大黄素抑制HL-60/ADR耐药细胞增殖和诱导凋亡的作用 被引量：16

1

作者 陈英玉 郑合勇 +4 位作者 胡建达 郑志宏 郑静 连晓岚 吕联煌 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2007年第5期955-960,共6页

本研究探讨中药大黄素(emodin)对人白血病耐药细胞株HL-60/ADR的增殖、凋亡影响及其相应的可能作用机制。采用MTT法绘制细胞生长曲线;集落培养法观察大黄素对HL-60/ADR克隆形成的影响;细胞周期分析、线粒体跨膜电位检测、Caspase-3酶活... 本研究探讨中药大黄素(emodin)对人白血病耐药细胞株HL-60/ADR的增殖、凋亡影响及其相应的可能作用机制。采用MTT法绘制细胞生长曲线;集落培养法观察大黄素对HL-60/ADR克隆形成的影响;细胞周期分析、线粒体跨膜电位检测、Caspase-3酶活性检测、Annexin V FITC/PI法、TdT酶介导的原位缺口末端标记法(TUNEL)分析凋亡细胞;RT-PCR及Western blot法检测大黄素作用后不同时间段bcl-2、c-myc mRNA及Bcl-2、c-Myc、Caspase-3前体蛋白表达水平的变化。结果表明,大黄素对HL-60/ADR细胞增殖具有明显的抑制作用,呈时间和浓度依赖性。较低浓度大黄素即可抑制HL-60/ADR细胞集落形成,IC50值为5.79μmol/L。细胞周期分析显示,与对照组比较,40、80μmol/L浓度组细胞被阻滞于G0/G1期比率明显增高(p<0.01),G2/M期细胞比率降低(p<0.01),而20μmol/L浓度组细胞周期改变差异不具有显著性(p>0.05),各浓度组均检测到典型的亚二倍体峰(凋亡峰)。大黄素作用12小时HL-60/ADR细胞线粒体跨膜电位降低,Annexin V FITC/PI法检测到早期凋亡细胞,作用24小时caspase-3酶活性显著升高,作用48小时TUNEL法检测到晚期凋亡细胞,细胞凋亡率呈药物浓度依赖性。大黄素作用HL-60/ADR细胞不同时间段,bcl-2、c-myc mRNA和Bcl-2、c-Myc、Caspase-3前体蛋白表达水平均有不同程度下调,并呈时间依赖性。结论:大黄素能够有效抑制HL-60/ADR细胞增殖,并诱导其凋亡,bcl-2、c-myc表达水平下调,线粒体跨膜电位水平降低和caspase-3激活可能参与了该过程。 展开更多

关键词 大黄素 HL-60/ADR细胞 细胞增殖 细胞凋亡

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IL-29对胰蛋白酶诱导的肥大细胞PARs表达的调节作用 被引量：5

2

作者 隋丽 陈冬 +1 位作者 张慧云 何韶衡 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期609-612,622,共5页

目的:检测白细胞介素29(Interleukin-29,IL-29)对胰蛋白酶引起的肥大细胞蛋白酶激活受体(Protease activated receptor,PAR)-1,2,3,4表达的调节作用。方法:P815肥大细胞培养后,用不同浓度的IL-29、胰蛋白酶单独或联合激发肥大细胞,在不... 目的:检测白细胞介素29(Interleukin-29,IL-29)对胰蛋白酶引起的肥大细胞蛋白酶激活受体(Protease activated receptor,PAR)-1,2,3,4表达的调节作用。方法:P815肥大细胞培养后,用不同浓度的IL-29、胰蛋白酶单独或联合激发肥大细胞,在不同时间点收集激发细胞,用流式细胞术(FCM)及实时定量PCR检测P815肥大细胞蛋白酶激活受体的表达。结果:IL-29单独作用能够下调肥大细胞PAR-1蛋白及mRNA水平的表达,上调PAR-3、PAR-4 mRNA的表达,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);以IL-29预处理肥大细胞后,IL-29对胰蛋白酶诱导的肥大细胞PAR-2、PAR-3、PAR-4表达起促进作用,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:IL-29能够调节胰蛋白酶引起的肥大细胞PARs表达,从而参与肥大细胞相关的炎症反应。 展开更多

