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FGF信号途径介导鹿角杯形珊瑚水螅体高温脱离的分子机制探究
1
作者 王艺 余秋玉 +2 位作者 曾赛男 刘兆群 周智 《海洋学报》 北大核心 2026年第1期42-55,共14页
本研究从鹿角杯形珊瑚(Pocillopora damicornis)中鉴定并克隆了2个成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor,FGF)基因,命名为PdFGF1和PdFGF17。序列分析结果表明,PdFGF1与Pd-FGF17分别编码195个和149个氨基酸,均含有信号肽和典型的... 本研究从鹿角杯形珊瑚(Pocillopora damicornis)中鉴定并克隆了2个成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor,FGF)基因,命名为PdFGF1和PdFGF17。序列分析结果表明,PdFGF1与Pd-FGF17分别编码195个和149个氨基酸,均含有信号肽和典型的FGF结构域,并具有β-折叠、η-环等拓扑结构。高等动物FGF家族分为FGF1、FGF4、FGF7、FGF8、FGF9、FGF11、FGF19等7个亚家族。多序列比对和系统进化树分析结果表明,PdFGF1属于FGF1亚家族,与人(Homo sapiens)FGF1的序列一致性为30.15%;PdFGF17属于FGF8亚家族,与人FGF1的序列一致性为29.36%。为进一步揭示Pd-FGF1和PdFGF17的生物学功能,本研究分析了高温诱导鹿角杯形珊瑚水螅体脱离的转录组数据,发现在水螅体高温脱离过程中FGF家族基因(PdFGF1、PdFGF2、PdFGF9、PdFGF17、PdFGF18、PdFGFR1、PdFGFR2、PdFGFR3及PdFGFR4)的表达水平显著上升,且FGF信号途径能够激活下游Ras/MAPK级联反应,驱动细胞骨架重构与细胞黏附调节;Cytoscape基因共表达网络分析还揭示FGF与珊瑚共肉(coenosarc)胞外基质(extracellular matrix,ECM)降解相关基因(ADAMTSs、COL21A1、CTSZ、P4HA等)存在显著共表达关系。综上,本研究发现高温激活了鹿角杯形珊瑚的FGF信号途径,促进了共肉组织ECM的降解,进而介导共肉裂解和水螅体脱离。 展开更多
关键词 成纤维细胞生长因子 水螅体脱离 热胁迫 加权基因共表达网络分析 基因克隆
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枯草芽胞杆菌漆酶的异源表达及催化腰果酚氧化聚合的研究
2
作者 张丹 王世依 +2 位作者 蔡冬波 陈守文 马昕 《湖北大学学报(自然科学版)》 2026年第1期142-152,共11页
漆酶是存在于自然界中的一类氧化还原酶,可以催化多元酚的氧化反应。为了实现漆酶的绿色制备并应用在催化腰果酚氧化聚合领域,本研究利用大肠杆菌Rosetta(DE3)异源表达枯草芽胞杆菌来源的漆酶CotA^(Bs),实现了CotA^(Bs)的可溶性高效表达... 漆酶是存在于自然界中的一类氧化还原酶,可以催化多元酚的氧化反应。为了实现漆酶的绿色制备并应用在催化腰果酚氧化聚合领域,本研究利用大肠杆菌Rosetta(DE3)异源表达枯草芽胞杆菌来源的漆酶CotA^(Bs),实现了CotA^(Bs)的可溶性高效表达;利用镍柱亲和层析纯化获得高纯度蛋白。酶学性质研究表明,CotA^(Bs)最适反应条件为pH 4.5和温度40℃,且在1 mmol/L Cu^(2+)存在下酶活为31.8 U/mL。应用方面,CotA^(Bs)成功催化腰果酚氧化聚合,体系颜色由浅黄渐变为深红褐色,流动性显著降低,证实其成膜潜力。结果表明,原核漆酶CotA^(Bs)具备热稳定性高、底物兼容性强及低成本制备优势,为环保涂层开发提供了技术基础。 展开更多
关键词 漆酶 异源表达 腰果酚 氧化聚合
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黄色瘤胃球菌阿拉伯呋喃糖苷酶基因α-ara的异源表达与酶学性质研究
3
作者 毕海红 胡馨元 夏呈强 《动物营养学报》 北大核心 2026年第1期738-750,共13页
