膀胱癌细胞高表达E2因子转录因子家族成员3a(E2F3a)通过上调CD24抑制NK细胞的杀伤 被引量：1

1

作者 姚田军 周幸春 +2 位作者 杨帆 刘静 张波 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期333-341,共9页

目的 探讨膀胱癌细胞过表达E2因子转录因子家族成员3a(E2F3a)后是否影响自然杀伤(NK)细胞的活化及杀伤并探讨其具体机制。方法 利用慢病毒载体构建E2F3a稳定过表达的人及小鼠膀胱癌细胞株并将其与NK细胞共孵育,乳酸脱氢酶释放实验及流... 目的 探讨膀胱癌细胞过表达E2因子转录因子家族成员3a(E2F3a)后是否影响自然杀伤(NK)细胞的活化及杀伤并探讨其具体机制。方法 利用慢病毒载体构建E2F3a稳定过表达的人及小鼠膀胱癌细胞株并将其与NK细胞共孵育,乳酸脱氢酶释放实验及流式细胞术检测NK细胞活化及杀伤能力的变化。转录组测序分析膀胱癌细胞E2F3a过表达组与对照组之间的基因表达差异,免疫组织化学染色法检测膀胱癌组织中E2F3a与差异基因在蛋白水平上表达的相关性。进一步利用染色质免疫沉淀(ChIP)、实时定量PCR、 Western blot法及小干扰RNA(siRNA)等方法探索膀胱癌细胞过表达E2F3a后对NK细胞活化及杀伤影响的具体机制。结果 在膀胱癌细胞中过表达E2F3a能显著抑制NK细胞的活化及杀伤。膀胱癌细胞过表达E2F3a可显著上调CD24基因的表达,膀胱癌组织中E2F3a和CD24蛋白的表达呈显著正相关。CHIP结果显示,E2F3a能够结合CD24的启动子区并促进CD24基因的转录。干涉E2F3a过表达膀胱癌细胞中的CD24表达后,发现膀胱癌细胞E2F3a过表达所介导的NK细胞活化及杀伤抑制被显著缓解。结论 在膀胱癌细胞中E2F3a可结合CD24的启动子区促进CD24基因的转录及CD24蛋白的表达。膀胱癌细胞E2F3a通过上调CD24表达来抑制NK细胞的活化及杀伤。 展开更多

关键词 膀胱癌 E2因子转录因子家族成员3a(E2F3a) 自然杀伤(NK)细胞 CD24 免疫抑制

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聚乙二醇重组人粒细胞集落刺激因子注射液Ⅰ期临床药代动力学和药效学研究 被引量：12

2

作者 韩晓红 张春玲 +8 位作者 刘鹏 宋媛媛 姚嘉瑞 秦燕 唐乐 张淑香 李丹 冯云 石远凯 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期695-700,共6页

目的评价聚乙二醇重组人粒细胞集落刺激因子(PEG-rhG-CSF)注射液在化疗引起的中性粒细胞减少症中的药代动力学(PK)和药效学(PD)。方法入组24例肿瘤患者接受2个周期且剂量相同化疗方案,第1周期为对照周期,第2周期于化疗药物给药结束后48 ... 目的评价聚乙二醇重组人粒细胞集落刺激因子(PEG-rhG-CSF)注射液在化疗引起的中性粒细胞减少症中的药代动力学(PK)和药效学(PD)。方法入组24例肿瘤患者接受2个周期且剂量相同化疗方案,第1周期为对照周期,第2周期于化疗药物给药结束后48 h皮下注射不同剂量的PEG-rhG-CSF 1次,共设置60、100和150μg.kg-13个剂量组,每组受试患者8例,ELISA法检测受试者血清中PEG-rhG-CSF浓度,并计算PK参数,同时监测受试者CD34+、血常规、血生化指标变化。结果 PEG-rhG-CSF 3个剂量组主要药代参数如下:T12分别为(37.5±7)、(40.8±12)、(80.7±48)h;CL_F分别是(17±9)、(9±4)、(7±2)ml.h-1.g-1;AUC0-t分别是(5,593.6±5,435)、(14,651.3±12,183)、(23,002.5±6,655)mg.h.L-1。第2周期3个剂量组的中性粒细胞绝对值(ANC)最低点均值分别为1.9×109、2.3×109、4.2×109cells.L-1,均比第1周期有所提高。结论 PEG-rhG-CSF在体内呈现非线性药代动力学特征,其在体内维持药效时间长,1次注射即可达到较好疗效。 展开更多

关键词 聚乙二醇化 重组人粒细胞集落刺激因子 药代动力学 药效学 酶联免疫分析法 临床Ⅰ期试验

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ONO-AE-248诱发的中性粒细胞非凋亡、非坏死性死亡 被引量：7

