 华支睾吸虫 MIRNA 胆管癌 免疫调节
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基于COX1和ITS-2基因的市售猫犬的肝吸虫感染调查分析
3
作者 黄玉碧 蒋智华 +4 位作者 唐雯茜 韦尧宝 吕国丽 胡莉萍 方钟燎 《医学动物防制》 2025年第8期778-783,共6页
目的探索广西壮族自治区市售猫犬感染的肝吸虫虫种及其遗传进化特征,进一步了解广西壮族自治区肝吸虫分子流行情况,为肝吸虫病的防控提供科学依据。方法2022年12月至2024年1月从广西壮族自治区不同方位收集猫、犬的肝脏,收集肝吸虫成虫... 目的探索广西壮族自治区市售猫犬感染的肝吸虫虫种及其遗传进化特征,进一步了解广西壮族自治区肝吸虫分子流行情况,为肝吸虫病的防控提供科学依据。方法2022年12月至2024年1月从广西壮族自治区不同方位收集猫、犬的肝脏,收集肝吸虫成虫样本,提取成虫DNA,PCR扩增COX1基因和ITS-2基因并测序。采用BioEdit测序结果进行分析,与GenBanK数据库基因比对,采用最大似然法构建基于COX1和ITS-2基因序列的系统进化树。结果不同县市共收集44份狗肝样本,55份猫肝样本,狗肝未发现肝吸虫感染,猫肝肝吸虫成虫感染率为23.6%。COX1和ITS-2基因的PCR扩增产物长度分别约为328bp和366bp。基于COX1和ITS-2基因序列构建系统进化树,结果显示,这些序列均与华支睾吸虫聚为一支,基于COX1基因序列构建的进化树显示,其与越南、广西壮族自治区、广东省分离株的亲缘关系较近,基于ITS-2基因序列构建的进化树与越南分离株和广西壮族自治区南宁市分离株亲缘关系较近。结论广西壮族自治区猫间所流行的肝吸虫虫种为华支睾吸虫,在人群华支睾吸虫感染率低的地区也有华支睾吸虫感染,其基因序列主要与越南分离株亲缘关系较近。 展开更多
关键词 华支睾吸虫 保虫宿主 PCR COX1基因 ITS-2基因 调查 分析
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华支睾吸虫一氧化氮合酶相互作用蛋白的组织定位及免疫学功能的初步研究
4
作者 边萌 余新炳 许青霞 《热带医学杂志》 2025年第1期19-23,I0003,共6页
目的诱导表达华支睾吸虫一氧化氮合酶相互作用蛋白(CsNOSIP)的重组质粒并进行组织定位研究,初步了解重组产物免疫小鼠后细胞因子的变化及诱发宿主免疫应答类型。方法应用生物信息学分析软件,分析CsNOSIP的序列特征;将重组质粒pET-30a(+)... 目的诱导表达华支睾吸虫一氧化氮合酶相互作用蛋白(CsNOSIP)的重组质粒并进行组织定位研究,初步了解重组产物免疫小鼠后细胞因子的变化及诱发宿主免疫应答类型。方法应用生物信息学分析软件,分析CsNOSIP的序列特征;将重组质粒pET-30a(+)-CsNOSIP诱导表达并用镍离子金属螯合剂亲和层析柱进行纯化,用纯化的CsNOSIP蛋白免疫BABL/c小鼠获得免疫血清;应用免疫荧光方法观察CsNOSIP在华支睾吸虫成虫的定位;应用ELISA检测实验组(重组蛋白皮下免疫小鼠)和对照组(磷酸盐缓冲液免疫小鼠)细胞因子水平的变化。应用qPCR检测内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和诱导性一氧化氮合酶(iNOS)转录水平的变化。结果CsNOSIP编码288个氨基酸,SecP分值为0.955097,无信号肽;理论分子量为35000;免疫组化结果显示,该蛋白定位于虫体的肠支和虫卵。与对照组相比,rCsNOSIP免疫组用5μg/mL ConA刺激后白细胞介素4、白细胞介素6水平均升高,差异均有统计学意义(t=12.16、8.91,P均<0.05);与对照组相比,eNOS转录水平降低,iNOS转录水平增高,差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论CsNOSIP可在原核表达系统中呈现高效的可溶性表达,是华支睾吸虫分泌排泄抗原之一,具有良好的免疫学活性。 展开更多
关键词 华支睾吸虫 一氧化氮合酶相互作用蛋白 组织定位 免疫反应
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基于转录组分析体外培养华支睾吸虫后尾蚴的实验研究差异表达基因
5
作者 冼凤喜 李柏蓉 +7 位作者 邓雪玲 吴雨洪 李仕涛 蒋一琦 周思颖 李林芮 吴展帅 唐泽丽 《中国人兽共患病学报》 北大核心 2025年第7期718-725,共8页