本研究旨在克隆黄色瘤胃球菌阿拉伯呋喃糖苷酶基因α-ara并在大肠杆菌表达系统中实现其可溶性表达,同时探讨其表达产物阿拉伯呋喃糖苷酶α-Ara的酶学性质。以黄色瘤胃球菌基因组DNA为模板,通过PCR技术扩增目的基因α-ara,将其与表达载体... 本研究旨在克隆黄色瘤胃球菌阿拉伯呋喃糖苷酶基因α-ara并在大肠杆菌表达系统中实现其可溶性表达,同时探讨其表达产物阿拉伯呋喃糖苷酶α-Ara的酶学性质。以黄色瘤胃球菌基因组DNA为模板,通过PCR技术扩增目的基因α-ara,将其与表达载体pET28a连接构建重组载体pET28a-α-ara,转化至大肠杆菌BL21(DE3)后,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,采用镍离子亲和层析柱纯化获得目标酶,对其进行生物信息学分析与酶学性质表征。结果显示:α-Ara的蛋白理论分子质量为106.87 ku,预测等电点为4.96,含有信号肽序列、1个纤维小体Dockerin结构域及3个催化结构域,属于糖苷水解酶43(GH43)家族。该酶的最适pH为6.0,在pH 6.0~9.0时具有较好的稳定性;最适温度为50℃,在温度≤50℃时能维持80%以上酶活性;镁离子(Mg^(2+))、钾离子(K^(+))、钴离子(Co^(2+))、钠离子(Na^(+))、钡离子(Ba^(2+))和锰离子(Mn^(2+))对其有较好的激活效果,而铜离子(Cu^(2+))、镍离子(Ni^(2+))和乙二胺四乙酸(EDTA)则表现出明显抑制效应;以对硝基苯-α-L-阿拉伯呋喃糖苷为底物(浓度1.0~6.0 mmol/L)时,其米氏常数(K_(m))为5.093 mmol/L,最大反应速度(V_(max))为9.234μmol/(min·mg),催化常数(kcat)为0.6325 s^(-1),酶比活性达8.760 U/mg。综上可知,本研究成功克隆并表达了黄色瘤胃球菌阿拉伯呋喃糖苷酶α-Ara,该酶最适温度为50℃、最适pH为6.0,兼具中温稳定性、宽pH(6.0~9.0)耐受特性及对多种金属离子的响应活性。 展开更多
关键词 黄色瘤胃球菌 阿拉伯呋喃糖苷酶 α-ara基因 异源表达 酶学性质
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知母糖基转移酶UGT708Z1基因的克隆与功能分析
4
作者 张倩 纪中菊 +4 位作者 李志新 董子舒 刘红宁 王晓云 黄佳 《世界科学技术-中医药现代化》 北大核心 2025年第10期2800-2809,共10页
目的 克隆知母糖基转移酶基因UGT708Z1,对其进行生物信息学、原核表达分析以及功能鉴定。方法 基于转录组数据,从知母中挖掘并筛选到一条候选糖基转移酶基因UGT708Z1。根据其全长开放阅读框设计带有同源臂的特异性引物,采用PCR进行基因... 目的 克隆知母糖基转移酶基因UGT708Z1,对其进行生物信息学、原核表达分析以及功能鉴定。方法 基于转录组数据,从知母中挖掘并筛选到一条候选糖基转移酶基因UGT708Z1。根据其全长开放阅读框设计带有同源臂的特异性引物,采用PCR进行基因克隆;通过同源重组技术构建pET-32a(+)-UGT708Z1重组质粒,并利用原核表达和纯化蛋白技术获得可溶性目的蛋白。最后,采用体外酶促反应对UGT708Z1进行功能鉴定。结果 序列分析表明UGT708Z1的开放阅读框为1377 bp,编码458个氨基酸。原核表达结果显示,UGT708Z1成功表达出可溶性目的蛋白,纯化后重组蛋白大小为70.86 kDa。体外酶促反应结果表明,UGT708Z1具有类黄酮7-OH糖基化活性,能够催化淫羊藿素生成淫羊藿次苷Ⅰ。此外,UGT708Z1还具有催化槲皮素和芹菜素的7-O-糖基化活性的功能。结论 本研究从知母中成功克隆并鉴定出一个黄酮醇糖基转移酶UGT708Z1,为后续深入解析黄酮醇苷的生物合成奠定基础。 展开更多
关键词 知母 糖基转移酶 基因克隆 原核表达 功能表征
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ERV1-2B_SSc-LTR-EGFP报告系统的建立及猪克隆胚胎ERVs转录活性的监测
5
作者 付博 马红 +3 位作者 汪亮 郭镇华 王芳 刘娣 《黑龙江动物繁殖》 2025年第4期23-28,共6页
体细胞核移植(SCNT)技术是生产转基因猪模型的核心技术,但猪克隆胚胎的发育能力仍然较低,其早期胚胎的内源性逆转录病毒(ERVs)的表达规律尚待深入研究。研究拟构建以猪基因组内源性逆转录病毒调控元件ERV1-2B_SSc-LTR驱动增强型绿色荧... 体细胞核移植(SCNT)技术是生产转基因猪模型的核心技术,但猪克隆胚胎的发育能力仍然较低,其早期胚胎的内源性逆转录病毒(ERVs)的表达规律尚待深入研究。研究拟构建以猪基因组内源性逆转录病毒调控元件ERV1-2B_SSc-LTR驱动增强型绿色荧光蛋白(EGFP)表达的报告系统。通过脂质体转染获得阳性成纤维细胞株,进行体细胞核移植构建克隆胚胎,并在荧光显微镜下实时监测EGFP表达。结果表明:ERV1-2B_SSc-LTR-EGFP报告系统成功构建;48%的克隆胚胎在4细胞期表达EGFP,表明该元件具有启动子活性。EGFP阳性胚胎的囊胚形成率和细胞数显著高于阴性胚胎[(19.5±1.7)%vs.(14.8±0.5)%,(40.0±2.1)枚vs.(30.0±1.9)枚,P<0.05],提示该报告系统可用于实时监测ERVs活性并辅助评估克隆胚胎质量。 展开更多