3

作者 刘佳佳 张姿 +2 位作者 何浩 李昕 何延政 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期541-543,共3页

目的:观察前列腺素E2受体亚型3(EP3)激动剂ONO-AE-248对中性粒细胞的影响。方法:运用电子显微镜、MTS法、RT-PCR和流式细胞术等技术,对中性粒细胞的形态变化、生物学活性及凋亡进行观察和评估,并对EP3受体进行分析。结果:中性粒细胞存在... 目的:观察前列腺素E2受体亚型3(EP3)激动剂ONO-AE-248对中性粒细胞的影响。方法:运用电子显微镜、MTS法、RT-PCR和流式细胞术等技术,对中性粒细胞的形态变化、生物学活性及凋亡进行观察和评估,并对EP3受体进行分析。结果:中性粒细胞存在EP3受体基因的表达,以5mmol/L的ONO-AE-248作用12h后,其多叶核融合为单叶核,核膜起泡、破裂,核质溢出,细胞死亡;但其快速死亡不具有细胞凋亡和坏死的形态特征且需要能量(ATP)供应。结论:ONO-AE-248所致这种新型细胞主动死亡的形式,可能为“非凋亡性程序化细胞死亡”的一种,这对于重新认识和定位中性粒细胞在非特异性免疫中的作用和地位提出了新的思路。 展开更多

关键词 ONO-AE-248 非凋亡性程序化细胞死亡 中性粒细胞 凋亡 坏死

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血管活性肠肽对大鼠Leydig细胞的免疫调节作用 被引量：6

4

作者 王伟 席晔斌 +4 位作者 陈广洁 郝静 沈天伟 王保国 李伟毅 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期696-700,共5页

目的:研究血管活性肠肽(VIP)对大鼠睾丸间质细胞(Leydig细胞)免疫功能的调节。方法:以VIP作用于溶脲脲原体(UU)感染的SD大鼠及大鼠Leydig细胞为研究对象,观察VIP对大鼠Leydig细胞分泌的细胞因子(IL-1、IL-6及TGF-β)和FasL表达的调节,... 目的:研究血管活性肠肽(VIP)对大鼠睾丸间质细胞(Leydig细胞)免疫功能的调节。方法:以VIP作用于溶脲脲原体(UU)感染的SD大鼠及大鼠Leydig细胞为研究对象,观察VIP对大鼠Leydig细胞分泌的细胞因子(IL-1、IL-6及TGF-β)和FasL表达的调节,从体外及动物整体水平来探讨VIP对大鼠Leydig细胞免疫功能的调节。结果:在睾丸局部感染时,VIP能调节Leydig细胞IL-1、IL-6、TGF-β及FasL的分泌和表达格局;同时VIP对大鼠睾丸局部免疫豁免的调节和维持也起到一定的作用。结论:VIP能调节大鼠Leydig细胞的免疫功能,并参与调节大鼠睾丸局部的免疫豁免。 展开更多

关键词 LEYDIG细胞 免疫调节 IL-1 IL- 6 TGF-β FASL

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锌指蛋白265在大鼠睾丸Sertoli细胞中的特异性表达 被引量：6

5

作者 席晔斌 李荣平 +4 位作者 王保国 葛瑜 沈天伟 蒋黎华 李伟毅 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期1011-1012,1015,共3页

目的:研究锌指蛋白265(ZNF265)在大鼠睾丸Ser-toli细胞中的特异性表达。方法:分离培养SD大鼠睾丸Ser-toli细胞,以免疫荧光染色、流式细胞术(FCM)检测ZNF265在Sertoli细胞的表达,且抽提Sertoli细胞总RNA,用PT-PCR法检测ZNF265的表达。结... 目的:研究锌指蛋白265(ZNF265)在大鼠睾丸Ser-toli细胞中的特异性表达。方法:分离培养SD大鼠睾丸Ser-toli细胞,以免疫荧光染色、流式细胞术(FCM)检测ZNF265在Sertoli细胞的表达,且抽提Sertoli细胞总RNA,用PT-PCR法检测ZNF265的表达。结果:经免疫荧光染色,实验组Ser-toli细胞核核周呈现明亮特异荧光,对照组未见特异性荧光;FCM检测结果显示实验组Sertoli细胞ZNF265的表达较对照组明显增高;RT-PCR扩增出目的条带ZNF265。结论:大鼠睾丸Sertoli细胞特异性表达ZNF265,且多表达于Sertoli细胞核核周胞质。 展开更多

关键词 ZNF265 SERTOLI细胞 SD大鼠 ZNF265表达

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ONO-AE-248诱导的中性粒细胞非凋亡性程序化细胞死亡的形态学变化 被引量：4

6

作者 张姿 刘佳佳 +4 位作者 姚富丽 何浩 羊建 谢华福 何涛 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期413-415,共3页