目的通过转录组学研究华支睾吸虫囊蚴和体外培养1 h、3 h后尾蚴的差异表达基因,以探索其早期入侵宿主的机制。方法从感染华支睾吸虫的麦穗鱼中消化分离得到囊蚴,体外使其脱囊成后尾蚴,提取囊蚴与体外培养1 h、3 h后尾蚴的mRNA进行转录... 目的通过转录组学研究华支睾吸虫囊蚴和体外培养1 h、3 h后尾蚴的差异表达基因,以探索其早期入侵宿主的机制。方法从感染华支睾吸虫的麦穗鱼中消化分离得到囊蚴,体外使其脱囊成后尾蚴,提取囊蚴与体外培养1 h、3 h后尾蚴的mRNA进行转录组测序分析,筛选差异表达基因(DEGs)并进行GO和KEGG分析,同时构建蛋白互作网络(PPI),筛选出核心基因。结果共检测到1218个DEGs,GO分析显示主要富集于转录调节因子活性、门控通道(主要为K+)活性等功能,KEGG分析表明主要富集于胆固醇代谢、溶酶体、甲状旁腺激素的合成等通路,PPI分析筛选得到ZFAND4-2、BIRC6等核心基因。观察到脱囊前后有丰富的组织蛋白酶基因的差异表达,如Cathepsin L、Cathepsin F等。结论华支睾吸虫囊蚴在脱囊前后发生了显著的转录水平变化,主要富集于激活生长、物质代谢等信号通路,以调控虫体的生长发育,同时激发了利于虫体入侵、迁移和粘附的生物事件。 展开更多
关键词 华支睾吸虫 囊蚴 后尾蚴 差异表达基因 转录组
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华支睾吸虫外泌体源Csi-miR-125a致肝纤维化作用及其机制
6
作者 吴银娟 易雪晴 +4 位作者 李美玉 徐安远 武奥迅 钟籽丰 李学荣 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 北大核心 2025年第2期198-204,共7页
目的 探究华支睾吸虫外泌体中关键miRNA分子在肝纤维化中的作用,以期为华支睾吸虫致肝纤维化的机制提供新的线索。方法 从阳性家猫肝脏剖取华支睾吸虫成虫,体外培养,从排泄/分泌产物中提取外泌体,透射电子显微镜观察并对粒径分布进行鉴... 目的 探究华支睾吸虫外泌体中关键miRNA分子在肝纤维化中的作用,以期为华支睾吸虫致肝纤维化的机制提供新的线索。方法 从阳性家猫肝脏剖取华支睾吸虫成虫,体外培养,从排泄/分泌产物中提取外泌体,透射电子显微镜观察并对粒径分布进行鉴定。提取外泌体总RNA并测序,miRDeep2软件预测miRNA,与miRBase数据库中序列进行比对,测算比较每个miRNA的表达量并筛选。使用miRanda、miRDB、PITA软件分别对选定mi RNA进行靶基因预测分析,top GO、cluster Profiler软件分别对靶基因的基因本体和信号通路进行富集分析。分别用浓度为5、10、20μg/ml外泌体与肝星状细胞(HSC)共培养24、48 h,设置空白对照组;终浓度为50 nmol/L的选定miRNA (Csi-miR-125a)转染HSC 48 h,设置阴性对照组,均采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测各组HSC增殖情况。使用小鼠抗人β-actin、兔抗人α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、兔抗人Ⅲ型胶原、兔抗人微管相关蛋白1A/1B-轻链3 (LC3)、兔抗人p62、兔抗人细胞外信号调节激酶(ERK)、兔抗人p-ERK抗体(1∶1 000)作为一抗,辣根过氧化物酶(HRP)标记的山羊抗小鼠或抗兔Ig G (1∶10 000)作为二抗,蛋白质免疫印迹(Western blotting)检测HSC的活化相关蛋白α-SMA、Ⅲ型胶原,自噬相关蛋白LC3、p62的表达水平及信号通路相关ERK蛋白磷酸化水平。结果华支睾吸虫外泌体呈小泡状,具有磷脂双分子层结构,粒径分布主峰值为72 nm,分布范围主要为30~150 nm。外泌体中含有多种miRNA,选择表达量次高且与已知miRNA序列相似度高的CsimiR-125a进行后续研究。Csi-miR-125a存在301个靶基因预测位点重合,主要富集在细胞质、胞浆等细胞组件,参与蛋白结合、离子结合等分子功能,涉及生物调节、系统发育、神经系统发育等生物过程;靶基因信号通路大多富集于Hedgehog信号通路、细胞外基质-受体互作的相关通路、NOD样受体信号通路等。CCK-8法检测结果表明,外泌体浓度为10μg/ml、孵育24 h时A_(450)达最高,为1.707;Csi-miR-125a共孵育组A_(450)为1.122,高于阴性对照组(0.492)。Western blotting检测结果显示,阴性对照组及Csi-miR-125a组的α-SMA条带灰度值分别为0.588和0.904(t=10.560,P<0.01);Ⅲ型胶原条带灰度值分别为0.783和0.997 (t=6.483,P<0.05)。阴性对照组和Csi-miR-125a组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ条带灰度比值分别为1.093和2.215 (t=5.206,P<0.05),p62条带灰度值分别为0.537和1.369(t=13.100,P<0.01),p-ERK/ERK条带灰度比值分别为0.791和1.037 (t=5.067,P<0.05)。结论华支睾吸虫外泌体中miRNA种类丰富多样,且涉及多种细胞功能和多条信号通路。Csi-miR-125a可能通过阻断HSC自噬流和激活ERK信号通路促进HSC增殖活化从而在肝纤维化的发生中发挥一定的作用。 展开更多
