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高品质花生DNA提取:CTAB法改良及多维度品质评价
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作者 田冬冬 杜龙 +3 位作者 赵星睿 王柏林 刘爱民 曲明静 《花生学报》 北大核心 2026年第1期123-132,共10页
花生叶片富含多酚、多糖及其他次生代谢物,常规方法或商品化试剂盒无法从中提取高品质DNA,严重阻碍了花生分子生物学研究。本研究以传统CTAB法为基础,根据CTAB裂解液各组分在DNA提取过程中所发挥的作用,以及细胞中DNA和多酚、多糖等物... 花生叶片富含多酚、多糖及其他次生代谢物,常规方法或商品化试剂盒无法从中提取高品质DNA,严重阻碍了花生分子生物学研究。本研究以传统CTAB法为基础,根据CTAB裂解液各组分在DNA提取过程中所发挥的作用,以及细胞中DNA和多酚、多糖等物质在空间上的相分离特性,进行改良优化。首先用PVP和高浓度EDTA组成预处理液,对花生组织进行预处理,从源头上阻断酚类氧化,去除过量多酚、多糖等杂质的同时,有效降低了花生叶片组织黏度;再用高浓度CTAB(3×)裂解液对预处理后的花生组织进行裂解,可以彻底清除蛋白及中性多糖等杂质。结果表明,相比传统CTAB法,改良CTAB法提取的花生叶片基因组DNA纯度极高,OD_(260)/OD_(280)值为1.8~1.9,OD_(260)/OD_(230)值大于2.0,并且提取结果稳定性好;DNA完整性高,能有效扩增出4 kb左右大片段DNA序列;DNA稳定性得到提升,室温(25℃)放置2个月无明显降解迹象。同时,改良CTAB法DNA提取效率大大提升,10 mg叶片即可获得3μg总DNA,即使使用衰老叶片也能高效提取到高品质DNA。上述研究表明,改良CTAB法提高了花生基因组DNA的纯度、完整性、稳定性和提取效率,适合应用于花生分子生物学研究,尤其是珍稀材料的遗传鉴定,同时为富含多酚、多糖等次生代谢产物样本DNA的提取提供了重要参考。 展开更多
关键词 花生叶片 DNA提取 改良CTAB法 多酚 多糖
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甘蓝型油菜冷调节基因BnaCOR27的克隆及表达分析
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作者 彭泱瑜 陈雨蝶 +3 位作者 张泽荣 洪波 邢曼 熊兴华 《山东农业科学》 北大核心 2026年第1期8-16,共9页
COR27基因是一种冷调节基因,在植物响应冷胁迫过程中起重要作用。为探明甘蓝型油菜COR27基因功能,本研究用甘蓝型油菜‘中双11号’作为材料,克隆出一条COR27的CDS序列,全长723 bp,编码240个氨基酸,将其命名为BnaCOR27。生物信息学分析... COR27基因是一种冷调节基因,在植物响应冷胁迫过程中起重要作用。为探明甘蓝型油菜COR27基因功能,本研究用甘蓝型油菜‘中双11号’作为材料,克隆出一条COR27的CDS序列,全长723 bp,编码240个氨基酸,将其命名为BnaCOR27。生物信息学分析结果表明,BnaCOR27蛋白为稳定性较差的亲水性蛋白,无跨膜结构域和信号肽,为非分泌蛋白。多重序列比对显示其与白菜型油菜、灰芥、萝卜等17种植物的COR27蛋白序列同源性不高;系统发育树显示十字花科植物的COR27聚到了一支,其中BnaCOR27与白菜型油菜的COR27进化关系最相近。启动子元件分析表明BnaCOR27的表达不仅受低温诱导,还受光信号调节,在响应冷胁迫及其他逆境胁迫中发挥重要作用。实时荧光定量PCR检测结果显示,BnaCOR27在‘中双11号’不同组织中的表达量呈现叶>根>花>茎>角果的趋势。同时成功构建了过表达载体pCAMBIA1301-BnaCOR27。这可为深入探究BnaCOR27基因在油菜耐寒过程中的作用机制奠定基础,为耐寒油菜分子育种提供理论指导。 展开更多
关键词 COR27 甘蓝型油菜 冷胁迫 生物信息学分析 表达分析 过表达载体
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丹参转录因子基因SmbHLH59的克隆与表达特征分析
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作者 刘聪 王朝阳 +4 位作者 柳江彬 梅显贵 王臣臣 任振丽 宋振巧 《山东农业科学》 北大核心 2026年第1期1-7,共7页
