玉米胚性愈伤组织的遗传转化及耐草甘膦植株再生 被引量：10

1

作者 余桂容 杜文平 +4 位作者 宋军 窦茜 刘永胜 陆伟 徐利远 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 2010年第4期108-113,共6页

以优良玉米自交系X2211的幼胚胚性愈伤组织为受体材料,采用农杆菌介导法将来自微生物荧光假单胞杆菌(Pseudomonas fluorescens)G2菌株的抗除草剂基因2mG2-epsps转入玉米愈伤组织细胞,转化后的细胞经草甘膦筛选,获得抗性愈伤组织并再生植... 以优良玉米自交系X2211的幼胚胚性愈伤组织为受体材料,采用农杆菌介导法将来自微生物荧光假单胞杆菌(Pseudomonas fluorescens)G2菌株的抗除草剂基因2mG2-epsps转入玉米愈伤组织细胞,转化后的细胞经草甘膦筛选,获得抗性愈伤组织并再生植株282株,成活86株,经特异PCR检测表明其中26株植株转入了2mG2-epsps基因,喷施0.125%除草剂试验检测表明,转基因植株具有良好的耐除草剂特性,为抗除草剂玉米新品种选育提供了较好的亲本材料。 展开更多

关键词 玉米幼胚 遗传转化 草甘膦 2mG2-epsps基因

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贵州地方鸭品种Cytb基因的全序列测定与系统进化分析 被引量：3

2

作者 李辉 易恒洁 +1 位作者 彭邦星 赵忠海 《贵州农业科学》 CAS 北大核心 2013年第9期12-14,共3页

为从分子水平探究贵州地方品种鸭的分类地位和遗传多样性,测定三穗鸭(20只)和兴义鸭(20只)细胞色素b基因全序列。结果显示:三穗鸭和兴义鸭的细胞色素b基因全序列长度都为1 143bp,序列间共有3个SNP多态位点,核苷酸变异类型包括转换和颠换... 为从分子水平探究贵州地方品种鸭的分类地位和遗传多样性,测定三穗鸭(20只)和兴义鸭(20只)细胞色素b基因全序列。结果显示:三穗鸭和兴义鸭的细胞色素b基因全序列长度都为1 143bp,序列间共有3个SNP多态位点,核苷酸变异类型包括转换和颠换,无插入和缺失。共检测到4种单倍型,A、C、G、T 4种碱基的平均含量分别为26.7%、35%、14%和24.3%。结合GenBank中已公布的鸭Cytb基因序列,基于邻接法(NJ法)构建系统进化树。结论:三穗鸭和兴义鸭都与绿头野鸭亲缘关系最近。 展开更多

关键词 鸭 CYTB基因 基因序列 系统进化树 贵州

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TAIL-PCR的技术改良及对香蕉NBS-RGC5基因侧翼序列的克隆 被引量：2

3

作者 罗静瑶 陈云云 +3 位作者 谢俊 韦双双 夏幽泉 汤华 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期143-145,170,共4页

香蕉枯萎病是一种毁灭性真菌病害,对香蕉的种植和产业发展危害严重,研究香蕉枯萎病相关的抗性基因,具有重要的理论意义。对TAIL-PCR进行技术改良,以简并引物组合的方式与特异性引物进行扩增,代替最初的单一简并引物方式,在TAIL-PCR第一... 香蕉枯萎病是一种毁灭性真菌病害,对香蕉的种植和产业发展危害严重,研究香蕉枯萎病相关的抗性基因,具有重要的理论意义。对TAIL-PCR进行技术改良,以简并引物组合的方式与特异性引物进行扩增,代替最初的单一简并引物方式,在TAIL-PCR第一轮扩增的大循环中设置不同的退火温度;采用改良后的TAIL-PCR成功克隆了巴西蕉NBS型抗性蛋白(NBS-RGC5)基因的侧翼序列。 展开更多

关键词 香蕉 枯萎病 热不对称交错PCR(TAIL-PCR) NBS-RGC5 侧翼序列

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农杆菌介导雪莲PBP基因对棉花的遗传转化研究 被引量：1