关键词 华支睾吸虫 肝纤维化 外泌体 Csi-miR-125a ERK信号通路
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吡喹酮对肝吸虫病患者γ-谷氨酰转肽酶、嗜酸性粒细胞水平及预后的影响
7
作者 杨文龙 张国荣 《中国地方病防治》 2025年第1期62-63,共2页
目的 分析吡喹酮对肝吸虫病患者γ-谷氨酰转肽酶(γ-glutamyl transpeptidase, GGT)、嗜酸性粒细胞(eosinophils, EOS)水平及预后的影响。方法 回顾性分析长兴康宁康复医院2010年1月至2021年10月收治的8例肝吸虫病患者临床资料,所有患... 目的 分析吡喹酮对肝吸虫病患者γ-谷氨酰转肽酶(γ-glutamyl transpeptidase, GGT)、嗜酸性粒细胞(eosinophils, EOS)水平及预后的影响。方法 回顾性分析长兴康宁康复医院2010年1月至2021年10月收治的8例肝吸虫病患者临床资料,所有患者接受吡喹酮治疗,对患者治疗前、治疗1个疗程、治疗2个疗程后GGT、EOS水平变化情况以及大便肝吸虫虫卵检测结果进行汇总分析。结果 治疗前8例患者GGT、EOS水平均高于参考范围,大便肝吸虫虫卵测定为阳性;经过1个疗程治疗后,所有患者GGT、EOS水平降低,其中患者1、2、8大便肝吸虫虫卵测定结果转阴,转阴率为37.50%;对大便肝吸虫虫卵测定结果仍为阳性的患者,重复治疗1个疗程,GGT、EOS水平继续降低,最终仅患者7大便肝吸虫虫卵测定结果仍为阳性,整体转阴率为87.50%。结论 吡喹酮治疗肝吸虫病可显著降低GGT、EOS水平,治疗2个疗程的大便肝吸虫虫卵转阴率明显高于治疗1个疗程,临床通过对上述指标的动态监测调整治疗方案对提升患者预后质量具有积极作用。 展开更多
关键词 吡喹酮 肝吸虫病 Γ-谷氨酰转肽酶 嗜酸性粒细胞 预后
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华支睾吸虫3-磷酸甘油醛脱氢酶与肝纤维化的关系
8
作者 胡月 黄艳 李文芳 《热带医学杂志》 2025年第1期6-11,F0002,共7页
目的探讨华支睾吸虫3-磷酸甘油醛脱氢酶(Cs.GAPDH)与肝纤维化之间的关系,为华支睾吸虫病的防治提供理论依据和实验基础。方法采用腹腔注射法建立Cs.GAPDH诱导大鼠肝纤维化模型,以注射磷酸盐缓冲液(PBS)作为阴性对照组,以注射猪血清作为... 目的探讨华支睾吸虫3-磷酸甘油醛脱氢酶(Cs.GAPDH)与肝纤维化之间的关系,为华支睾吸虫病的防治提供理论依据和实验基础。方法采用腹腔注射法建立Cs.GAPDH诱导大鼠肝纤维化模型,以注射磷酸盐缓冲液(PBS)作为阴性对照组,以注射猪血清作为阳性肝纤维化模型对照组,通过HE染色、Masson染色和免疫组织化学法观察大鼠肝脏炎症及坏死反应的严重程度;利用免疫组织化学实验观察肝脏组织石蜡切片的Ⅲ型胶原表达情况;通过免疫细胞化学实验观察Cs.GAPDH与人肝星状细胞LX‐2的结合情况,以及这种结合是否依赖其纤溶酶原结合特性;通过CCK‐8细胞增殖和流式细胞法评估不同浓度Cs.GAPDH(0、2、5、10、20、40μg/mL)对人肝星状细胞LX‐2分别在24、48、72 h的影响;通过RT‐PCR方法和ELISA检测Cs.GAPDH刺激RAW264.7细胞分泌细胞因子白细胞介素-33(IL‐33)的转录和表达水平变化。结果通过对实验组大鼠肝脏HE染色和Masson染色发现,与对照组相比,注射Cs.GAPDH大鼠肝脏组织中出现了纤维胶原的沉积与炎症细胞的浸润;免疫组织化学染色显示,Cs.GAPDH组肝组织可见Ⅲ型胶原成条索状小片状分布在肝窦间隙中;Cs.GAPDH与LX‐2细胞结合并不依赖于其纤溶酶原结合特性;低浓度(2μg/mL)的Cs.GAPDH可以在短期内诱导LX‐2细胞的增殖(F=11.69,P<0.05),而持续高浓度(20μg/mL)则未能促进细胞增殖反而抑制了细胞的增殖,并诱导LX‐2细胞的凋亡(F=15.88,P<0.05);在体外刺激RAW264.7细胞24 h后,与PBS组相比,IL‐33在蛋白转录表达水平上显著升高且差异有统计学意义(t=5.69,P<0.05)。结论Cs.GAPDH通过诱导RAW264.7细胞分泌IL‐33,进一步介导肝星状细胞的增殖和凋亡,参与华支睾吸虫长期慢性感染引起的肝纤维化发生与发展,为深入了解肝纤维化机制及华支睾吸虫病的防治提供了潜在的研究方向。 展开更多
