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恶性疟原虫PfSET5的生物信息学分析及蛋白纯化
1
作者 朱文菊 李亚楠 +6 位作者 张俊梅 刘娇 谢金晶 张欣 董宏杰 尹昆 王琦 《中国病原生物学杂志》 北大核心 2026年第1期66-72,共7页
目的PfSET5属于SET家族,是一种包含SET结构域的组蛋白甲基转移酶。恶性疟原虫(Plasmodium falciparum)PfSET5可以通过介导组蛋白H3的第64位赖氨酸(H3K64)的甲基化修饰,影响染色质结构并参与基因表达调控。本研究通过对PfSET5进行生物信... 目的PfSET5属于SET家族,是一种包含SET结构域的组蛋白甲基转移酶。恶性疟原虫(Plasmodium falciparum)PfSET5可以通过介导组蛋白H3的第64位赖氨酸(H3K64)的甲基化修饰,影响染色质结构并参与基因表达调控。本研究通过对PfSET5进行生物信息学分析以及重组蛋白的表达纯化,阐明PfSET5蛋白的理化特性和结构特征,为后续的功能研究和靶向药物的开发奠定基础。方法从NCBI数据库获取PfSET5的氨基酸序列,采用Expasy,TMHMM,SignalP,NetPhos3.1等软件分析PfSET5的理化性质、跨膜区、信号肽、疏水性以及磷酸化位点预测。通过分子克隆构建pET28a-MBP-PfSET5重组蛋白,在大肠埃希菌BL21(DE3)中诱导表达,高压破碎后依次采用镍离子亲和层析、阴离子亲和层析以及分子筛排阻层析进行蛋白纯化。结果PfSET5蛋白共由178个氨基酸组成,带正电荷,无跨膜区,无信号肽,弱亲水性;系统发育树和多序列对比分析显示PfSET5在进化过程中比较保守;成功构建pET28a-MBP-PfSET5重组蛋白并获得大量高纯度蛋白。结论本研究成功实现了PfSET5蛋白的高效表达及纯化,为PfSET5蛋白甲基化分子机制的进一步研究和靶向药物开发奠定基础。 展开更多
关键词 PfSET5 异源表达 重组蛋白 蛋白纯化
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微孢子虫孢壁蛋白的研究
2
作者 陈洁 胡婉莹 +4 位作者 龙梦娴 李田 李春峰 潘国庆 周泽扬 《蚕学通讯》 2025年第2期13-21,共9页
微孢子虫(microsporidia)是一类专性细胞内寄生的单细胞真核微生物,可危害动物及人类健康。微孢子虫以孢子形式存在于环境中,其孢壁主要由富含蛋白质的孢外壁、富含几丁质的孢内壁以及孢原质膜组成。本文综述了国内外微孢子虫孢壁蛋白... 微孢子虫(microsporidia)是一类专性细胞内寄生的单细胞真核微生物,可危害动物及人类健康。微孢子虫以孢子形式存在于环境中,其孢壁主要由富含蛋白质的孢外壁、富含几丁质的孢内壁以及孢原质膜组成。本文综述了国内外微孢子虫孢壁蛋白研究的最新进展。研究表明,孢壁蛋白在结构和功能上均表现出显著的物种特异性。孢壁蛋白在微孢子虫的生理活动中发挥关键作用,参与孢子形成、增殖、发芽、黏附和侵染等多个生物学过程。本文系统地分析了孢壁蛋白的种类、结构特征及其生物学功能,重点阐述孢壁蛋白在宿主细胞黏附、侵染和增殖过程中的关键作用,并探讨其在揭示寄生虫生物学特性中的重要意义。通过总结现有的研究成果,为未来相关领域的研究及抗微孢子虫感染新策略的开发提供参考。 展开更多
关键词 微孢子虫 孢壁结构 孢壁蛋白 功能分类
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福建省1例人感染田鼠巴贝虫的实验诊断
3
作者 林耀莹 陈云虹 +2 位作者 谢汉国 欧阳榕 肖丽贞 《海峡预防医学杂志》 2025年第2期1-3,21,共4页
目的分析福建省2024年1例人感染田鼠巴贝虫的实验诊断结果,促进提升各级实验室的巴贝虫病诊断筛查能力,及时诊断和治疗有关病例,降低疾病危害。方法收集福建省少见的1例人感染巴贝虫病例的抗凝全血及病例相关信息,用姬姆萨染色镜检、巴... 目的分析福建省2024年1例人感染田鼠巴贝虫的实验诊断结果,促进提升各级实验室的巴贝虫病诊断筛查能力,及时诊断和治疗有关病例,降低疾病危害。方法收集福建省少见的1例人感染巴贝虫病例的抗凝全血及病例相关信息,用姬姆萨染色镜检、巴贝虫虫种核酸18S rRNA鉴定方法等对病例血样进行检测。结果姬姆萨染色镜检结果初步判定该病例感染巴贝虫;经NCBI-BLAST线上比对,显示该病例血样18S rRNA片段扩增产物(GenBank accession number:PQ999821)与田鼠巴贝虫(KF410827)的一致性为99.5%,判断该病例为田鼠巴贝虫感染。结论人感染巴贝虫病是一种新发寄生虫病,应加强巴贝虫镜检和核酸筛查等常态化检测,以准确了解人感染巴贝虫病的流行情况,为疾病防控制定对应的策略。 展开更多