关键词 肥大细胞 白细胞介素29(IL-29) 胰蛋白酶 蛋白酶激活受体(PARs) 流式细胞术

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TNF-α对肥大细胞IL-10、IL-12分泌和组胺释放的影响 被引量：6

3

作者 张慧云 马文静 何韶衡 《海南医学院学报》 CAS 2010年第12期1533-1535,1542,共4页

目的:检测TNF-α对P815肥大细胞IL-10,IL-12分泌和组胺释放的影响。方法:P815肥大细胞培养后,用不同浓度的TNF-α单独或联合用TNF-α单克隆抗体激发肥大细胞,不同时间点收集上清,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测上清中IL-10,IL-12和组胺... 目的:检测TNF-α对P815肥大细胞IL-10,IL-12分泌和组胺释放的影响。方法:P815肥大细胞培养后,用不同浓度的TNF-α单独或联合用TNF-α单克隆抗体激发肥大细胞,不同时间点收集上清,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测上清中IL-10,IL-12和组胺水平。结果:单独作用时,TNF-α促进P815肥大细胞IL-12分泌,而对IL-10分泌和组胺释放无明显影响,TNF-α单克隆抗体的应用可以阻断TNF-α引起的肥大细胞IL-12分泌。结论:TNF-α可以通过促进肥大细胞分泌IL-12参与肥大细胞相关的炎症过程。 展开更多

关键词 肥大细胞 TNF-Α 白细胞介素(IL)-10 IL-12 组胺

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Notch信号在造血祖细胞扩增中作用的研究进展 被引量：3

4

作者 李国辉 黄斯勇 +2 位作者 康志杰 徐恒 梁英民 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2008年第5期1227-1231,共5页

造血祖细胞扩增具有十分重要的临床价值,传统的方法扩增往往导致造血祖细胞的分化。Notch受体和配体在造血系统中广泛存在,活化的Notch信号可抑制造血祖细胞的分化而促进其扩增,提示可以通过Notch信号途径实现对造血祖细胞的扩增。本文... 造血祖细胞扩增具有十分重要的临床价值,传统的方法扩增往往导致造血祖细胞的分化。Notch受体和配体在造血系统中广泛存在,活化的Notch信号可抑制造血祖细胞的分化而促进其扩增,提示可以通过Notch信号途径实现对造血祖细胞的扩增。本文就Notch信号通路、Notch信号与造血祖细胞维持、Notch信号与造血祖细胞扩增,Notch信号维持造血祖细胞未分化状况的分子机制,进行了综述。 展开更多

关键词 NOTCH信号 造血祖细胞 造血 扩增

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小乌桂颗粒剂含药血清对CIA大鼠膝关节成纤维滑膜细胞体外增殖的干预研究 被引量：4

5

作者 吴婧 朱俊卿 李娟 《热带医学杂志》 CAS 2013年第7期797-800,827,F0002,共6页

目的通过观察小乌桂颗粒剂含药血清对胶原诱导关节炎(CIA)大鼠成纤维滑膜细胞(CIA-FLS)体外增殖的影响,探讨其治疗类风湿关节炎(RA)的可能机制。方法采用鸡Ⅱ胶原建立CIA大鼠模型,运用关节炎指数评分法及病理切片炎症程度评分系统对其... 目的通过观察小乌桂颗粒剂含药血清对胶原诱导关节炎(CIA)大鼠成纤维滑膜细胞(CIA-FLS)体外增殖的影响,探讨其治疗类风湿关节炎(RA)的可能机制。方法采用鸡Ⅱ胶原建立CIA大鼠模型,运用关节炎指数评分法及病理切片炎症程度评分系统对其进行评价。组织块培养法体外分离培养CIA大鼠膝关节滑膜组织中CIA-FLS。实验分为空白对照组、甲氨蝶呤(MTX)组及高、中、低剂量小乌桂颗粒剂含药血清组5组,分别干预CIA-FLS24、48、72h,MTT法检测其增殖情况,ELISA检测干预前和各组细胞上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和基质金属蛋白酶-1(MMP-1)的水平。结果高、中剂量小乌桂颗粒剂含药血清组和MTX组干预CIA-FLS24、48、72h均可明显抑制其增殖,细胞培养上清中TNF-α、MMP-1水平明显降低,与干预前及空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);低剂量小乌桂颗粒剂含药血清组干预CIA-FLS48、72h可明显抑制CIA-FLS增殖,细胞培养上清中TNF-α水平明显降低,其干预CIA-FLS24、48、72h细胞培养上清中MMP-1水平均明显降低,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论小乌桂颗粒剂含药血清可能通过抑制FLS增殖,并抑制FLS分泌TNF-α、MMP-1来减轻滑膜炎症反应,该过程是其发挥治疗RA的可能机制。 展开更多