丹参酮是丹参的主要药效成分,合成途径受多种因子的调控。碱性螺旋-环-螺旋(basic helix-loop-helix,bHLH)转录因子家族对植物的生长代谢、活性物质合成、胁迫响应等有重要影响。为探究bHLH在丹参酮合成中的作用,本研究通过基因克隆获... 丹参酮是丹参的主要药效成分,合成途径受多种因子的调控。碱性螺旋-环-螺旋(basic helix-loop-helix,bHLH)转录因子家族对植物的生长代谢、活性物质合成、胁迫响应等有重要影响。为探究bHLH在丹参酮合成中的作用,本研究通过基因克隆获得丹参bHLH家族基因SmbHLH59的全长编码序列,并对其进行生物信息学和表达特征分析。结果表明,SmbHLH59结构保守,含有3个外显子和2个内含子。SmbHLH59蛋白由226个氨基酸组成,呈弱酸性,疏水性较强,属脂溶性蛋白,稳定性差,无规则卷曲数量多,复杂性较高,亚细胞定位于细胞核,与一串红的bHLH126亲缘关系最近。SmbHLH59的启动子区域富含响应植物激素的顺式作用元件。表达分析显示SmbHLH59在丹参红根韧皮部中表达量最高,受茉莉酸甲酯诱导上调表达,推测该基因与红根中丹参酮的合成有关且其作用受到茉莉酸甲酯的调控。本研究结果可为深入研究SmbHLH59基因的功能奠定重要基础。 展开更多
关键词 丹参 bHLH转录因子 基因克隆 生物信息学分析 表达分析
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黄瓜CsHLS2基因的克隆与表达分析
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作者 方凯 杜亚琳 +3 位作者 郝宁 曹嘉健 王春华 武涛 《山东农业科学》 北大核心 2026年第1期17-26,共10页
HLS1为调控植物顶端弯钩的关键基因,同时参与植物发育的多个过程。CsHLS1通过调控黄瓜叶片和叶柄角大小影响黄瓜的株型。然而,CsHLS1在黄瓜中是否有同源基因及其潜在的生物学功能均待于解析。本研究通过构建CsHLS1的系统发育树挖掘到黄... HLS1为调控植物顶端弯钩的关键基因,同时参与植物发育的多个过程。CsHLS1通过调控黄瓜叶片和叶柄角大小影响黄瓜的株型。然而,CsHLS1在黄瓜中是否有同源基因及其潜在的生物学功能均待于解析。本研究通过构建CsHLS1的系统发育树挖掘到黄瓜中与其高度同源的一个蛋白,将其命名为CsHLS2,继而进一步克隆了黄瓜CsHLS2并研究其分子特征和表达特性。结果表明,CsHLS2基因全长2152bp,编码278个氨基酸;编码蛋白分子量为32.25kDa,理论等电点为9.03,不稳定系数为39.24,脂肪系数为84.17,总平均亲水性系数为-0.415,不含信号肽和跨膜结构域,属于稳定蛋白;二级结构以无规卷曲(59.71%)与-螺旋(26.26%)为主;系统发育以及蛋白保守结构域分析结果表明,CsHLS2与甜瓜CmHLS2的亲缘关系最近。对CsHLS2基因启动子进行克隆并分析其作用元件,结果显示该区域含有多个环境响应元件和激素响应元件。RT-qPCR结果表明,该基因在黄瓜的子房和叶柄基部高表达。研究结果可为解析CsHLS2在黄瓜生长发育中的功能提供参考。 展开更多
关键词 黄瓜 CsHLS2 基因克隆 表达模式分析
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RNA干扰沉默褐飞虱糖转运蛋白基因4的研究
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作者 谢坤 丁汉凤 +6 位作者 李娜娜 贾素平 白静 丛韫喆 李广贤 姚方印 杨永义 《山东农业科学》 北大核心 2025年第1期22-29,共8页
褐飞虱是水稻上危害最严重的害虫之一,目前的防治措施存在各种弊端,开展控制褐飞虱的探索研究可开辟新的防治途径。本研究利用dsRNA(double-stranded RNA,双链RNA)介导的RNAi(RNA interference,RNA干扰)技术,以褐飞虱糖运输蛋白基因(Nls... 褐飞虱是水稻上危害最严重的害虫之一,目前的防治措施存在各种弊端,开展控制褐飞虱的探索研究可开辟新的防治途径。本研究利用dsRNA(double-stranded RNA,双链RNA)介导的RNAi(RNA interference,RNA干扰)技术,以褐飞虱糖运输蛋白基因(Nlst4)为靶标,在体外合成Nlst4的dsRNA,将其饲喂褐飞虱若虫后,其体内目标基因表达量显著下降,产生致死表型;构建Nlst4的RNAi干扰载体,通过农杆菌侵染转化培育转基因水稻,褐飞虱取食后,体内目标基因转录水平显著降低,1龄、2龄若虫发育历期显著延长,但未出现致死表型。试验结果证实,利用RNAi技术通过培育转基因水稻防治褐飞虱存在可行性,可为后续转基因抗褐飞虱水稻的培育提供科学依据。 展开更多
关键词 褐飞虱 RNA干扰 糖转运蛋白基因4 人工饲喂 转基因水稻
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小麦生理型雄性不育系差异表达基因筛选与表达模式分析
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作者 付亮 吴国丽 +5 位作者 马华平 李洋 周思远 李永珍 李政 蒋志凯 《山东农业科学》 北大核心 2025年第10期18-27,共10页