关键词 华支睾吸虫 3-磷酸甘油醛脱氢酶 肝纤维化 白细胞介素-33
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华支睾吸虫半胱氨酸蛋白酶参与囊蚴脱囊的作用研究
9
作者 赖雅诗 梁凯 +6 位作者 何姗姗 李晓芹 陈豫 卢婷 邓佩超 石云良 李艳文 《热带医学杂志》 CAS 2024年第1期8-12,18,共6页
目的探讨华支睾吸虫重组半胱氨酸蛋白酶和半胱氨酸蛋白酶特异抑制剂对脱囊的促进或抑制作用。方法用人工消化法收集囊蚴;采用体外脱囊,每组囊蚴100个,实验组分别加入N-(反式-环氧丁二酰基)-L-亮氨酸-4-胍基丁基酰胺(E-64)(20、40μmol/L... 目的探讨华支睾吸虫重组半胱氨酸蛋白酶和半胱氨酸蛋白酶特异抑制剂对脱囊的促进或抑制作用。方法用人工消化法收集囊蚴;采用体外脱囊,每组囊蚴100个,实验组分别加入N-(反式-环氧丁二酰基)-L-亮氨酸-4-胍基丁基酰胺(E-64)(20、40μmol/L)、碘乙酸(IAA)(50、100μmol/L)、华支睾吸虫半胱氨酸蛋白酶成熟结构域(CsCPL-m)与囊蚴孵育,对照组仅加入缓冲液,37℃,30 min;弃掉液体后加入10μg/mL胰蛋白酶-PBS溶液(pH 7.5),每5 min计数1次脱囊数,共计数6次,计算脱囊率;体视显微镜下将每组脱囊后的空囊分为三类计构成比。结果rCsCPL-m处理组与对照组在5、10 min脱囊率接近,差异均无统计学意义(χ^(2)=0.070、0.163,P均>0.05),到15 min时,两组脱囊率均达到99%。E-64与IAA处理组在5、10、15、20 min脱囊率均低于对照组,差异均有统计学意义(χ^(2)=73.895、286.003、203.959、41.451,P均<0.001);25 min时E-64(20、40μmol/L)与IAA(100μmol/L)组脱囊率仍低于对照组,差异均有统计学意义(χ^(2)=10.318、11.428、16.807,P均<0.001);IAA处理组,在6个统计时间点均显示50μmol/L组的脱囊率高于100μmol/L处理组,差异均有统计学意义(χ^(2)=10.285、22.623、14.654、12.934、7.789、4.308,P均<0.05)。rCsCPL-m组空囊形态3种类型构成比与对照组比较差异无统计学意义(χ^(2)=2.993,P>0.05);E-64和IAA作用组与对照组比较,均显示A型占比减少,C型占比增加,差异均有统计学意义(χ^(2)=21.495、17.324,P均<0.01)。结论华支睾吸虫半胱氨酸蛋白酶可能通过对囊壁内层的酶解软化作用促进脱囊,而CsCPL是否参与脱囊还需进一步确定。 展开更多
关键词 华支睾吸虫 脱囊 半胱氨酸蛋白酶
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广东省华支睾吸虫病流行现状调查和分析 被引量：68
10
作者 方悦怡 吴军 +4 位作者 柳青 黄少玉 林荣幸 张启明 阮彩文 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2007年第1期54-56,共3页
目的了解广东省华支睾吸虫病流行现状和态势。方法在全省原63个流行县（市）按流行程度和水系流域进行分层随机整群抽样，用改良加藤厚涂片法粪检虫卵并计数。结果全省调查9个县（市）27个点13876人，华支睾吸虫平均感染率为16．42％，... 目的了解广东省华支睾吸虫病流行现状和态势。方法在全省原63个流行县（市）按流行程度和水系流域进行分层随机整群抽样，用改良加藤厚涂片法粪检虫卵并计数。结果全省调查9个县（市）27个点13876人，华支睾吸虫平均感染率为16．42％，平均克粪虫卵数（EPG）为359。有8个县市查出感染者，其中3个县感染率超过20％。平均感染率男性18．92％，女性13．89％，差异有显著性（x^2=616．7，P〈0．01）。各年龄组均有感染，以成人感染为重（感染率19．38％～27．42％）。职业分布以渔民和商人感染最重（感染率32．69％）。结论广东省华支睾吸虫病流行范围广、感染率高，已经成为一个严重的公共卫生问题，应积极开展综合性防控工作。 展开更多
关键词 广东省 华支睾吸虫病 流行现状 调查
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珠江三角洲不同地区淡水鱼华支睾吸虫感染情况 被引量：33
11