关键词 小乌桂颗粒剂 胶原诱导关节炎大鼠 成纤维滑膜细胞 增殖

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环磷酰胺对雄性大鼠生殖免疫功能的影响 被引量：7

6

作者 韩咪莎 林珊 高学勇 《中国组织化学与细胞化学杂志》 CAS CSCD 2011年第6期596-600,共5页

目的观察环磷酰胺对大鼠睾丸及其细胞免疫的影响,探讨抗肿瘤药物在生殖免疫功能中的机制。方法选用16只15周龄SD大鼠,随机分为对照组和实验组,每组8只;实验组腹腔注射环磷酰胺20mg/kg/d,连续5天,用药两个月后,应用HE染色法研究大鼠睾丸... 目的观察环磷酰胺对大鼠睾丸及其细胞免疫的影响,探讨抗肿瘤药物在生殖免疫功能中的机制。方法选用16只15周龄SD大鼠,随机分为对照组和实验组,每组8只;实验组腹腔注射环磷酰胺20mg/kg/d,连续5天,用药两个月后,应用HE染色法研究大鼠睾丸远期组织学变化,用原位缺口末端标记法(TUNEL方法)检测生精小管中生殖细胞凋亡,放射免疫法检测血清睾酮(T)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH),流式细胞术进行血液T淋巴细胞亚群分析。结果实验组睾丸生精小管直径缩小、间距增宽、生精上皮变薄、生殖细胞层次和数量减少、生精小管腔多未见精子形成,实验组睾丸生精小管直径、面积、生殖细胞数均显著低于对照组(P<0.01);实验组与对照组比较生殖细胞凋亡增多,差异显著(P<0.01);实验组与对照组比较血清T明显降低,差异显著(P<0.01),血清FSH、LH水平两组间差异无显著性;血液T淋巴细胞亚群分析,实验组与对照组比较CD3+CD4+、CD4+/CD8+明显降低(P<0.01),CD3+CD8+明显升高(P<0.01)。结论环磷酰胺对大鼠睾丸远期损害明显,促进生殖细胞凋亡,降低睾酮的分泌,并抑制T淋巴细胞的免疫功能。 展开更多

关键词 环磷酰胺 生殖细胞 细胞凋亡 T淋巴细胞

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NS-398诱导舌鳞癌细胞凋亡及其对E2F-1蛋白表达的影响 被引量：1

7

作者 杜一飞 陈宁 +1 位作者 张双越 周薇娜 《口腔医学》 CAS 2008年第2期81-84,共4页

目的观察选择性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂NS-398诱导舌鳞癌Tca8113细胞凋亡及其对细胞核转录因子E2F-1蛋白表达的影响。方法NS-398作用于舌癌Tca8113细胞,噻唑蓝法检测细胞生长抑制情况,流式细胞仪检测细胞周期及其凋亡率的改变,放射免... 目的观察选择性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂NS-398诱导舌鳞癌Tca8113细胞凋亡及其对细胞核转录因子E2F-1蛋白表达的影响。方法NS-398作用于舌癌Tca8113细胞,噻唑蓝法检测细胞生长抑制情况,流式细胞仪检测细胞周期及其凋亡率的改变,放射免疫法测定细胞上清液中前列腺素E2(PGE2)含量,Western blot法检测细胞中COX-2和E2F-1蛋白表达的变化。结果NS-398可以抑制Tca8113细胞的增殖,其抑制作用随着时间的延长和药物浓度的增加而增强。NS-398(50μmol/L)可引起Tca8113细胞G0/G1期细胞的逐渐增加,S期和G2/M期细胞比例数减少,并随着时间的延长细胞上清液中PGE2含量降低,细胞中COX-2和E2F-1蛋白表达下调。结论NS-398可以抑制Tca8113细胞的增殖,阻断细胞生长停滞于G0/G1期;该效应可能与其诱导细胞凋亡和降低细胞产生前列腺素E2有关;E2F-1蛋白可能参与了这些过程。 展开更多