关键词 体细胞核移植 长末端重复序列 绿色荧光蛋白报告系统 克隆 胚胎
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基于Smart-seq2挖掘猪早期胚胎pDUXC类基因及其潜在功能分析
6
作者 付博 马红 +4 位作者 汪亮 郭镇华 王芳 霍秀鹏 刘娣 《黑龙江动物繁殖》 2025年第5期45-50,共6页
研究旨在挖掘猪早期胚胎发育中pDUXC类基因及其潜在的功能。采用Smart-seq2单胚胎转录组测序与StringTie组装方法,对4-细胞期猪体外受精胚胎进行系统分析,在17号染色体末端成功识别出DUX类基因pDUXC。通过生物信息学手段对pDUXC蛋白进... 研究旨在挖掘猪早期胚胎发育中pDUXC类基因及其潜在的功能。采用Smart-seq2单胚胎转录组测序与StringTie组装方法,对4-细胞期猪体外受精胚胎进行系统分析,在17号染色体末端成功识别出DUX类基因pDUXC。通过生物信息学手段对pDUXC蛋白进行结构与功能预测。结果显示:pDUXC蛋白含有两个保守的HOX同源域和富含脯氨酸的转录激活区,并具有明显的核定位信号,符合转录因子的典型特征。系统发育分析表明,pDUXC与人类DUX4聚为一支,提示二者在进化上具有高度保守性。综合分析结果推测,pDUXC可能通过激活ERVs参与合子基因组激活(ZGA),进而驱动早期胚胎发育相关基因的表达。 展开更多
关键词 猪 pDUXC类基因 胚胎 转录本组装 Smart-seq2
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第二信使cGMP调控哺乳动物卵母细胞成熟的研究进展 被引量：1
7
作者 黄梦姣 安磊 +1 位作者 田见晖 席广银 《中国畜牧杂志》 北大核心 2025年第6期1-7,共7页
环鸟苷酸(Cyclic Guanosine Monophosphate,cGMP)是一类环化核苷酸,在细胞内扮演着第二信使的角色,可以将胞外信号传导至细胞核内。卵泡发育和卵子发生是雌性生殖活动中的关键事件,虽然cGMP在哺乳动物雌性生殖活动中的作用早有报道,但... 环鸟苷酸(Cyclic Guanosine Monophosphate,cGMP)是一类环化核苷酸,在细胞内扮演着第二信使的角色,可以将胞外信号传导至细胞核内。卵泡发育和卵子发生是雌性生殖活动中的关键事件,虽然cGMP在哺乳动物雌性生殖活动中的作用早有报道,但它在卵母细胞成熟调控中的重要作用近几年才广泛受到关注。现对哺乳动物卵巢中cGMP来源和cGMP相关通路在卵母细胞成熟、颗粒细胞凋亡和卵泡闭锁等方面作用的研究进展进行综述,以期为理解哺乳动物卵母细胞成熟发育的分子调控机理提供新视角,为动物高效繁殖调控技术的开发提供理论依据。 展开更多
关键词 卵母细胞 CGMP 钠肽 减数分裂 卵泡发育
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马鹿鹿茸原代前软骨与软骨细胞电穿孔法转染研究 被引量：1
8
作者 金庆梅 索婧媛 +4 位作者 韩青 高仰 杨帆 吴玄烨 郑冬 《野生动物学报》 北大核心 2025年第1期72-80,共9页
电穿孔转染(电转染)是一种高效、低毒、操作方便的细胞转染技术,但在鹿茸原代细胞中还没有应用的先例。为探索电转染过程中影响鹿茸原代细胞电转染效率和细胞存活率的关键参数,以293T细胞系为平行实验组,将pCMV-C-EGFP质粒电转入马鹿(Ce... 电穿孔转染(电转染)是一种高效、低毒、操作方便的细胞转染技术,但在鹿茸原代细胞中还没有应用的先例。为探索电转染过程中影响鹿茸原代细胞电转染效率和细胞存活率的关键参数,以293T细胞系为平行实验组,将pCMV-C-EGFP质粒电转入马鹿(Cervus elaphus)鹿茸前软骨和软骨原代细胞中。结果显示:(1)在方波条件下,鹿茸前软骨细胞电转染电压500~700 V,脉冲长度0.4~1.4 ms,脉冲次数优选1或2次;而软骨细胞电转染电压500 V,脉冲长度0.2~1.3 ms,脉冲次数1或2次,可以在上述参数基础上进行各原代细胞后续试验优化。(2)物种(鹿、人)、细胞类型(原代细胞、细胞系)以及细胞组织来源(软骨、肾)等要素对电转染效率和细胞存活率结果具有较大影响。(3)电转染效率和细胞存活率通常存在反比关系。(4)原代细胞电转染效率均低于细胞系。研究结果可为电转染技术在鹿茸再生机理研究中的应用提供基础数据。 展开更多
关键词 电穿孔转染 鹿茸原代细胞 质粒 电转染效率 细胞存活率