关键词 田鼠巴贝虫 巴贝虫病 新发寄生虫病 实验诊断 疾病控制
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重庆市输入性间日疟原虫耐药分子标记物监测分析
4
作者 向尧 谭妍 +4 位作者 罗飞 蔡娇娇 李志峰 许静茹 邱景富 《中国人兽共患病学报》 北大核心 2025年第7期726-734,共9页
目的为了解重庆市输入性间日疟原虫耐药分子标记物突变流行情况,对间日疟原虫Pvdhfr、Pvdhps、Pvmdr1、Pvcrt-o、Pvk12基因突变情况进行分析。方法收集2011—2022年重庆市输入性间日疟原虫感染患者血样,扩增Pvdhfr、Pvdhps、Pvmdr1、Pvc... 目的为了解重庆市输入性间日疟原虫耐药分子标记物突变流行情况,对间日疟原虫Pvdhfr、Pvdhps、Pvmdr1、Pvcrt-o、Pvk12基因突变情况进行分析。方法收集2011—2022年重庆市输入性间日疟原虫感染患者血样,扩增Pvdhfr、Pvdhps、Pvmdr1、Pvcrt-o、Pvk12基因并测序,以评估基因突变情况,利用生物信息学方法分析其突变流行情况。结果Pvdhfr在50、57、58、61、99、117、199位点分别在2.94%、23.53%、76.47%、23.53、2.94%、82.35%和5.88%的样本中检测到突变,单体型突变中最常见的是双重突变S58R/S117N(50%),其次是四重突变型F57L/S58R/T61M/S117T(11.76%)。Pvdhfr的串联重复序列有4种类型,野生型最为常见,插入型为本次研究新发现。Pvdhps基因突变率较低,单突变体为主,占27.03%。Pvmdr1第958位和1076位的核苷酸突变率分别为100%和89.19%,双重突变T058M/F1076L占主导地位,达54.05%。在37份样品测序成功的Pvcrt-o中,仅8份检测出K10插入,占比22.22%。本研究未发现Pvk12的非同义突变。结论本研究的病例来自不同的输入来源国,发现了Pvdhfr新的串联重复突变类型,及Pvdhps新的突变位点,进一步丰富了国内输入性间日疟原虫耐药分子标记物的突变信息。 展开更多
关键词 输入性间日疟原虫 耐药性 突变 Pvdhfr Pvdhps Pvmdr1 Pvcrt-o Pvk12
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若尔盖县高原鼠兔贾第虫及隐孢子虫分子流行病学调查
5
作者 陈虹汐 向阳 +4 位作者 吉克日洪 陈天祥 袁东波 朱良全 郝力力 《中国人兽共患病学报》 北大核心 2025年第3期331-338,共8页
目的了解四川省若尔盖县高原鼠兔贾第虫(Giardia)和隐孢子虫(Cryptosporidium)感染情况。方法2023年3月至12月,在若尔盖县5个乡镇(达扎寺镇、阿西镇、红星镇、唐克乡和麦溪乡)捕获高原鼠兔,取肠胃内容物并提取DNA,针对贾第虫bg、gdh、tp... 目的了解四川省若尔盖县高原鼠兔贾第虫(Giardia)和隐孢子虫(Cryptosporidium)感染情况。方法2023年3月至12月,在若尔盖县5个乡镇(达扎寺镇、阿西镇、红星镇、唐克乡和麦溪乡)捕获高原鼠兔,取肠胃内容物并提取DNA,针对贾第虫bg、gdh、tpi基因和隐孢子虫SSU rRNA(小亚基核糖体RNA)基因进行巢式PCR扩增;将PCR阳性样本测序后得到的序列进行剪切、比对并构建遗传进化树,以确定扩增序列所属的虫种和基因型。结果共捕获114只鼠兔,采集肠道内容物和胃内容物各114份。bg基因检出贾第虫阳性44份;gdh基因检出贾第虫阳性14份,总检出率43.9%(50/114)。共检出2种贾第虫集聚体[集聚体E和1种新的集聚体Assemblage OC1(暂命名)];SSU rRNA基因检出隐孢子虫阳性8份,总检出率7.0%(8/114),检出3种新的基因型。部分样本存在混合感染,检出率为3.5%(4/114)。结论若尔盖县高原鼠兔感染贾第虫为蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia)和Giardia sp.(REG-1、REG-2),集聚体E为该地区优势集聚体,且存在一种新的集聚体Assemblage OC1;感染的隐孢子虫为Cryptosporidium sp.(REG-1、REG-2和REG-3)。应加强对若尔盖地区贾第虫和隐孢子虫的监测,为当地公共卫生提供重要的数据支撑。 展开更多
关键词 高原鼠兔 蓝氏贾第鞭毛虫 隐孢子虫 巢式PCR 流行病学