为探究化学杂交剂SQ-1诱导小麦花粉败育的分子机制,本研究以西农1376为试验材料,采用RNA-seq技术对SQ-1(5 kg·hm^(-2))处理组(PHYMS-1376)和清水对照组(CK-1376)处理后8、24 h和5 d的小花进行转录组测序,筛选差异表达基因(DEGs),... 为探究化学杂交剂SQ-1诱导小麦花粉败育的分子机制,本研究以西农1376为试验材料,采用RNA-seq技术对SQ-1(5 kg·hm^(-2))处理组(PHYMS-1376)和清水对照组(CK-1376)处理后8、24 h和5 d的小花进行转录组测序,筛选差异表达基因(DEGs),并进行GO富集、KEGG通路及表达模式分析。结果表明,从处理后8、24 h和5 d的PHYMS-1376和CK-1376小花中共鉴定出2827个DEGs,其中有1799个基因显著上调表达,1028个基因显著下调表达。GO分析结果显示,这些DEGs主要富集于光合作用和DNA复制等生物学过程、类囊体膜和细胞壁等细胞组分以及电子传递活性、ATP酶活性等分子功能中。KEGG分析结果显示,这些DEGs主要参与淀粉和蔗糖代谢、谷胱甘肽代谢及苯丙素生物合成等通路。qRT-PCR验证结果显示16个DEGs的表达模式与转录组分析结果基本一致(R 2=0.9856)。综上,SQ-1可能通过干扰活性氧代谢、碳源分配及能量供应等关键通路诱导花粉发育相关物质合成受阻,最终导致雄性不育。这可为进一步探究SQ-1的分子作用机制及小麦杂种优势利用提供一定理论依据。 展开更多
关键词 小麦 化学杂交剂SQ-1 雄性不育 转录组测序 差异表达基因 GO富集分析 KEGG通路分析
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水稻种子OsIAA1和OsIAA24基因的克隆及表达分析
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作者 王娜 金祖英 +2 位作者 章露露 何霞红 王澍 《山东农业科学》 北大核心 2025年第5期29-35,共7页
Aux/IAA(生长素/吲哚-3-乙酸)基因是植物生长素调节的关键基因,可通过调控生长素信号传导调节植物的生长发育,尤其是对种子发育具有促进作用。为明确Aux/IAA基因在不同种植模式(旱地种植和传统水田种植)水稻种子发育中的功能,本研究从水... Aux/IAA(生长素/吲哚-3-乙酸)基因是植物生长素调节的关键基因,可通过调控生长素信号传导调节植物的生长发育,尤其是对种子发育具有促进作用。为明确Aux/IAA基因在不同种植模式(旱地种植和传统水田种植)水稻种子发育中的功能,本研究从水稻(滇禾优615)种子中成功克隆出2个Aux/IAA基因,分别命名为OsIAA1和OsIAA24,其cDNA全长序列分别为600 bp和660 bp,分别编码199个和219个氨基酸。生物信息学分析表明,OsIAA1和OsIAA24均为亲水性不稳定蛋白,且均没有信号肽和跨膜结构域,但均包含AUX/IAA基因家族典型的4个保守结构域,均定位在细胞核。系统进化分析结果表明,OsIAA1和OsIAA24基因编码的氨基酸序列与光稃稻的同源序列相似性分别为99.50%和98.20%。荧光定量PCR(qRT-PCR)分析结果显示,OsIAA1和OsIAA24的表达水平在旱种模式下均显著高于水种模式,推测它们可能参与调控种子发育并在水稻耐旱性调节中发挥关键作用。本研究结果可为深入解析滇禾优615在旱地与水田种植条件下种子发育的分子机制提供理论支持。 展开更多
关键词 水稻 OsIAA1基因 OsIAA24基因 生物信息学分析 表达分析
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苹果属垂丝海棠钾转运基因MhHAK5的克隆及耐低钾功能鉴定
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作者 马翠霞 吴相凯 《山东农业科学》 北大核心 2025年第6期28-36,共9页
钾(K)是植物生长发育必需的矿质元素之一,对产量及品质形成至关重要。HAK5是重要的高亲和力钾转运蛋白,主要介导低钾条件下的钾摄取,然而关于苹果属HAK5的功能知之甚少。本研究以苹果属的垂丝海棠(Malus halliana)为试材,克隆其HAK5(MhH... 钾(K)是植物生长发育必需的矿质元素之一,对产量及品质形成至关重要。HAK5是重要的高亲和力钾转运蛋白,主要介导低钾条件下的钾摄取,然而关于苹果属HAK5的功能知之甚少。本研究以苹果属的垂丝海棠(Malus halliana)为试材,克隆其HAK5(MhHAK5)基因,进行生物信息学分析和组织表达特异性分析,并通过遗传转化手段将该基因在拟南芥中过表达,分析其对低钾处理的响应。结果表明,MhHAK5基因全长1 830 bp,开放阅读框(ORF)全长1 695 bp,编码518个氨基酸;MhHAK5蛋白分子量为60.05 kDa,等电点7.45,存在4个跨膜结构,为不稳定的亲水跨膜蛋白,定位于细胞核内。系统发育分析表明,MhHAK5与拟南芥AtHAK5和AtHAK10、水稻OsHAK5相似性最高,具有Ser-Gly-Gly-Gly氨基酸序列。组织表达特异性分析结果表明,MhHAK5在垂丝海棠根系中的表达量最高,且受低钾诱导。将该基因在拟南芥中过表达,与野生型(WT)相比,过表达MhHAK5能有效提高拟南芥植株在低钾条件下的K+吸收及生长激素合成,从而保障根系发育。综上,MhHAK5在低钾应激反应中发挥重要作用,本研究结果可为低钾苹果砧木的基因改良与选育提供理论依据。 展开更多