关键词 NS-398 鳞状细胞癌 环氧化酶-2 E2F-1

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活性氧与肺炎性损伤 被引量：7

8

作者 吴禹 周向东 《现代医药卫生》 2005年第1期31-32,共2页

关键词 炎症反应 炎性损伤 肺炎 中性粒细胞 活性氧 慢性肺部疾病 慢性炎症 伤病 生活性 重要环节

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Fas/Apo-1(CD95)系统与细胞凋亡研究新进展 被引量：6

9

作者 高临路 崔玉芳 《国外医学（免疫学分册）》 1999年第4期234-237,共4页

Ｆａｓ／Ａｐｏ－１（ＣＤ９５）系统与机体免疫功能和细胞凋亡的关系十分密切，近几年来一直是免疫学家和临床医师关注的热点。本文综述了Ｆａｓ／Ａｐｏ－１ 在Ｉｐｒ突变小鼠和在胸腺Ｔ 细胞发育中研究的新进展，重点阐述了Ｆａｓ／... Ｆａｓ／Ａｐｏ－１（ＣＤ９５）系统与机体免疫功能和细胞凋亡的关系十分密切，近几年来一直是免疫学家和临床医师关注的热点。本文综述了Ｆａｓ／Ａｐｏ－１ 在Ｉｐｒ突变小鼠和在胸腺Ｔ 细胞发育中研究的新进展，重点阐述了Ｆａｓ／Ａｐｏ－１ 系统诱导凋亡的分子机理。 展开更多

关键词 FAS/APO-1 细胞凋亡 CD95

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人IgE分子Fc段受体结合区的表达、纯化及功能鉴定

10

作者 李晶 郭怀祖 +5 位作者 杨扬 钱卫珠 张大鹏 薛静亚 朱磊 王皓 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期445-449,共5页

利用哺乳动物细胞表达、纯化具有生物学功能的人IgE Fc段与受体结合的功能区(Fcε2-4)。以CRL8033细胞株为模板,PCR扩增人IgE Fcε2-4的cDNA并构建到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,脂质体转染CHO-K1细胞并以G418加压筛选。利用有限稀释法、... 利用哺乳动物细胞表达、纯化具有生物学功能的人IgE Fc段与受体结合的功能区(Fcε2-4)。以CRL8033细胞株为模板,PCR扩增人IgE Fcε2-4的cDNA并构建到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,脂质体转染CHO-K1细胞并以G418加压筛选。利用有限稀释法、Dot-blot及FACS筛选出高表达目的蛋白的稳定细胞株并进行扩增。CHO-K1培养上清经偶联抗IgE抗体(Omalizumab)的亲和层析柱分离纯化后,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定纯度,并采用表面等离子共振(SPR)法对该蛋白与其抗体的亲和力进行检测。结果表明,SDS-PAGE显示最终获得了纯度高于95%的人IgE Fcε2-4蛋白,呈二聚体状态,分子量约78kD,SPR检测结果显示,该蛋白与Omalizumab抗体特异性高亲和力结合(kD值约3.8nmol/L)。提示,本实验获得了结构及糖基化修饰正确的人IgE Fcε2-4结构域,为进一步研究其功能及探索新的抗体药物奠定了基础。 展开更多