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人工智能辅助疟原虫检测平台的开发与应用效果研究
6
作者 吴凯 夏青 +1 位作者 贾立铭 傅敏 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 北大核心 2025年第3期345-350,共6页
目的研究并建立基于人工智能的疟原虫辅助检测平台,评价其应用效果。方法收集2008—2022年武汉市境外输入性疟疾现症病例的血涂片,采用智能检测平台的自动图像采集系统获取镜下图像,由专业镜检人员进行标注,创建疟原虫薄血膜图像数据集... 目的研究并建立基于人工智能的疟原虫辅助检测平台,评价其应用效果。方法收集2008—2022年武汉市境外输入性疟疾现症病例的血涂片,采用智能检测平台的自动图像采集系统获取镜下图像,由专业镜检人员进行标注,创建疟原虫薄血膜图像数据集。通过训练检测模型进行疟原虫、白细胞和红细胞的检测,推理出阴阳性、感染率、感染虫种,并展示于应用界面中。采用真阳性、真阴性、假阳性、假阴性的样本数量,计算准确率、精确率、召回率、F1分数来评估模型的性能。参照疟疾镜检人员的技术考核方式,模拟镜检过程,取10张血涂片对模型检测综合结果进行评分。结果薄血膜图像数据集共包含3704张图像,由专家使用边界框进行注释,注释包含7835个虫体和786个白细胞标注。经YOLOv8模型混淆矩阵分析,模型整体正确率为85.5%、精确率为98.5%、召回率为93.3%、F1分数为95.8%、平均精度@0.50分数为96.2%。间日疟原虫和三日疟原虫的检测精确率较高,分别为96.9%和93.8%。恶性疟原虫和白细胞的检测精确率较低,分别为87.2%和87.8%。除恶性疟原虫的F1分数为89.7%外,其他类别检测的F1分数均高于90.0%。召回率由高到低为三日疟原虫(94.9%)、白细胞(94.2%)、间日疟原虫(94.1%)、卵形疟原虫(93.6%)、恶性疟原虫(92.4%)。共有64个目标被误检,误检率为6.7%。平台与专家检测结果正确率均为100%,平台得分90,无阴阳性误判现象,但鉴别虫种存在误检。结论本人工智能检测平台能较好地识别定位疟原虫、白细胞及红细胞,评分结果趋近于镜检专家,具备较高的检测能力,可应用于临床疟原虫镜检的辅助诊断。 展开更多
关键词 疟原虫检测 目标检测模型 YOLOv8模型 深度学习 血涂片
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牦牛腹泻3种常见病原体多重PCR检测方法的建立与应用
7
作者 潘瑶 张晶 +8 位作者 金美君 辛凌翔 肖海月 刘燕 姚文生 程川 郝力力 蓝岚 朱良全 《寄生虫与医学昆虫学报》 2025年第3期146-152,共7页
目的建立一种快速、敏感、特异、可同时检测隐孢子虫、球虫和牛细小病毒的多重PCR检测方法。方法针对隐孢子虫SSU rRNA基因、球虫SSU rRNA基因、牛细小病毒VP2基因分别设计特异性引物并构建重组质粒标准品。经温度梯度PCR法和单一控制... 目的建立一种快速、敏感、特异、可同时检测隐孢子虫、球虫和牛细小病毒的多重PCR检测方法。方法针对隐孢子虫SSU rRNA基因、球虫SSU rRNA基因、牛细小病毒VP2基因分别设计特异性引物并构建重组质粒标准品。经温度梯度PCR法和单一控制变量法优化反应条件,建立多重PCR检测方法并对其敏感性、特异性、重复性和临床应用进行评价。结果多重PCR方法的最佳退火温度为60.5℃,球虫上下游引物各为0.2μmol/L、隐孢子虫和牛细小病毒上下游引物各为0.4μmol/L;建立的方法敏感性高,对隐孢子虫、球虫和牛细小病毒的重组质粒标准品的最低检测下限分别为243、260和3110 copies;特异性强,与牛群常见沙门氏菌、病毒性腹泻病毒、轮状病毒等10种病原无交叉反应。重复性好,批内与批间实验结果均一致。利用建立的多重PCR方法对从四川甘孜州部分地区送检的81份临床腹泻样品进行检测,结果隐孢子虫、球虫和牛细小病毒的阳性率分别为18.52%(15/81)、34.57%(28/81)、18.52%(15/81),三者混合感染阳性率为3.7%(3/81)。结论建立的隐孢子虫、球虫和牛细小病毒多重PCR方法,可为临床3种常见牦牛腹泻病原的鉴别诊断及流行病学调查提供技术支持。 展开更多
关键词 牦牛 隐孢子虫 球虫 细小病毒 多重PCR
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微小隐孢子虫亲环蛋白CpCyP1的亚细胞定位及其酶动力学研究
8
作者 靳昔蒙 姜鹏 +3 位作者 王东强 翟宗振 尹继刚 朱冠 《寄生虫与医学昆虫学报》 2025年第3期129-137,173,共10页