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基于转录组测序的多伞阿魏 FfeFLS 基因克隆与分析 被引量：1
9
作者 赵静怡 赵金提 +7 位作者 刘芯宇 田志佳 余香雪 李倩 陈博 木古丽 张定国 郭新勇 《种子》 北大核心 2025年第4期70-77,共8页
黄酮醇合成酶基因具有显著提高植株黄酮含量的功能,通过从多伞阿魏中进行基因克隆获得FfeFLS基因,并对其编码的蛋白质进行预测分析。结果表明,蛋白质等电点为5.67,为亲水性蛋白,存在许多与黄酮类合成、激素、光响应相关的作用元件。基... 黄酮醇合成酶基因具有显著提高植株黄酮含量的功能,通过从多伞阿魏中进行基因克隆获得FfeFLS基因,并对其编码的蛋白质进行预测分析。结果表明,蛋白质等电点为5.67,为亲水性蛋白,存在许多与黄酮类合成、激素、光响应相关的作用元件。基因序列与胡萝卜的同源性最高。qRT-PCR结果表明,FfeFLS基因多伞阿魏因在4—6月均有表达,但在6月的表达量显著高于其他月份。 展开更多
关键词 多伞阿魏 FfeFLS基因 生物信息学分析 基因克隆
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薄荷McGATA 5基因克隆及表达特征分析
10
作者 肖桃兰 于盱 +5 位作者 房海灵 亓希武 李莉 陈泽群 柏杨 梁呈元 《植物资源与环境学报》 北大核心 2025年第3期1-11,共11页
为探究GATA转录因子在薄荷(Mentha canadensis Linn.)中的生物学功能,根据薄荷转录组数据克隆了McGATA 5基因,并分析了McGATA5的序列结构、理化特性、系统进化关系、转录自激活活性,McGATA 5的组织表达特性以及激素诱导和非生物胁迫条件... 为探究GATA转录因子在薄荷(Mentha canadensis Linn.)中的生物学功能,根据薄荷转录组数据克隆了McGATA 5基因,并分析了McGATA5的序列结构、理化特性、系统进化关系、转录自激活活性,McGATA 5的组织表达特性以及激素诱导和非生物胁迫条件下McGATA 5在叶片中的表达水平变化。结果显示:薄荷McGATA 5定位于细胞核,基因编码区(CDS)全长849 bp,编码282个氨基酸;McGATA5为亲水性蛋白,理论相对分子质量为30931,理论等电点为pI 6.71。系统进化分析结果表明McGATA 5属于GATAⅠ亚家族。转录自激活活性验证结果表明McGATA5具有转录自激活活性。组织表达分析结果显示McGATA 5在薄荷根、茎、叶、花中均有表达,且在茎、成熟叶、花中的相对表达量显著高于根和幼叶。0.5μmol·L^(-1)24-表油菜素内酯(EBR)、0.1 mmol·L^(-1)脱落酸(ABA)、0.01 mmol·L^(-1)萘乙酸(NAA)和200 mmol·L^(-1)NaCl以及干旱(控水)处理后的McGATA 5相对表达量明显上调,低温(4℃)处理后的McGATA 5相对表达量总体下调。综上所述,薄荷McGATA 5受激素EBR、ABA、NAA诱导表达,并参与NaCl、低温和干旱胁迫的应答过程。 展开更多
关键词 薄荷 GATA5 基因克隆 表达 激素诱导 非生物胁迫
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小鼠S100A9蛋白在枯草芽孢杆菌中的表达及生物学活性分析
11
作者 李婷 李甜甜 +1 位作者 丁明玲 彭勇波 《中南民族大学学报（自然科学版）》 CAS 2025年第1期36-42,共7页
钙结合蛋白S100A9与细胞炎症应答及肿瘤生长等密切相关,但对其生物学功能还不十分清楚.本研究构建了小鼠S100A9基因的枯草芽孢杆菌诱导表达载体,以期获得具有生物活性的S100A9蛋白并探讨其功能.采用无缝克隆将小鼠S100A9基因编码区序列... 钙结合蛋白S100A9与细胞炎症应答及肿瘤生长等密切相关,但对其生物学功能还不十分清楚.本研究构建了小鼠S100A9基因的枯草芽孢杆菌诱导表达载体,以期获得具有生物活性的S100A9蛋白并探讨其功能.采用无缝克隆将小鼠S100A9基因编码区序列克隆至pHT43载体的Pgrac启动子区,并将重组载体pHT43-S100A9转化至芽孢杆菌WB800N菌株,经IPTG诱导S100A9蛋白表达.通过LPS诱导的RAW264.7细胞炎症模型检测了重组蛋白S100A9对炎症应答的调控作用.Western Blot证实了S100A9重组蛋白分泌表达,且在0.2 mmol/L的IPTG、30℃的发酵条件下其表达水平最佳.ELISA检测表明S100A9重组蛋白分泌表达量达到了15.47 ng/mL.分别利用含有1.54、3.09、6.59 ng/mL三种不同浓度S100A9重组蛋白的发酵液上清作用于LPS诱导的RAW264.7细胞,与空载组比较,1.54 ng/mL的S100A9重组蛋白能显著抑制LPS诱导的RAW264.7细胞促炎因子TNF-α及IL-6等的表达(P<0.05). 展开更多