关键词 垂丝海棠 MhHAK5基因 生物信息学分析 低钾胁迫 基因表达
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藜麦ANT基因家族的鉴定及其在愈伤组织中的表达分析 被引量:2
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作者 高爱红 张侠 +5 位作者 曹萌 安珂欣 尹海波 郭善利 张平 赵波 《山东农业科学》 北大核心 2025年第4期22-31,共10页
ANT/euANT(AINTEGUMENTA)是一类仅存在于植物中的APETALA2(AP2)型转录因子,隶属于AP2/EREBP家族。本研究利用藜麦基因组数据库,对藜麦ANT基因家族进行鉴定和生物信息学分析,并通过qRT-PCR分析藜麦ANT基因家族成员在不同愈伤组织与芽中... ANT/euANT(AINTEGUMENTA)是一类仅存在于植物中的APETALA2(AP2)型转录因子,隶属于AP2/EREBP家族。本研究利用藜麦基因组数据库,对藜麦ANT基因家族进行鉴定和生物信息学分析,并通过qRT-PCR分析藜麦ANT基因家族成员在不同愈伤组织与芽中的表达。结果表明,在藜麦中共鉴定出13个含有两个AP2保守结构域的ANT基因家族成员,不均匀地分布在藜麦9条染色体上,根据在染色体上的位置将其分别命名为CqANT1—CqANT13。它们编码蛋白的氨基酸长度为244~710 aa,分子量为27.20~77.22 kDa,等电点为5.57~9.21,为不稳定的亲水蛋白,均定位于细胞核。基因共线性分析发现12个CqANT基因组成6对片段复制,未鉴定到串联复制事件。启动子顺式作用元件分析发现,藜麦ANT家族成员的启动子区含有多种激素和环境响应元件,暗示其参与调控藜麦的非生物胁迫及激素信号级联体调控应答等过程。其与双子叶植物拟南芥的ANT同源性较高;表达模式分析结果表明,藜麦ANT基因的表达具有组织特异性,并对非生物胁迫具有一定响应;藜麦ANT基因在发生芽和不同愈伤组织中均有一定的表达,说明其在芽与愈伤组织诱导和维持中发挥重要作用。本研究结果可为进一步揭示藜麦ANT基因的功能和调控机制提供依据。 展开更多
关键词 藜麦 ANT基因家族 生物信息学分析 愈伤组织表达
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洋葱WRKY基因家族鉴定及其在鳞茎发育过程中的表达分析 被引量:1
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作者 李艳伟 王振宝 +3 位作者 杨妍妍 霍雨猛 孙亚玲 刘冰江 《山东农业科学》 北大核心 2025年第1期1-11,共11页
为了探讨洋葱WRKY转录因子家族的功能,本研究基于洋葱全基因组和鳞茎不同发育时期的转录组数据,利用生物信息学方法筛选并鉴定到55个AcWRKY基因家族成员,其编码蛋白序列长度为144~683 aa,等电点为5.11~9.65,脂肪系数为47.14~77.24,均为... 为了探讨洋葱WRKY转录因子家族的功能,本研究基于洋葱全基因组和鳞茎不同发育时期的转录组数据,利用生物信息学方法筛选并鉴定到55个AcWRKY基因家族成员,其编码蛋白序列长度为144~683 aa,等电点为5.11~9.65,脂肪系数为47.14~77.24,均为亲水性蛋白。亚细胞定位预测结果表明,这55个AcWRKY蛋白都定位在细胞核中。进化树分析显示,洋葱WRKY家族基因分为GroupⅠ、GroupⅡ和GroupⅢ三大类,其中GroupⅡ组可进一步分为5个亚组,洋葱和拟南芥WRKY蛋白在各组中均有分布,推测相同组或亚组中洋葱与拟南芥的WRKY转录因子可能具有相似的功能。保守结构域分析发现,所有AcWRKYs均具有高度保守的WRKYGQK基序及其特有的锌指结构,少数成员存在保守结构域的变异。基因结构和保守基序分析结果显示,不同AcWRKY成员的外显子和motif在数量和分布上存在一定差异,同一组或亚组的成员表现出一定的相似性。转录组数据分析结果表明,绝大多数AcWRKYs基因直接或者间接参与了洋葱鳞茎的发育与形成。本研究结果可为深入研究AcWRKY基因在洋葱鳞茎形成中的机制提供参考。 展开更多
关键词 洋葱 WRKY基因家族 生物信息学分析 基因表达 转录组分析