目的 本研究旨在阐明微小隐孢子虫亲环蛋白CpCyP1(Cryptosporidium parvum cyclophilin protein-1)的亚细胞定位和酶动力学等特征,为进一步深入研究其生物学功能和探索抗虫药物靶点提供基础。方法 采用荧光定量qRT-PCR,对CpCyP1基因在... 目的 本研究旨在阐明微小隐孢子虫亲环蛋白CpCyP1(Cryptosporidium parvum cyclophilin protein-1)的亚细胞定位和酶动力学等特征,为进一步深入研究其生物学功能和探索抗虫药物靶点提供基础。方法 采用荧光定量qRT-PCR,对CpCyP1基因在隐孢子虫不同发育时期转录水平进行分析;通过原核表达系统获得带有His标签的CpCyP1重组蛋白(His-CpCyP1),并用该蛋白免疫新西兰家兔以制备特异性抗血清,利用亲和层析技术纯化所得抗血清;通过Western blot检测子孢子中的CpCyP1蛋白表达,通过间接免疫荧光(IFA)技术确定CpCyP1在虫体内不同发育阶段的亚细胞定位;最后,通过吸光度比色法测定His-CpCyP1的肽基脯氨酰顺反异构酶(peptidyl-prolyl cis-trans isomerase, PPIase)活性,并评估环孢菌素A(cyclosporine A, CsA)对His-CpCyP1酶活性的影响。结果 CpCyP1基因在隐孢子虫的各个发育阶段均有转录,尤其在裂殖体和配子阶段表达量较高;CpCyP1蛋白在子孢子和细胞内阶段均定位于虫体胞浆内。酶动力学研究显示,CpCyP1对含脯氨酸的短肽底物的米氏常数Km为456.4μmol/L,最大反应速率Vmax为1.981 U[μmol/(min·μg)]。CsA与CpCyP1结合的解离常数Kd为5.122μmol/L,半数抑制浓度IC50为1.004μmol/L。结论 CpCyP1在隐孢子虫的各个发育阶段均有表达,并且重组的CpCyP1具有微摩尔级别的PPIase酶活性,该活性可以被CsA所抑制,这提示CpCyP1可能是CsA的潜在底物,因此,CpCyP1作为抗虫药物靶点的潜力值得进一步研究。 展开更多
关键词 微小隐孢子虫 亲环蛋白 酶动力学 蛋白定位
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青海湖地区普氏原羚隐孢子虫的分子流行病学调查
9
作者 赵心愿 张迪迪 +4 位作者 张学勇 马利青 李秀萍 王光华 简莹娜 《中国人兽共患病学报》 北大核心 2025年第11期1179-1184,共6页
目的对青海湖地区国家一级保护动物普氏原羚(Procapra przewalskii)中隐孢子虫(Cryptosporidium)的感染流行情况展开调查。方法基于隐孢子虫18S rRNA基因的巢式PCR方法对采集到的普氏原羚新鲜粪便样品基因组DNA进行扩增,以检测隐孢子虫... 目的对青海湖地区国家一级保护动物普氏原羚(Procapra przewalskii)中隐孢子虫(Cryptosporidium)的感染流行情况展开调查。方法基于隐孢子虫18S rRNA基因的巢式PCR方法对采集到的普氏原羚新鲜粪便样品基因组DNA进行扩增,以检测隐孢子虫感染率,并基于gp60基因片段对隐孢子虫阳性样本进行亚型分析。结果普氏原羚中隐孢子虫的感染率为3.67%(16/436),共检测到肖氏隐孢子虫(C.xiaoi)和泛在隐孢子虫(C.ubiquitum)2种隐孢子虫,其中C.xiaoi为优势虫株,占阳性样品的68.75%(11/16)。对C.ubiquitum阳性样本进行亚型分析,鉴定出其为XIIa型。结论本次研究首次证实普氏原羚中存在隐孢子虫感染,并且存在能够感染人的XIIa亚型C.ubiquitum,具有较大的人兽共患病传播风险。 展开更多
关键词 普氏原羚 隐孢子虫 感染率 人兽共患
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1例国内罕见的输入性卵形疟的实验室检测 被引量：31
10
作者 师永霞 黄吉城 +5 位作者 苏锦坤 李小波 幸芦琴 郑夔 洪烨 郭波旋 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期914-917,920,共5页