4

作者 李萍 艾秀莲 +4 位作者 危晓薇 孟庆玉 王博 王志方 黄乐平 《新疆农业大学学报》 CAS 2006年第4期32-36,共5页

雪莲磷脂酰乙醇胺结合蛋白(Phosphatidyl ethanolamine-binding family protein,PBP)基因表达产物与细胞膜的冷稳定性有关,可能在植物抗寒方面起一定作用。本研究将XLPBP基因以农杆菌介导的方法转化新陆早17号、新陆早13号、新陆早1号3... 雪莲磷脂酰乙醇胺结合蛋白(Phosphatidyl ethanolamine-binding family protein,PBP)基因表达产物与细胞膜的冷稳定性有关,可能在植物抗寒方面起一定作用。本研究将XLPBP基因以农杆菌介导的方法转化新陆早17号、新陆早13号、新陆早1号3个品种陆地棉,通过对不同激素浓度、预培养时间、菌液浓度和浸菌时间等因素对转化培养物的影响以及茎段外植体对卡那霉素(Kan)的敏感性等方面的探讨,确定了新陆早13号外植体材料(茎段)的最佳转化条件,即:在OD600为0.4的农杆菌菌液中侵染10 min,在茎段最适培养基(含0.1 mg/L KT和0.1 mg/L 2,4-D,pH5.8)上进行预培养2 d,共培养2 d,转至不含选择压的培养基(含Cef 500 mg/L)上进行延迟培养7 d,再进行选择培养,茎段愈伤分化达25%(诱导出愈伤组织的外植体数占接种的外植体数)以上;茎段转化适宜的选择压力为Kan 50 mg/L;在获得的抗性愈伤中8%左右经检测为GUS阳性。 展开更多

关键词 农杆菌介导 PBP基因 遗传转化 棉花

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浅谈转基因克隆动物技术 被引量：4

5

作者 张德福 王建荣 《生物学通报》 北大核心 2000年第4期6-7,共2页

根据现有理论和技术发展趋势 ,提出了转基因克隆动物的概念 ,即将克隆动物与转基因克隆动物技术有机地结合起来 ,认为转基因克隆动物制作技术将有望成为下一世纪创建遗传工程动物的主导性技术。

关键词 克隆动物 胚胎细胞 体细胞 转基因克隆动物

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脑膜炎奈瑟氏菌NspA基因的克隆及序列分析 被引量：1

6

作者 李景梅 曲英敏 +3 位作者 郝凤奇 袁传飞 李艳艳 郑鑫 《长春理工大学学报（自然科学版）》 2011年第1期157-160,共4页

为了获得脑膜炎奈瑟氏菌(Nesseria meningitidis,Nm)表面蛋白A(NspA)基因,从脑膜炎患者的血液中分离出脑膜炎奈瑟氏菌并对其进行鉴定,然后根据NspA基因的核苷酸序列,设计合成一对特异性引物,通过聚合酶链式反应(PCR)技术体外扩增得到Nsp... 为了获得脑膜炎奈瑟氏菌(Nesseria meningitidis,Nm)表面蛋白A(NspA)基因,从脑膜炎患者的血液中分离出脑膜炎奈瑟氏菌并对其进行鉴定,然后根据NspA基因的核苷酸序列,设计合成一对特异性引物,通过聚合酶链式反应(PCR)技术体外扩增得到NspA基因,进行克隆、测序及序列分析。结果显示,其核苷酸序列同源性与Genbank报道的标准菌株相比同源性为100%。克隆获得的基因保持了脑膜炎奈瑟氏菌表面蛋白NspA基因的完整性,保留了其抗原性,为以后进一步开发脑膜炎基因工程疫苗奠定了实验基础。 展开更多

关键词 脑膜炎奈瑟氏菌 NspA基因 序列分析

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Angioarrestin(hARP1)C端FD区的克隆、表达及其免疫活性鉴定

7

作者 孙铭娟 王梁华 +3 位作者 董晓毅 宗英 高云 焦炳华 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期136-140,共5页