关键词 S100A9蛋白 枯草芽孢杆菌 异源表达 RAW264.7细胞 炎症因子
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噬菌体VB_SauM_Lm44穿孔素HolLm44的克隆表达及其抑菌效果研究
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作者 张欣然 廖毅婷 +3 位作者 熊东炜 李鹏 杨淑华 龙淼 《动物营养学报》 北大核心 2025年第3期2081-2089,共9页
本试验旨在克隆表达金黄色葡萄球菌噬菌体VB_SauM_Lm44穿孔素并研究其抑菌效果。首先,通过分析VB_SauM_Lm44基因组,获得穿孔素基因序列,并利用PCR扩增穿孔素基因(命名为HolLm44,其表达的穿孔素蛋白命名为HolLm44);然后,将目的基因片段... 本试验旨在克隆表达金黄色葡萄球菌噬菌体VB_SauM_Lm44穿孔素并研究其抑菌效果。首先,通过分析VB_SauM_Lm44基因组,获得穿孔素基因序列,并利用PCR扩增穿孔素基因(命名为HolLm44,其表达的穿孔素蛋白命名为HolLm44);然后,将目的基因片段与双酶切处理后的线性pET-28a(+)质粒连接、转化入大肠杆菌DH5α克隆感受态细胞,提取重组质粒并转化入大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)及BL21(DE3)plysS,进行目的蛋白诱导表达和纯化;最后,通过平板抑菌法及刃天青染色法验证穿孔素的抑菌效果,探究穿孔素HolLm44发挥其活性的最适作用条件。结果显示:穿孔素HolLm44具有2个跨膜区,其N-端和C-端都分布于细胞质内,属于Ⅱ类穿孔素。穿孔素HolLm44最适作用温度为37℃,最适作用pH为5.2。在作为指示菌的20株金黄色葡萄球菌中,只有1株为对穿孔素HolLm44表现出敏感性。本研究成功克隆表达出了噬菌体VB_SauM_Lm44中具有活性的穿孔素HolLm44,并证实其具有良好的抑制金黄色葡萄球菌的效果。 展开更多
关键词 噬菌体VB_SauM_Lm44 穿孔素 克隆表达 抑菌 金黄色葡萄球菌
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中国花鲈IgM重链(IgMH)和MHCⅡβ基因的克隆及表达分析
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作者 雷丽娜 高谦 +3 位作者 王伟 孙兆盛 罗璋 刘其根 《水产学报》 北大核心 2025年第6期24-41,共18页
【目的】进一步了解中国花鲈适应性免疫机制在病害防治中的作用。【方法】本研究通过荧光定量PCR(RT-PCR)和快速扩增c DNA末端(RACE)技术克隆获得了免疫球蛋白M重链(IgMH)和主要组织兼容性复合体MHC Ⅱβ基因的全长;通过实时荧光定量PCR... 【目的】进一步了解中国花鲈适应性免疫机制在病害防治中的作用。【方法】本研究通过荧光定量PCR(RT-PCR)和快速扩增c DNA末端(RACE)技术克隆获得了免疫球蛋白M重链(IgMH)和主要组织兼容性复合体MHC Ⅱβ基因的全长;通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测其在中国花鲈各组织的分布情况以及LPS、Poly(I:C)刺激及迟缓爱德华氏菌人工感染后其对应mRNA水平的表达变化情况;实验构建了IgMH-pET21d、IgMCH1-2-pET21d和MHCⅡβ-pET21d原核重组表达质粒,进行重组蛋白表达,并通过分子筛层析技术纯化中国花鲈IgMH、IgMCH1-2和MHCⅡβ重组蛋白,进而制备了抗中国花鲈IgMH的多克隆抗体。【结果】中国花鲈IgMH和MHCⅡβ的cDNA全长分别为1977 bp和1242 bp;二者在鳃、脾脏和头肾等免疫相关组织中对应mRNA表达量较高;LPS、Poly(I:C)刺激及迟缓爱德华氏菌人工感染中国花鲈导致鳃、脾脏和头肾中这两个基因的表达水平发生显著变化,表明IgMH和MHCⅡβ均参与了中国花鲈的抗感染免疫反应;此外,抗中国花鲈IgM的多克隆抗体能与中国花鲈全血清发生强烈反应,与鳜全血清弱反应,与大口黑鲈和草鱼血清不发生反应,推测其反应强度反映了物种间亲缘关系的远近。【结论】本研究首次克隆了中国花鲈的IgMH和MHCⅡβ基因全长,表达了IgMH和MHCⅡβ原核重组蛋白,制备了抗中国花鲈IgM的多克隆抗体,揭示了IgMH和MHCⅡβ参与中国花鲈的抗感染免疫应答,为深入研究中国花鲈的免疫调控机制和疾病防控策略奠定了基础。 展开更多
