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嗜热芽孢杆菌产耐热蛋白酶稳定性的研究 被引量：4
1
作者 胡毅恒 何华锋 +1 位作者 黄光荣 蒋家新 《中国计量学院学报》 2009年第2期149-153,共5页
实验室成功地分离保存了一株产蛋白酶的耐热芽孢杆菌.该菌所产的蛋白酶最适pH 7.5,在pH4.0-9.0时较稳定.最适温度为70℃,80℃以下时热稳定性较好,在稳定的pH或温度下能保持1 h以上活性不变.通过添加Ca^2＋,Li^＋,Co^2＋,Mg^2＋等12种金... 实验室成功地分离保存了一株产蛋白酶的耐热芽孢杆菌.该菌所产的蛋白酶最适pH 7.5,在pH4.0-9.0时较稳定.最适温度为70℃,80℃以下时热稳定性较好,在稳定的pH或温度下能保持1 h以上活性不变.通过添加Ca^2＋,Li^＋,Co^2＋,Mg^2＋等12种金属离子证实该酶为金属激活蛋白酶,其中Li＋提高该酶活性最显著.氧化剂过氧化氢可以提高该酶的活力,表面活性剂如Tween 80和Triton X-100对酶活力影响不大.该蛋白酶对各种常用的商品洗涤剂耐受能力较强,在洗涤工业中具有较好的应用前景. 展开更多
关键词 嗜热芽孢杆菌 耐高温蛋白酶 稳定性
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微波固定对琥珀酸脱氢酶细胞化学影响的电镜观察 被引量：2
2
作者 胡闻 肖莎 汪凤霞 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1995年第2期105-107,共3页
对浸泡在四种不同液体（生理盐水、０．２５％戊二醛、２．５％戊二醛、５％戊二醛）中的鼠肝组织进行微波照射固定，并按琥珀酸脱氢酶（ＳＤＨ）常规孵育、制片、电镜观察。结果表明：四个组都随微波照射时间增加，液体温度不断升高，... 对浸泡在四种不同液体（生理盐水、０．２５％戊二醛、２．５％戊二醛、５％戊二醛）中的鼠肝组织进行微波照射固定，并按琥珀酸脱氢酶（ＳＤＨ）常规孵育、制片、电镜观察。结果表明：四个组都随微波照射时间增加，液体温度不断升高，肝细胞内线粒体ＳＤＨ酶活性由强逐渐减弱，定位趋于稳定；其中生理盐水ＳＤＨ酶活性保存最好，且以微波照射４０ｓ时，ＳＤＨ酶活性及定位最佳，超微结构清晰。 展开更多
关键词 微波照射 肝细胞 琥珀酸脱氢酶 组织化学 电镜
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不同周期Sf9细胞琥珀酸脱氢酶酶活的研究 被引量：2
3
作者 张佑红 陈龙 +3 位作者 靖志强 郑伟 陈林 秦琴 《武汉工程大学学报》 CAS 2009年第5期4-6,63,共4页
为了研究不同周期Sf9细胞线粒体琥珀酸脱氢酶酶活的差异,首先使用TdR(胸腺嘧啶核苷)双阻断法将Sf9细胞同步化于G1/S期,恢复生长分别得到S、G2/M、G1期的细胞,然后利用MTT法检测不同细胞周期的Sf9细胞琥珀酸脱氢酶酶活,发现处于G1期的细... 为了研究不同周期Sf9细胞线粒体琥珀酸脱氢酶酶活的差异,首先使用TdR(胸腺嘧啶核苷)双阻断法将Sf9细胞同步化于G1/S期,恢复生长分别得到S、G2/M、G1期的细胞,然后利用MTT法检测不同细胞周期的Sf9细胞琥珀酸脱氢酶酶活,发现处于G1期的细胞酶活比S、G2/M期的细胞酶活大.跟踪细胞成长,在不同的时间点采样,以MTT法检测琥珀酸脱氢酶酶活,发现接种后48 h的Sf9细胞酶活最大,此时与其他时刻相比的Sf9细胞处于G1、S期所占的比例最大. 展开更多
关键词 细胞周期 琥珀酸脱氢酶 MTT法
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枯草杆菌ylnF基因编码蛋白产物性质的研究
4
作者 范军 陈小峰 +1 位作者 朱娟 程备久 《中国农学通报》 CSCD 2006年第4期52-56,共5页
