结核分枝杆菌耐吡嗪酰胺分子机制研究 被引量：12

1

作者 姜英 彭俊平 +3 位作者 杨帆 余黎 王玉琳 金奇 《微生物学免疫学进展》 2007年第1期5-9,共5页

吡嗪酰胺(PZA)是结核病短程化疗中的一线抗结核药物,由吡嗪酰胺酶转换成为活性形式吡嗪酸而生效。吡嗪酰胺酶由pncA基因编码,pncA基因突变会导致该酶活性丧失,与PZA耐药性产生有关。为了进一步明确PZA耐药性产生的基因学基础和PZA耐药株... 吡嗪酰胺(PZA)是结核病短程化疗中的一线抗结核药物,由吡嗪酰胺酶转换成为活性形式吡嗪酸而生效。吡嗪酰胺酶由pncA基因编码,pncA基因突变会导致该酶活性丧失,与PZA耐药性产生有关。为了进一步明确PZA耐药性产生的基因学基础和PZA耐药株的pncA基因突变率,对中国100株结核分枝杆菌临床分离株进行了DNA序列测定,其中85株为PZA耐药株,15株为PZA敏感株。PZA耐药株有27%(23/85)发生了pncA基因突变,从而导致吡嗪酰胺酶基本氨基酸序列的改变,突变分布在pncA基因开读框架17-546位的核苷酸。其中有一株突变位于pncA基因的调节区域-11位处。同时发现20%(3/15)pncA敏感株也发生了pncA基因突变。敏感株发生突变可能是由于PZA敏感性实验不准确或存在其它耐药机制。实验表明,pncA基因突变是PZA耐药的主要机制之一,中国PZA耐药临床分离株尚存在其它耐药分子机制。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 吡嗪酰胺 耐药 DNA序列分析

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《武威医简》68、86甲乙及唐以前麻风病用药特点讨论 被引量：3

2

作者 段祯 王亚丽 《中国中医基础医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1687-1688,共2页

《武威汉代医简》简68所载内容及其与牍86甲、乙的关系,学界鲜有讨论。故结合云梦睡虎地秦简《封诊式》、张家山汉简《脉书》以及《黄帝内经》(以下简称《内经》)等传世文献的相关论述对上述诸简进行了研究,认为简68与牍86甲、乙皆与麻... 《武威汉代医简》简68所载内容及其与牍86甲、乙的关系,学界鲜有讨论。故结合云梦睡虎地秦简《封诊式》、张家山汉简《脉书》以及《黄帝内经》(以下简称《内经》)等传世文献的相关论述对上述诸简进行了研究,认为简68与牍86甲、乙皆与麻风病的诊治有关。并就简68的内容与牍86甲、乙所载之"恶病大风方",结合《周礼》《本草图经》《备急千金要方》等传世文献对唐以前治疗麻风病的用药特点进行探讨,发现自两汉以迄隋唐运用以石药为主的方剂攻治麻风病是医界通例,为进一步研究《武威汉代医简》和运用古代麻风病的诊治提供了资料借鉴。 展开更多

关键词 疠 大风 恶疾 恶病、麻风 石药

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麻风病流行区水、土壤中麻风杆菌的检测初步报告 被引量：5

3

作者 邢燕 刘建 +1 位作者 温艳 翁小满 《中国麻风皮肤病杂志》 2009年第1期4-6,共3页

目的：检测云南省丘北县水、土壤中是否存在麻风杆菌，探究水、土壤是否充当麻风杆菌病原库。方法：从麻风病不同流行程度的村庄采集水、土壤，从中分离出微生物、提取DNA；Nested—PCR扩增后直接测序，用基本局域线性搜索工具（BLAST）... 目的：检测云南省丘北县水、土壤中是否存在麻风杆菌，探究水、土壤是否充当麻风杆菌病原库。方法：从麻风病不同流行程度的村庄采集水、土壤，从中分离出微生物、提取DNA；Nested—PCR扩增后直接测序，用基本局域线性搜索工具（BLAST）与NCBIGenBank中的标准序列进行比较，以确认PCR产物是否为麻风杆菌。结果：从36个采样点采集的59份水样中，有29份PCR阳性，其中18份标本测序后能确认为麻风杆菌。从7个采样点采集的11份土样中有7份PCR阳性，其中3份标本测序后能确认为麻风杆菌。结论：麻风病流行村庄水、土壤中存在的麻风杆菌可能是麻风病的传染源。 展开更多