目的对1例输入性疑似疟疾患者的血样进行实验室检测。方法制备疑似疟疾患者血样的血涂片,吉姆萨染色后进行疟原虫的镜检观察。利用实验室自行研制的疟原虫属特异性(通用型)和4种疟原虫种特异性的巢式PCR和实时荧光PCR检测方法,对该血样... 目的对1例输入性疑似疟疾患者的血样进行实验室检测。方法制备疑似疟疾患者血样的血涂片,吉姆萨染色后进行疟原虫的镜检观察。利用实验室自行研制的疟原虫属特异性(通用型)和4种疟原虫种特异性的巢式PCR和实时荧光PCR检测方法,对该血样进行疟疾检测及分型。将PCR扩增片段进行序列测定,并与已知的卵形疟序列进行blast比对分析。结合血样的分子生物学检测结果,重新对镜检结果进行复核。结果血样初次镜检为疟疾阴性。使用疟原虫巢式PCR通用引物对血样的DNA进行PCR检测,扩增出了预期大小约240bp的条带;巢式PCR分型检测表明,血样仅扩增出预期大小约450bp的卵形疟条带,无对应大小的恶性疟、间日疟和三日疟扩增条带产生。疟原虫通用型和卵形疟特异性的荧光PCR检测结果均为典型的S形阳性曲线,卵形疟扩增片段的熔解温度为72.5℃。序列分析表明,扩增片段长度为434bp,blast比对发现去除引物后的393个碱基与GenBank DQ845247等卵形疟的SSU rRNA对应部分的基因序列同源性为100%。重新对血涂片进行镜检复核,结果在薄血膜中发现了卵形疟的环状滋养体,被寄生的红细胞为椭圆形,边缘呈伞矢状。结论使用巢式PCR、实时荧光PCR、序列分析和镜检等方法,证实该例输入性的疑似疟疾患者为卵形疟原虫感染。 展开更多
关键词 输入性卵形疟 镜检 巢式PCR 实时荧光PCR 序列分析
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基于18S rRNA和HSP70基因序列的隐孢子虫种系发育分析 被引量：14
11
作者 王进产 菅复春 +5 位作者 张龙现 宁长申 闫文朝 孙铭飞 仇书兴 卢庆斌 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期947-953,共7页
为阐明河南区域隐孢子虫分子流行病学特点,用PCR技术扩增分离虫株的18S rRNA基因全序列和HSP70基因序列,并对扩增片段进行测序。用PAUP 4.0和TREEPUZZLE 4.1构建进化树,试图从分子水平证明河南省不同地区不同宿主来源隐孢子虫的遗传特征... 为阐明河南区域隐孢子虫分子流行病学特点,用PCR技术扩增分离虫株的18S rRNA基因全序列和HSP70基因序列,并对扩增片段进行测序。用PAUP 4.0和TREEPUZZLE 4.1构建进化树,试图从分子水平证明河南省不同地区不同宿主来源隐孢子虫的遗传特征,以阐明隐孢子虫病的分子流行病学特点。通过18S rRNA基因全序列和HSP70基因序列分析,其结果:河南人源隐孢子虫分离株为Cryptosporidium parvum鼠基因型;河南鹿源隐孢子虫分离株为C. parvum鹿基因型;河南猪源隐孢子虫的2个分离株均为C. parvum猪基因I型,即C. suis;河南鹌鹑源的隐孢子虫2个分离株分别为C. baileyi和C. meleagridis;河南乌鸡源隐孢子虫和鸵鸟源隐孢子虫分离株均为C. baileyi;河南牛源隐孢子虫分离株为C.andersoni。 展开更多
关键词 隐孢子虫 HSP70 18S RRNA 种系发育
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微小隐孢子虫卵囊DNA提取及用于PCR检测 被引量：12
12
作者 沈玉娟 曹建平 +6 位作者 卢潍媛 李小红 刘海鹏 徐馀信 周晓农 汤林华 刘述先 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期228-230,共3页
目的采用3种方法提取微小隐孢子虫卵囊DNA,并用于PCR检测以进行比较。方法微小隐孢子虫卵囊经多次冻融加热破壁后,采用螯合树脂(Chelex-100)、酚/氯仿和基因组DNA纯化系统试剂盒3种方法提取微小隐孢子虫卵囊DNA,并根据微小隐孢子虫基因... 目的采用3种方法提取微小隐孢子虫卵囊DNA,并用于PCR检测以进行比较。方法微小隐孢子虫卵囊经多次冻融加热破壁后,采用螯合树脂(Chelex-100)、酚/氯仿和基因组DNA纯化系统试剂盒3种方法提取微小隐孢子虫卵囊DNA,并根据微小隐孢子虫基因序列(L16996)设计一对寡核苷酸引物,分别对3种方法制备模板进行PCR扩增分析。Chelex-100提取的DNA也用于观察PCR检测的敏感性。结果3种方法制备的微小隐孢子虫卵囊模板用于PCR检测均获得1条446 bp条带,Chelex-100提取的DNA用于PCR检测的敏感性至少达0.5个卵囊。结论3种方法提取的微小隐孢子虫卵囊DNA均可用于PCR检测,Chelex-100法是一种高效而快速的微量提取DNA方法,适用于对隐孢子虫DNA的检测。 展开更多
关键词 微小隐孢子虫 卵囊 脱氧核精核酸 分离和提纯 螯合树脂法 聚合酶链反应