关键词 IGE Fcε2-4 克隆表达 CHO 偶联抗IgE抗体

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HL-60细胞内游离钙对环核苷酸水平的影响

11

作者 林德馨 叶庆林 +2 位作者 高永琳 何艳 杨丽俐 《福建医科大学学报》 2002年第1期26-28,共3页

目的　藉离子霉素提高细胞内游离钙浓度 ([Ca2 +]i) ,观察其对人急性白血病 HL- 6 0细胞内环核苷酸水平的影响。　方法　在 IBMX抑制磷酸二酯酶作用后加入离子霉素提高 [Ca2 +]i,比较 [Ca2 +]i升高对静息水平和肾上腺素刺激水平的 HL- ... 目的　藉离子霉素提高细胞内游离钙浓度 ([Ca2 +]i) ,观察其对人急性白血病 HL- 6 0细胞内环核苷酸水平的影响。　方法　在 IBMX抑制磷酸二酯酶作用后加入离子霉素提高 [Ca2 +]i,比较 [Ca2 +]i升高对静息水平和肾上腺素刺激水平的 HL- 6 0细胞内 c AMP、c GMP水平的影响 ,c AMP、c GMP水平以环核苷酸的累积量表示。　结果　 [Ca2 +]i升高可使静息和肾上腺素刺激水平的 c AMP累积量明显降低 ,c GMP累积量无明显改变 ;[Ca2 +]i升高对硒诱导分化后的 HL- 6 0细胞环核苷酸的影响同分化前一致。　结论　 [Ca2 +]i升高能够降低 HL- 6 0细胞内c AMP水平 ,对 c GMP水平无影响 ,这种作用不因细胞分化而改变。 展开更多

关键词 钙 环磷酸腺苷 环磷酸鸟苷 离子 HL-60细胞 白血病

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生物薄膜干涉技术和ELISA法检测抗体药物免疫原性的方法学比较 被引量：3

12

作者 衡磊 王冲 +2 位作者 钱卫珠 张大鹏 王皓 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期282-286,共5页

采用生物薄膜干涉技术(BLI)开发快速检测治疗性单抗(抗EGFR单抗,Cetuximab)的抗抗体(ADAs)的检测方法。本研究利用ForteBio公司开发的Octet系统,在光纤制成的生物传感器底端覆盖生物分子相容层,偶联配体,形成生物膜层。当分析物结合传... 采用生物薄膜干涉技术(BLI)开发快速检测治疗性单抗(抗EGFR单抗,Cetuximab)的抗抗体(ADAs)的检测方法。本研究利用ForteBio公司开发的Octet系统,在光纤制成的生物传感器底端覆盖生物分子相容层,偶联配体,形成生物膜层。当分析物结合传感器底端偶联的配体时,生物膜层厚度增加,反射光干涉光谱曲线产生可测量的漂移,从而可以实现对分子间相互作用的实时测量,同时以传统的抗体桥ELISA法作为平行对照。SA(Streptavidin)传感器结合生物素化的单抗,用免疫原性试剂孵育血清样品后,利用传感器检测血清样品的ADA。分别应用BLI和ELISA两种方法确定cutpoint,并进行剂量反应曲线的分析。研究结果表明BLI快速分析法具有同ELISA法极其相似的免疫原性检测行为,均能准确检测出筛选分析中的20例正常人血清的基线反应值。同时,BLI法在竞争抑制实验中体现出了很高的特异性。与ELISA相比,BLI技术用于治疗性抗体的临床免疫原性分析,更加省时,快捷,准确,而且可避免低亲和力ADA易受洗板干扰的弊端。因此,BLI技术可能成为抗体药物免疫原性检测的一种新的有效方法。 展开更多

关键词 西妥昔单抗 EusA 生物薄膜干涉技术 抗抗体 检测

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抗CTLA-4嵌合抗体的制备及生物学活性鉴定 被引量：1

13

作者 许静 李晶 +4 位作者 杨扬 郭怀祖 钱卫珠 张大鹏 王皓 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期359-364,共6页

制备新型抗CTLA-4人鼠嵌合抗体并进行活性鉴定。通过杂交瘤技术获得高亲和力小鼠抗人CTLA-4单克隆抗体22G11和16C11;利用分子克隆技术将鼠源抗体可变区基因与人源抗体恒定区拼接后,最终通过CHO-K1工程株细胞表达高亲和力抗CTLA-4嵌合抗... 制备新型抗CTLA-4人鼠嵌合抗体并进行活性鉴定。通过杂交瘤技术获得高亲和力小鼠抗人CTLA-4单克隆抗体22G11和16C11;利用分子克隆技术将鼠源抗体可变区基因与人源抗体恒定区拼接后,最终通过CHO-K1工程株细胞表达高亲和力抗CTLA-4嵌合抗体。经SDS-PAGE电泳显示最终获得了纯度高于90%的CTLA-4嵌合抗体c22G11和c16C11,抗原结合活性结果表明两株嵌合抗体都能很好地与Jurkat细胞结合,竞争抑制实验表明它们都能与各自对应的鼠源抗体竞争。据此,本实验获得了两株抗人CTLA-4胞外区的高亲和力和特异性嵌合抗体。 展开更多