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滇水金凤花距发育相关基因MADS-EJ2和MADS2的克隆及表达分析 被引量:1
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作者 王天野 杨梦情 +3 位作者 马慧 梁光容 黄美娟 黄海泉 《山东农业科学》 北大核心 2025年第9期1-8,共8页
E类MADS-box转录因子基因SEPALLATA(SEP)-like在花器官发育方面发挥着重要作用。为了探究基因SEP-like在滇水金凤(Impatiens uliginosa)花距发育中的功能,本研究成功克隆出基因MADS-EJ2和MADS2,分别命名为IuMADS-EJ2和IuMADS2,其cDNA全... E类MADS-box转录因子基因SEPALLATA(SEP)-like在花器官发育方面发挥着重要作用。为了探究基因SEP-like在滇水金凤(Impatiens uliginosa)花距发育中的功能,本研究成功克隆出基因MADS-EJ2和MADS2,分别命名为IuMADS-EJ2和IuMADS2,其cDNA全长均为762 bp,编码253 aa。生物信息学分析表明,IuMADS-EJ2为亲水性稳定蛋白,IuMADS2为亲水性不稳定蛋白,二者均含MIKC结构,在C-端都有其亚家族特异的SEPⅠ和SEPⅡ基序,均为E类基因;亚细胞定位预测IuMADS-EJ2和IuMADS2均定位在细胞核。IuMADS-EJ2和IuMADS2的氨基酸序列与喜马拉雅凤仙花的同源序列相似性分别为98.03%和95.26%。qRT-PCR分析表明,两基因在滇水金凤花距发育的3个时期及2个不同部位均有表达,IuMADS-EJ2在花苞期距部的表达量最高,IuMADS2在花苞期檐部的表达量最高,推测两基因调控花距发育且主要在花距发育初期发挥作用。本研究结果可为凤仙花花距发育分子机制解析、花形改良和新品种培育提供一定的基础数据和理论依据。 展开更多
关键词 滇水金凤 花距发育 MADS-EJ2基因 MADS2基因 生物信息学分析 表达分析
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山药生长素运输载体基因的表达特点及其对N-(1-奈基)邻氨甲酰苯甲酸的响应
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作者 尹冬 徐升胜 +4 位作者 段延碧 程园 郭凤根 王仕玉 龙雯虹 《山东农业科学》 北大核心 2025年第4期32-39,共8页
为了探讨生长素运输载体基因AUXs和PINs在山药(Dioscorea opposita)生长发育过程中的作用,本研究采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术,通过筛选合适的内参基因,系统研究了生长素运输载体基因AUXs和PINs在山药不同部位茎蔓及其他组织中的... 为了探讨生长素运输载体基因AUXs和PINs在山药(Dioscorea opposita)生长发育过程中的作用,本研究采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术,通过筛选合适的内参基因,系统研究了生长素运输载体基因AUXs和PINs在山药不同部位茎蔓及其他组织中的表达模式,以及其对N-(1-奈基)邻氨甲酰苯甲酸(NPA)的响应。结果如下:利用Delta Ct、NormFinder、geNorm和Comparative△Ct软件对8个候选内参基因(MYB、GADPH、TRX-2、ACT-1、EF-1α、F-box、HIS、α-TUB)的稳定性进行评价,筛选出MYB基因可用作山药不同部位茎蔓中生长素运输载体基因表达分析的内参基因。RT-qPCR分析结果表明,DoAUX2、DoAUX3、DoPIN1、DoPIN3和DoPIN7基因在山药茎蔓幼嫩部位的上端表达量高于下端表达量;DoAUX1、DoAUX2和DoPIN3基因在茎蔓成熟部位的上端表达量高于下端表达量;DoPIN3基因在茎蔓幼嫩部位和成熟部位的上端表达量高于下端。生长素运输载体基因在山药茎尖、叶片、根系、珠芽、雄花及雌花中均有表达,其中,DoAUX1、DoAUX2和DoPIN7基因在叶片中的表达量最高,DoAUX3和DoPIN1基因在茎尖中的表达量显著高于其他组织,DoPIN3和DoPIN6基因在根系中的表达量显著高于其他组织,表现出明显的组织特异性。与清水对照相比,NPA处理显著影响DoAUX1、DoAUX2、DoAUX3、DoPIN1、DoPIN3、DoPIN6和DoPIN7基因的表达,且大多表现为下调表达。综上,生长素运输载体基因通过调控生长素在山药不同组织中的分布调控其生长发育,NPA能通过调控生长素运输载体基因的表达影响生长素在山药植株中的运输。 展开更多
关键词 生长素运输载体基因 山药 表达特点 茎蔓 N-(1-奈基)邻氨甲酰苯甲酸(NPA)