关键词 麻风杆菌 PCR 水 土壤

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几种检测麻风菌的基因扩增试验的比较研究 被引量：1

4

作者 吴勤学 李新宇 +1 位作者 李涛 侯伟 《中国麻风杂志》 北大核心 1996年第3期164-167,共4页

对检测麻风菌用的几种PCR方法进行了比较研究。这些PCR以编码麻风菌65KD、36KD、18KD、groEL和16S rRNA的基因为基础。比较用的指标是敏感性、特异性、简易快速和节省试剂,结果显示以编码麻风菌65KD抗原的基因为基础的PCR(此法原为Wood... 对检测麻风菌用的几种PCR方法进行了比较研究。这些PCR以编码麻风菌65KD、36KD、18KD、groEL和16S rRNA的基因为基础。比较用的指标是敏感性、特异性、简易快速和节省试剂,结果显示以编码麻风菌65KD抗原的基因为基础的PCR(此法原为Woods报告,后经我们优化改良)为最实用,其检测下限为10～100条麻风菌,与其它已知的分枝菌无交叉反应,用单对引物,仅需30个循环,以2.5～3个小时就能完成实验,且用料仅为其它常用反应体系的1/2,敏感性高、特异性强,简单、快速、价廉,故适于推广应用。 展开更多

关键词 PCR 麻风菌 基因扩增试验

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高效麻风菌基因组DNA库的建立及评价 被引量：1

5

作者 尹跃平 吴勤学 +2 位作者 侯伟 铃木定彦 牧野正直 《中国麻风杂志》 北大核心 1998年第2期76-78,共3页

以构建的噬菌体λｇｔｌｌ为载体，插入平均长度为４ｋｂ的麻风菌ＤＮＡ片段，建立了ＭＬ基因组ＤＮＡ库。重组效率检测表明，阳性重组噬菌体颗粒浓度为６×１０＾４ｐｆｕｍｌ（噬斑形成单位／ｍｌ），且扩增为２．６×１０＾... 以构建的噬菌体λｇｔｌｌ为载体，插入平均长度为４ｋｂ的麻风菌ＤＮＡ片段，建立了ＭＬ基因组ＤＮＡ库。重组效率检测表明，阳性重组噬菌体颗粒浓度为６×１０＾４ｐｆｕｍｌ（噬斑形成单位／ｍｌ），且扩增为２．６×１０＾８ｐｆｕ／ｍｌ建立了高重效率和高浓度的ＭＬ ＤＮＡ重组噬菌体颗粒悬液，成为ＭＬ基因组ＤＮＡ库的永久来源。 展开更多

关键词 麻风菌 DNA库 ML基因

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2种染色方法查找痰中结核杆菌的比较 被引量：3

6

作者 曾希鹏 张小芬 陈烨 《中国卫生检验杂志》 北大核心 2014年第23期3402-3404,共3页

目的评价发光二极管荧光染色法(简称LED法)与萋-尼氏抗酸染色法(简称Z-N法)查找痰中结核杆菌的差异。方法对1 168份痰标本分别进行萋-尼氏抗酸染色和荧光染色检测,比较2种方法检查结核杆菌的阳性检出率、读片时间、褪色速度等方面的差... 目的评价发光二极管荧光染色法(简称LED法)与萋-尼氏抗酸染色法(简称Z-N法)查找痰中结核杆菌的差异。方法对1 168份痰标本分别进行萋-尼氏抗酸染色和荧光染色检测,比较2种方法检查结核杆菌的阳性检出率、读片时间、褪色速度等方面的差异。结果 LED法检测结果与Z-N法检测结果的符合率为99.1%,二者差异无统计学意义(P>0.05),另有11份用Z-N法染色检测为阴性的标本其荧光染色检测为阳性,表明荧光染色检测方法具有更高的灵敏度,LED法的读片时间明显短于Z-N法。结论 LED法具有读片时间短、灵敏度较高、操作步骤简单等特点,在基层痰检室对肺结核患者的发现具有一定优势,适合在临床推广。 展开更多

关键词 结核杆菌 荧光染色法 痰涂片 萋-尼氏抗酸染色法

原文传递

麻风杆菌α2抗原基因的克隆及表达研究

7

作者 尹跃平 铃木定彦 +1 位作者 牧野正直 吴勤学 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第1期62-68,共7页