目的研究前列腺素E受体亚型3(EP3)激动剂ONO-AE-248诱导的中性粒细胞(PMN)非凋亡性程序化细胞死亡的形态学变化,探讨PMN死亡形式的多样性和复杂性。方法运用透射电镜、荧光显微镜及激光共聚焦扫描显微镜观察PMN在自发性凋亡与ONO-AE-24... 目的研究前列腺素E受体亚型3(EP3)激动剂ONO-AE-248诱导的中性粒细胞(PMN)非凋亡性程序化细胞死亡的形态学变化,探讨PMN死亡形式的多样性和复杂性。方法运用透射电镜、荧光显微镜及激光共聚焦扫描显微镜观察PMN在自发性凋亡与ONO-AE-248刺激下亚细胞微结构的变化。结果以5mmol/L的ONO-AE-248刺激PMN12h后,电镜观察绝大多数PMN的多叶核融合为单叶核,核质疏松,核膜分层、起泡甚至破裂,核质溢出,但细胞膜较完整,细胞器无明显改变。以荧光染料DAPI标染活细胞核,ONO-AE-248刺激后,PMN表现为多叶核融合成大而模糊的球形,核染色密度较低;ONO-AE-248刺激的PMN死亡仍有细胞膜磷脂酰丝氨酸(PS)的外翻。ONO-AE-248刺激组与自发性凋亡组PMN在线粒体的形态结构、分布和细胞质内的染色性均有明显差异。结论ONO-AE-248在体外能刺激人PMN发生非凋亡性程序化细胞死亡,这一刺激过程不影响自发性凋亡的PMN细胞膜PS的外翻,并且细胞核和线粒体的改变是其早期最为显著的形态学改变,提示二者可能是ONO-AE-248刺激的靶标和早期的药物反应中心。 展开更多

关键词 ONO-AE-248 中性粒细胞 线粒体 凋亡 非凋亡性程序化细胞死亡

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HBV相关性肝癌患者CD19^+CD24^+CD38^+调节性B细胞和IL-10的检测及临床价值 被引量：5

7

作者 廖玲 黄恒柳 +3 位作者 章明徐 秦海涛 邹佳峻 邓少丽 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期625-630,共6页

目的检测HBV相关性肝癌患者CD19^+CD24^+CD38^+调节性B细胞(Bregs细胞)的分布频率及血清白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)的水平并分析其临床意义。方法收集93例HBV相关性肝癌患者、47例HBV相关性肝硬化患者和57例健康体检者的外周... 目的检测HBV相关性肝癌患者CD19^+CD24^+CD38^+调节性B细胞(Bregs细胞)的分布频率及血清白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)的水平并分析其临床意义。方法收集93例HBV相关性肝癌患者、47例HBV相关性肝硬化患者和57例健康体检者的外周血,采用流式细胞术检测CD19^+CD24^+CD38^+Bregs细胞分布频率,化学发光法检测血清IL-10水平,并分析其与疾病分期、肿瘤个数、血管侵犯等临床指标的关系;同时收集20例HBV相关性肝癌患者的癌组织、癌旁组织和远癌组织,采用流式细胞术检测组织中CD19^+CD24^+CD38^+Bregs细胞分布频率,并分析其与肿瘤位置的相关性。结果 HBV相关性肝癌外周血CD19^+CD24^+CD38^+Bregs细胞显著高于肝硬化组和健康对照组,且HBV相关性肝癌晚期(C+D期)患者显著高于早期(0+A期)和中期(B期)患者(P<0.05,P<0.01);HBV相关性肝癌和HBV相关性肝硬化患者血清IL-10水平显著高于健康对照组(P<0.01);HBV相关性肝癌外周血CD19^+CD24^+CD38^+Bregs细胞分布频率和血清IL-10水平与肿瘤个数、是否血管侵犯有密切关系;HBV相关性肝癌患者外周血CD19^+CD24^+CD38^+Bregs细胞分布频率与血清IL-10呈正相关(r=0.46,P<0.01);HBV相关性肝癌患者癌组织和癌旁组织CD19^+CD24^+CD38^+Bregs细胞频率显著高于远癌组织(P<0.01)。结论 CD19^+CD24^+CD38^+Bregs细胞可能通过分泌IL-10在HBV相关性肝癌免疫微环境中发挥调节作用,参与肿瘤的发生、发展。 展开更多

关键词 调节性B细胞 白细胞介素-10 乙肝相关性肝癌

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睾酮对衰老心肌细胞及细胞周期调控因子的作用 被引量：2

8

作者 邢晓雯 吴赛珠 +3 位作者 阮云军 何天民 刘新强 赖文岩 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期641-644,共4页