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隐孢子虫牛源分离株的分离和鉴定 被引量：17
13
作者 刘海鹏 曹建平 +8 位作者 沈玉娟 陈有贵 李小红 卢潍媛 徐馀信 刘宜升 刘述先 周晓农 汤林华 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期81-86,共6页
目的分离和鉴定采自徐州自然感染奶牛粪便中的隐孢子虫卵囊。方法在徐州某奶牛场采集经改良抗酸染色镜检确认为隐孢子虫感染的奶牛粪便,用不连续Sheather’s蔗糖密度梯度离心法纯化卵囊。采用Chelex-100方法提取卵囊基因组DNA,设计引物... 目的分离和鉴定采自徐州自然感染奶牛粪便中的隐孢子虫卵囊。方法在徐州某奶牛场采集经改良抗酸染色镜检确认为隐孢子虫感染的奶牛粪便,用不连续Sheather’s蔗糖密度梯度离心法纯化卵囊。采用Chelex-100方法提取卵囊基因组DNA,设计引物扩增小亚基核糖体RNA(SSU rRNA)基因和卵囊囊壁蛋白(COWP)基因,分别克隆到pGEM-T和pGEM-T Easy载体,测定核苷酸序列,运用BLAST和MEGA软件进行序列同源性和种系发生分析。结果分离的隐孢子虫卵囊个体大小为(7．4±0．32)μm×(5．4±0．21)μm,长宽比为1．3±0．07(n=20)。徐州牛源隐孢子虫与Gen- Bank公布的安氏隐孢子虫比较,SSU rRNA和COWP基因序列同源性分别为100％和99％。种系发生分析显示该株隐孢子虫与安氏隐孢子虫处于同一分支。结论由徐州自然感染奶牛粪便中分离获得的隐孢子虫是安氏隐孢子虫。 展开更多
关键词 安氏隐孢子虫 小亚基核糖体RNA 卵囊囊壁蛋白 种系发生分析
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白果内酯抗大鼠卡氏肺孢子虫肺炎的实验研究 被引量：25
14
作者 唐小葵 倪小毅 +3 位作者 陈雅棠 王健 吴亚梅 卢萍 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第10期851-853,共3页
目的　研究白果内酯治疗实验大鼠卡氏肺孢子虫肺炎的疗效。方法　以地塞米松皮下注射大鼠 6周诱导建立肺孢子虫肺炎动物模型 ,用不同剂量白果内酯治疗实验大鼠 ,以免疫抑制为对照组 ,通过大鼠肺质量 /体质量的值 ,肺印片每视野的包囊均... 目的　研究白果内酯治疗实验大鼠卡氏肺孢子虫肺炎的疗效。方法　以地塞米松皮下注射大鼠 6周诱导建立肺孢子虫肺炎动物模型 ,用不同剂量白果内酯治疗实验大鼠 ,以免疫抑制为对照组 ,通过大鼠肺质量 /体质量的值 ,肺印片每视野的包囊均数为指标评价疗效。结果　白果内酯 2 0mg/kg、3 0mg/kg治疗组大鼠肺质量 /体质量的值分别为 0 0 0 97± 0 0 0 3 3、0 0 10 2± 0 0 0 2 1,明显低于免疫抑制组对照组 0 0 14 6± 0 0 0 3 4(P <0 0 5 )。白果内酯 2 0mg/kg、3 0mg/kg治疗组大鼠肺印片每视野的包囊均数分别为 2 3 1± 0 88、1 95± 0 5 7明显低于免疫抑制组对照组 7 3 9± 2 3 3 (P <0 0 1)。 展开更多
关键词 白果内酯 卡氏肺孢子虫 治疗
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半量诱导剂在建立卡氏肺孢子虫肺炎模型中的作用 被引量：16
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作者 陈殿学 孙宏伟 +3 位作者 王玉华 杨淑芝 安春丽 李建春 《中国人兽共患病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第1期61-62,共2页
目前，卡氏肺孢子虫肺炎（ＰＣＰ）模型的建立虽然可应用皮下注射可的松的方法获得稳定的效果，但是传统的诱导剂量存在着致实验动物死亡率高的问题。为此，本文采用减半诱导剂量的方法，既可使ＰＣＰ 模型建立，且又明显降低实验动物... 目前，卡氏肺孢子虫肺炎（ＰＣＰ）模型的建立虽然可应用皮下注射可的松的方法获得稳定的效果，但是传统的诱导剂量存在着致实验动物死亡率高的问题。为此，本文采用减半诱导剂量的方法，既可使ＰＣＰ 模型建立，且又明显降低实验动物的死亡率，从而为ＰＣＰ的研究奠定较好的基础。 展开更多
关键词 卡氏肺孢子虫 动物模型 诱导剂 肺炎
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聚合酶链反应检测粪便中微小隐孢子虫 被引量：35
