目的通过动物和体外培养的软骨细胞观察糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)对软骨细胞线粒体功能的损伤作用,并探讨相关机制。方法小鼠膝关节腔直接注射AGEs,番红O-固绿染色评估病理学改变;JC-1检测线粒体膜电位ΔΨ...目的通过动物和体外培养的软骨细胞观察糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)对软骨细胞线粒体功能的损伤作用,并探讨相关机制。方法小鼠膝关节腔直接注射AGEs,番红O-固绿染色评估病理学改变;JC-1检测线粒体膜电位ΔΨm;Western blot检测腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphate-activated protein kinase,AMPK)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助活化因子α(peroxisome proliferator-activated receptorγcoactivator-1α,PGC-1α)、去乙酰化酶3(sirtuin3,SIRT3)及基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-3、-13的表达。结果膝关节注射AGEs 8周后,小鼠出现骨关节炎样病理改变;在体外培养的软骨细胞中,AGEs可以损伤线粒体功能,同时p-AMPK、SIRT3和PGC-1α的表达减少;给予AMPK选择性激动剂AICAR则可以拮抗AGEs的上述作用,而特异性敲除SIRT3或PGC-1α后,AICAR此拮抗作用减弱。结论AGEs可能通过下调AMPK-PGC-1α-SIRT3信号通路诱导软骨细胞线粒体功能损伤,进而促进OA病变。展开更多
目的探讨高寒环境对骨骼肌功能及骨关节炎病理进程的影响,旨在揭示寒冷条件下骨骼肌萎缩、纤维化与关节退变之间的相互作用机制,为高寒地区官兵运动系统健康防护提供理论依据。方法40只11周龄C57BL/6雄性小鼠按内侧半月板失稳术(destabi...目的探讨高寒环境对骨骼肌功能及骨关节炎病理进程的影响,旨在揭示寒冷条件下骨骼肌萎缩、纤维化与关节退变之间的相互作用机制,为高寒地区官兵运动系统健康防护提供理论依据。方法40只11周龄C57BL/6雄性小鼠按内侧半月板失稳术(destabilization of the medial meniscus,DMM)术后8、12周2个时间点分层,每个时间点下使用随机数字表法设4组(n=5):22℃假手术(22℃Sham)组、4℃假手术(4℃Sham)组、22℃DMM组和4℃DMM组。DMM术后2周,4℃Sham与4℃DMM组每日置于湿度(50±5)%、4℃低温舱暴露12 h,持续至相应终点;22℃Sham与22℃DMM组常规常温环境饲养。在干预8、12周时进行以下评估:①行为学测试:采用CatWalk系统量化步态参数,双足平衡测试评估肢体承重能力,旷场实验记录自发活动距离与时间,并在体测定股四头肌单收缩力(twitch)、强直收缩力(tetanus)及力-频率曲线(force-frequency curve)。②组织病理学分析:取股四头肌与膝关节组织,经石蜡包埋、切片后行HE染色和番红O-固绿染色,评估滑膜炎症细胞浸润、软骨表面完整性及国际骨关节炎研究学会(osteoarthritis research society international,OARSI)评分,同时通过Masson三色染色观察肌纤维胶原沉积。③分子检测:采用免疫荧光技术以Dystrophin抗体标记肌纤维边界并计算横截面积,免疫组化法检测滑膜组织中IL-1β、TNF-α的阳性表达水平。结果①小鼠行为学表现异常。与22℃DMM组相比,4℃DMM组在8、12周2个时间点均呈现显著加重的功能障碍:a.步态协调性丧失,8周时右后肢相对站立相时间降低0.113(P<0.001)、足迹面积降低0.102(P<0.05)、摆动相时间增加0.115(P<0.05)、单肢站立时间降低0.146(P<0.01);至12周上述异常持续存在,足迹面积差异扩大至0.154(P<0.05),摆动相时间仍维持0.113的升高幅度(P<0.05)。b.承重能力衰退,8周时右足承重占比降低2.777%(P<0.001),12周时降低程度进一步扩大至5.156%(P<0.0001)。c.自发活动抑制,8周时总活动距离减少1069 cm(P<0.0001),12周时仍减少429.3 cm(P<0.05)。②关节组织病理损伤加剧。寒冷暴露协同DMM手术显著加重滑膜炎症与软骨破坏:a.滑膜病变,4℃DMM组相较22℃DMM组在8周时滑膜病理评分增加2.133分(P<0.01),12周时增至2.833分(P<0.001),提示炎症反应持续升级。b.软骨退变,4℃DMM组相较22℃DMM组在8周时OARSI最大评分升高1.000分(P<0.05)、总评分升高2.000分(P<0.01);12周时最大评分仍有0.750分的升高趋势,总评分维持2.000分的差异趋势。c.促炎因子表达上调,4℃DMM组相较22℃DMM组,滑膜IL-1β相对表达面积在8周和12周分别增加1.047%(P<0.05)和1.892%(P<0.05);TNF-α表达面积较同期分别增加3.850%(P<0.0001)和3.806%(P<0.0001)。③骨骼肌结构与收缩功能复合性损伤。