关键词 中国花鲈 IgMH MHCⅡβ 表达调控 蛋白纯化
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传染性胰腺坏死病毒VP2蛋白单克隆抗体的制备及应用
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作者 吴敏 邵轶智 +2 位作者 卢彤岩 赵景壮 徐黎明 《大连海洋大学学报》 北大核心 2025年第4期575-584,共10页
为了建立传染性胰腺坏死病毒(infectious pancreatic necrosis virus,IPNV)快速诊断方法,通过对IPNV病毒VP2蛋白进行抗原表位预测,筛选出抗原性强、保守性好,且位于蛋白表面第178~191位和第380~393位的两个肽段,分别制备了针对VP2蛋白... 为了建立传染性胰腺坏死病毒(infectious pancreatic necrosis virus,IPNV)快速诊断方法,通过对IPNV病毒VP2蛋白进行抗原表位预测,筛选出抗原性强、保守性好,且位于蛋白表面第178~191位和第380~393位的两个肽段,分别制备了针对VP2蛋白的单克隆抗体VP2-178抗体和VP2-380抗体;对纯化后的抗体进行HRP标记,建立了针对IPNV病毒VP2蛋白的抗原捕获ELISA检测方法。结果表明:捕获抗体为VP2-178抗体,其最佳工作浓度为0.5μg/孔;检测抗体为VP2-380抗体,最佳稀释度为1∶2000;经检测条件优化后,该ELISA方法能够检测国内流行的1型和5型IPNV毒株,但与传染性造血器官坏死病毒、鲤春病毒血症病毒及病毒性出血性败血症病毒均无反应,表明该方法广谱性好、特异性强;灵敏度试验结果显示,该方法对IPNV的最低检测限为62.5 TCID_(50)/mL;重复性结果显示,批内和批间重复性变异系数均小于7%;利用本研究建立的抗原捕获ELISA检测方法与国标方法同时对40份临床样品进行检测,结果显示两者符合率为100%。本研究建立的ELISA检测方法可为IPNV的临床快速诊断提供技术支持。 展开更多
关键词 传染性胰腺坏死病毒 抗原表位 单克隆抗体 抗原捕获ELISA
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纤维改良转基因棉花的研究现状 被引量：2
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作者 王晓元 柏锡 +1 位作者 王建胜 崔洪志 《生物技术进展》 2025年第1期11-18,共8页
棉花作为天然纤维,是最重要的纺织工业原料,为全球最重要的经济作物之一。随着对高品质棉纤维的需求逐渐增加,提高产量和改良棉花纤维品质都是当前我国棉花育种的重要目标。调控棉纤维发育的关键因子和相关功能基因的发掘,不仅有助于了... 棉花作为天然纤维,是最重要的纺织工业原料,为全球最重要的经济作物之一。随着对高品质棉纤维的需求逐渐增加,提高产量和改良棉花纤维品质都是当前我国棉花育种的重要目标。调控棉纤维发育的关键因子和相关功能基因的发掘,不仅有助于了解棉纤维发育机制,而且可为培育优质棉纤维新品种提供新的思路。从纤维伸长、细胞骨架结构蛋白、植物激素、糖类物质代谢和木质素代谢5个方面概述了相关因子在纤维发育和调控中的重要作用,以及纤维改良转基因棉花的研究进展,以期为进一步解析调控棉纤维发育的分子机理,为提高棉纤维品质的相关研究提供参考。 展开更多
关键词 转基因棉花 纤维发育 纤维品质改良
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植物乳杆菌NCU116中谷氨酸脱羧酶的挖掘及其酶学特性探究 被引量：1
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作者 张静 周海丽 +2 位作者 彭飞 熊涛 彭珍 《南昌大学学报(工科版)》 2025年第2期128-136,共9页