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应用巢式PCR对猪胚胎微量细胞性别的鉴定方法
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作者 刘龑 徐蕴博 +4 位作者 张琦 徐倩倩 尹智 刘忠华 翁晓刚 《东北农业大学学报》 北大核心 2025年第4期47-55,共9页
为建立1种准确可靠的猪胚胎微量细胞性别的鉴定方法,将不同数量细胞样本进行DNA提取纯化后进行PCR扩增,结果表明:当使用纯化的DNA模板进行1轮PCR扩增时,SRY/ZFX引物可在10个细胞中有效扩增,而AMEL和SUSY/SUS12S引物仅在50个细胞以上有... 为建立1种准确可靠的猪胚胎微量细胞性别的鉴定方法,将不同数量细胞样本进行DNA提取纯化后进行PCR扩增,结果表明:当使用纯化的DNA模板进行1轮PCR扩增时,SRY/ZFX引物可在10个细胞中有效扩增,而AMEL和SUSY/SUS12S引物仅在50个细胞以上有效。与纯化DNA模板相比,使用细胞裂解液进行PCR扩增的效果更优,但单次PCR中SUSY/SUS12S和AMEL引物在1或10个细胞样本中未检测到特异性条带。通过设计巢式PCR引物,成功在单细胞中扩增目标基因,特别是AMEL引物效果最佳,并通过Y染色体DNA-FISH检测验证PCR结果准确性。此外,通过在体外受精囊胚中测试建立的巢式PCR方法,表现出良好特异性。 展开更多
关键词 胚胎 单细胞 巢式PCR 性别鉴定
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花生中镰刀菌抗性相关WRKY转录因子的挖掘及功能分析
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作者 朱立飞 王冕 +5 位作者 唐月异 张初署 陈静 周海翔 曹世宁 张建成 《花生学报》 北大核心 2025年第2期117-124,133,共9页
由镰刀菌感染引起的根腐病、果腐病等花生病害严重制约花生产业的发展,镰刀菌相关抗性基因的挖掘以及抗病新品种的培育成为亟待解决的问题。本研究以接种镰刀菌的花育20幼苗为材料,利用转录组测序挖掘花生中的差异表达基因。通过转录因... 由镰刀菌感染引起的根腐病、果腐病等花生病害严重制约花生产业的发展,镰刀菌相关抗性基因的挖掘以及抗病新品种的培育成为亟待解决的问题。本研究以接种镰刀菌的花育20幼苗为材料,利用转录组测序挖掘花生中的差异表达基因。通过转录因子预测、功能注释等方法筛选获得31个受镰刀菌诱导表达的WRKY转录因子;利用多序列比对、保守基序分析、GO分类和KEGG富集分类分析以及蛋白互作网络分析等方法对31个转录因子进行分类及功能鉴定。结果显示:镰刀菌侵染后,31个WRKY转录因子均为上调表达;31个转录因子根据结构域特点分为3类,Ⅰ类4个,Ⅱ类18个、Ⅲ类9个;在植物-病原体互作通路中有4个WRKY转录因子均与VQ蛋白互作,且共同富集在植物MAPK级联途径中。本研究为镰刀菌抗性相关基因的挖掘及功能分析提供了新方向,也为后续开展花生中抗病调控网络机制的解析工作奠定了基础。 展开更多
关键词 花生 WRKY转录因子 镰刀菌 抗性基因挖掘 功能分析
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玉米JRL基因家族全基因组鉴定及表达分析
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作者 张盼 孙海潮 +5 位作者 董文恒 李永江 张莹莹 史丽丽 赵鋆 卢道文 《中国农业科技导报(中英文)》 北大核心 2025年第10期32-41,共10页
JRL(jacalin-related lectin)蛋白是植物凝集素家族成员之一,具有特异糖结合活性,在植物胁迫响应等过程中发挥重要作用。为解析玉米JRL(ZmJRL)基因家族功能,利用生物信息学方法对ZmJRL基因进行鉴定与分析,并利用MaizeGDB网站公布的转录... JRL(jacalin-related lectin)蛋白是植物凝集素家族成员之一,具有特异糖结合活性,在植物胁迫响应等过程中发挥重要作用。为解析玉米JRL(ZmJRL)基因家族功能,利用生物信息学方法对ZmJRL基因进行鉴定与分析,并利用MaizeGDB网站公布的转录组数据检测ZmJRL基因在不同组织和不同胁迫处理下的差异表达情况。结果显示,玉米中共有16个ZmJRL基因,命名为ZmJRL01~ZmJRL16,不均匀分布在玉米7条染色体上,它们的蛋白结构相似,均具有jacalin结构域,多数为碱性稳定蛋白。亚细胞定位结果显示,ZmJRL蛋白主要定位于细胞质、细胞核、叶绿体等部位。系统进化分析将玉米JRL蛋白分为3个类群,与水稻亲缘关系较近,相同类群的ZmJRL蛋白具有相似的保守基序。ZmJRL基因启动子区具有多种非生物胁迫和激素胁迫响应元件。转录组数据分析表明,ZmJRL基因表达具有组织特异性,多数ZmJRL基因能对冷、热、盐、干旱等至少1种逆境胁迫响应表达。以上研究结果为进一步探究ZmJRL基因的生物学功能提供了基础。 展开更多