Angioarrestin是一种具有潜在应用价值的肿瘤血管形成抑制因子.利用DNA重组法构建了angioarrestinC端hFDcDNA和麦芽糖结合蛋白(MBP)重组原核表达质粒pMAL-C2-hFD.将重组质粒转入大肠杆菌E.coliBL21(DE3),经0.3mmol/LIPTG在37℃条件下诱... Angioarrestin是一种具有潜在应用价值的肿瘤血管形成抑制因子.利用DNA重组法构建了angioarrestinC端hFDcDNA和麦芽糖结合蛋白(MBP)重组原核表达质粒pMAL-C2-hFD.将重组质粒转入大肠杆菌E.coliBL21(DE3),经0.3mmol/LIPTG在37℃条件下诱导表达4h,SDS-PAGE检测,融合蛋白表达量约占细菌总蛋白的20%.Western印迹证实,目的蛋白N端带有MBP标签.取表达上清纯化、透析、浓缩并冻干,以此为抗原免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体.此多抗可以与pET-22b(+)表达系统获得的hFD重组蛋白发生良好的抗原抗体反应,ELISA检测多抗效价达1∶10240.实验证明:通过基因重组可获得angioarrestinC端hFD在大肠杆菌中的高效表达蛋白,且该蛋白具有较高的免疫活性.以此为抗原制备的抗angioarrestin多克隆抗体为深入研究angioarrestin提供了材料. 展开更多

关键词 ANGIOARRESTIN MBP 融合蛋白 大肠杆菌表达 多克隆抗体

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酵母双杂交文库筛选及hTRIP15与Y盒结合蛋白-1相互作用的探讨

8

作者 彭永德 宋怀东 +3 位作者 曲建 张新 韩泽广 陈家伦 《生命科学研究》 CAS CSCD 2005年第1期15-18,42,共5页

为探讨甲状腺素受体相互作用蛋白(hTRIP15)是否与其他核蛋白发生相互作用,以hTRIP15作为诱饵,用酵母双杂交技术筛选人肝cDNA文库,在高严格度选择培养基(SD-Trp-Leu-Ade-His)上长出的克隆773个,再经β-gal表达和PCR等技术进一步缩小范围,... 为探讨甲状腺素受体相互作用蛋白(hTRIP15)是否与其他核蛋白发生相互作用,以hTRIP15作为诱饵,用酵母双杂交技术筛选人肝cDNA文库,在高严格度选择培养基(SD-Trp-Leu-Ade-His)上长出的克隆773个,再经β-gal表达和PCR等技术进一步缩小范围,经Blastn搜寻最终显示2个重复克隆编码一种共调节辅因子——Y盒结合蛋白-1(YB-1).将插入序列与全长YB-1比较发现进入ORF内230bp,插入序列编码82aa,该蛋白称为YB-1-p,经蛋白体外翻译及GST-pulldown试验证实YB-1-p与hTRIP15发生相互作用.提示hTRIP15可通过与YB-1相互作用,参与调控MHCII及TSH受体等甲状腺细胞重要基因表达. 展开更多

关键词 Y盒结合蛋白-1(YB-1) hTRIP15 酵母双杂交文库筛选:GST pulldown试验

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CRIF1基因启动子克隆及活性分析

9

作者 冉茜 李忠俊 《中国输血杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期25-27,共3页

目的研究急性髓性白血病基因1(AML-1/RUNX1)调控CR6相互作用因子(CRIF1)基因启动子的主要活性区域。方法采用PCR技术克隆CRIF1基因启动子并测序,构建截短突变体,以双荧光素酶报告系统检测AML-1/RUNX1调节CRIF1基因启动子的主要活性区域... 目的研究急性髓性白血病基因1(AML-1/RUNX1)调控CR6相互作用因子(CRIF1)基因启动子的主要活性区域。方法采用PCR技术克隆CRIF1基因启动子并测序,构建截短突变体,以双荧光素酶报告系统检测AML-1/RUNX1调节CRIF1基因启动子的主要活性区域。结果克隆出CRIF1基因启动子-2 505—+9共计2 514 bp的活性区域,并构建了截短突变体CRIF1-1 800、1 500、1 000、600及300 bp;较之CRIF1基因启动子全长序列转录活性,CRIF1-300 bp突变启动子活力明显下降,CRIF1-600 bp内启动子活力与其相当,CRIF1-1 500 bp区启动子活性是它的2.8倍。结论本研究提示CRIF1基因启动子-1 500—-2 514 bp间可能是AML-1/RUNX1对其进行转录负性调控的主要活性区域。 展开更多