作者 陈结云 陈翠珊 +7 位作者 叶葆青 何妙茵 王袖平 罗谧睿 黄晓彦 陈代雄 沈浩贤 李小敏 《热带医学杂志》 CAS 2004年第4期418-420,共3页
目的了解目前珠江三角洲淡水鱼华支睾吸虫感染情况。方法使用直接压片法和消化法对从顺德、南海、三水、广州和番禺等地采集的各种淡水鱼进行检查。结果从上述5个地区采集的淡水鱼中均检出了华支睾吸虫囊蚴,其中来自三水小塘的淡水鱼感... 目的了解目前珠江三角洲淡水鱼华支睾吸虫感染情况。方法使用直接压片法和消化法对从顺德、南海、三水、广州和番禺等地采集的各种淡水鱼进行检查。结果从上述5个地区采集的淡水鱼中均检出了华支睾吸虫囊蚴,其中来自三水小塘的淡水鱼感染最严重,广州地区的淡水鱼感染最轻。在不同鱼种中,以麦穗鱼感染率和感染度最高,主要食用鱼种如鲩鱼、大头鱼和非洲鲫鱼也有一定程度的感染。结论广东珠江三角洲地区淡水鱼华支睾吸虫的感染较为普遍和严重,防治工作有待加强。 展开更多
关键词 珠江三角洲 淡水鱼 华支睾吸虫 感染 调查
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基于核糖体DNA ITS区和COX1基因鉴别华支睾吸虫囊蚴 被引量：14
12
作者 杨庆利 申继清 +4 位作者 蒋智华 杨益超 李红梅 陈颖丹 周晓农 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期217-220,共4页
目的基于核糖体DNA ITS区和COX1基因,PCR鉴别鱼体内华支睾吸虫囊蚴。方法于2013年5月底采集广西横县某水库的麦穗鱼,用消化法从鱼肉组织中分离单个华支睾吸虫囊蚴及其他吸虫囊蚴;PCR检测华支睾吸虫核糖体DNA ITS区和COX1基因,并分析检... 目的基于核糖体DNA ITS区和COX1基因,PCR鉴别鱼体内华支睾吸虫囊蚴。方法于2013年5月底采集广西横县某水库的麦穗鱼,用消化法从鱼肉组织中分离单个华支睾吸虫囊蚴及其他吸虫囊蚴;PCR检测华支睾吸虫核糖体DNA ITS区和COX1基因,并分析检测的灵敏性和特异性。结果分离到不同发育阶段的华支睾吸虫囊蚴并经PCR检测证实。用针对核糖体DNA ITS区和COX1基因的PCR均能检测到单个华支睾吸虫囊蚴DNA,其特异性扩增条带大小分别为437/549、156/249和195/166 bp。用核糖体DNA ITS1和ITS2区的通用引物和特异性引物扩增华支睾吸虫囊蚴DNA的阳性数之比分别为0.905和0.952。针对COX1基因的特异性扩增均检测到目标DNA,并且扩增条带较亮。用该方法对其他吸虫囊蚴检测的对比试验显示特异性引物均未出现任何非特异性扩增反应;用ITS区通用引物检测其他吸虫囊蚴则显示出严重的非特异性扩增反应。结论通过形态观察结合PCR法识别出了不同发育阶段的华支睾吸虫囊蚴。用华支睾吸虫核糖体DNA ITS区的特异性引物进行PCR检测的灵敏性和特异性均优于相应通用引物。针对COX1基因的特异性PCR检测的灵敏性和特异性与核糖体DNA ITS区的检测结果相当。 展开更多
关键词 华支睾吸虫 囊蚴 ITS区 COX1基因 PCR
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日本血吸虫中国大陆株成虫cDNA文库的免疫筛选及PCR初步鉴定 被引量：14
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作者 吴海玮 陈淑贞 +2 位作者 王荣芝 苏川 张兆松 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 1998年第1期7-10,共4页
用成虫抗原免疫免血清筛选构建于表达载体λgt11的日本血吸虫成虫cDNA文库，再以多聚酶链反应（PCR）技术鉴定免疫筛选的阳性克隆。结果，对cDNA表达库中随机选取的约6.2×104个噬菌斑进行了筛选．初筛时共挑出52个可能的阳性斑，... 用成虫抗原免疫免血清筛选构建于表达载体λgt11的日本血吸虫成虫cDNA文库，再以多聚酶链反应（PCR）技术鉴定免疫筛选的阳性克隆。结果，对cDNA表达库中随机选取的约6.2×104个噬菌斑进行了筛选．初筛时共挑出52个可能的阳性斑，经两次复筛后，有25个噬菌仍呈阳性反应；以阳性噬菌斑DNA为模板，经PCR扩增均可获得一定大小的片段，从564bp到1200bp不等。这样能快速大量地筛选cDNA文库，便于高效地获得有价值的重组抗原基因克隆。 展开更多
关键词 日本血吸虫 CDNA文库 免疫筛选 PCR
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嫩江流域齐齐哈尔段野生淡水鱼华支睾吸虫囊蚴感染现状 被引量：14