目的探讨不同剂量睾酮对心肌细胞衰老的干预作用及其可能机制。方法用1μmol/L、100nmol/L、10nmol/L三种剂量睾酮干预自然衰老的小鼠心肌细胞,应用流式细胞仪检测各组细胞周期分布,用RT-PCR及Western印迹检测各组细胞p16INK4a、cyclinD... 目的探讨不同剂量睾酮对心肌细胞衰老的干预作用及其可能机制。方法用1μmol/L、100nmol/L、10nmol/L三种剂量睾酮干预自然衰老的小鼠心肌细胞,应用流式细胞仪检测各组细胞周期分布,用RT-PCR及Western印迹检测各组细胞p16INK4a、cyclinD1mRNA、蛋白及去磷酸化RB蛋白的表达。结果与衰老心肌细胞相比,1μmol/L、100nmol/L、10nmol/L睾酮干预细胞G0/G1期比例明显降低(P<0.05),这一作用具有剂量依赖性。睾酮干预可上调cyclinD1mRNA及蛋白表达,下调p16INK4amRNA及蛋白表达,并使去磷酸化RB蛋白表达下降(P<0.05),而这些作用均可被雄激素受体阻断剂而不被雌激素受体阻断剂所阻断(P<0.05)。结论睾酮可剂量依赖性的抑制小鼠心肌细胞衰老,这一作用部分是通过睾酮上调cyclinD1表达,下调p16INK4a及去磷酸化RB蛋白表达而实现的。 展开更多

关键词 衰老 睾酮 RB CYCLIND1 P16INK4A

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单个核细胞的接种密度对贴壁筛选法培养内皮祖细胞增殖的影响 被引量：2

9

作者 肖刚峰 张怀勤 +2 位作者 季亢挺 邓武 黄晓燕 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期233-234,238,共3页

目的:探讨单个核细胞接种密度对内皮祖细胞体外培养扩增的影响。方法:采集正常脐血,用密度梯度离心法分离单个核细胞并接种在包被纤维连接蛋白的24孔培养板中。按接种的密度分为5组,即1×106/cm2,2×106/cm2,3×106/cm2,4&#... 目的:探讨单个核细胞接种密度对内皮祖细胞体外培养扩增的影响。方法:采集正常脐血,用密度梯度离心法分离单个核细胞并接种在包被纤维连接蛋白的24孔培养板中。按接种的密度分为5组,即1×106/cm2,2×106/cm2,3×106/cm2,4×106/cm2及5×106/cm2。在培养的第7天,计数各组每孔细胞的集落数和贴壁细胞数。用流式细胞术和免疫荧光染色法对细胞的表面标志及功能进行鉴定。结果:以不同密度接种的各组每1×106个单个核细胞得到的集落数和贴壁细胞数不同。3×106/cm2组的细胞集落和细胞数最多,细胞的集落数和贴壁细胞数具有良好的相关性。结论:贴壁筛选法培养内皮祖细胞,脐血单个核细胞接种密度以3×106/cm2为宜,通过计数细胞集落可粗略估计内皮祖细胞的增殖能力。 展开更多

关键词 细胞培养 内皮祖细胞 单个核细胞 密度

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人乳头瘤病毒6型E7与结核杆菌热休克蛋白70融合基因的构建及原核表达 被引量：1

10

作者 党育平 王刚 +3 位作者 范雪莉 沈柱 樊建勇 刘玉峰 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期208-210,共3页

目的:构建结核杆菌热休克蛋白(HSP)70与人乳头瘤病毒(HPV)6型E7抗原的融合基因,在大肠杆菌中进行表达和纯化。方法:利用PCR方法扩增结核杆菌HSP70基因,插入原核表达载体pGEX-4T-1;经测序后,再通过PCR方法扩增HPV6型E7基因片段,测序后插... 目的:构建结核杆菌热休克蛋白(HSP)70与人乳头瘤病毒(HPV)6型E7抗原的融合基因,在大肠杆菌中进行表达和纯化。方法:利用PCR方法扩增结核杆菌HSP70基因,插入原核表达载体pGEX-4T-1;经测序后,再通过PCR方法扩增HPV6型E7基因片段,测序后插入HSP70基因的5'端,构建HPV6E7与结核杆菌HSP70的N端融合基因原核表达质粒pGEX-E7-HSP70;在含有该质粒的大肠杆菌DH5α中,进行诱导表达和分离纯化。结果:成功地构建了pGEX-E7-HSP70原核表达质粒;在含有该质粒的大肠杆菌DH5α中,经异丙醇-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后表达相对分子质量约为108000的蛋白;经谷胱甘肽硫转移酶(GST)融合蛋白表达系统纯化,得到E7与结核杆菌HSP70的可溶性融合蛋白。结论:成功获得HPV6型E7与结核杆菌HSP70的融合蛋白,为研究该融合蛋白疫苗在尖锐湿疣治疗中的作用奠定了基础。 展开更多