关键词 CR6相互作用因子(CRIFl) 启动子 急性髓性白血病基因1(AML-1/RUNXl) 白血病细胞 残留白血病(MRD)

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魁蚶过氧化氢酶基因克隆及表达分析 被引量：3

10

作者 黄永欢 刘志鸿 +4 位作者 吴彪 周丽青 孙秀俊 杨爱国 李东明 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期856-866,共11页

采用RT-PCR和c DNA末端快速扩增技术（rapid amplification of c DNA ends,RACE）克隆出魁蚶过氧化氢酶（Sb CAT）基因c DNA全长序列,该基因全长为2181 bp,包括1431 bp的开放阅读框（open reading frame,ORF）,96 bp的5＇端非翻译区（UT... 采用RT-PCR和c DNA末端快速扩增技术（rapid amplification of c DNA ends,RACE）克隆出魁蚶过氧化氢酶（Sb CAT）基因c DNA全长序列,该基因全长为2181 bp,包括1431 bp的开放阅读框（open reading frame,ORF）,96 bp的5＇端非翻译区（UTR）和654 bp的3＇-UTR。其中ORF编码477个氨基酸,预测分子量为54 ku,理论等电点为8.03。Sb CAT氨基酸序列与其他所选动物的氨基酸序列具有较高的相似性,其相似度为68%～96%,Sb CAT氨基酸具有CAT基因家族的特征性序列,包括CAT活性位点,1个亚铁血红素结合位点及3个催化位点残基。此外,Sb CAT还具有保守的亚铁血红素结合口袋与还原型辅酶Ⅱ（NADPH）结合位点。采用实时荧光定量PCR（q RT-PCR）检测了Sb CAT的组织表达特征。结果显示,Sb CAT m RNA在所检测的6种组织中均有表达,在外套膜中表达量较高,在肝胰腺和红细胞中表达量较低。经鳗弧菌和金黄色葡萄球菌刺激后,鳗弧菌刺激组的外套膜表达量一直较低,其他组织均表现出先上升再下降的趋势。研究表明,Sb CAT可能在魁蚶免疫防御中发挥重要作用。 展开更多

关键词 魁蚶 过氧化氢酶 RACE QRT-PCR

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实用光老化动物模型建立方法的探讨 被引量：32

11

作者 郭鲁义 李春雨 +1 位作者 张宁 杨智荣 《中国美容医学》 CAS 2008年第2期235-237,共3页

目的:探讨光老化动物模型造模过程中的各个关健因素,确定实用的造模方法。方法:用电推剪剃除大鼠背部预定部位的毛,将大鼠置于专用固定器中,每天10min,用SS-03AB型紫外线光疗仪(UVA:340～400nm;UVB:260～350nm)连续照射60天,第61天处死... 目的:探讨光老化动物模型造模过程中的各个关健因素,确定实用的造模方法。方法:用电推剪剃除大鼠背部预定部位的毛,将大鼠置于专用固定器中,每天10min,用SS-03AB型紫外线光疗仪(UVA:340～400nm;UVB:260～350nm)连续照射60天,第61天处死大鼠,照射部位皮肤组织切片进行HE染色,观察造模效果,并结合实践总结造模经验。结果:与空白组大鼠皮肤相比较,模型组呈现表皮层厚薄不一,真皮层血管扩张,大量炎性细胞浸润,胶原纤维明显变性等典型光老化特征,造模成功。结论:本实验中讨论并确定的造模关健因素简便易行,经济可靠,可复制性强,为光老化动物模型的复制建立了一种实用的方法。 展开更多

