目的了解云南省手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)的病原构成及柯萨奇病毒A2型(coxsackievirus A2,CVA2)的VP1基因特征。方法选取2023年云南省手足口病病例标本中经实时荧光逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)鉴定为肠道病毒阳性的...目的了解云南省手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)的病原构成及柯萨奇病毒A2型(coxsackievirus A2,CVA2)的VP1基因特征。方法选取2023年云南省手足口病病例标本中经实时荧光逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)鉴定为肠道病毒阳性的标本进行病毒分离培养。通过RT-PCR对分离株肠道病毒结构蛋白VP4/VP2结合区和VP1区进行扩增并测序,并对其中7株CVA2毒株进行基因序列比较与进化分析。结果1488份粪便样本中共分离获得184株毒株,总分离率为12.71%(184/1448),其中A组肠道病毒占94.02%(173/184),涵盖6个血清型;B组肠道病毒占3.80%(7/184),涉及4个血清型;C组病毒4株占2.17%。基于完整的VP1序列系统进化分析显示:CVA2病毒可分为4个基因型(A~D),本研究分离的7株CVA2均属于基因型D分支2。序列分析显示,本研究7株CVA2分离株间VP1区核苷酸和氨基酸相似性分别为93.23%~99.89%和99.30%~100.00%。结论2023年云南省HFMD病原呈现多样性,以A组肠道病毒为主。2023年云南省HFMD病例分离的CVA2主要是基因型D。未来需进一步加强对肠道病毒的实验室监测及分子流行病学分析,为手足口病防控提供依据。展开更多
本研究对2008～2009年青岛地区手足口病的病原学进行调查研究。首先对HFMD病例的咽拭子标本直接进行病毒核酸的提取,然后采用多重荧光逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法对总肠道病毒(Enterovirus,EV)、肠道病毒71型(Enterovirus Type 71,...本研究对2008～2009年青岛地区手足口病的病原学进行调查研究。首先对HFMD病例的咽拭子标本直接进行病毒核酸的提取,然后采用多重荧光逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法对总肠道病毒(Enterovirus,EV)、肠道病毒71型(Enterovirus Type 71,EV71)和柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus Group A 16,CVA16)进行检测,对EV阳性而EV71和CVA16均阴性的标本采用半巢式反转录PCR进行肠道病毒VP1基因部分序列的扩增和序列分析以鉴定其血清型别。结果提示2008～2009年青岛地区手足口病的主要病原为EV71和CVA16,无论轻症和重症病例,EV71的比例都大于CVA16。2008年共获得5个(8株)其它血清型,分别是柯萨奇病毒(Cox-sackievirus,CV)的A5、A6、A10、A12及埃可病毒9(Echovirus 9,E9),血清型分布比较分散、均匀。2009年共获得3个其它血清型(13株),分别是CVA9、CVA12及CVB2,CVA12所占比例较大(11/13),分布比较集中。CVA12成为2009年青岛地区HFMD病原中除EV71和CVA16外,新的较为流行的病原。展开更多
目的原核表达柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus group A type 16,CA16)VP1蛋白,并检测其免疫原性。方法通过RT-PCR法从CA16病毒青岛株中扩增VP1基因,克隆至原核表达载体pET43.1a(+)中,构建重组表达质粒pET43.1a-VP1,转化感受态E.coli R...目的原核表达柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus group A type 16,CA16)VP1蛋白,并检测其免疫原性。方法通过RT-PCR法从CA16病毒青岛株中扩增VP1基因,克隆至原核表达载体pET43.1a(+)中,构建重组表达质粒pET43.1a-VP1,转化感受态E.coli Rossatte(DE3),IPTG诱导表达。表达的重组CA16 VP1蛋白通过Ni柱亲和层析纯化后,采用不同剂量(5、10、20、40μg)免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测血清中特异性IgG、IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3抗体效价,微量细胞病变抑制法检测血清中和抗体效价。结果重组表达质粒pET43.1a-VP1经双酶切及测序证实构建正确;表达的重组CA16 VP1蛋白相对分子质量约为34 000,主要以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的15%;纯化的重组CA16 VP1蛋白纯度可达95%以上,可与猴CA16抗血清反应;不同剂量的重组CA16 VP1蛋白免疫BALB/c小鼠,可诱导产生CA16特异性抗体,血清中总IgG、IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3抗体效价均明显高于对照组,且抗体效价与免疫剂量存在一定的量效关系;各剂量CA16 VP1组免疫小鼠血清中和抗体效价均小于1∶8。结论已成功在大肠杆菌中表达了重组CA16 VP1蛋白,纯化的重组蛋白可诱导小鼠特异性体液免疫应答,为进一步研究CA16的结构、功能及相关疫苗的研制奠定了基础。展开更多