关键词 人乳头瘤病毒6型 E7蛋白 结核杆菌 热休克蛋白70 融合基因 原核表达

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ONO-AE-248诱发中性粒细胞非凋亡性程序化细胞死亡的生化信号转导初探 被引量：1

11

作者 何浩 刘佳佳 +6 位作者 张姿 李昕 段承刚 谢华福 刘晓燕 何涛 何延政 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期398-401,406,共5页

目的:研究ONO-AE-248诱发中性粒细胞(PMN)非凋亡性程序化细胞死亡过程中,细胞死亡相关的蛋白分子caspase-3、caspase-8、p-38MAPK和PKC的作用,探讨这种细胞死亡的分子机制。方法:运用光镜和DNA电泳对PMN形态学变化和生化特征进行观察和... 目的:研究ONO-AE-248诱发中性粒细胞(PMN)非凋亡性程序化细胞死亡过程中,细胞死亡相关的蛋白分子caspase-3、caspase-8、p-38MAPK和PKC的作用,探讨这种细胞死亡的分子机制。方法:运用光镜和DNA电泳对PMN形态学变化和生化特征进行观察和评估;通过Western blot显示PMN中caspase-3、caspase-8活性改变和p-38MAPK磷酸化改变;运用MTS法检测PKC抑制剂对PMN活性的影响。结果:PMN经ONO-AE-248刺激,绝大多数分叶核融合成单叶核(12小时),DNA琼脂糖电泳结果显示缺乏梯状条带(24小时),而且ONO-AE-248对caspase-3、caspase-8活性和p-38MAPK磷酸化水平无明显影响。然而,PKC抑制剂STS和H-7能显著抑制ONO-AE-248对PMN的促死亡效应。结论:ONO-AE-248所诱导的PMN死亡可能是一种非凋亡性的主动性细胞死亡,即非凋亡性程序化细胞死亡。该死亡过程不依赖caspase-3、caspase-8的活化和p-38MAPK的磷酸化,但是PKC可能发挥正向的调控作用。 展开更多

关键词 ONO-AE-248 中性粒细胞 CASPASE PKC p-38MAPK

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炎性小体中凋亡相关斑点样蛋白抗结核分枝杆菌感染作用的研究 被引量：1