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作者 刘继鑫 孙艳宏 +1 位作者 张浩 李朝品 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期292-294,共3页
于2013年5～11月从嫩江流域齐齐哈尔段的绰尔河、雅鲁河、乌裕尔河、阿伦河和音河采集野生淡水鱼,直接压片法检查华支睾吸虫囊蚴感染情况,人工消化法获取囊蚴。40只雌性昆明小鼠感染华支睾吸虫囊蚴（30～40个/鼠）,36d后解剖小鼠,收集... 于2013年5～11月从嫩江流域齐齐哈尔段的绰尔河、雅鲁河、乌裕尔河、阿伦河和音河采集野生淡水鱼,直接压片法检查华支睾吸虫囊蚴感染情况,人工消化法获取囊蚴。40只雌性昆明小鼠感染华支睾吸虫囊蚴（30～40个/鼠）,36d后解剖小鼠,收集肝胆管内的虫体,醋酸洋红染色后,镜下观察。共采集到9种1175尾野生淡水鱼,华支睾吸虫囊蚴总感染率为51.2%（602/1 175）。除鲶鱼外,其他鱼种均有不同程度感染,其中蛇鮈感染率最高,为82.7%（91/149）;葛氏鲈塘鳢的感染率最低,为7.1%（6/84）。不同鱼种间感染率差异有统计学意义（P〈0.05）。乌裕尔河段野生淡水鱼感染率最高,为65.7%（218/332）;阿伦河段和音河段感染率最低,均为24.1%（67/278）（P〈0.05）。鲫鱼和麦穗鱼全身各部位（除脑外）均易感,蛇鮈的感染部位主要在鱼鳞,在拉氏鱥的脑组织内首次发现囊蚴感染。感染小鼠实验结果显示,小鼠肝胆管内发现华支睾吸虫成虫,感染率为85.0%（34/40）。镜下清晰可见华支睾吸虫吸盘、消化系统和生殖系统等结构。 展开更多
关键词 嫩江流域 淡水鱼 华支睾吸虫 囊蚴 感染
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珠三角某市淡水鱼养殖环境及华支睾吸虫感感染情况调查 被引量：9
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作者 王曼 罗乐 +2 位作者 陈雪琴 李雷 方悦怡 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期716-719,共4页
目的了解珠三角某市淡水鱼养殖环境卫生及华支睾吸虫感染情况,为制订华支睾吸虫病防控策略提供依据。方法 2016年,根据鱼塘的分布,在珠三角某市选择14个镇区36个鱼塘进行调查。每个鱼塘采样10~20尾。在3个水产批发市场,每个市场选择3~6... 目的了解珠三角某市淡水鱼养殖环境卫生及华支睾吸虫感染情况,为制订华支睾吸虫病防控策略提供依据。方法 2016年,根据鱼塘的分布,在珠三角某市选择14个镇区36个鱼塘进行调查。每个鱼塘采样10~20尾。在3个水产批发市场,每个市场选择3~6个摊位,每个摊位采样不同鱼种20~30尾。采用消化法检查鱼体内华支睾吸虫囊蚴感染情况,并进行统计分析。结果 36个鱼塘周边均未见到粪便直接入塘的厕所,其中仅1个鱼塘周边存在粪便入塘动物栏(鸭)。检测鱼塘淡水鱼437尾,感染率为4.35%(19/437)。虫卵感染阳性的鱼分布在25%(9/36)的鱼塘、50%(7/14)的镇区。不同鱼的感染率分别为:鲫鱼13.95%(6/43),鲩鱼4.76%(9/189),鲮鱼4.44%(2/45),鳙鱼1.55%(2/129),非洲鲫鱼0.0%(0/31),差异有统计学意义(χ~2=13.46,P<0.05)。批发市场淡水鱼检测307尾,感染率为1.95%(6/307)。其中鲩鱼和鳙鱼的感染率分别为3.20%(4/125)和2.78%(2/72),鲫鱼、鲮鱼和非洲鲫鱼未检出阳性,不同鱼的感染率差异无统计学意义。结论珠三角某市鱼塘环境卫生较好,但是养殖和市售淡水鱼仍然存在一定程度华支睾吸虫囊蚴感染。 展开更多
关键词 华支睾吸虫 水产养殖 环境卫生 感染率 珠三角地区
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湖南长沙及湘西泡状带绦虫分离株线粒体cox1基因的克隆及序列分析 被引量：17
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作者 刘国华 戴荣四 +4 位作者 赵光辉 林瑞庆 刘伟 刘毅 朱兴全 《热带医学杂志》 CAS 2009年第2期117-120,共4页