将枯草杆菌ylnF基因经PCR扩增,酶切后插入表达质粒pET15b中,转化大肠杆菌BL21(DE3),诱导表达,金属螯合亲和层析一步纯化,酶活性测定。结果表明:ylnF基因编码产物是依赖于NAD+的前咕啉-2氧化酶,一个西罗血红素生物合成末端的酶。SDS-PAG... 将枯草杆菌ylnF基因经PCR扩增,酶切后插入表达质粒pET15b中,转化大肠杆菌BL21(DE3),诱导表达,金属螯合亲和层析一步纯化,酶活性测定。结果表明:ylnF基因编码产物是依赖于NAD+的前咕啉-2氧化酶,一个西罗血红素生物合成末端的酶。SDS-PAGE显示YlnF亚基分子量约22kD,全酶分子量约25kD,显示酶为单体酶。将Asp102定点突变Ala102,酶活丧失,表明Asp102在催化中起重要作用。 展开更多
关键词 ylnF基因 枯草杆菌 前咕啉-2氧化酶 西罗血红素生物合成 定点突变
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酵母发酵液催化不对称还原反应合成(S)-4-氯-3-羟基-丁酸乙酯的条件优化
5
作者 马小魁 《第四军医大学学报》 北大核心 2006年第17期1555-1558,共4页
目的优化酵母发酵液直接催化4-氯乙酰乙酸乙酯(COBE)合成(S)-4-氯-3-羟基-丁酸乙酯((S)-CHBE)的反应条件.方法考察酵母发酵液催化该反应过程中基质变化的规律,研究底物和能源供体对反应的影响,并通过正交实验设计法优化反应条件.结果在... 目的优化酵母发酵液直接催化4-氯乙酰乙酸乙酯(COBE)合成(S)-4-氯-3-羟基-丁酸乙酯((S)-CHBE)的反应条件.方法考察酵母发酵液催化该反应过程中基质变化的规律,研究底物和能源供体对反应的影响,并通过正交实验设计法优化反应条件.结果在酵母发酵液催化COBE不对称还原反应的过程中,底物和还原糖消耗、产物合成相对集中在反应的前期;反复分批式添加底物和蔗糖有利于反应效率的提高;正交实验优化反应条件的结果表明酵母发酵液直接催化COBE不对称还原反应合成(S)-CHBE的最佳反应条件为蔗糖添加方式Ⅱ(反应开始2h后添加5g/120mL),底物添加方式Ⅳ[0.5(3)],缓冲剂添加量2g/120mL,β-环糊精添加量为2g/120mL,反应后测定产物的产率达96%,ee(对映体过量值)达100%.结论通过反应条件优化提高了酵母发酵液的催化效果. 展开更多
关键词 酵母发酵液 不对称还原反应 4-氯乙酰乙酸乙酯 (S)4-氯-3-羟基-丁酸乙酯 正交实验
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影响多步脱氢酶CrtI功能的关键结构特征探索
6
作者 陈琛 王颖 +3 位作者 刘宏 陈艳 姚明东 肖文海 《化工学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第1期189-198,共10页
在生物体内存在可催化多步连续反应的通用酶,对生物代谢过程具有重要作用。八氢番茄红素脱氢酶(CrtI)作为典型代表,可以催化多步连续脱氢反应,生成番茄红素等具有重要价值的产物。本文以酿酒酵母为底盘研究CrtI的催化功能特征。首先通... 在生物体内存在可催化多步连续反应的通用酶,对生物代谢过程具有重要作用。八氢番茄红素脱氢酶(CrtI)作为典型代表,可以催化多步连续脱氢反应,生成番茄红素等具有重要价值的产物。本文以酿酒酵母为底盘研究CrtI的催化功能特征。首先通过组合设计与筛选番茄红素合成路径中的三种外源酶CrtE、CrtB和CrtI,发现CrtI是主要的限制因素,且三孢布拉氏霉菌来源的CrtI (BtCrtI)表现出优异的催化功能。通过生物信息学与蛋白结构分析发现BtCrtI的S311残基是连接和稳定活性中心结构的关键。随后通过分析该位点的饱和突变结果,揭示了该位点的氨基酸残基类型对活性中心结构和功能的显著作用,为酶的设计和改造提供了新的思路。同时发现CrtI的活性差异未对合成路径中的类胡萝卜素的代谢流造成扰动,表明CrtI是番茄红素的产量和纯度的决定因素。 展开更多
关键词 酶 合成生物学 生物催化 八氢番茄红素脱氢酶 多步脱氢反应 酶的活性中心结构
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