关键词 光老化 动物模型 HE染色

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切除匍匐茎对鹅绒委陵菜克隆生长的影响 被引量：2

12

作者 康晓燕 孙海群 《青海大学学报（自然科学版）》 2007年第3期17-19,共3页

研究了切除匍匐茎对鹅绒委陵菜克隆生长的影响。结果表明:切除匍匐茎使鹅绒委陵菜根部直径有增大趋势,而根长明显小于对照;在生物量分配方面,切除匍匐茎使其生物量投资偏向于地上部分,总生物量明显小于对照;此外,切除匍匐茎使鹅绒委陵... 研究了切除匍匐茎对鹅绒委陵菜克隆生长的影响。结果表明:切除匍匐茎使鹅绒委陵菜根部直径有增大趋势,而根长明显小于对照;在生物量分配方面,切除匍匐茎使其生物量投资偏向于地上部分,总生物量明显小于对照;此外,切除匍匐茎使鹅绒委陵菜的复叶数、复叶长度、基株高度在不同程度都有所升高。 展开更多

关键词 鹅绒委陵菜 匍匐茎 克隆整合

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遗传性皮肤色素异常的分子遗传学研究进展

13

作者 经卉 崔英霞 《现代检验医学杂志》 CAS 2010年第3期1-3,共3页

遗传性皮肤色素异常在临床上是组异质性疾病，包括数十种疾病。临床分类：不很清楚，疾病的分子基础也不清楚，近年来，在遗传性皮肤色素异常的分子遗传学研究方面，我国学者做了一些重要的原创性工作，以下就遗传性皮肤色素异常的分子... 遗传性皮肤色素异常在临床上是组异质性疾病，包括数十种疾病。临床分类：不很清楚，疾病的分子基础也不清楚，近年来，在遗传性皮肤色素异常的分子遗传学研究方面，我国学者做了一些重要的原创性工作，以下就遗传性皮肤色素异常的分子遗传学基础和临床诊断的进展做一综述。 展开更多

关键词 遗传性对称性色素异常 遗传性广泛性色素异常 遗传性广泛性黑皮症

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对藏族中小学生学习方式的思考 被引量：1

14

作者 兰才让 《民族教育研究》 2004年第4期28-33,共6页

　目前藏族中小学生的学习方式以被动接受式为主要特征。在新一轮基础教育课程改革下,藏族中小学应根据课程改革精神,结合当地实际和学生特点,真正实现藏族中小学生向积极主动、独立自主等个性化学习方式的转变。

关键词 藏族 中小学生 课程改革 学习方式 转变

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原癌基因LMO3相互作用蛋白的筛选及鉴定

15

作者 惠玲 王剑锋 +3 位作者 刘文轩 贾庆华 唐瑜 杨玉捷 《医学分子生物学杂志》 CAS CSCD 2011年第1期11-15,共5页

目的 通过筛选LMO3的相互作用蛋白，进一步了解LMO3的作用及可能机制。方法酵母双杂交方法筛选LMO3相瓦作用蛋白，并通过酵母结合试验、免疫共沉淀及荧光共定位等进行验证。结果在初步获得相互作用蛋白：钙-整合素结合蛋白（Calcium—an... 目的 通过筛选LMO3的相互作用蛋白，进一步了解LMO3的作用及可能机制。方法酵母双杂交方法筛选LMO3相瓦作用蛋白，并通过酵母结合试验、免疫共沉淀及荧光共定位等进行验证。结果在初步获得相互作用蛋白：钙-整合素结合蛋白（Calcium—and integrin—binding protein，CIB）的基础上，在酵母中证实了LMO3与CIB的相互作用，并通过酵母结合试验确定了CIB与LMO3的相互作用位点，发现CIB可与LMO3的第一个LIM结构域（LIMI）及全长LMO3结合，免疫共沉淀试验确证了它们可以在真核细胞内结合，荧光共定位表明与CIB的相互作用可使LMO3在C8细胞中的定位由细胞核移到细胞质。结论LMO3可以与CIB在真核细胞中发生相互作用，提示LMO3可能通过与CIB的相互作用参与细胞相关功能的调节。 展开更多

关键词 钙-整合素结合蛋白 基因转染 胶质瘤 凋亡

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