动物模型是将治疗方法从实验室转化到临床应用的重要工具。随着基因编辑技术的不断发展,基于成簇规则间隔短回文重复序列/CRISPR相关蛋白9(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR associated protein 9,CRI...动物模型是将治疗方法从实验室转化到临床应用的重要工具。随着基因编辑技术的不断发展,基于成簇规则间隔短回文重复序列/CRISPR相关蛋白9(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR associated protein 9,CRISPR/Cas9)构建的动物模型为研究发病机制、开发新的治疗方法以及评估药物疗效提供了新的可能。论文简述了CRISPR/Cas9相关技术及原理,总结了基因编辑动物模型在人类和动物转化医学研究中的应用,探讨了CRISPR/Cas9应用过程中面临的挑战和解决策略,以期促进基因编辑技术在动物模型构建中的应用。展开更多
目的:探讨缺氧诱导的基因结构域家族成员1A(hypoxia-induced gene domain family member 1A,HIGD1A)在多柔比星(doxorubicin,DOX)诱导的大鼠H9c2心肌细胞焦亡中的作用及机制。方法:以大鼠H9c2心肌细胞为研究对象,实验分为以下7组:对照组...目的:探讨缺氧诱导的基因结构域家族成员1A(hypoxia-induced gene domain family member 1A,HIGD1A)在多柔比星(doxorubicin,DOX)诱导的大鼠H9c2心肌细胞焦亡中的作用及机制。方法:以大鼠H9c2心肌细胞为研究对象,实验分为以下7组:对照组、DOX组、沉默对照(siNC)组、沉默Higd1a(siHigd1a)组、siNC+DOX组、siHigd1a+DOX组和siHigd1a+DOX+MCC950[核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)抑制剂]组。DOX(5μmol/L)处理24 h构建大鼠H9c2心肌细胞损伤模型,利用siRNA沉默Higd1a基因。采用DHE染色检测各组细胞中活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量;TMRE染色法评估线粒体功能;Western blot法检测各组细胞焦亡相关蛋白的表达量;利用乳酸脱氢酶试剂盒检测心肌细胞的损伤情况。结果:与对照组相比,DOX处理使H9c2心肌细胞活力显著下降(P<0.01),HIGD1A的mRNA和蛋白表达量均显著降低(P<0.05)。与siNC+DOX组相比,沉默Higd1a后加重DOX诱导的ROS生成与线粒体膜电位下降(P<0.01),并且增加NLRP3、焦孔蛋白D剪切片段(gasdermin D cleaved fragment,GSDMD CL)、cleaved caspase-1、白细胞介素18(interleukin-18,IL-18)表达量(P<0.01),促进心肌细胞损伤标志物乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放(P<0.01)。进一步加入NLRP3抑制剂MCC950可部分逆转沉默Higd1a导致的心肌细胞焦亡增加(P<0.05)。结论:DOX处理可下调大鼠H9c2心肌细胞HIGD1A表达,沉默Higd1a基因通过促进线粒体功能障碍及心肌细胞焦亡参与DOX导致的心肌细胞损伤,其机制与抑制ROS/NLRP3信号途径介导的心肌细胞焦亡有关。展开更多
文摘动物模型是将治疗方法从实验室转化到临床应用的重要工具。随着基因编辑技术的不断发展,基于成簇规则间隔短回文重复序列/CRISPR相关蛋白9(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR associated protein 9,CRISPR/Cas9)构建的动物模型为研究发病机制、开发新的治疗方法以及评估药物疗效提供了新的可能。论文简述了CRISPR/Cas9相关技术及原理,总结了基因编辑动物模型在人类和动物转化医学研究中的应用,探讨了CRISPR/Cas9应用过程中面临的挑战和解决策略,以期促进基因编辑技术在动物模型构建中的应用。