谷氨酸脱羧酶(GAD)是生产γ-氨基丁酸(GABA)的关键限速酶,但细胞内酶系较为复杂使得其表达水平较低,微生物序列的基因组挖掘可以作为一种经济的策略来鉴定和生产具有良好性能和高活性的新型GAD。本文将植物乳杆菌NCU116的Lp GAD基因进... 谷氨酸脱羧酶(GAD)是生产γ-氨基丁酸(GABA)的关键限速酶,但细胞内酶系较为复杂使得其表达水平较低,微生物序列的基因组挖掘可以作为一种经济的策略来鉴定和生产具有良好性能和高活性的新型GAD。本文将植物乳杆菌NCU116的Lp GAD基因进行克隆,构建了重组质粒pET22b-Lp GAD,随后将其转化至大肠杆菌表达获得重组菌株E.coli BL21(DE3)-pET22b-Lp GAD,经诱导表达和分离纯化获得较高纯度Lp GAD。重组Lp GAD由467个氨基酸编码获得,为同源三聚体,分子质量为53.4 kDa,在278氨基酸位置有一个磷酸吡哆醛结合位点的保守赖氨酸,活性位点为213T和245D。酶学性质研究结果表明,重组Lp GAD在pH 5.0~5.5保持较高活性,在40~60℃时相对酶活较好,能在酸性和低温环境中保持较好的稳定性,K+对重组酶的催化活性具有促进作用。在pH 5.0和50℃条件下,谷氨酸脱羧酶催化L-谷氨酸钠(MSG)脱羧生成GABA的反应动力学参数Km、kcat、kcat/Km、酶的比活力分别为26.95 mmol/L、1.29 s-1、0.42 s^(-1)·mmol^(-1)·L、12.43 U/mg。 展开更多
关键词 基因挖掘 基因工程 生物学分析 酶学性质 Γ-氨基丁酸 谷氨酸脱羧酶 植物乳杆菌
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A-超家族芋螺毒素基因内含子结构及其遗传进化分析
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作者 徐国飞 刘坤鹏 +1 位作者 罗素兰 长孙东亭 《生物学杂志》 北大核心 2025年第5期53-59,共7页
从南海产的帝王芋螺(Conus imperialis)、玉女芋螺(Conus virgo)和大理石芋螺(Conus marmoreus)等3种芋螺的基因组DNA中,通过设计特异性引物进行分子克隆,克隆得到8条A-超家族芋螺毒素前体基因全序列,其中,帝王芋螺4条、玉女芋螺2条、... 从南海产的帝王芋螺(Conus imperialis)、玉女芋螺(Conus virgo)和大理石芋螺(Conus marmoreus)等3种芋螺的基因组DNA中,通过设计特异性引物进行分子克隆,克隆得到8条A-超家族芋螺毒素前体基因全序列,其中,帝王芋螺4条、玉女芋螺2条、大理石芋螺2条,并分析其内含子序列特征、分子进化与食性之间的关系。对A-超家族芋螺毒素基因的序列结构特征进行系统分析,构建其内含子的系统进化树。克隆到的A-超家族芋螺毒素基因内含子长度为139~1010 bp,而GT或TG二核苷酸简单重复序列(单元)均位于内含子末端,表明A-超家族芋螺毒素内含子区可能存在插入/缺失现象。研究首次在帝王芋螺、玉女芋螺和大理石芋螺中克隆出A-超家族芋螺毒素的完整基因序列,表明A-超家族芋螺毒素前体基因内含子的进化受到食性的影响,阐述该超家族基因结构特征及其分子进化机制。此外,同一超家族芋螺毒素前体基因中的内含子具有保守性,可作为特异引物设计的依据,从其他不同种类的芋螺及其个体中发现更多的新芋螺肽氨基酸序列,将为后续人工合成和新药研发提供大量的新分子。 展开更多
关键词 A-超家族芋螺毒素 内含子 简单重复序列 系统进化树 芋螺
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杉虎杂交斑肌球蛋白重链基因分子结构分析及生长相关SNPs筛选
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作者 曹柳 马军 +5 位作者 卢艳 武雅彤 王钧 钟立静 苏珊珊 黄海 《南方水产科学》 北大核心 2025年第4期171-184,共14页
肌球蛋白重链(Myosin heavy chain)参与鱼类肌纤维肥大和增生过程,在肌肉生长和收缩过程中扮演重要角色。为筛选出与生长性状相关的单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphisms,SNPs)位点,采用PCR扩增技术获得海水经济养殖鱼类—... 肌球蛋白重链(Myosin heavy chain)参与鱼类肌纤维肥大和增生过程,在肌肉生长和收缩过程中扮演重要角色。为筛选出与生长性状相关的单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphisms,SNPs)位点,采用PCR扩增技术获得海水经济养殖鱼类——杉虎杂交斑(棕点石斑鱼Epinephelus fuscoguttatus♀×清水石斑鱼E.polyphekadion♂)的肌球蛋白重链基因序列全长,并基于相关性分析筛选与生长性状相关的SNPs位点。结果表明,杉虎杂交斑肌球蛋白重链基因序列全长为12129 bp,包含36个外显子和35个内含子,可编码1934个氨基酸。该基因包含4种类型的蛋白结构域:Myosin_N、MYSc、IQ和Myosin_tail_1。经比对分析发现,该基因的核苷酸序列及蛋白结构域在鲈形目、鲀形目和鲽形目鱼类中均表现出较高的保守性。在肌球蛋白重链基因中检测到62个SNPs位点,其中8个符合Hardy-Weinberg平衡。有12个SNPs位点位于外显子区域,且均与体质量、全长等多个生长表型性状显著相关(p<0.05)。在这12个SNPs位点中仅有g5417 C>G为错义突变,导致丙氨酸变成甘氨酸;其余位点均为同义突变。这些与生长相关的SNPs位点可作为杉虎杂交斑生长分子标记开发的候选位点。 展开更多