目的研究湖南省长沙及湘西泡状带绦虫分离株线粒体细胞色素c氧化酶第I亚基(cox1)基因部分序列(pcox1)的遗传变异情况,并用pcox1序列重构泡状带绦虫与其他带科绦虫的种群遗传关系。方法应用聚合酶链反应(PCR)扩增泡状带绦虫虫株的pcox1,... 目的研究湖南省长沙及湘西泡状带绦虫分离株线粒体细胞色素c氧化酶第I亚基(cox1)基因部分序列(pcox1)的遗传变异情况,并用pcox1序列重构泡状带绦虫与其他带科绦虫的种群遗传关系。方法应用聚合酶链反应(PCR)扩增泡状带绦虫虫株的pcox1,应用ClustalX1.81程序对序列进行比对,然后用Phylip3.67程序MP法和Mage4.0程序NJ法绘制种系发育树,并用Puzzle5.2程序构建最大似然树;同时利用DNAstar5.0中的Megalign程序进行同源性分析,并与GenBankTM中已知泡状带绦虫相应基因序列进行比较分析。结果所获得的pcox1序列长度一致,均为343bp,与GenBankTM公布的带科绦虫序列进行比较分析表明,湖南长沙分离株1和湘西分离株5与已知泡状带绦虫相应基因的相似性分别为99.4%和99.7%,与其它带科绦虫的相似性均小于90.0%;湖南长沙1和湘西分离株5与已知泡状带绦虫相应基因遗传距离分别为0.006和0.003,与其他带科绦虫的遗传距离均大于0.100。种系发育树表明,2个分离株与已知泡状带绦虫位于同一分枝,Bootstrap值在97%以上。结论由于泡状带绦虫pcox1序列种内相对保守,种间差异较大,故可作为种间遗传变异研究的标记,研究结果为进一步研究泡状带绦虫的群体遗传结构奠定了基础。 展开更多
关键词 泡状带绦虫 线粒体DNA cox1基因 种系发育关系
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华支睾吸虫囊蚴cDNA表达文库的构建及鉴定 被引量：13
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作者 陈守义 余新炳 +5 位作者 徐劲 虢国泰 蒋忠军 吴德 胡旭初 李军涛 《热带医学杂志》 CAS 2003年第1期22-24,8,共4页
目的 构建华支睾吸虫囊蚴cDNA表达文库,为筛选特异诊断抗原和疫苗候选抗原奠定基础。方法提取华支睾吸虫囊蚴总RNA;用Clontech公司SMARTTM cDNA文库构建试剂盒并按其操作方法进行,进行反转录合成双链cDNA。PCR产物经蛋白酶K消化、纯化后... 目的 构建华支睾吸虫囊蚴cDNA表达文库,为筛选特异诊断抗原和疫苗候选抗原奠定基础。方法提取华支睾吸虫囊蚴总RNA;用Clontech公司SMARTTM cDNA文库构建试剂盒并按其操作方法进行,进行反转录合成双链cDNA。PCR产物经蛋白酶K消化、纯化后,进行SfiI酶切;用ChromaSpin 400柱将酶切产物进行分级分离,经1.1％琼脂糖凝胶电泳鉴定,回收0.4～4kb的组分,并与λTriplEx2载体连接;连接产物经体外蛋白包装,产生未扩增文库;检测未扩增文库滴度和重组效率后,进行文库的扩增,并测定扩增文库的滴度;随机挑取9个噬菌斑,用载体克隆位点两端的引物进行PCR扩增,以检测所构建的cDNA文库的质量。结果 未扩增文库滴度达7.0×107pfu/ml,扩增文库滴度达2.5×108pfu/ml;用载体两端的引物进行PCR鉴定,结果显示:扩增文库中,含1kb以上的占30％左右,1kb～500bp占69％。结论已成功地获得一高质量的华支睾吸虫囊蚴cDNA表达文库。 展开更多
关键词 华支睾吸虫囊蚴 CDNA表达文库 构建 鉴定
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2015年吉林省人群华支睾吸虫感染现状调查 被引量：13
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作者 王心 王本贺 +2 位作者 王姝雅 尹强 徐长喜 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期291-295,共5页
目的掌握吉林省人群华支睾吸虫感染现状,为科学防治华支睾吸虫病提供依据。方法2015 年,按照全国人体重点寄生虫病现状调查方案和实施细则统一要求,分层整群抽取全省35个县(市、区)的78 个农村调查点和21个城镇调查点,调查3周岁以上常... 目的掌握吉林省人群华支睾吸虫感染现状,为科学防治华支睾吸虫病提供依据。方法2015 年,按照全国人体重点寄生虫病现状调查方案和实施细则统一要求,分层整群抽取全省35个县(市、区)的78 个农村调查点和21个城镇调查点,调查3周岁以上常住人口,每个调查点不少于250人。采集粪样,用改良加藤厚涂片法(一粪两检)检查华支睾吸虫虫卵,并收集调查对象的信息。采用χ^2检验对不同性别、年龄、职业等特征人群感染率进行统计学分析。随机抽取50个调查点部分人员开展华支睾吸虫病问卷调查,了解相关知识的认知状况。结果共调查24 963人,华支睾吸虫感染者749例,感染率为3.0%。以轻度感染为主,占88.5%(663/749),中、重度感染分别为11.0%(82/749)和0.4%(3/749)。农村、城镇人口华支睾吸虫感染率分别为3.8%(746/19683)和0.1%(3/5 280),差异有统计学意义(P<0.01)。