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作者 马良 陈雅棠 刘约翰 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 1996年第2期111-114,共4页
目的：利用聚合酶链反应（ＰＣＲ）原理建立一种敏感且特异的方法检测人和动物粪便标本中的微小隐孢子虫（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍｐａｒｖｕｍ，Ｃ．ｐ．）。方法：从含有Ｃ．ｐ．卵囊的人和豚鼠粪便标本中直接提取ＤＮＡ用作... 目的：利用聚合酶链反应（ＰＣＲ）原理建立一种敏感且特异的方法检测人和动物粪便标本中的微小隐孢子虫（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍｐａｒｖｕｍ，Ｃ．ｐ．）。方法：从含有Ｃ．ｐ．卵囊的人和豚鼠粪便标本中直接提取ＤＮＡ用作ＰＣＲ的模板。用一对人工合成的寡核苷酸序列作为ＰＣＲ引物，扩增长为４５２ｂｐ的Ｃ．ｐ．目的ＤＮＡ片段。扩增产物用琼脂糖凝胶电泳、溴化乙锭染色检测。结果：从感染Ｃ．ｐ．的人和豚鼠粪便标本ＤＮＡ抽提物中均扩增出目的片段，而从其他几种寄生虫、肠道微生物或宿主ＤＮＡ中均不能扩增出目的片段。本方法的敏感性比目前常用的检测方法高约１００倍。结论：ＰＣＲ技术检测人和动物粪便中的Ｃ．ｐ．，具有敏感性高且特异性强的特点，有希望成为隐孢子虫病诊断和流行病学调查的有力手段。 展开更多
关键词 微小隐孢子虫 聚合酶链反应 粪便 检测
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微小隐孢子虫CP15/60-DNA滴鼻免疫小鼠诱导的粘膜与系统免疫反应 被引量：6
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作者 何宏轩 张西臣 +2 位作者 尹继刚 李建华 杨举 《中国农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期112-116,共5页
为了观察微小隐孢子虫表面蛋白基因的重组质粒 pc DNA3- 15 /6 0诱导机体产生的免疫应答情况 ,用重组质粒经鼻粘膜接种 BAL B/c小鼠 ,采用淋巴细胞转化实验、流式细胞仪、EL ISA和免疫组化染色法检测了其诱导的系统和粘膜免疫反应 ,并... 为了观察微小隐孢子虫表面蛋白基因的重组质粒 pc DNA3- 15 /6 0诱导机体产生的免疫应答情况 ,用重组质粒经鼻粘膜接种 BAL B/c小鼠 ,采用淋巴细胞转化实验、流式细胞仪、EL ISA和免疫组化染色法检测了其诱导的系统和粘膜免疫反应 ,并在免疫后经口接种微小隐孢子虫卵囊。结果为免疫小鼠淋巴细胞增殖反应二免后 SI均大于 2 (P<0 .0 1) ;免疫后 ,CD+ 4 T细胞增加了 (32 .4 2± 2 .19) % (P>0 .5 ) ,CD+ 8T细胞增加了(2 6 .73± 3.33) % (P<0 .5 ) ;小肠粘膜 Ig A分泌型浆细胞数增加了 94 .3± 6 .3;血清中 Ig G和小肠液中 Ig A滴度分别提高了 0 .6 8± 0 .0 6和 0 .77± 0 .0 5 (P<0 .0 1) ;实验组小鼠排出卵囊减少了 2 .2倍 ,排卵时间缩短了4 .5 d(P<0 .5 )。研究表明重组质粒诱导机体产生多种免疫反应 。 展开更多
关键词 微小隐孢子虫 CP15/60-DNA 滴鼻免疫 小鼠 诱导 系统免疫反应 粘膜免疫 核酸疫苗
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福建省人体肠道原虫病调查分析 被引量：9
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作者 陈宝建 谢汉国 +5 位作者 张榕燕 李燕榕 林陈鑫 谢贤良 江典伟 张山鹰 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期542-545,549,共5页