目的用现代分子生物学技术即基因工程手段制备麻风杆菌抗原。方法用原位斑点杂交法筛选阳性克隆，并对其中一株约３０００ｂｐ的ＤＮＡ片段进行酶谱和ＤＮＡ序列分析。结果从本实验组制备的麻风杆菌基因文库中筛选出２株含α２抗原的基... 目的用现代分子生物学技术即基因工程手段制备麻风杆菌抗原。方法用原位斑点杂交法筛选阳性克隆，并对其中一株约３０００ｂｐ的ＤＮＡ片段进行酶谱和ＤＮＡ序列分析。结果从本实验组制备的麻风杆菌基因文库中筛选出２株含α２抗原的基因片段，并建立了α２抗原基因在大肠杆菌中的表达体系，在ＸＬＩ－Ｂｌｕｅ菌株中大量表达出易于提纯的α２重组融合蛋白抗原，经麦芽糖亲和色谱柱提纯后，每２００ｍｌ转化宿主菌培养液可获得１０ｍｇ重组融合蛋白。结论α２重组融合蛋白抗原的制备对于探讨麻风病的发病机制、建立麻风病和其它抗酸杆菌疾病（如结核病等）的高度特异性血清学诊断方法都有意义。 展开更多

关键词 麻风杆菌 α2抗原 基因克隆 重组抗原

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免疫印迹实验及麻风菌抗原血清学活性的初步研究

8

作者 吴勤学 魏万惠 +2 位作者 李新宇 候伟 叶干运 《中国麻风杂志》 北大核心 1996年第3期172-174,共3页

初步分析了自己建立的聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)与免疫印迹试验(WB)及其应用于麻风菌(ML)和有关分支菌(AFB)抗原分析的结果,表明受试各菌都有自己独特的SDS—PAGE谱和WB反应谱。ML的WB反应带与有关报导大多相符,虽未能显示28KD,但... 初步分析了自己建立的聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)与免疫印迹试验(WB)及其应用于麻风菌(ML)和有关分支菌(AFB)抗原分析的结果,表明受试各菌都有自己独特的SDS—PAGE谱和WB反应谱。ML的WB反应带与有关报导大多相符,虽未能显示28KD,但发现ML有新的55KD反应带。作者认为,这些结果及特性可用于菌株鉴别和筛选血清试验用的吸收剂,对分析和寻找用于血清试验和疫苗的抗原及分离提纯这些抗原有相当的潜力。作者对实验方法及应用技巧作了详细描述,分析麻风菌(ML)抗原及其免疫活性对了解ML的抗原组成,探索麻风诊断、分型乃至发病机理都有重要意义。对此,国外已有些报道,但国内尚未见。 展开更多

关键词 麻风菌 免疫印迹实验 SDDS-PAGE

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麻风菌α抗原基因不同表位DNA段的制备及表达

9

作者 尹跃平 吴勤学 +2 位作者 候伟 铃木定彦 牧野正直 《中国麻风杂志》 北大核心 1998年第3期139-142,共4页

为筛选麻风菌α抗原基因的特异表位,通过限制性内切酶消化法及多引物 PCR 法制备出麻风菌“抗原基因不同表位的 DNA 片段,并对以消化法得到的 DNA 片段进行了初步表达,为确定麻风菌α抗原基因的特异表位奠定了基础。

关键词 麻风菌α抗原 特异表位 制备 表达

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麻风杆菌生化代谢研究的进展

10

作者 吴勤学 叶干运 《国外医学（皮肤性病学分册）》 北大核心 1989年第3期148-153,共6页

麻风杆菌(ML)虽是1873年就被发现的第一种人类致病的病原菌,但直至今天仍是微生物学家之谜。不但体外培养试验收效甚微,而且与其他微生物相比分子生物学方面的进展也非常有限。回顾二十年来ML 生化代谢的研究,尽管进展缓慢,但确有肯定... 麻风杆菌(ML)虽是1873年就被发现的第一种人类致病的病原菌,但直至今天仍是微生物学家之谜。不但体外培养试验收效甚微,而且与其他微生物相比分子生物学方面的进展也非常有限。回顾二十年来ML 生化代谢的研究,尽管进展缓慢,但确有肯定的进展,而这些进展对当今麻风防治研究有较大的理论和实践意义,现将有关方面的资料作一整理,以供参考。一、ML 代谢研究的主要障碍和研究方法(一)ML 代谢研究的主要障碍:由于ML 体外培养尚未获得成功。 展开更多