12

作者 陈曦 姜广路 +1 位作者 贾红彦 张宗德 《中国防痨杂志》 CAS 2017年第2期114-122,共9页

目的分析核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族含pyrin结构域蛋白3（NLRP3）炎性小体在结核分枝杆菌（ Mycobacterium tuberculosis, MTB）感染小鼠中的免疫保护作用。方法选取无免疫缺陷的野生型（widetype，WT）C57BL／6小鼠、半胱天冬酶... 目的分析核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族含pyrin结构域蛋白3（NLRP3）炎性小体在结核分枝杆菌（ Mycobacterium tuberculosis, MTB）感染小鼠中的免疫保护作用。方法选取无免疫缺陷的野生型（widetype，WT）C57BL／6小鼠、半胱天冬酶-1-/-小鼠、ASC-/-小鼠及NLRP3-/-小鼠用于体内MTB感染实验，各种系小鼠骨髓和腹腔巨噬细胞用于体外MTB感染实验。体内感染实验小鼠分为2组：第1组中4种小鼠各感染30只，用于细菌载量分析、细胞因子检测及生存期评价；第2组中4种小鼠各感染15只，用于组织病理学分析及肺组织细胞流式分析；实验第1、2、3、4周时各种系小鼠各取1只未感染小鼠作为对照。检测感染小鼠的生存率及肺组织匀浆中细菌载量；采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法，测定未感染野生型小鼠、感染小鼠肺组织匀浆中的肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-12p40（IL-12p40）、IL-1β和γ-干扰素（IFN-γ）水平；应用流式细胞术分析小鼠感染后肺组织中的浸润细胞组分及细胞坏死情况，并以ELISA法分析支气管灌洗液和血清中坏死相关因子高迁移率族蛋白1（HMGB-1）和IL-1α的分泌情况；对感染肺组织进行组织病理学分析；采用蛋白质免疫印迹检测半胱天冬酶-1的成熟情况；采用ELISA法测定巨噬细胞培养上清中的IL-1β水平。结果感染MTB24h后，野生型小鼠骨髓巨噬细胞培养上清中IL-1β水平明显高于半胱天冬酶-1-/-小鼠、ASC-/-小鼠及NLRP3-/-小鼠[分别为：（316．29±4．64）pg／ml、（21．30±2．37）pg／ml、（22．99±0．46）pg／ml、（32．61±0．22）pg／ml；F=30．53，P〈0．01]；野生型小鼠腹腔巨噬细胞培养上清中IL-1β水平也明显高于半胱天冬酶-1-/-小鼠、ASC-/-小鼠及NLRP3-/-小鼠[分别为：（2970．36±11．53）pg／ml、（130．48±2．52）pg／ml、（120．24±3．43）pg／ml、（121．66±2．48）pg／ml；F=549．92，P〈0．01]。与野生型小鼠相比，半胱天冬酶十和NLRP3-/-小鼠未表现出对MTB抵抗力的降低，感染29周后生存率分别为72．2％（13／18）、66．7％（12／18）、61．1%（11／18），但ASC-/-小鼠对MTB高度易感，感染4-12周后全部死亡。感染4周时，ASC-/-小鼠肺脏细菌载量较野生型小鼠、半胱天冬酶-1-/-及NLRP3-/-小鼠升高约100倍（菌落计数分别为0．93×10^7±426、5．07×10^5±221、5．32×10^5±209、5．26×10^5±606；F=87．74，P〈0．01），显微镜检表现为急性坏死性肺炎，坏死细胞数量明显增高，伴有大量中性粒细胞浸润，且全肺细胞计数明显高于野生型小鼠、半胱天冬酶-1-/-小鼠及NLRP3-/-小鼠[分别为（10342．64±103．56）×10^5、（3014．26±22．87）×10^5、（2919．28±36．75）×10^5、（2974．77±17．35）×10^5；F=349．11，P〈0．01）；ASC-/-小鼠中与细胞坏死相关的血清HMGB-1、支气管灌洗液HMGB-1和支气管灌洗液中IL-1α水平较野生型小鼠明显升高[血清HMGB-1水平分别为（155893．36±168．30）pg／ml、（5112．56±43．62）pg／ml；t=-206．98，P〈0．01；支气管灌洗液HMGB-1水平分别为（137．80±1．67）ng／ml、（75．16±1．47）ng／ml；t=-21．71，P〈0．01；支气管灌洗液IL-1水平分别为（848．17±4．40）ng／ml、（197．04±2．93）ng／ml；t=-54．78，P〈0．01]。结论在MTB感染中，ASC分子具有独立于炎性小体NLRP3和半胱天冬酶-1的关键保护性作用。ASC-/-小鼠中肺组织病理异常与增强的细胞坏死相关，细胞过度坏死引起组织损伤，可能造成的细菌载量升高及过度的免疫反应都可能导致宿主死亡。 展开更多

关键词 分枝杆菌 结核 巨噬细胞炎性蛋白质类 自身免疫 抗生作用 动物 实验

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ONO-AE-248诱发中性粒细胞非凋亡性程序化死亡中Mcl-1表达的研究 被引量：2

13

作者 薛晓婕 刘佳佳 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期24-27,共4页

目的研究淋巴瘤细胞株的髓细胞白血病1(myeloid cell leukemia-1,Mcl-1)在ONO-AE-248刺激的中性粒细胞(polymorpho nuclear neutrophils,PMN)非凋亡程序化细胞死亡中的作用,为进一步确定这种新型细胞死亡模式提供线索。方法 Ficoll法新... 目的研究淋巴瘤细胞株的髓细胞白血病1(myeloid cell leukemia-1,Mcl-1)在ONO-AE-248刺激的中性粒细胞(polymorpho nuclear neutrophils,PMN)非凋亡程序化细胞死亡中的作用,为进一步确定这种新型细胞死亡模式提供线索。方法 Ficoll法新鲜分离健康志愿者外周静脉血中性粒细胞,与ONO-AE-248共同培养运用流式、RT-PCR和Western-bloting技术,对接受ONO-AE-248刺激的PMN的Mcl-1的表达进行检测。结果 ONO-AE-248刺激2 h时中性粒细胞Mcl-1 mRNA的表达明显上调,特异性抗Mcl-1单克隆抗体通过Western blotting技术检测发现其在凋亡组与非凋亡组的表达有明显差异性,表现为上升的趋势。结论 Mcl-1在ONO-AE-248诱导的非凋亡性程序化死亡中蛋白表达的上调可能是中性粒细胞凋亡和ONO-AE-248诱导的中性粒细胞非凋亡性程序化细胞死亡的关键性差异点。Mcl-1在ONO-AE-248诱导的非凋亡性程序化死亡和传统凋亡中发挥的调控作用可能是不相同的。 展开更多

关键词 中性粒细胞 ONO-AE-248 非凋亡性程序化细胞死亡 凋亡 髓细胞白血病1

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成年大鼠周围神经损伤后远侧端雪旺细胞变化的体外研究 被引量：3

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作者 李奕 林巍巍 +1 位作者 王晓冬 姚健 《南通大学学报（医学版）》 2006年第6期414-416,共3页