关键词 CTLA-4 单克隆抗体 免疫原性 5’RACE技术 嵌合抗体

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MAPKs通路在胰岛素促人乳腺癌细胞系增殖中的机制研究 被引量：1

14

作者 钱晓娟 袁小青 +2 位作者 马向华 沈捷 丁娇 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期684-688,共5页

目的:探讨丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinases,MAPKs)信号转导通路在胰岛素促人乳腺癌细胞MCF-7增殖中的作用机制。方法:通过MTT比色法观察不同浓度(0、25、50、100、200 nmol/L)胰岛素促MCF-7细胞的增殖效应,及用JN... 目的:探讨丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinases,MAPKs)信号转导通路在胰岛素促人乳腺癌细胞MCF-7增殖中的作用机制。方法:通过MTT比色法观察不同浓度(0、25、50、100、200 nmol/L)胰岛素促MCF-7细胞的增殖效应,及用JNK、ERK1/2通路特异性抑制剂(SP600125、PD98059)阻断MAPKs信号通路对胰岛素促MCF-7细胞增殖效应的影响;Western blot检测胰岛素干预对磷酸化JNK、磷酸化ERK1/2蛋白表达水平的影响以及JNK、ERK1/2、JAK2特异性抑制剂对上述蛋白表达的影响。结果:各浓度胰岛素均能不同程度促进人乳腺癌细胞MCF-7增殖,25 nmol/L胰岛素的促增殖效应最强(P<0.01);分别用SP600125、PD98059、AG490阻断JNK、ERK1/2、JAK/STAT信号通路均可不同程度抑制胰岛素促MCF-7细胞的增殖效应;胰岛素可诱导MAPKs信号通路中靶蛋白的磷酸化激活,Western blot结果显示,100 nmol/L胰岛素作用于MCF-7细胞5 min后即可磷酸化激活JNK途径,且该活化状态可持续1hr,而ERK1/2蛋白在胰岛素作用30 min后才被磷酸化激活;10μmol/L PD98059(ERK通路抑制剂)可显著抑制200 nmol/L胰岛素作用30 min对ERK1/2的磷酸化激活,而20μmol/LSP600125(JNK通路抑制剂)以及20μmol/L AG490(JAK/STAT通路抑制剂)对ERK1/2磷酸化激活的抑制作用则不明显。结论:胰岛素可促进人乳腺癌细胞MCF-7增殖,该增殖效应可能与其激活MAPKs信号通路及下游其他信号转导有关,上述通路的激活可能促进乳腺癌的发生发展。 展开更多

关键词 胰岛素 MAPKS 乳腺癌

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RA诱导P19细胞神经元分化过程中nestin基因的表达变化 被引量：1

15

作者 刘中华 吴文军 王少娜 《中国实用神经疾病杂志》 2009年第13期44-46,共3页

目的观察nestin基因在RA诱导P19细胞向神经分化过程中表达水平的变化,探讨nestin基因在神经分化过程中的特点。方法P19细胞经1×10-6M视黄酸(RA)诱导悬浮培养4d形成细胞聚集体(aggregation),将聚集体用生长培养基黏附培养至12d,观... 目的观察nestin基因在RA诱导P19细胞向神经分化过程中表达水平的变化,探讨nestin基因在神经分化过程中的特点。方法P19细胞经1×10-6M视黄酸(RA)诱导悬浮培养4d形成细胞聚集体(aggregation),将聚集体用生长培养基黏附培养至12d,观察神经细胞分化情况,用神经元标记分子NF160对分化第10天的P19细胞进行免疫染色,观察其产生神经元情况,并采用RT-PCR技术对P19细胞、RA连续诱导培养的细胞聚集体以及细胞分化成熟的不同时段检测P19细胞中nestin基因的表达水平。结果经RA成团诱导4d后,P19细胞向神经方向分化,随着分化时间延长逐渐形成神经网络;NF160对分化第10天的P19细胞检测呈阳性;nestin基因在P19细胞RA诱导前后皆有表达,在RA诱导P19细胞向神经元方向分化时表达水平逐渐上调,各时间点之间差异显著(P<0.05),而在随后P19细胞的分化过程中,随着P19神经元的成熟nestin基因的表达逐渐下降,直至接近于消失。结论nestin基因在P19细胞向神经元诱导过程中表达逐渐上调,而在P19细胞神经元分化后表达明显下调,它参与神经元的分化和发育过程。 展开更多