文摘目的了解云南省手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)的病原构成及柯萨奇病毒A2型(coxsackievirus A2,CVA2)的VP1基因特征。方法选取2023年云南省手足口病病例标本中经实时荧光逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)鉴定为肠道病毒阳性的标本进行病毒分离培养。通过RT-PCR对分离株肠道病毒结构蛋白VP4/VP2结合区和VP1区进行扩增并测序,并对其中7株CVA2毒株进行基因序列比较与进化分析。结果1488份粪便样本中共分离获得184株毒株,总分离率为12.71%(184/1448),其中A组肠道病毒占94.02%(173/184),涵盖6个血清型;B组肠道病毒占3.80%(7/184),涉及4个血清型;C组病毒4株占2.17%。基于完整的VP1序列系统进化分析显示:CVA2病毒可分为4个基因型(A~D),本研究分离的7株CVA2均属于基因型D分支2。序列分析显示,本研究7株CVA2分离株间VP1区核苷酸和氨基酸相似性分别为93.23%~99.89%和99.30%~100.00%。结论2023年云南省HFMD病原呈现多样性,以A组肠道病毒为主。2023年云南省HFMD病例分离的CVA2主要是基因型D。未来需进一步加强对肠道病毒的实验室监测及分子流行病学分析,为手足口病防控提供依据。
文摘本研究对2008～2009年青岛地区手足口病的病原学进行调查研究。首先对HFMD病例的咽拭子标本直接进行病毒核酸的提取,然后采用多重荧光逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法对总肠道病毒(Enterovirus,EV)、肠道病毒71型(Enterovirus Type 71,EV71)和柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus Group A 16,CVA16)进行检测,对EV阳性而EV71和CVA16均阴性的标本采用半巢式反转录PCR进行肠道病毒VP1基因部分序列的扩增和序列分析以鉴定其血清型别。结果提示2008～2009年青岛地区手足口病的主要病原为EV71和CVA16,无论轻症和重症病例,EV71的比例都大于CVA16。2008年共获得5个(8株)其它血清型,分别是柯萨奇病毒(Cox-sackievirus,CV)的A5、A6、A10、A12及埃可病毒9(Echovirus 9,E9),血清型分布比较分散、均匀。2009年共获得3个其它血清型(13株),分别是CVA9、CVA12及CVB2,CVA12所占比例较大(11/13),分布比较集中。CVA12成为2009年青岛地区HFMD病原中除EV71和CVA16外,新的较为流行的病原。
文摘目的原核表达柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus group A type 16,CA16)VP1蛋白,并检测其免疫原性。方法通过RT-PCR法从CA16病毒青岛株中扩增VP1基因,克隆至原核表达载体pET43.1a(+)中,构建重组表达质粒pET43.1a-VP1,转化感受态E.coli Rossatte(DE3),IPTG诱导表达。表达的重组CA16 VP1蛋白通过Ni柱亲和层析纯化后,采用不同剂量(5、10、20、40μg)免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测血清中特异性IgG、IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3抗体效价,微量细胞病变抑制法检测血清中和抗体效价。结果重组表达质粒pET43.1a-VP1经双酶切及测序证实构建正确;表达的重组CA16 VP1蛋白相对分子质量约为34 000,主要以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的15%;纯化的重组CA16 VP1蛋白纯度可达95%以上,可与猴CA16抗血清反应;不同剂量的重组CA16 VP1蛋白免疫BALB/c小鼠,可诱导产生CA16特异性抗体,血清中总IgG、IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3抗体效价均明显高于对照组,且抗体效价与免疫剂量存在一定的量效关系;各剂量CA16 VP1组免疫小鼠血清中和抗体效价均小于1∶8。结论已成功在大肠杆菌中表达了重组CA16 VP1蛋白,纯化的重组蛋白可诱导小鼠特异性体液免疫应答,为进一步研究CA16的结构、功能及相关疫苗的研制奠定了基础。