目的了解福建省人体肠道原虫病流行现状。方法按全国统一调查方案,以分层整群随机抽样方法,抽取15个调查县(市、区),每个县(市、区)调查5个点,每个调查点调查人数不少于250人。每份标本采用卢戈氏碘液涂片法与生理盐水直接涂片法检查肠... 目的了解福建省人体肠道原虫病流行现状。方法按全国统一调查方案,以分层整群随机抽样方法,抽取15个调查县(市、区),每个县(市、区)调查5个点,每个调查点调查人数不少于250人。每份标本采用卢戈氏碘液涂片法与生理盐水直接涂片法检查肠道原虫包囊或滋养体。结果共调查15县(市、区)75个点(村)10 652人,阳性者222人,各种肠道原虫总感染率为2.08%。检出6种肠道原虫,即人芽囊原虫、微小内蜒阿米巴、结肠内阿米巴、哈门氏内阿米巴、波列基内阿米巴及蓝氏贾第鞭毛虫,其感染率分别为0.79%、0.58%、0.41%、0.18%、0.09%与0.02%。男性感染率为0.84%,女性为1.25%,女性高于男性(χ^(2)=8.8126,P<0.05)。感染者最大年龄86岁,最小3岁,以高年龄组(56岁以上)为主,占38.3%。感染者分布于多种职业,其中农民占77.9%,其次为学生占14.4%。调查地区感染率以平潭为最高7.04%,其次为漳浦4.62%与周宁3.92%。浙闽山地丘陵生态功能区感染率为1.52%(83/5469),滇桂粤中部闽南山地丘陵生态功能区为2.68%(139/5183),两者差异具有统计学意义(χ^(2)=17.674,P<0.01)。结论本次调查的人群原虫总感染率大幅降低,感染虫种明显减少,并以人芽囊原虫为常见的肠道原虫,应列为今后防制重点。 展开更多
关键词 肠道原虫 调查研究 感染率 福建
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环介导等温扩增技术检测恶性疟原虫的研究 被引量：12
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作者 杨秋林 许丽芳 +2 位作者 沈元琼 王可耕 张愉快 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1045-1046,共2页
目的环介导等温扩增(LAMP)技术检测恶性疟原虫。方法酚氯仿法提取恶性疟原虫基因组DNA,设计四条扩增恶性疟原虫环子孢子蛋白基因的LAMP引物,以间日疟原虫、弓形虫、卡氏肺孢子虫、人全血DNA为对照,进行LAMP反应。LAMP产物经显色、电泳... 目的环介导等温扩增(LAMP)技术检测恶性疟原虫。方法酚氯仿法提取恶性疟原虫基因组DNA,设计四条扩增恶性疟原虫环子孢子蛋白基因的LAMP引物,以间日疟原虫、弓形虫、卡氏肺孢子虫、人全血DNA为对照,进行LAMP反应。LAMP产物经显色、电泳鉴定。将原虫血症为1.5%的恶性疟原虫血样用正常人血按1∶10倍比稀释为1.5×10-3、1.5×10-4、1.5×10-5、1.5×10-6、1.5×10-7、1.5×10-86个浓度后进行LAMP,检测其敏感性。结果恶性疟原虫检测管经显色后呈绿色(阳性),对照组均呈棕色(阴性)。恶性疟原虫LAMP产物经电泳后呈LAMP特征性梯状条带,对照组均无扩增产物。LAMP可检测恶性疟原虫的敏感度为1.5个疟原虫/107RBC。结论检测恶性疟原虫的LAMP方法特异、敏感及简便。 展开更多
关键词 恶性疟原虫 环介导等温扩增法 酚氯仿法
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大鼠肺孢子虫肺炎动物模型的实验研究 被引量：9
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作者 周永华 高琪 +6 位作者 胡玉红 周华云 许永良 华海涌 曹慧 张燕 黄伊 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 2006年第5期374-377,共4页
目的建立肺孢子虫肺炎(PCP)的大鼠实验动物模型。方法将34只雌性清洁级SD大鼠随机分成实验组和对照组,每组17只。实验组采取每周2次每次每只皮下注射地塞米松1mg诱导的方法建立PCP动物模型;对照组则注射与地塞米松等体积的灭菌生理盐水... 目的建立肺孢子虫肺炎(PCP)的大鼠实验动物模型。方法将34只雌性清洁级SD大鼠随机分成实验组和对照组,每组17只。实验组采取每周2次每次每只皮下注射地塞米松1mg诱导的方法建立PCP动物模型;对照组则注射与地塞米松等体积的灭菌生理盐水。所有大鼠的饮水中加入1g/L盐酸四环素预防继发性细菌感染。12周后解剖全部大鼠,并分别制作肺组织印片,姬氏染色,检查肺孢子虫包囊。同时制作肺组织病理切片,HE染色,观察肺组织的病理学变化。结果用地塞米松诱导大鼠5周,肺组织印片均查见肺孢子虫包囊,肺组织也出现典型的病理学改变。连续诱导12周,均未见实验鼠死亡。实验组大鼠体重下降明显,与对照组比较,差异有非常显著性(P<0.01)。结论应用皮下注射地塞米松免疫抑制诱导的方法可成功建立PCP的大鼠动物模型。 展开更多
关键词 肺孢子虫 肺孢子虫肺炎 动物模型 大鼠
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