目的:体外观察大鼠坐骨神经损伤不同时间段远侧端雪旺细胞的变化。方法:切断成年SD大鼠坐骨神经,以远侧端为研究对象,术后1、2周和1个月取材,进行雪旺细胞体外培养,倒置相差显微镜,S-100免疫荧光染色及激光扫描共聚焦显微镜观察雪旺细... 目的:体外观察大鼠坐骨神经损伤不同时间段远侧端雪旺细胞的变化。方法:切断成年SD大鼠坐骨神经,以远侧端为研究对象,术后1、2周和1个月取材,进行雪旺细胞体外培养,倒置相差显微镜,S-100免疫荧光染色及激光扫描共聚焦显微镜观察雪旺细胞的形态,MTT检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞周期。结果:神经被切断后,雪旺细胞形态发生改变,1月组最明显;细胞活力和增殖能力也发生变化,切断1周组活力和增殖能力最强,随后逐渐变弱。结论:周围神经损伤后雪旺细胞形态发生变化,细胞的活力和增殖能力随着时间的推移逐渐下降但仍未停止增殖。 展开更多

关键词 雪旺细胞 S-100 MTT 流式细胞仪 坐骨神经 大鼠

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胆固醇天然抗体的检测与分析 被引量：1

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作者 冯旭阳 李巍 +2 位作者 王海昌 付萌 邢影 《心脏杂志》 CAS 2007年第2期173-175,共3页

目的检测不同年龄正常人血清IgM抗体以及单克隆天然抗体2H8、3B4、4G2对胆固醇的结合。方法应用间接ELISA法检测新生儿(脐带血)、幼儿、成年人及老年人血清IgM对胆固醇的反应性及其滴度,ELISA和流式细胞仪分析单克隆天然抗体对胆固醇的... 目的检测不同年龄正常人血清IgM抗体以及单克隆天然抗体2H8、3B4、4G2对胆固醇的结合。方法应用间接ELISA法检测新生儿(脐带血)、幼儿、成年人及老年人血清IgM对胆固醇的反应性及其滴度,ELISA和流式细胞仪分析单克隆天然抗体对胆固醇的结合。结果脐带血中即存在与胆固醇反应的IgM抗体,但其滴度明显低于其它3个年龄组,而其他3组的抗体滴度无明显差异;单抗3B4与胆固醇发生较强的反应。结论正常人血清中天然存在着与胆固醇发生反应的IgM型自身抗体,天然来源的单克隆抗体3B4可以与胆固醇结合,从而为进一步研究天然抗体在脂质代谢中的作用奠定了基础。 展开更多

关键词 胆固醇 天然抗体 动脉粥样硬化

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ONO-AE-248诱发的中性粒细胞非凋亡性程序化死亡相关蛋白的初步研究

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作者 段春燕 王松 +2 位作者 郑小莉 何涛 刘佳佳 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期978-979,共2页

关键词 ONO-AE-248 细胞程序化死亡 中性粒细胞 自发性凋亡 死亡相关蛋白 诱发 炎症细胞 前列腺素E2

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rTNFα、rIL-1及rIL-1ra对人脐静脉内皮细胞释放IL-1的影响 被引量：1

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作者 张庆殷 侯桂华 +2 位作者 曹容华 孙汶生 宋静 《山东医科大学学报》 1998年第2期107-111,共5页

用体外原代培养的人脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ）观察ｒＴＮＦα、ｒＩＬ－１对ＨＵＶＥＣ产生ＩＬ－１的诱导效应及重组ＩＬ－１受体拮抗剂（ｒＩＬ－１ｒａ）的抑制效应。结果表明，ｒＴＮＦα以剂量依赖的方式促进ＨＵＶＥＣ释放Ｉ... 用体外原代培养的人脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ）观察ｒＴＮＦα、ｒＩＬ－１对ＨＵＶＥＣ产生ＩＬ－１的诱导效应及重组ＩＬ－１受体拮抗剂（ｒＩＬ－１ｒａ）的抑制效应。结果表明，ｒＴＮＦα以剂量依赖的方式促进ＨＵＶＥＣ释放ＩＬ－１；刺激８ｈＩＬ－１的释放活性显著提高，２４ｈ达峰值。ｒＩＬ－１也可促进ＨＵＶＥＣ释放ＩＬ－１，随ｒＩＬ－１浓度的增加，ＩＬ－１的释放活性也增加，刺激４ｈ，ＩＬ－１的释放活性即可明显提高（Ｐ＜０．０１）。ｒＩＬ－１ｒａ可抑制由ｒＩＬ－１引起的ＩＬ－１释放，提高ｒＩＬ－１ｒａ的浓度，上清液中ＩＬ－１活性相应减低，当ｒＩＬ－１ｒａ浓度达１０ｍｇ／Ｌ时。 展开更多