关键词 玉米 JRL蛋白 ZmJRL基因家族 生物信息学
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稻瘟菌侵染对水稻氮素吸收利用途径相关基因表达的影响
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作者 黄浩 林晋军 +6 位作者 陈文凤 姚威 陈倩茹 黄希来 吴俊 刘雄伦 刘金灵 《山东农业科学》 北大核心 2025年第9期31-40,共10页
稻瘟病是水稻生产中最严重的真菌病害。高氮肥施用容易引发水稻感稻瘟病,但相关遗传基础尚不清楚。为解析氮素吸收利用途径在稻瘟菌侵染过程中的作用,本研究利用实时荧光定量PCR方法对稻瘟菌侵染后水稻氮素吸收、代谢和利用信号途径相... 稻瘟病是水稻生产中最严重的真菌病害。高氮肥施用容易引发水稻感稻瘟病,但相关遗传基础尚不清楚。为解析氮素吸收利用途径在稻瘟菌侵染过程中的作用,本研究利用实时荧光定量PCR方法对稻瘟菌侵染后水稻氮素吸收、代谢和利用信号途径相关基因的表达模式进行分析。结果显示,在分析的33个相关基因中,有22个基因(包括8个硝酸盐转运蛋白基因、3个铵盐转运蛋白基因、3个氮素同化相关基因、5个氮信号调控相关基因和3个氮素利用相关基因)在接种稻瘟菌亲和小种后4 h受到激活显著上调表达,而在侵染中后期(8~96 h),其表达水平与对照相比无显著变化;有28个基因(包括11个硝酸盐转运蛋白基因、4个铵盐转运蛋白基因、5个氮素同化相关基因、5个氮信号调控相关基因和3个氮素利用相关基因)在接种稻瘟菌非亲和小种后(4~96 h)受抑制下调表达。这些结果表明,氮素吸收、代谢和利用信号途径相关基因的激活在促进早期稻瘟菌侵染过程中发挥着重要的作用,可为进一步解析氮素促进水稻感病的分子机制提供参考。 展开更多
关键词 水稻 稻瘟病 氮素促进感病 氮素吸收利用信号途径 基因表达
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分子标记辅助选择Pigm基因改良水稻不育系泰丰A的稻瘟病抗性
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作者 邓吉奇 黄俊 +7 位作者 车凡昊 邹玉莹 周庚 郭成龙 谌强 李家鑫 刘金灵 刘雄伦 《山东农业科学》 北大核心 2025年第10期28-35,共8页
为定向改良水稻细胞质雄性不育(CMS)系泰丰A的稻瘟病抗性,本研究以携带广谱持久抗稻瘟病基因Pigm的水稻品种谷梅4号为供体亲本,先后以保持系泰丰B和不育系泰丰A为受体亲本,利用筛选的Pigm基因共显性标记S29742开展分子标记辅助选择育种... 为定向改良水稻细胞质雄性不育(CMS)系泰丰A的稻瘟病抗性,本研究以携带广谱持久抗稻瘟病基因Pigm的水稻品种谷梅4号为供体亲本,先后以保持系泰丰B和不育系泰丰A为受体亲本,利用筛选的Pigm基因共显性标记S29742开展分子标记辅助选择育种。结果看出,标记S29742在谷梅4号基因组中扩增出554 bp大小的产物,而在两个受体亲本基因组中扩增出的产物大小为745 bp,多态性明显。通过标记S29742选择,结合田间与室内稻瘟病苗瘟抗性鉴定,初步筛选出2个改良不育系泰丰A-Pigm-1和泰丰A-Pigm-2以及配套的改良保持系泰丰B-Pigm-1和泰丰B-Pigm-2。通过育性鉴定、农艺性状调查以及稻米品质分析等,最终遴选出高抗稻瘟病、不育度高、不育性稳定、异交习性好且农艺性状优异的改良不育系泰丰A-Pigm-1及其配套保持系泰丰B-Pigm-1。该结果为进一步培育广谱高抗稻瘟病杂交水稻新组合奠定了基础。 展开更多
关键词 泰丰A 细胞质雄性不育系 稻瘟病抗性 Pigm基因 分子标记辅助选择
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桑树韧皮部蛋白MaPP2基因的克隆及表达分析
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作者 袁梦佳 陈静 +1 位作者 杨金宏 孔卫青 《山东农业科学》 北大核心 2025年第10期36-41,共6页
韧皮部蛋白参与植物的逆境生理和抗性。为明确韧皮部蛋白2基因(PP2)在桑树中的功能,本研究对桑树韧皮部蛋白2基因MaPP2进行了克隆,得到962 bp的序列,编码194个氨基酸,有3个外显子。序列分析结果表明,MaPP2蛋白为亲水蛋白,分子量22.565 k... 韧皮部蛋白参与植物的逆境生理和抗性。为明确韧皮部蛋白2基因(PP2)在桑树中的功能,本研究对桑树韧皮部蛋白2基因MaPP2进行了克隆,得到962 bp的序列,编码194个氨基酸,有3个外显子。序列分析结果表明,MaPP2蛋白为亲水蛋白,分子量22.565 kDa,等电点为8.27,含有PP2基因家族的保守结构域,没有信号肽和跨膜结构域。氨基酸序列比对和系统发育分析结果显示,MaPP2蛋白与川桑和无花果PP2蛋白具有较高的序列相似性,亲缘关系最近。qRT-PCR结果显示,桑植原体侵染和MeJA对MaPP2基因的表达有诱导作用,脱落酸(ABA)和损伤对基因的表达有抑制作用。本研究结果可为深入了解MaPP2基因的功能和作用以及桑树抗性研究提供参考。 展开更多