寒冷干预导致股四头肌出现肌肉萎缩、力学性能衰退及纤维化重塑三重病理改变:a.肌力储备耗竭,Twitch在8周和12周分别降低34.77 mN·m/kg(P<0.01)和52.87 mN·m/kg(P<0.05);Tetanus同期分别降低115.0 mN·m/kg(P<0.05)和138.3 mN·m/kg(P<0.0001),Force-frequency curve下移。b.肌萎缩,股四头肌质量比在8周和12周分别降低0.076%(P<0.05)和0.102%(P<0.0001);肌纤维横截面积(cross-sectional area,CSA)同期分别减少261.3μm^(2)(P<0.05)和233.5μm^(2)(P<0.01),小直径肌纤维比例增高。c.纤维化沉积,肌组织胶原纤维相对面积在8周和12周分别增加4.072%(P<0.01)和2.238%(P<0.05),提示细胞外基质异常重构。结论高寒环境不仅可直接加剧骨关节炎的滑膜炎症与软骨退变,还能通过诱导股四头肌萎缩、肌力下降及纤维化等,进一步加剧关节结构与功能的恶化。展开更多
文摘目的探讨高寒环境对骨骼肌功能及骨关节炎病理进程的影响,旨在揭示寒冷条件下骨骼肌萎缩、纤维化与关节退变之间的相互作用机制,为高寒地区官兵运动系统健康防护提供理论依据。方法40只11周龄C57BL/6雄性小鼠按内侧半月板失稳术(destabilization of the medial meniscus,DMM)术后8、12周2个时间点分层,每个时间点下使用随机数字表法设4组(n=5):22℃假手术(22℃Sham)组、4℃假手术(4℃Sham)组、22℃DMM组和4℃DMM组。DMM术后2周,4℃Sham与4℃DMM组每日置于湿度(50±5)%、4℃低温舱暴露12 h,持续至相应终点;22℃Sham与22℃DMM组常规常温环境饲养。在干预8、12周时进行以下评估:①行为学测试:采用CatWalk系统量化步态参数,双足平衡测试评估肢体承重能力,旷场实验记录自发活动距离与时间,并在体测定股四头肌单收缩力(twitch)、强直收缩力(tetanus)及力-频率曲线(force-frequency curve)。②组织病理学分析:取股四头肌与膝关节组织,经石蜡包埋、切片后行HE染色和番红O-固绿染色,评估滑膜炎症细胞浸润、软骨表面完整性及国际骨关节炎研究学会(osteoarthritis research society international,OARSI)评分,同时通过Masson三色染色观察肌纤维胶原沉积。③分子检测:采用免疫荧光技术以Dystrophin抗体标记肌纤维边界并计算横截面积,免疫组化法检测滑膜组织中IL-1β、TNF-α的阳性表达水平。结果①小鼠行为学表现异常。与22℃DMM组相比,4℃DMM组在8、12周2个时间点均呈现显著加重的功能障碍:a.步态协调性丧失,8周时右后肢相对站立相时间降低0.113(P<0.001)、足迹面积降低0.102(P<0.05)、摆动相时间增加0.115(P<0.05)、单肢站立时间降低0.146(P<0.01);至12周上述异常持续存在,足迹面积差异扩大至0.154(P<0.05),摆动相时间仍维持0.113的升高幅度(P<0.05)。b.承重能力衰退,8周时右足承重占比降低2.777%(P<0.001),12周时降低程度进一步扩大至5.156%(P<0.0001)。c.自发活动抑制,8周时总活动距离减少1069 cm(P<0.0001),12周时仍减少429.3 cm(P<0.05)。②关节组织病理损伤加剧。寒冷暴露协同DMM手术显著加重滑膜炎症与软骨破坏:a.滑膜病变,4℃DMM组相较22℃DMM组在8周时滑膜病理评分增加2.133分(P<0.01),12周时增至2.833分(P<0.001),提示炎症反应持续升级。b.软骨退变,4℃DMM组相较22℃DMM组在8周时OARSI最大评分升高1.000分(P<0.05)、总评分升高2.000分(P<0.01);12周时最大评分仍有0.750分的升高趋势,总评分维持2.000分的差异趋势。c.促炎因子表达上调,4℃DMM组相较22℃DMM组,滑膜IL-1β相对表达面积在8周和12周分别增加1.047%(P<0.05)和1.892%(P<0.05);TNF-α表达面积较同期分别增加3.850%(P<0.0001)和3.806%(P<0.0001)。③骨骼肌结构与收缩功能复合性损伤。寒冷干预导致股四头肌出现肌肉萎缩、力学性能衰退及纤维化重塑三重病理改变:a.肌力储备耗竭,Twitch在8周和12周分别降低34.77 mN·m/kg(P<0.01)和52.87 mN·m/kg(P<0.05);Tetanus同期分别降低115.0 mN·m/kg(P<0.05)和138.3 mN·m/kg(P<0.0001),Force-frequency curve下移。b.肌萎缩,股四头肌质量比在8周和12周分别降低0.076%(P<0.05)和0.102%(P<0.0001);肌纤维横截面积(cross-sectional area,CSA)同期分别减少261.3μm^(2)(P<0.05)和233.5μm^(2)(P<0.01),小直径肌纤维比例增高。c.纤维化沉积,肌组织胶原纤维相对面积在8周和12周分别增加4.072%(P<0.01)和2.238%(P<0.05),提示细胞外基质异常重构。结论高寒环境不仅可直接加剧骨关节炎的滑膜炎症与软骨退变,还能通过诱导股四头肌萎缩、肌力下降及纤维化等,进一步加剧关节结构与功能的恶化。