关键词 细胞分化 P19细胞 nestin基因

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人小肠肌间神经丛的形态学观察 被引量：7

16

作者 蔡文琴 曾微 +2 位作者 武景望 孙榆 李巍 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第4期364-368,I006,共6页

用镀银染色铺片法及常规电镜技术，对人小肠肌间神经丛进行了形态学观察。结果表明：人小肠肌间神经丛由神经纤维束和神经节组成，呈与肠管共同始终的连续网格状结构。神经节细胞形态呈高度的异质性，体积变异大，自１７９．８～３６８... 用镀银染色铺片法及常规电镜技术，对人小肠肌间神经丛进行了形态学观察。结果表明：人小肠肌间神经丛由神经纤维束和神经节组成，呈与肠管共同始终的连续网格状结构。神经节细胞形态呈高度的异质性，体积变异大，自１７９．８～３６８１７．６μｍ３，神经细胞平均密度为１３７５个／ｃｍ２。电镜下可见神经节为神经细胞与神经胶质细胞组成的实体，神经细胞胞体包埋于神经细胞与神经胶质细胞突起组成的神经纤维网中，内含多种不同形态突触小泡的神经终末支，以轴－树及轴－体突触较为多见。神经节外无结缔组织被膜，仅有基板及成纤维细胞的突起。肠平滑肌收缩可改变神经节表面的外形，在神经细胞内常见散在或成团的脂褐素。 展开更多

关键词 小肠 肌间神经丛 超微结构 镀银染色 形态学

全文增补中

重组可溶性人IL-6的原核表达纯化和活性鉴定

17

作者 刘彩艳 赵自叶 +4 位作者 郑娟 段树燕 郭怀祖 徐进 王皓 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期464-468,共5页

使用大肠杆菌BL21(DE3)重组表达可溶性人IL-6并对其进行纯化和活性鉴定。以人激活T细胞总RNA为模板,逆转录PCR扩增人IL-6的基因片段并将其克隆到原核表达载体pET32a(+)中,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),优化表达条件获得可溶性表达目... 使用大肠杆菌BL21(DE3)重组表达可溶性人IL-6并对其进行纯化和活性鉴定。以人激活T细胞总RNA为模板,逆转录PCR扩增人IL-6的基因片段并将其克隆到原核表达载体pET32a(+)中,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),优化表达条件获得可溶性表达目的蛋白。细菌裂解上清经镍金属螯和层析纯化,SDS-PAGE鉴定其分子量大小,western blot鉴定其免疫原性,并通过IL-6依赖的细胞株T1165分析重组蛋白的活性。成功构建了pET32a(+)/IL-6表达载体,并获得了可溶性表达的重组人IL-6蛋白。SDS-PAGE显示,其分子量约为21kD,可被抗IL-6抗体特异性识别,并且该重组蛋白可刺激IL-6依赖的细胞株T1165增殖,比活性与标准品一致,约为1×106 U/mg。本实验获得了可溶性高表达的重组人IL-6蛋白,为进一步研究人IL-6奠定了基础。 展开更多

关键词 IL-6 原核表达纯化 活性鉴定

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亚硒酸钠诱导的晶体上皮细胞凋亡的流式细胞分析

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作者 温炎华 韩英 高惠英 《河北医药》 CAS 1999年第4期263-264,共2页

关键词 亚硒酸钠 晶体上皮细胞 细胞凋亡 流式细胞术

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多巴胺D3受体对醛固酮介导的血管平滑肌细胞增殖的影响 被引量：2