男性、女性感染率分别为3.6%(459/12 843)、2.4%(290/12 120),差异有统计学意义(P< 0.01)。41~50岁感染率最高,为4.4%(227/5 175);农民感染率最高,为4.1%(712/17 455);初中文化程度组感染率最高,为4.4%(546/12 322);汉族人群感染率最高,为3.1%(746/23 794);不同年龄组、职业、文化程度和民族间感染率差异均有统计学意义(P<0.01)。对50个调查点共计 2 850人开展问卷调查,城市地区居民对华支睾吸虫病的知晓率(58.5%, 350/598)高于农村地区(34.9%, 787/2252)(P<0.01);农村居民生食淡水鱼、虾的比例(11.9%, 269/2252)低于城市居民(19.0%, 113/598)(P<0.01),城市居民华支睾吸虫病知识知晓率与行为模式普遍优于农村地区。结论吉林省华支睾吸虫感染率较高。居民对华支睾吸虫病的知晓率和健康行为了解程度较低,生食淡水鱼虾的饮食习惯没有改变。 展开更多
关键词 吉林省 华支睾吸虫病 流行病学
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两个华支睾吸虫半胱氨酸蛋白酶的基因克隆、表达与定性(英文) 被引量：9
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作者 裴福全 Isao Nagano +5 位作者 吴军 WuZhi-liang 崔惠儿 Yuzo Takahashi 潘波 方悦怡 《热带医学杂志》 CAS 2004年第1期10-14,55,共6页
目的 寻找对华支睾吸虫病诊断有效的抗原基因,以便生物合成并研究其应用价值。方法 选取两个Genbank已报告的基因序列AF271091(CysA)及AF093242(CysB)分别克隆与表达融合蛋白,亲和层析纯化后进行免疫定性。结果 CysA与CysB均获得成功克... 目的 寻找对华支睾吸虫病诊断有效的抗原基因,以便生物合成并研究其应用价值。方法 选取两个Genbank已报告的基因序列AF271091(CysA)及AF093242(CysB)分别克隆与表达融合蛋白,亲和层析纯化后进行免疫定性。结果 CysA与CysB均获得成功克隆与表达,Western blot分析显示CysA与华支睾吸虫病阳性血清有强反应,与日本血吸虫病阳性血清只有很弱的交叉反应,而CysA与华支睾吸虫感染血清无反应。免疫组化显示,被表达的两个半胱氨酸蛋白酶在华支睾吸虫体内的免疫定位无显著不同,主要在成虫肠道及虫卵。结论 成功表达的两个半胱氨酸蛋白酶中,CysB针对华支睾吸虫病血清有良好的抗原活性,值得视为诊断抗原候选做进一步的研究。 展开更多
关键词 华支睾吸虫 重组半胱氨酸蛋白酶 基因表达 克隆 华支睾吸虫病 诊断
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淡水鱼中华支睾吸虫囊蚴PCR检测技术的建立及应用分析 被引量：11
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作者 王真瑜 江莉 +4 位作者 张耀光 何艳燕 马晓疆 朱倩 蔡黎 《热带医学杂志》 CAS 2018年第11期1435-1439,F0004,共6页
目的建立灵敏度高,特异性强的淡水鱼中华支睾吸虫囊蚴PCR检测方法。方法采用DNeasy组织提取试剂盒提取淡水鱼中华支睾吸虫囊蚴DNA,根据核糖体第二内转录间隔区(ITS2)基因序列合成1对特异性CS1/CS2引物,对模板DNA进行PCR扩增。预试验后... 目的建立灵敏度高,特异性强的淡水鱼中华支睾吸虫囊蚴PCR检测方法。方法采用DNeasy组织提取试剂盒提取淡水鱼中华支睾吸虫囊蚴DNA,根据核糖体第二内转录间隔区(ITS2)基因序列合成1对特异性CS1/CS2引物,对模板DNA进行PCR扩增。预试验后优化反应条件,评估反应的特异性和灵敏性。用消化镜检法和PCR法同时检测2015-2016年上海市4区121件淡水鱼样本并比较结果。结果该方法检测含有华支睾吸虫囊蚴麦穗鱼的DNA为阳性,其余对照均为阴性;检测按1∶10倍比稀释阳性样本的灵敏度达到fg水平。应用于上海市4区121件淡水鱼样本中华支睾吸虫囊蚴检测,消化镜检法检出阳性3件,阳性率2.48%;PCR法检出5件(包含消化法检出的3件),阳性率为4.13%,两法基本相当,差异无统计学意义(χ^2=0.52,P>0.05)。结论 PCR法检测淡水鱼中华支睾吸虫囊蚴具有简便快速且特异性敏感性高的特点,具有较好的应用前景。 展开更多
关键词 淡水鱼 华支睾吸虫 囊蚴 PCR
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