关键词 麻风杆菌 生化代谢 酶

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组织样麻风瘤1例

11

作者 刘振锋 廖文俊 《中国麻风皮肤病杂志》 2006年第6期512-512,共1页

关键词 组织样麻风瘤 界线类偏瘤型麻风 麻风杆菌 传染病 接触性 麻风病

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麻风菌活性检测用于药物疗效观察的研究进展

12

作者 温艳 《热带医学杂志》 CAS 2007年第12期1236-1238,共3页

自从20世纪40年代开始用化学药物治疗麻风病以来,药物疗效评估、细菌活性监测等研究一直是人们非常关注的焦点。由于麻风菌不能体外培养,尽管方法很多,但始终没有一个简便且适用于现场的可靠方法。随着分子生物学技术的发展,在麻风菌活... 自从20世纪40年代开始用化学药物治疗麻风病以来,药物疗效评估、细菌活性监测等研究一直是人们非常关注的焦点。由于麻风菌不能体外培养,尽管方法很多,但始终没有一个简便且适用于现场的可靠方法。随着分子生物学技术的发展,在麻风菌活性检测方法上又有了新的突破。本文就该方面的各种检测方法的历史和发展进行简要综述。 展开更多

关键词 麻风菌 药物疗效 细菌活性检测

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结核分枝杆菌早期分泌蛋白MPT64的原核表达及其在结核病血清学诊断上的初步应用 被引量：13

13

作者 屈蓉 吴康 +2 位作者 吴娟 范小勇 吕建新 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期566-570,共5页

目的原核表达、纯化结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)早期分泌蛋白MPT64,并初步评估其在结核病(tuberculosis,TB)血清学诊断中的价值。方法PCR扩增Mtb标准菌株H37Rv mpt64基因,克隆至原核表达载体pET28a(+),构建重组质粒pE... 目的原核表达、纯化结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)早期分泌蛋白MPT64,并初步评估其在结核病(tuberculosis,TB)血清学诊断中的价值。方法PCR扩增Mtb标准菌株H37Rv mpt64基因,克隆至原核表达载体pET28a(+),构建重组质粒pET28a-mpt64,转化大肠埃希菌BL21(DE3)后,进行重组蛋白的原核诱导表达及纯化。将600μg纯化的MPT64蛋白经皮下多点免疫新西兰大白兔,隔周免疫1次,共4次,末次免疫2周后,耳缘静脉采血分离血清,ELISA法检测血清效价,Western blot法鉴定抗原特异性。收集44例TB确诊患者(TB组)和36名健康对照人群[HC(healthy control)组]血清,间接ELISA法检测血清中MPT64抗原的特异性IgG、IgA抗体水平,抗原对照为Gro ES和Ag85A。结果重组表达质粒pET28a-mpt64经双酶切鉴定及测序证明构建正确;表达的重组MPT64蛋白主要以包涵体形式存在,部分以可溶性形式存在,经Ni2+-NTA亲和纯化后,纯度可达90%,蛋白浓度约2.0 mg/m L;MPT64兔多克隆抗血清效价达1∶2048000,纯化的MPT64蛋白可与其发生反应,在相对分子质量约24000处可见特异性蛋白条带;TB组血清中MPT64抗原特异性IgG和IgA水平均显著高于HC组(P<0.05),而Gro ES、Ag85A抗原特异性IgA和IgG水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论重组MPT64蛋白具有较好的血清学诊断效能,可作为TB血清学早期诊断的候选抗原之一。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 MPT64 免疫学诊断 血清学诊断

原文传递

麻风杆菌分子生物学研究的进展

14

作者 吴勤学 《国外医学（皮肤性病学分册）》 北大核心 1994年第4期195-199,共5页

本文系统复习了用分子生物学方法在研究麻风杆菌组成、生长、代谢、耐药、检测及其有关抗原成分的分析和DNA重组后表达物质的生物活性等方面的最新进展,同时对存在的问题及未来的远景作了分析和展望。

关键词 麻风杆菌 分子生物学

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结核分枝杆菌阳性检出方法分析

15

作者 胡正义 汪领 《医药论坛杂志》 2006年第3期40-40,共1页

关键词 一痰一片 一痰三片 结核漏检率

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麻风菌16s rRNA基因扩增试验的建立 被引量：1

16

作者 候伟 吴勤学 +4 位作者 李新宇 尹跃平 张津平 蔡秀玲 叶干运 《中国麻风杂志》 北大核心 1997年第2期70-72,共3页

以编码麻风菌（ＭＬ）１６ｓｒＲＮＡ种特异性片段的基因为扩增靶，建立了检测麻风的基因扩增试验。本法特异性高，可重复性好。

关键词 麻风菌 PCR 麻风 16srRNA 基因扩增试验

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结核分枝杆菌Rv3873抗原的同源表达及其在结核病血清学诊断中的应用 被引量：1

17

作者 顾雯菲 吴娟 +1 位作者 胡志东 范小勇 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期1069-1075,共7页