关键词 脐静脉 内皮细胞 白细胞介素1 受体 拮抗剂

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血管活性肠肽(VIP)对大鼠Leydig细胞FasL表达及介导Jurkat细胞凋亡的影响

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作者 王保国 王伟 +5 位作者 席晔斌 陈广洁 郝静 沈天伟 蒋黎华 李伟毅 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期291-295,共5页

目的研究VIP对大鼠Leydig细胞FasL表达及介导Jurkat细胞凋亡的影响。方法VIP作用于UU感染的SD大鼠及大鼠Leydig细胞,观察VIP对大鼠Leydig细胞FasL表达的调节,从体外及动物整体水平来探讨VIP对大鼠Leydig细胞FasL表达及介导Jurkat细胞凋... 目的研究VIP对大鼠Leydig细胞FasL表达及介导Jurkat细胞凋亡的影响。方法VIP作用于UU感染的SD大鼠及大鼠Leydig细胞,观察VIP对大鼠Leydig细胞FasL表达的调节,从体外及动物整体水平来探讨VIP对大鼠Leydig细胞FasL表达及介导Jurkat细胞凋亡的影响。结果在睾丸局部感染时,VIP能调节Leydig细胞FasL表达格局并能调节Leydig细胞介导Jurkat细胞的凋亡率。结论VIP参与调节大鼠睾丸局部的免疫豁免。 展开更多

关键词 血管活性肠肽(VIP) LEYDIG细胞 FasL 凋亡 免疫豁免

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HPV6型E6与结核杆菌HSP70融合基因的构建及原核表达

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作者 党育平 范雪莉 +3 位作者 孙林朝 沈柱 王刚 刘玉峰 《中国皮肤性病学杂志》 CAS 北大核心 2005年第12期705-707,共3页

目的构建HPV6型E6抗原与结核杆菌HSP70的融合基因,在大肠杆菌中进行表达和纯化。方法利用PCR方法扩增结核杆菌HSP70基因,插入原核表达载体pGEX-4T-1;经测序正确后,再通过PCR方法扩增HPV6型E6基因片段,测序后插入HSP70基因的5′端,构建HP... 目的构建HPV6型E6抗原与结核杆菌HSP70的融合基因,在大肠杆菌中进行表达和纯化。方法利用PCR方法扩增结核杆菌HSP70基因,插入原核表达载体pGEX-4T-1;经测序正确后,再通过PCR方法扩增HPV6型E6基因片段,测序后插入HSP70基因的5′端,构建HPV6E6与结核杆菌HSP70的N端融合基因原核表达质粒pGEX-E6-HSP70;在含有该质粒的大肠杆菌DH5α,进行诱导表达和分离纯化。结果成功地构建了pGEX-E6-HSP70原核表达质粒,诱导表达产物与抗GST抗体在113 kD处有很强的交叉反应;大肠杆菌超声破碎后的上清液用SDS-PAGE检测到表达的蛋白多为可溶性融合蛋白;经GST融合蛋白表达系统纯化,得到了E6与结核杆菌HSP70的可溶性融合蛋白。结论成功获得HPV6型E6与结核杆菌HSP70的融合蛋白,为研究HPV6型E6与结核杆菌HSP70融合蛋白疫苗在尖锐湿疣治疗中的作用提供了材料。 展开更多

关键词 结核杆菌 热休克蛋白70 人乳头瘤病毒6型 融合基因 原核表达

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不同激酶活性的hPAK6基因原核表达载体的构建及重组蛋白的表达

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作者 刘彤 李洋 +1 位作者 朱戈 李丰 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期1057-1059,1071,共4页

目的构建不同激酶活性的hPAK6原核表达载体并诱导和鉴定其融合蛋白表达。方法野生型、激酶活型和激酶死型pcDNA3.1-PAK6经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后,克隆至GST融合表达载体pGEX-5X-1,在E.coli BL21中诱导不同型GST-hPAK6融合蛋白表达,并经... 目的构建不同激酶活性的hPAK6原核表达载体并诱导和鉴定其融合蛋白表达。方法野生型、激酶活型和激酶死型pcDNA3.1-PAK6经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后,克隆至GST融合表达载体pGEX-5X-1,在E.coli BL21中诱导不同型GST-hPAK6融合蛋白表达,并经免疫印迹鉴定结果。结果野生型、激酶活型和激酶死型hPAK6编码序列已被克隆至GST融合表达载体pGEX-5X-1,双酶切及测序鉴定正确,并在E.coli BL21中获得了诱导表达,蛋白的分子量均为101 kDa,免疫印迹检测到了融合蛋白表达。结论成功构建不同激酶活性的hPAK6基因原核表达载体,并分别诱导表达出GST-PAK6融合蛋白。 展开更多

关键词 PAK6基因 激酶活型 激酶死型 原核表达 融合蛋白

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