关键词 桑树 韧皮部蛋白2 表达分析 桑植原体侵染 非生物胁迫
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丹参成花素FT基因家族鉴定及表达分析
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作者 杨盛 刘珊 +4 位作者 孙楠 李佳 黄璐瑶 侯丛哲 刘振华 《山东农业科学》 北大核心 2025年第11期1-9,共9页
FLOWERING LOCUS T(FT)是高等开花植物中成花诱导的关键基因,是植物诱导开花层级基因网络的重要整合子,而丹参FT基因家族的鉴定和分析目前尚未见报道。本研究在丹参基因组中鉴定出FT基因家族并进行生物信息学分析及其在已开花与未开花... FLOWERING LOCUS T(FT)是高等开花植物中成花诱导的关键基因,是植物诱导开花层级基因网络的重要整合子,而丹参FT基因家族的鉴定和分析目前尚未见报道。本研究在丹参基因组中鉴定出FT基因家族并进行生物信息学分析及其在已开花与未开花丹参不同组织中的表达模式分析。结果表明,丹参FT基因家族共包含10个成员,编码165~193个氨基酸,理论等电点为5.45~9.60,相对分子质量为17.85~22.04 kDa,所有成员均为亲水蛋白。丹参FT家族成员基因结构相似,其蛋白序列相对保守。顺式作用元件的预测结果表明,丹参FT基因家族可能参与成花诱导等生长发育过程。进化树结果表明,丹参FT基因家族在YBHB、MFT、FT和TFL亚家族中皆有分布。表达模式分析结果表明,FT基因家族的表达存在明显的组织特异性,总体可分为4类:(1)SmFT、SmFTL2和SmFTL5特异性高表达于已开花丹参的叶片;(2)SmFTL1、SmFTL3和SmFTL8特异性高表达于未开花丹参的叶片;(3)SmFTL4和SmFTL9特异性高表达于已开花丹参的根;(4)SmFTL6和SmFTL7特异性高表达于未开花丹参的根。推测这4组基因协同调控丹参地上部分开花与地下根发育的平衡。研究结果可为通过调节地上地下生物量的分配比选育丹参高产新种质提供育种靶点。 展开更多
关键词 FT基因 丹参 生物信息学分析 表达模式分析 开花诱导
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基于WGCNA的忍冬盐胁迫响应调控网络分析及核心基因发掘
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作者 黄璐瑶 侯丛哲 +4 位作者 刘振华 段童瑶 李壮壮 王彬 李佳 《山东农业科学》 北大核心 2025年第9期9-21,共13页
加权基因共表达网络分析(WGCNA)是一种经典的系统生物学分析方法,可用于鉴定协同表达的基因模块,探索模块与目标性状的生物学相关性,挖掘模块中的核心基因。本研究收集300 mmol·L^(-1)NaCl处理0、12、24、48、72 h的忍冬(Lonicera ... 加权基因共表达网络分析(WGCNA)是一种经典的系统生物学分析方法,可用于鉴定协同表达的基因模块,探索模块与目标性状的生物学相关性,挖掘模块中的核心基因。本研究收集300 mmol·L^(-1)NaCl处理0、12、24、48、72 h的忍冬(Lonicera japonica Thunb.)叶片的15份转录组数据,利用WGCNA方法鉴定忍冬响应盐胁迫的基因共表达网络模块,共得到8个共表达网络模块。其中Brown和Black模块的基因表达模式随NaCl处理时间的延长均表现为由负到正的变化趋势,且两模块的特征向量(ME)之间相关性较高,说明Brown和Black模块是忍冬抗盐相关特异性模块。通过计算模块内基因的连通性挖掘得到Black模块4个核心基因及Brown模块10个核心基因,功能注释表明这些基因可能在忍冬抗盐过程中发挥着重要作用。基因相对表达量分析结果显示,多数核心基因表达量与胁迫时间呈反比,表现为在盐胁迫12 h时表达量增加,而后降低;表达量在盐胁迫12 h时显著增加的核心基因Ljap00036010、Ljap00006511和Ljap00032341均参与植物光响应途径,说明核心基因可能通过快速转录在忍冬盐胁迫应答早期发挥功能,尤其是光响应途径的快速应答。本研究结果提供了对忍冬响应盐胁迫调控网络的进一步了解,对选育耐盐碱植物适应盐碱地、发展金银花产业和盐碱地开发利用至关重要,但核心基因的功能和作用机制还有待深入研究。 展开更多
关键词 忍冬 盐胁迫响应 加权基因共表达网络分析(WGCNA) 基因模块 核心基因
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