目的在耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis,Msm)中克隆并表达结核分枝杆菌(M.tuberculosis,Mtb)RD1区蛋白Rv3873,并评价其在结核病(tuberculosis,TB)血清学诊断中的价值。方法以Mtb H37Rv标准株全基因组DNA为模板,扩增得到rv3873基... 目的在耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis,Msm)中克隆并表达结核分枝杆菌(M.tuberculosis,Mtb)RD1区蛋白Rv3873,并评价其在结核病(tuberculosis,TB)血清学诊断中的价值。方法以Mtb H37Rv标准株全基因组DNA为模板,扩增得到rv3873基因完整序列,克隆至分枝杆菌表达载体pMF406,构建重组质粒pMF406-rv3873,电转化至Msm mc2155,加入乙酰胺诱导表达Rv3873同源重组蛋白(mRv3873),利用亲和层析进行纯化,Western blot分析抗原特异性;ELISA法检测27份TB患者和31份健康者血清IgG抗体,以大肠埃希菌表达的Rv3873(r Rv3873)和免疫优势抗原Ag85A作为对照抗原,评价mRv3873在TB血清学诊断中的作用。结果在Msm中成功表达了重组Mtb蛋白mRv3873,主要以可溶形式存在,经Ni2+亲和层析柱纯化可获得高纯度(95%)的可溶性重组蛋白,蛋白浓度约为2.0 mg/mL;TB患者组血清中抗mRv3873和Ag85A抗原特异性IgG水平均显著高于健康组(P<0.05),而两组血清r Rv3873特异性IgG水平差异无统计学意义(P>0.05);mRv3873抗原与对照抗原Ag85A的诊断效能相当,ROC曲线下面积分别为0.7760和0.7784,显著高于异源表达抗原r Rv3873的曲线下面积(0.5866)。结论在快速生长分枝杆菌Msm中可高水平表达并纯化Mtb RD1区抗原Rv3873,较之异源表达抗原,TB患者产生针对mRv3873的IgG水平显著高于健康人群,分枝杆菌同源表达的mRv3873具有作为TB血清诊断的潜力。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 RD1区抗原 同源表达 结核病 血清学诊断

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以编码麻风菌65KD蛋白的基因为基础的基因扩增试验的建立

18

作者 李涛 吴勤学 《中国麻风杂志》 北大核心 1995年第1期12-14,共3页

以编码麻风菌(ML)65KD抗原基因的末端重复顺序为扩增靶,建立了检测麻风菌的基因扩增试验,敏感性可达20条菌/μ1,对13株标准分支菌扩增的结果表明特异性也很强。

关键词 麻风菌 多聚酶链反应 65KD 基因

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酶联免疫吸附实验检测麻疹IgM抗体实验室工作体会

19

作者 曹琦 刘健 《疾病预防控制通报》 2011年第6期70-71,共2页

目的探讨麻疹IgM抗体检测过程中的影响因素,在消灭麻疹病毒方面进行有效积极的监测工作,对疑似、确诊的麻疹病例开展准确、及时的疾病监测。方法对疑似、确诊的麻疹病例进行血液采集,分离血清,使用酶联免疫吸附法进行麻疹IgM抗体检测。... 目的探讨麻疹IgM抗体检测过程中的影响因素,在消灭麻疹病毒方面进行有效积极的监测工作,对疑似、确诊的麻疹病例开展准确、及时的疾病监测。方法对疑似、确诊的麻疹病例进行血液采集,分离血清,使用酶联免疫吸附法进行麻疹IgM抗体检测。结果酶联免疫吸附实验中,从试剂盒的选择开始直至最后的结果观察,都存在主观或客观的影响。结论定期使用质控血清,进行实验室内部质量控制,通过制作质控图以及不断地进行人员培训,能有效地避免一些客观因素的影响。 展开更多

关键词 酶联免疫吸附试验(ELISA) 麻疹 IGM抗体 影响因素

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麻风菌热休克蛋白研究的现状

20

作者 夏理评 《中国麻风杂志》 北大核心 1993年第1期60-62,共3页

二十多年前人们便观察到细胞对环境温度升高所产生的热休克反应,即产生热休克蛋白(Heat Shock Proteins,HSP)。几乎所有有机体,从大肠菌到人的组织细胞,受热休克后均产生热休克蛋白。后发现HSP不仅产生于热应激,在葡萄糖缺乏、感染、缺... 二十多年前人们便观察到细胞对环境温度升高所产生的热休克反应,即产生热休克蛋白(Heat Shock Proteins,HSP)。几乎所有有机体,从大肠菌到人的组织细胞,受热休克后均产生热休克蛋白。后发现HSP不仅产生于热应激,在葡萄糖缺乏、感染、缺氧时也可产生,所以应称为应激蛋白(Stress Proteins)。 展开更多

关键词 麻风杆菌 热休克蛋白

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