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作者 李源 陈彩宇 +4 位作者 杨剑 周发英 王娜 杨德忠 曾春雨 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期943-946,共4页

目的观察多巴胺D3受体对醛固酮介导的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖的影响。方法以大鼠胸主动脉平滑肌细胞株(A10细胞)为研究对象,观察在醛固酮10-10～10-7mol/L、多巴胺D3受体激动剂(PD128907)10-10～10-7mo... 目的观察多巴胺D3受体对醛固酮介导的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖的影响。方法以大鼠胸主动脉平滑肌细胞株(A10细胞)为研究对象,观察在醛固酮10-10～10-7mol/L、多巴胺D3受体激动剂(PD128907)10-10～10-7mol/L分别单独作用,醛固酮10-7mol/L、PD128907 10-10～10-7mol/L共同作用以及D3受体拮抗剂(U99194A)、PD128907 10-7mol/L和醛固酮10-7mol/L共同作用的情况下,A10细胞增殖幅度的变化,细胞增殖用3H-胸腺嘧啶核苷掺入法测定。Western blot检测ERK1/2、p-ERK1/2表达。结果醛固酮呈浓度依赖性地促进A10细胞的增殖,其最大促增殖作用幅度达(65±6)%(P<0.05)。PD128907本身对A10细胞增殖无影响,但PD128907可通过D3多巴胺受体减弱醛固酮(10-7mol/L)介导的A10细胞增殖,在10-7mol/L浓度时可使促增殖幅度降低至(12±6)%(P<0.05),应用D3受体阻断剂U99194A后该抑制作用丧失。PD128907能够降低醛固酮(10-7mol/L)对ERK1/2信号的磷酸化激活效果。结论多巴胺D3受体激活对醛固酮介导的促VSMCs增殖有明显抑制效应。 展开更多

关键词 多巴胺受体 醛固酮 血管平滑肌细胞 细胞增殖

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趋化因子12促进少突胶质前体细胞的增殖 被引量：1

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作者 李邦银 蒋涛 +2 位作者 阴洪 余淼 任先军 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期794-799,共6页

目的体外研究趋化因子12(CXCL12)对大鼠少突胶质前体细胞(oligodendrocyte precursor cells,OPCs)增殖的影响及其机制。方法振荡分离和差速贴壁等方法获得OPCs,采用免疫细胞化学技术进行鉴定;CCK-8检测OPCs在不同浓度CXCL12(0、5、10、2... 目的体外研究趋化因子12(CXCL12)对大鼠少突胶质前体细胞(oligodendrocyte precursor cells,OPCs)增殖的影响及其机制。方法振荡分离和差速贴壁等方法获得OPCs,采用免疫细胞化学技术进行鉴定;CCK-8检测OPCs在不同浓度CXCL12(0、5、10、20 ng/m L)作用不同时间点(0、24、48、72 h)的增殖,Western blot检测OPCs在各浓度下72 h后下游CXCR4、CXCR7、MMP9蛋白表达;CXCR4 siRNA、CXCR7 siRNA分别干扰CXCR4、CXCR7蛋白表达后,检测在20 ng/m L CXCL12下OPCs在各时间点的增殖,Western blot检测该条件下CXCR4、CXCR7、MMP9蛋白表达;MMP9 siRNA干扰MMP9蛋白表达后,检测在20 ng/m L CXCL12下OPCs在各时间点的增殖。结果在一定浓度范围内,CXCL12能够明显促进OPCs增殖,并且促进OPCs内CXCR4、CXCR7、MMP9蛋白表达。与0 ng/m L相比,20 ng/m L CXCL12作用72 h后,OPCs增殖及CXCR4、CXCR7、MMP9蛋白表达增加最明显(P<0.05,P<0.01);CXCR4、CXCR7分别干扰后,OPCs增殖受到抑制,MMP9蛋白表达量也明显降低(P<0.05,P<0.01);MMP9干扰后,OPCs增殖受到抑制(P<0.05)。结论 CXCL12对OPCs增殖有明显促进作用,与CXCR4、CXCR7、MMP9蛋白表达上调相关。 展开更多

关键词 CXCL12 OPCs CXCR4 CXCR7 增殖 脊髓损伤

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