关键词 杉虎杂交斑 肌球蛋白重链基因 生长性状 单核苷酸多态性位点
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鹿角杯形珊瑚氨转运体基因PdRhp-1的鉴定与功能初探
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作者 曾赛男 秦郅暄 +2 位作者 王艺 刘兆群 周智 《海洋学报》 北大核心 2025年第11期84-94,共11页
为揭示高温对鹿角杯形珊瑚(Pocillopora damicornis)氨同化作用的影响,阐明造礁石珊瑚的热适应机制,本研究鉴定并克隆了1个鹿角杯形珊瑚氨转运体基因PdRhp-1,其开放阅读框(ORF)全长1 410 bp,编码一条由469 aa组成的多肽链。序列分析结... 为揭示高温对鹿角杯形珊瑚(Pocillopora damicornis)氨同化作用的影响,阐明造礁石珊瑚的热适应机制,本研究鉴定并克隆了1个鹿角杯形珊瑚氨转运体基因PdRhp-1,其开放阅读框(ORF)全长1 410 bp,编码一条由469 aa组成的多肽链。序列分析结果表明,PdRhp-1编码一种疏水性跨膜蛋白,含有12个跨膜结构域,属于Rhesus型氨转运体,其氨基酸序列与人(Homo sapiens)的氨转运体RhCG的一致性为44.14%。为解析PdRhp-1的生物学功能,将其重组表达载体转染至HEK293T细胞,并在培养基中添加氯化铵,发现表达PdRhp-1的细胞总氨摄取率显著高于对照组,说明PdRhp-1具有氨转运功能。同时,分析了高温处理鹿角杯形珊瑚的转录组数据,发现高温显著抑制了PdRhp-1及部分氨同化相关基因的表达。以上结果确认,鹿角杯形珊瑚PdRhp-1编码一个Rhesus型氨转运体,高温可能通过抑制该蛋白介导的氨转运过程影响珊瑚与虫黄藻的共生稳态。 展开更多
关键词 鹿角杯形珊瑚 氨转运体 氨同化作用 高温
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辣椒和烟草瞬时转化中3种报告基因系统表型的比较分析
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作者 刘芬 罗婕 +3 位作者 滕慧 王育捷 赵燕 张学文 《湖南农业大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第6期63-68,共6页
选取反义PDS(antiPDS)、RUBY报告基因系统以及病毒诱导的基因沉默(VIGS)介导的PDS基因沉默等3种报告基因系统,构建了由CaMV 35S启动子调控的pBI121-antiPDS、pTRV2-PDS和1300flag-RUBY植物转化载体,采用根癌农杆菌侵染法将3种报告基因... 选取反义PDS(antiPDS)、RUBY报告基因系统以及病毒诱导的基因沉默(VIGS)介导的PDS基因沉默等3种报告基因系统,构建了由CaMV 35S启动子调控的pBI121-antiPDS、pTRV2-PDS和1300flag-RUBY植物转化载体,采用根癌农杆菌侵染法将3种报告基因系统分别对烟草和辣椒进行瞬时转化,通过分析antiPDS干扰、VIGS及RUBY瞬时表达的表型,研究了3种报告基因系统在烟草和辣椒中的表达效果。3种报告基因系统在烟草叶片中进行瞬时转化验证后将其转入辣椒叶片中。试验结果表明:3种报告基因系统在烟草和辣椒叶片中瞬时转化后均表现出比较明显的表型,其中VIGS和antiPDS均能有效沉默PDS,导致叶片出现白化斑块现象,且前者展现出更强的广泛性和侵染性,符合病毒介导基因沉默的特征;相较之下,antiPDS的抑制功能限制于转化部位的局部区域,缺乏侵染性;RUBY瞬时转化后在绿色叶片上形成红色斑块,但也局限在农杆菌作用的区域。在烟草和辣椒3种报告基因系统的瞬时转化中,VIGS沉默的表型最明显,但这种白化表型会抑制叶片光合功能,影响转化材料的后续生长与繁殖,仅适用于瞬时转化的标记;RUBY系统作为功能获得型报告基因,其表达不影响辣椒后续的生长与繁殖,推测RUBY系统更适合作为辣椒稳定遗传转化的指示基因。 展开更多
关键词 辣椒 烟草 报告基因 瞬时表达
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