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溶藻弧菌抗独特型抗体单链抗体基因真核表达载体的构建 被引量：2
1
作者 付建芳 黄威权 +2 位作者 秦红 金晓航 杨安钢 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期767-768,771,共3页
目的:构建溶藻弧菌抗独特型抗体的单链抗体(scFv)基因的毕赤酵母分泌型表达载体。方法:从分泌溶藻弧菌抗独特型抗体的杂交瘤细胞株(2F4)中克隆该抗体的重链可变区(VH)基因和轻链可变区(VL)基因(GenBank acces-sion No:DQ011530和DQ01153... 目的:构建溶藻弧菌抗独特型抗体的单链抗体(scFv)基因的毕赤酵母分泌型表达载体。方法:从分泌溶藻弧菌抗独特型抗体的杂交瘤细胞株(2F4)中克隆该抗体的重链可变区(VH)基因和轻链可变区(VL)基因(GenBank acces-sion No:DQ011530和DQ011531),并通过基因重组为scFv基因。然后将其克隆入毕赤酵母菌分泌型表达载体pPIC9K中,经序列测定后,电转化入毕赤酵母菌SMD1168中,将经表型筛选和G418抗性筛选的重组酵母菌株进行PCR鉴定。结果:获得毕赤酵母菌分泌型表达载体pPIC9K-scFv,经G418浓度梯度筛选及PCR鉴定得到高拷贝整合的重组酵母菌株。结论:成功地构建溶藻弧菌抗独特型抗体的scFv基因的真核表达载体,为进一步研究其生物学活性奠定了基础。 展开更多
关键词 溶藻弧菌 单链抗体 真核表达 毕赤酵母菌
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抗迟缓爱德华菌独特型单克隆抗体重链可变区基因的克隆及序列分析 被引量：2
2
作者 秦红 黄威权 +2 位作者 杨向民 温伟红 杨安钢 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期155-156,共2页
目的克隆并分析迟缓爱德华菌抗独特型单克隆抗体(mAb)VH基因。方法从分泌迟缓爱德华菌抗独特型mAb的杂交瘤细胞株(1E11)中提取总RNA,利用RT-PCR技术,扩增迟缓爱德华菌抗独特型抗体VH基因,并将其克隆到PBS-Tvector中进行序列分析。结果V... 目的克隆并分析迟缓爱德华菌抗独特型单克隆抗体(mAb)VH基因。方法从分泌迟缓爱德华菌抗独特型mAb的杂交瘤细胞株(1E11)中提取总RNA,利用RT-PCR技术,扩增迟缓爱德华菌抗独特型抗体VH基因,并将其克隆到PBS-Tvector中进行序列分析。结果VH基因的全长序列为339bp,编码113个氨基酸。通过NCBI/BLAST/N和IMGT数据库(Lefrance,2001)分析表明,VH基因符合小鼠IgGV区基因的特征含有4个框架区(FR),3个抗原互补决定区(CDR)及两个抗体特征性的半胱氨酸。结论成功地克隆了迟缓爱德华菌抗独特型mAbVH基因,为进一步构建迟缓爱德华菌抗独特型抗体基因工程疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 迟缓爱德华菌 抗独特型抗体 基因克隆 序列分析
原文传递
抗溶藻弧菌独特型单克隆抗体单链抗体ScFv的构建和表达 被引量：2
3
作者 付建芳 黄威权 +1 位作者 夏永娟 杨安钢 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第10期735-738,共4页
目的:克隆抗溶藻弧菌独特型单克隆抗体ScFv。方法:从分泌抗溶藻弧菌独特型单克隆抗体的杂交瘤细胞株(2F4)中提取总RNA,利用RT-PCR技术,克隆该抗体重链可变区基因(VH)和轻链可变区基因(VL),通过基因重组构建VH-VL的表达载体pTAT-AL1,转... 目的:克隆抗溶藻弧菌独特型单克隆抗体ScFv。方法:从分泌抗溶藻弧菌独特型单克隆抗体的杂交瘤细胞株(2F4)中提取总RNA,利用RT-PCR技术,克隆该抗体重链可变区基因(VH)和轻链可变区基因(VL),通过基因重组构建VH-VL的表达载体pTAT-AL1,转化大肠杆菌BL21后用IPTG诱导表达。结果:VH基因序列全长369碱基对,编码123个氨基酸,VL基因序列全长339碱基对,编码113个氨基酸,二者均符合小鼠免疫球蛋白可变区基因特征,含有4个框架区(FRs)、3个抗原互补决定区(CDRs)及抗体特征性的两个半胱氨酸残基。ELISA测定显示基因工程抗体ScFv与原代抗体一样,具有较高的抗原亲和力。结论:成功构建了抗溶藻弧菌独特型抗体ScFv基因并表达于细菌壁膜间隙和包涵体中,为溶藻弧菌独特型抗体单链抗体ScFv成为新一代基因工程疫苗奠定了初步基础。 展开更多
关键词 溶藻弧菌 单链抗体 基因工程疫苗
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蒙古高原种子植物属的区系地理分析 被引量：5
4
作者 岳秀贤 袁帅 +1 位作者 马少薇 刘果厚 《草地学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期312-320,共9页
通过3年的实地调查,查阅多个标本馆标本及相关资料,研究了蒙古高原种子植物属的组成和区系特征,以期探讨其起源与演化。结果表明:该区有种子植物115科761属4 280种,与中国植物区系相比,本区种子植物区系物种相对贫乏,特有程度较低;区域... 通过3年的实地调查,查阅多个标本馆标本及相关资料,研究了蒙古高原种子植物属的组成和区系特征,以期探讨其起源与演化。结果表明:该区有种子植物115科761属4 280种,与中国植物区系相比,本区种子植物区系物种相对贫乏,特有程度较低;区域植物具有典型的温带性质,其区系地理成分复杂,联系广泛,与热带成分具有一定的亲缘关系。植物区系优势现象不显著,以单型属和少型属为主。蒙古高原植物区系表现出强烈的旱生性和古老性。从植物区系发生角度分析,蒙古高原植物区系的起源可归结为古地中海成分、东亚成分、温带成分和本地起源。 展开更多
关键词 种子植物 属的组成 地理成分 起源与演化 蒙古高原
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